2011年 · 第34卷第02期

对结核病早期、有效的诊断,特别是对涂阴结核病和MDR-TB的诊断,是全球结核病控制工作的优先领域.传统实验室检测方法由于耗时长等原因,不能满足对MDR-TB进行早期诊断和及时有效治疗的需要.近年来涌现了许多有应用前景的新诊断技术,有望给结核病特别是耐药结核病的诊断带来新的机遇。

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的传染性疾病,在历史上曾经夺去过数以万计的生命.伴随着减毒牛分枝杆菌疫苗的诞生,以及一系列抗生素和抗结核药物的发现与应用,科学家曾乐观地认为结核病会被人类消灭.然而,2008年全球仍有940万例新增结核患者,全世界每年有170万人死于结核病,其中90%以上的患者分布在发展中国家.同时,结核病也是引起HIV感染患者死亡的重要原因之一,估计2008年全世界200万HIV阳性死亡患者中,有50万患者同时患有结核病。

目的 探讨流式细胞术在识别CK阳性和阴性非造血系统肿瘤骨髓侵犯中的价值.方法 选取代表10种常见人类上皮来源肿瘤的26个细胞系和1种人淋巴瘤细胞系、1种T淋巴母细胞白血病细胞系,均购自美国标准生物品收藏中心.选择2009年7月至2010年6月北京市道培医院5份非造血系统肿瘤患者、15份血液系统肿瘤患者、15份移植后骨髓恢复正常的对照组患者骨髓标本.复苏冻存的各细胞系,传代培养至细胞进入对数生长期.破膜后使用胞浆CK-FITC抗体做荧光标记,进行四色流式细胞术检测,分析肿瘤细胞CK表达率.骨髓标本按照我室常规四色直接免疫荧光标记法做胞膜和胞浆染色,通过系别标志和幼稚细胞标志,以及CK表达情况,根据2008年世界卫生组织诊断标准做出相应诊断或者排除造血系统肿瘤.结果 所有上皮来源的肿瘤细胞系均不同程度表达CK,平均CK表达率为81.1%,而淋巴系统肿瘤细胞系均不表达CK.2例上皮来源肿瘤均表达CK,其中1例甲状腺癌病例CK表达率为100.0%,1例肺癌病例CK表达率为98.2%.血液系统肿瘤和对照组骨髓标本均不表达CK,分别表达相应的血液学标志:如CD45和系别标志,或者CD138和胞浆轻链.3份非上皮来源的非造血系统肿瘤骨髓标本均不表达CK.CK阳性或阴性的非造血系统肿瘤不表达造血细胞标志:如CD45、HLA-ABC、HLA-DR DP DQ,不表达特异性系别标志.而CK阳性可能有助于提示上皮来源肿瘤的诊断.结论 使用流式细胞术检测造血细胞标志和CK可以有效排除CD45阴性的造血系统肿瘤,检测CK阳性和阴性非造血系统肿瘤骨髓侵犯。

目的 调查温州地区健康成人RET-He及网织红分群值正常值范围.方法 选取2008年8月至2010年2月温州地区1 000名健康体检者,并按性别和年龄分组.按性别分组:男506名,女494名.按年龄分组:20～40岁组341名;＞40～60岁组316名;＞60岁组343名.采集所有调查对象2 ml乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血,利用Sysmex XE-2100五分类自动血细胞分析仪对1 000名健康成人外周血RET-He及网织红分群值(IRF、LFR、MFR、HFR)进行检测,确定其正常值范围.仪器测定血标本之前进行校准和验证,所有标本采集后2 h内完成检测.RET-He、RET绝对值、RET百分数为正态分布数据,采用((x)-1.96 s,(x)+1.96 s)确定正常值范围.网织红分群值(IRF、LFR、MFR、HFR)为偏态分布数据,采用百分位数(P2.5,P97.5)来确定正常值范围.结果 男性RET-He均值为(33.91±1.77)pg,正常值范围为(30.44～37.38)pg,女性均值为(33.97±1.85)pg,正常值范围为(30.34～37.60)pg,差异无统计学意义(t=-0.533,P＞0.05).男性RET绝对值均值为(0.051±0.023)×1012/L,正常值范围为(0.006～0.096)×1012/L,女性均值为(0.037±0.026)×1012/L,正常值范围为(0～0.088)×1012/L,差异有统计学意义(t=8.409,P＜0.05).男性RET百分数均值为(1.041±0.459)%,正常值范围为(0.141～1.941)%,女性均值为(0.869±0.603)%,正常值范围为(0～2.051)%,差异有统计学意义(t=5.074,P＜0.05).男性LFR、MFR、HFR、IRF正常值范围分别为0.951(0.866～0.988)、0.046(0.010～0.114)、0.003(0～0.023)、0.050(0.012～0.134),女性分别为0.096(0.880～0.991)、0.039(0.008～0.113)、0.002(0～0.016)、0.040(0.009～0.121),差异均有统计学意义(Z=-5.044、-4.793、-3.559、-5.075,P均＜0.05).20～40岁组、＞40～60岁组、＞60岁组和全年龄段RET-He均值分别为(33.38±1.49)、(34.36±1.46)、(34.12±2.21)、(33.94±1.81)pg,正常值范围分别为(30.46～36.30)、(31.50～37.22)、(29.79～38.45)、(30.39～37.49)Pg,差异有统计学意义(F=28.072,P＜0.05),且20～40岁组与＞40～60岁组、＞60岁组比较,差异均有统计学意义(q=9.970、7.791,P均＜0.05).＞60岁组LFR、MFR、HFR、IRF正常值范围分别是0.961(0.878～0.992)、0.037(0.007～0.105)、0.002(0～0.020)、0.039(0.008～0.117),与20～40岁组的0.953(0.867～0.990)、0.045(0.009～0.116)、0.003(0～0.019)、0.050(0.010～0.133)比较,差异有统计学意义(Z=-3.949、-4.236、-4.373、-4.973,P均＜0.05),与＞40～60岁组的0.951(0.855～0.989)、0.047(0.010～0.133)、0.003(0～0.020)、0.049(0.011～0.149)比较,差异亦有统计学意义(Z=-2.747、-3.275、-3.901、-4.185,P均＜0.05).RET-He测定值在不同性别组间差异无统计学意义,可以制定同一正常值范围;但RET-He在不同年龄组间差异有统计学意义,应制定不同的正常值范围.LFR、MFR、HFR、IRF在不同性别及不同年龄组间差异均有统计学意义,应按性别和年龄分组制定正常值范围.结论 本研究建立了温州地区健康成人外周血RETHe及网织红分群值正常值范围,提高了网织红细胞参数的临床应用价值。

目的 评估用SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用.方法 收集北京市结核病胸部肿瘤研究所2007年1-12月的分枝杆菌118株,通过PNB培养基初筛,其中结核分枝杆菌复合群25株,非结核分枝杆菌93株.同时用测序方法和SMIS分析分枝菌酸方法鉴定118株分枝杆菌,以16S rDNA和16-23S rDNA ITS测定作为菌种鉴定的标准,评估利用SMIS分离分枝菌酸鉴定分枝杆菌菌种的符合率及一致性;并验证以上两种方法鉴定结果分别与PNB初筛分结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌结果的符合率及一致性.结果 SMIS与测序鉴定分枝杆菌相比的符合率为92%(108/118),其中结核分枝杆菌复合群鉴定的符合率为95%(35/37),非结核分枝杆菌为90%(73/81),Kappa分析显示两种方法鉴定结果的一致性很好(Kappa=0.%).回顾验证初筛结果显示,SMIS与PNB培养基方法鉴定结果符合率90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.73);测序方法与PNB培养基方法鉴定结果符合率也为90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.74),但有11株测序和分枝菌酸菌种鉴定方法结果相同的结核分枝杆菌复合群与PNB实验结果不一致.结论 利用分枝菌酸对临床分离的分枝杆菌进行菌种鉴定是一种快速、简便和准确的方法,对处置应急和突发公共卫生事件中的分枝杆菌菌种鉴定具有一定的参考价值,是分枝杆菌菌种多相鉴定策略的重要组成部分。

目的 应用荧光判读仪手工判读方法对MGIT液体培养基进行快速检测分枝杆菌的效果评价.方法 收集2008年10月至2009年1月上海市各区结核病定点医院初诊患者首次痰标本200份,其中痰涂片法抗酸染色阳性标本67份,阴性标本133份.分别对L-J培养基、BacT/Alert 3D 系统和MGIT液体培养基分枝杆菌分离培养效果比对.结果 200份痰标本中,共分离培养出105株分枝杆菌菌株,检出率为52.5%;MGIT液体培养基检出率为49.5%(99/200),BacT/Alert 3D系统检出率为48.0%(96/200),L-J培养基检出率为45.0%(90/200).MGIT液体培养基分离培养检出率高于L-J培养方法,差异有统计学意义(x2=5.40,P=0.020 1).在133份抗酸染色阴性标本中,用MGIT液体培养基、BacT/Alert 3D系统和L-J培养基分离培养检出率分别为24.8%(33/133)、23.3%(31/133)、18.8%(25/133).MGIT液体培养基和L-J培养基分离培养检出率差异有统计学意义(x2=5.33,P=0.020 9).MGIT液体培养基分离培养阳性报告时间中位数为11 d;BacT/Alert 3D系统分离培养阳性报告时间中位数为15 d;L-J培养基分离培养阳性报告时间中位数为22 d.MGIT液体培养基阳性报告时间短于BacT/Alert 3D系统,差异有统计学意义(Z=3.414,P＜0.01);MGIT液体培养基阳性报告时间短于L-J培养基培养,差异有统计学意义(Z=7.083,P＜0.01).结论 MGIT液体培养基能快速检测分枝杆菌,检出率高,阳性报告时间短,且不需要昂贵仪器,成本低,适合基层实验室推广应用。

目的 利用焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星的耐药性,并对其临床应用进行评价.方法 收集上海市肺科医院2008-2009年临床确诊的肺结核患者的痰标本培养阳性结核分枝杆菌89株.所有菌株按<结核病诊断实验室检验规程>进行分枝杆菌培养、菌种鉴定.另外10株已知药敏结果的结核分枝杆菌来自上海市肺科医院菌株库.利用焦磷酸测序技术,以10株已知药敏结果和经直接测序已知耐药基因突变情况的结核分枝杆菌为试验菌株,探索焦磷酸测序检测结核分枝杆菌rpoB、katG、gyrA、rrs耐药基因的最佳模式,并用该条件检测89株结核分枝杆菌临床分离株,检测结果与Bactec 960药敏法进行比较.结果 rpoB、gyrA基因检测宜采用焦磷酸测序序列分析模式,katG、rrs基因检测宜采用焦磷酸测序单核苷酸多态性模式.以Bactec 960药敏法测定结果为判断标准,则焦磷酸测序法检测89株结核分枝杆菌临床分离株对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性的敏感度分别为98.0%、64.1%、79.5%、78.3%,特异度分别为97.5%、100.0%、90.0%、100.0%,准确性分别为97.8%、77.5%、85.4%、94.4%,该法检测利福平、氧氟沙星、阿米卡星的检测结果与Bactec 960药敏检测结果一致性较好,Kappa值均≥0.7.结论 焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性具有快速、准确、高通量的优点,是一种可对结核分枝杆菌多种药物耐药性进行快速检测的方法。

目的 比较评价自行研发及国外进口T-SPOT TB两种结核抗原特异性γ干扰素释放试验在HIV感染人群中诊断结核潜伏感染的价值.方法 102例HIV感染者均来自于深圳市第三人民医院艾滋病门诊,其中男66例,女36例,平均年龄35岁.运用自行研发的结核杆菌抗原特异性γ干扰素ELISpot检测方法及T-SPOT TB试剂盒对102例确诊的HIV感染者的外周血结核特异性γ干扰素释放水平进行检测,并同时进行TST.结果 在HIV感染者中17例患者T-SPOT和ELISpot两种方法检测共同阳性,ELISpot的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为94.4%、94.0%、77.3%、98.8%和94.1%.其中3例患者在TST与T-SPOT两种检验方法检测共同阳性,TST的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为16.7%、98.8%、75.0%、84.7%和84.3%.利用3种抗原对102例患者进行检测,结核分枝杆菌重组抗原(ESAT-6)、PoolA、PoolB刺激所得斑点数的平均值分别为26.89±5.77、18.96±4.75和14.51±3.77,仅ESAT-6与PoolB的差异有统计学意义(H=7.557,P=0.022 9).不同CD4分组ELISpot检测阳性率和T-SPOT TB检测阳性率差异均无统计学意义(x2=0.860 8,P=0.650 2;x2=1.396 4,P=0.497 5).结论 自行研发的结核杆菌抗原特异性γ干扰素ELISpot检测技术在HIV感染人群中用于结核潜伏感染的诊断与T-SPOT TB检测方法类似,两种方法的敏感度与特异度均高于TST,可用于艾滋病合并结核潜伏感染的辅助诊断。

目的 分析结核分枝杆菌katG基因2个不同区域的基因变异,并确定与INH耐药的相关性.方法 从痰液分离并鉴定结核分枝杆菌耐INH菌株53株,用PCR扩增katG基因的2个区域:区域1为第1位密码子至150位密码子,区域2为第227位密码子至470位密码子,并分别测序.结果 3株对INH耐药但2个区域都不发生突变.14株区域1存在突变,其中5株只在区域1存在突变,5株在区域1出现缺失突变,并呈现高度耐药.点突变是区域2的主要特点,特别是S315位密码子,60.4%(32/53)S315发生突变,最常见的是S315N(AGC→AAC)(18株);katG S315在高度INH耐药和低度INH耐药的结核分枝杆菌中突变率分别是84.4%(27/32)、15.6%(5/32),两组间差异有统计学意义(x2=30.25,P＜0.01).27株S315突变呈高度耐药,占S315突变菌株总数的84.4%,其余18株至少有一个非S315点突变的耐药株中高度耐药只有5株,占27.7%,两组间差异有统计学意义(x2=16.02,P＜0.01).对INH耐药的结核分枝杆菌区域2的突变发生率为84.9%.5株只在区域1存在突变,通过检测基因突变诊断INH耐药的检出率上升至94.3%.结论 S315突变发生率最高,突变类型和位置与耐药程度密切相关,分析区域1能使检出率提高9.4%。

目的 评价探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的应用价值,为临床检测提供指导依据.方法 613份痰标本于2009年9月至2010年4月收集自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心.结核分枝杆菌H37Rv标准株来源于国家结核病参比实验室.37株包含结核与非结核分枝杆菌的标准盘由中国药品生物制品检定所提供.首先采用梯度稀释的野生型标准株H37Rv DNA考察探针熔解曲线分析法的分析灵敏度,然后用标准盘验证其检测特异性,最后以测序法为对照方法,采用613份结核分枝杆菌的标本评价该方法的临床应用价值.结果 探针熔解分析法可检测到3拷贝/反应,且能特异检测结核分枝杆菌.613份结核分枝杆菌的检测结果显示,符合要求的583份标本的试剂盒检测结果与测序结果完全一致,其中embB306突变菌株数为34株,embB 378-380突变菌株数为23株,embB 406突变菌株数为3株,embB 497突变菌株数为3株.结论 探针熔解分析法检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变特异性好,灵敏度高,能有效地检测临床标本常见乙胺丁醇耐药突变位点,是值得推广的快速检测方法。

结核分枝杆菌生长缓慢的特性一直以来限制了临床对患者的诊断及治疗.为了快速准确的鉴定结核分枝杆菌,为临床诊断提供有效依据,基于分子生物学技术的诊断方法越来越多的应用到日常的检测工作中,核酸扩增试验(nucleic acid amplification tests,NAAT)自应用到结核病的早期诊断以来,就显示出其强大的优越性.它比培养的速度快,特异性高,可以在3～6 h得到结果[1].商业化的检测试剂盒更是让早期快速诊断结核病成为可能[2-3].高通量的自动检测装置虽然提高了工作效率,但是高昂的价格和实验室配套设备的要求限制了方法的使用范围.为更好的控制结核病的蔓延,临床迫切需求一种简便、快速、准确的结核病早期诊断方法。

结核分枝杆菌的药物敏感性试验对于结核病的治疗起着举足轻重的作用.WHO把比例法作为结核分枝杆菌药物敏感性检测的"金标准"[1],而多年来我国各级实验室普遍沿用绝对浓度法进行常规的结核分枝杆菌药敏试验.这两种检测方法的一致性始终是争论的焦点.为了便于我国结核菌药敏信息与国外进行比较,为临床提供更为准确的药敏信息,本研究对比例法与绝对浓度法检测结核分枝杆菌的药物敏感性的比较作了探讨。

近年来在世界范围内非结核分枝杆菌病发病率有所升高,临床实验室遇到非结核分枝杆菌病越来越多[1],而目前分枝杆菌的鉴定主要依据其生物学表型特征及细胞化学反应多项指标综合分析,方法复杂、费时、重复性差,且试验的影响因素较多,有时会出现误判,急需建立快速、简便、准确的分枝杆菌鉴定方法.近年来,随着分子生物学理论及技术,特别是PCR为基础的各种分子诊断技术的快速发展,分子诊断技术已在分枝杆菌菌种鉴定中逐步应用.本研究采用多重PCR的SNaPshot技术,对临床较常见的几种非结核分枝杆菌进行同时快速鉴定。

目的 分析评价血清ProGRP、TPS和NSE在SCLC患者临床诊断和疗效监测中的临床意义.方法 分别采用化学发光法、ELISA法和电化学发光法测定51例SCLC患者(SCLC组,局限期患者36例,广泛期患者15例)、60例肺良性疾病患者(良性疾病对照组)及60名健康人(健康对照组)血清ProGRP、TPS和NSE浓度;分析评价3项指标在SCLC患者治疗前、化疗第1周期和第2周期的变化.结果 局限期SCLC患者治疗前的血清ProGRP、TPS和NSE浓度分别为136.9(22.8～631.7)ng/L、78.2(56.4～114.6)U/L和28.1(20.9～46.1)μg/L;广泛期为1 106.6(41.2～2 161.1)ng/L、230.9(143.5～259.0)U/L和81.1(34.3～140.0)μgL;肺良性疾病组为19.7(9.5～29.1)ng/L、48.7(17.9～95.4)U/L和12.1(1.2～13.9)μg/L;健康对照组为20.3(10.7～30.6)ng/L、50.3(19.5～70.7)U/L和11.7(1.1～13.4)μg/L;经Kruskal-Wallis检验,3项指标在各组间的差异均有统计学意义(x2值分别为51.368、36.532和81.645,P均＜0.01);两个对照组分别与局限期SCLC比较,差异均有统计学意义(U值分别为491、827、609和476、831、585,P均＜0.05);两个对照组分别与广泛期SCLC比较,差异亦有统计学意义(U值分别为314、532、456和302、553、430,P均＜0.01).血清ProGRP诊断SCLC的ROC曲线AUC为0.832±0.029(95%CI:0.774～0.890),以37.7 ng/L为临界值时,其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和约登指数分别为71%(36/51)、97%(116/120)、90%(36/40)、89%(116/131)和67%.联合检测时,ProGRP+TPS+NSE、ProGRP+TPS、ProGRP+NSE和TPS+NSE组合的敏感度分别为92%、86%、92%和88%,特异度分别为77%、77%、92%和77%.经非参数Fridman检验,3项指标在不同治疗阶段的差异均有统计学意义(x2值分别为49.120、10.614和44.392,P均＜0.01).经过连续2个周期化疗后,血清ProGRP浓度持续降低,分别降低至68.0(18.6～158.4)和21.0(14.9～63.5)ng/L,与化疗前组比较,差异均有统计学意义(Z值分别为-4.889、-5.594,P均＜0.01);血清TPS在第1周期化疗结束后升高至105.2(54.1～181.2)U/L,但差异无统计学意义(Z=-1.248,P＞0.05),在第2周期化疗结束后明显降低至79.0(48.7～155.3)U/L,差异有统计学意义(Z=-2.484,P＜0.05);血清NSE在第1周期化疗后迅速降低至11.8(8.0～16.0)μg/L,差异有统计学意义(Z=-5.568,P＜0.01),第2周期化疗后降为10.6(9.0～12.7)μg/L,与第1化疗周期结束后相比,差异无统计学意义(Z=-1.851,P＞0.05).在2个周期化疗后,临床治疗有效的SCLC患者46例(CR 3例,PR 43例),其中3项指标的检测结果全部正常或仅有1项超过临界值的患者为38例(各19例),占83%;3项指标全部异常的患者2例,临床疗效评价均为PD;还有2例临床疗效评价为SD和1例未评价的患者均有2项指标结果异常.结论 血清ProGRP、TPS和NSE均为诊断和监测SCLC治疗疗效的较好的指标,尤其以ProGRP+NSE组合的临床诊断价值最高.联合应用3项指标,有助于SCLC患者的疗效监测和预后判断。

目的 分析研究不同感染时间和不同途径感染HIV/AIDS感染者覆盖全基因组的CTL应答特征.方法 将75例HIV/AIDS感染者分为3组,血液感染1～2年组(10例)、血液感染＞10年组(43例)和性接触感染1～2年组(22例);以HIV-1 B亚型构建全基因组17个肽库作为抗原,采用ELISpot检测各组HIV特异性CTL应答;采用流式细胞术检测各组CD4计数;采用实时定量RT-PCR检测各组HIV病毒载量.结果 血液感染1～2年组、血液感染＞10年组和性接触感染1～2年组感染者对HIV-B亚型17个肽库的平均应答频率分别为40%、65%、23%,经单向方差分析,3组感染者对HIV-1 B亚型17个肽库的应答频率差异有统计学意义(F=19.96,P＜0.01);3组感染者对HIV-B亚型17个肽库总应答强度范围分别为0～5 835 SFCs/106 PBMC、0～7 225 SFCs/106PBMC、0～9 740 SFCs/106PBMC,且3组感染者对HIV-B亚型17个肽库的应答强度差异亦有统计学意义(H=101.90,P＜0.01);此外,3组感染者对HIV-1 B亚型17个肽库的应答广度分别为7(2～11)个、11(9～14)个、4(2～6)个,3组感染者应答广度的差异也有统计学意义(H=34.75,P＜0.01).3组感染者应答频率、应答强度和应答广度从高到低依次为血液感染＞10年组、血液感染1～2年组、性接触感染1～2年组.不同感染时间和不同感染途径的感染者对Nef肽库和Gag肽库的应答百分比和应答强度均高于其他肽库.CD4计数＜200/μl、CD4计数为200～500/μl和≥500/μl3组感染者对17个肽库的总应答强度范围分别为0～18 475 SFCs/106 PBMC、350～34 095 SFCs/106PBMC、490～21 550 SFCs/106 PBMC,但差异无统计学意义(H=2.93,P=0.23);3组感染者CTL应答广度分别为3(0～8)个、10(2～17)个、10(1～17)个,3组间差异有统计学意义(H=14.72,P＜0.01),CD4计数＜200/μl的感染者CTL应答广度低于CD4计数为200～500/μl和≥500/μl组.不同病毒载量3组(＜LDL、LDL-1×104拷贝/ml和≥1×104拷贝/ml)标本对17个肽库的总应答强度范围分别为490～18 475 SFCs/106PBMC、0～24 115 SFCs/106PBMC、770～34 095 SFCs/106 PBMC,但3组间差异无统计学意义(H=0.79,P=0.67);应答广度分别为8(1～17)个、11(0～17)个、8(1～16)个,3组间差异也无统计学意义(H=5.27,P=0.07).结论 中国HIV/AIDS感染者中CTL应答多集中在Nef和Gag,这两个抗原为HIV/AIDS感染的优势抗原;感染时间和感染途径对CTL应答可产生显著影响;随感染时间的延长,免疫反应的强度与应答比例均增加.这些信息对设计针对中国人群的AIDS疫苗有较重要意义。

目的 以家庭为基础,利用传递不平衡原理研究TGFβ1-509 C/T及TCRCα-575 A/G的SNP与AAV的相关关系.方法 采用PCR-RFLP和直接测序法,鉴定88例原发AAV患者及其父母、兄弟姐妹基因型,获得88个核心家庭中264人的基因型,采用传递不平衡检验和HRR分析的方法观察TGFβ1-509 C/T及TCRCα-575 A/G在患病子代的不平衡传递.结果 32个满足TGFβ1-509C/T的传递不平衡检验的AAV患者核心家庭中,杂合子父母传递给患病子代的等位基因频率为C/T=36/28,期望值为C/T=33.5/30.5,两者相比,差异无统计学意义(x2=0.51,P＞0.05);34个满足TCRCα-575 A/G的传递不平衡检验的AAV患者核心家庭中,杂合子父母传递给患病子代的等位基因频率为A/G=29/39,期望值为A/G=33.5/34.5,两者相比,差异无统计学意义(x2=1.59,P＞0.05).38个满足HRR分析的AAV患者核心家庭中,TGFβ1-509 C/T多态性传递的基因型为CC/CT/TT=12/20/6,等位基因为C/T=44/32,未传递基因型为CC/CT/TT=10/19/9,等位基因为C/T=39/37,两者基因型、等位基因相比,差异均无统计学意义(基因型和单体型x2值分别为0.81、0.66,P均＞0.05),HRR=1.30,HRR系数末过度偏离(1.00);39个满足TCRCα-575 A/G的HRR分析的核心家庭中,TCRCα-575 A/G多态性传递的基因型为AA/AG/GG=9/18/12,等位基因为A/G=36/42,未传递的基因型为AA/AG/GG=15/15/9,等位基因为A/G=35/33,两者基因型、等位基因相比,差异均无统计学意义(基因型和等位基因x2值分别为2.20、0.41,P均＞0.05),HRR=0.81,HRR系数未过度偏离(1.00).结论 广西汉族人群中,TGFβ1-509 C/T及TCRCα-575 A/G可能与原发AAV的遗传易感性不相关。

目的 研究人脐带血CD34+细胞体外扩增巨核细胞的基因表达,从分子水平探讨巨核细胞的表达机制.方法 采用密度梯度离心法和免疫磁珠分选系统获取人脐带血CD34+细胞.100 ng/ml TPO诱导培养12 d后,应用抗CD+41单克隆抗体免疫磁珠法分选巨核细胞.应用基因芯片技术检测巨核细胞、非巨核细胞和meg-01细胞株的基因差异表达.选择THBS1、HOXA9、β-actin、IL-8、ANXA6、FGF-8对检测结果进行RT-PCR验证.结果 巨核细胞样本与非巨核细胞样本比较,呈显著差异表达的基因有116个,其中52个上调,64个下调;巨核细胞样本与meg-01细胞株样本比较呈显著差异表达的基因有158个,其中71个上调,87个下调.THBSI在巨核细胞表达高于非巨核细胞,HOX A9在巨核细胞表达低于非巨核细胞;β-actin在巨核细胞与非巨核细胞的表达无差别.IL-8在巨核细胞表达高于meg-01细胞株;ANXA6在巨核细胞表达低于meg-01细胞株;FGF-8在巨核细胞与meg-01细胞株的表达无差别.结论 巨核细胞、非巨核细胞和meg-01细胞株基因表达存在显著差异,差异表达中的调控基因包括应激反应基因、免疫相关基因、DNA合成和修复基因、新陈代谢基因、肿瘤基因和肿瘤抑制基因等。

目的 研究甜菜碱(betaine)在不同温度下对人血清中ALT酶活性的稳定作用,并评估添加甜菜碱的人血清在各检测系统中的基质效应.方法 血清中添加终浓度为1 mol/L的甜菜碱,检测37 ℃、25 ℃、4 ℃、-20 ℃下放置不同时间的血清中的ALT酶活力.根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP14-A文件进行基质效应实验,以4个被评价检测系统为被比较系统,以罗氏公司试剂-日立仪器检测系统为比较系统,用比较系统和被评价系统检测40个患者血清样品以及添加了1 mol/L甜菜碱的3个血清(高、中、低浓度)样本的ALT酶活力;用直线回归方法统计数据,以回归直线的(-Y)估计值(^/Y)的95%可信区间估计这3个添加了甜菜碱的样品在4种检测系统中的基质效应.结果 37 ℃添加甜菜碱的血清48 h后ALT酶活力稳定为99%,对照血清降至42%;25 ℃添加甜菜碱的血清4 d后ALT酶活力稳定为98%,对照血清降至86%;4 ℃添加甜菜碱的血清4周后ALT酶活力稳定为97%,对照血清1周后已降至71%;-20 ℃添加甜菜碱的血清4个月后ALT酶活力稳定为99%,对照血清1个月后已降至79%.添加了甜菜碱的3个样本的值均在回归直线的(-Y)估计值(^/Y)的95%可信区间内,即其在4个被评价系统和比较系统中均无明显基质效应.结论 甜菜碱可作为一个较好的血清ALT酶活力的稳定剂用于血清酶ALT的校准品的研制中。

CA72-4等肿瘤标志是临床检测胃肠道肿瘤,尤其是胃癌患者治疗效果及早期预测胃癌患者术后是否复发的重要标志.然而,因患者食用野生榛蘑,造成其血清CA72-4测定值非病理性升高,临床极为少见.2009年5至6月青岛大学医学院附属威海医院通过实验室检测发现1例,并通过患者术后食用和停食野生榛蘑前后自身对比,以及与健康对照者的试验得到证实.现将该患者食用野生榛蘑致血清CA72-4非病理性升高病情变化过程报告如下。

患者男,59岁.2009年10月因"右腹股沟出现肿物伴疼痛,活动受限"于2010年3月8日于北京市某医院就诊.彩色超声检查提示:右腹股沟多发肿大淋巴结,较大者2.2 cm ×0.75 cm,边界清晰.3月8日至4月19日,先后给予乳酸红霉素、克林霉素和头孢曲松钠治疗,剂量不详,未见好转.4月19日于另一医院再行超声检查,提示双侧腹股沟多发淋巴结肿大,以右侧为著,2.4 cm ×0.8 cm.5月于北京市某中医院进行中药治疗(小金丸和血府逐瘀胶囊),效果不明显。

新型隐球菌所致中枢神经系统、呼吸系统及血液感染已有报道[1-3].2010年3月,我们从溃疡性结肠炎患者骨髓中检出新型隐球菌1例,报告如下。

阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)又名阿萨希丝孢酵母,系毛孢于菌属中的一种,为酵母样真菌[1].目前认为该菌是一种条件致病菌,可引起免疫缺陷患者各种机会性感染,也是毛孢子菌病最多见的敏病菌[2].该菌既可引起表浅部位感染又可伴随血行播散进而导致深部感染,且患者预后差.2009年12月我们从1例白血病患者血液中多次分离到该菌,现报告如下。

军团菌是引起军团菌病(Legionellosis或Legionnaire's disease)的重要病原体,广泛存在于天然淡水环境和人工水系中[1].目前已知军团菌有52个种,3个亚群,70个血清型,与人类疾病相关的有24种,嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是引起军团菌肺炎的主要病原菌[2].军团菌是由美国CDC的McDade于1977年首次从暴发流行死者肺部组织中分离和鉴定到一种革兰阴性杆菌,1978年国际上正式命名为嗜肺军团菌。

19世纪初,法国学者就发现某些传染性疾病(如伤寒、天花)伴有小细胞性贫血.以后,在临床上逐渐注意到许多慢性疾病(如感染、炎症和恶性肿瘤)伴发的贫血有一定的特点,主要表现为铁的利用障碍,故早期这类贫血曾被称为"铁粒幼细胞贫血伴网状内皮系统含铁血黄素沉着症",20世纪后改称为"慢性病贫血".实际上,"慢性病贫血"一词对这类贫血并不是十分恰当[1],且容易与慢性系统性疾病(如肝病、肾病及内分泌疾病)伴随的贫血相混淆.后者是由于疾病的各种症状(如失血、营养不良及肾功能不全)导致的贫血,不存在铁代谢障碍,现被称为"慢性系统疾病性贫血"、"症状性贫血"或"继发性贫血"。

我国著作权法公布以来，已得到社会各界的广泛重视，作为医学科技期刊必须不折不扣地执行著作权法。为此将本刊对作者署名和志谢的有关要求重申如下。一、作者署名的意义和应具备的条件 1．署名的意义：（1）标明论文的责任人，文责自负。（2）医学论文是医学科技成果的总结和记录，是作者辛勤劳动的成果和创造智慧的结晶，也是作者对医学事业作出的贡献，并以此获得社会的尊重和承认的客观指标，是应得的荣誉，也是论文版权归作者的一个声明。

为繁荣我国检验医学事业，促进检验医学领域的学术交流，依据中华医学会杂志社关于实施杂志会员制度的相关规定，中华检验医学杂志2011年继续实行VIP读者会员制。一、会员权利1．免费获得2011年中华检验医学杂志。2．免费获赠由中华检验医学杂志编辑部与美国临床化学杂志（Clinical Chemistry）合作出版的《海外检验医学》杂志，每年4期。

近年来许多报道国内优秀科研成果的论文首先投向国外，特别是被美国科学引文索引（SCI）收录的高水平国际期刊上，以有助于促进国际间的学术交流，让世界更好地了解中国。为了将这些高质量、有影响的论文介绍给国内的广大读者，中华检验医学杂志将开设“在国外发表的SCI论文介绍”栏目，目的是使国内更多的读者共享我国的科研成果和相关学科的进展。

为顺应当今期刊网络化、数字化的发展趋势，更好地为广大作者、读者提供高质量的服务，本刊从2009年5月15日起已开通中华检验医学杂志网站及稿件远程管理系统。网站的开通，将为广大读者、作者、编者提供一个学术交流和沟通的平台。通过本刊网站，读者、作者、编者将能及时了解本领域的国内外学术动态及各专业学术会议的召开事宜。目前本刊有VIP会员1200余人，网站的开通将有利于我们更好地为VIP会员提供优质服务。

为进一步活跃学术氛围，更好地实现检验与临床的沟通，加强和提高我国形态学临床检验技术水平，本刊从2008年起设置了“临床病例（理）讨论”栏目，重点介绍检验与临床工作中遇到的疑难及典型病例，以便普及形态学检验诊断的知识和技术。文章分病历摘要、病例讨论、诊断及鉴别诊断、病理诊断及病例来源5个部分。

分子诊断技术以其显著优势和巨大潜力，已成为保障人类健康的最重要的高科技手段之一。为扩大交流，搭建起前沿研究与临床应用问畅通的桥梁，探讨逐步建立完善的分子诊断技术质量控制体系，由中国工程院医药卫生学部、中国医院协会临床检验管理专业委员会、中华医学会检验分会、中国医师协会检验医师分会、中国医药生物技术协会和全国生物芯片标准化技术委员会主办，由重庆医科大学、中华检验医学杂志、中国医院协会临床检验管理专业委员会分子诊断技术与质量管理分委会及中国医药生物技术协会生物芯片分会承办的“第二届中国分子诊断技术大会”定于2011年4月7－9日在重庆国际会议展览中心召开。

重链病(heavy chain diseases,HCD)是一组临床少见的B淋巴细胞系浆细胞异常增殖导致的疾病,其特征是合成不完全的单克隆免疫球蛋白重链而不伴随有轻链的生成[1],致使血清和尿中出现大量游离的无免疫功能的免疫球蛋白重链.该病根据重链的不同可进行免疫分型,以α型为最多见,其他类型也有报道,而ε重链病尚未见报道.自从1964年首例γ型重链病被Franklin等[2]报道以来,目前世界范围内文献报道约有120例.最近我们发现1例γ型重链病,现报告如下。