2019年 · 第42卷第09期

实验室检测是自身免疫性疾病诊治中的重要手段，对疾病的辅助诊断、病情评估和疗效判断等方面均有重要的临床价值，但当前自身免疫实验室体系内包括检测标准、质量控制、行业监督等方面不够健全，导致存在着检验结果不规范、各实验室间检测结果一致性较差等现象。在当前精准医疗背景下，随着检测技术的进步和深度学习与人工智能在检验领域的不断应用，自身免疫实验室迎来了集成化、自动化、智能化的新发展趋势。

类风湿性关节炎（RA）是一种常见的慢性、全身性自身免疫性疾病，确切发病机制尚不明确，临床表现以侵蚀性、对称性多关节炎为主。早期诊断RA对判断疾病的严重程度，改善预后以及提高RA患者生活质量有重要意义。目前，RA患者血清中已经发现多种自身抗体以及蛋白质类生物标志物，文章就以往发现的RA患者血清中存在的几种自身抗体以及近年来新发现的血清标志物在RA中的诊断、预后评价等方面的研究进展进行阐述。

风湿免疫性疾病是由自身免疫系统异常而导致的一类疾病，其发病原因较为复杂，且受多种因素的影响。基质金属蛋白酶是一种可降解细胞外基质成分的蛋白水解酶，其中，基质金属蛋白酶3是促使其降解的主要酶。近年来，研究发现MMP-3参与多种风湿免疫性疾病的发生发展，不仅可作为某些疾病的活动性标志，也可用于疾病的治疗监测。

颅内感染是一种严重危害儿童健康的较常见的中枢神经系统疾病，早期明确诊断、合理及时治疗对改善患儿远期预后具有重要意义。本文论述了颅内感染实验室常规检测方法的改进，探讨了常用感染标志物C反应蛋白、降钙素原、肿瘤坏死因子-α、白介素-6及肝素结合蛋白在颅内感染病原鉴别诊断中的作用。

现代实验室自建项目（LDTs），在精准医学和临床实验诊断学科发展中起到非常重要的作用。完善的LDTs检测平台不仅需要严格的质量控制体系和管理标准，更需要高端专业团队的技术支持。本文通过梳理LDTs的发展历程，就其在精准医疗背景下开展的意义，对检验医学学科的发展和对检验人才的培养方面所起到的积极作用，以及如何有效开展LDTs进行了探讨。

目的 探讨抗角蛋白抗体（AKA）、抗核周因子（APF）及抗环瓜氨酸肽抗体（ACPA）3种关节炎抗体在幼年特发性关节炎（JIA）的早期分型诊断意义，以及其与预后的关系。 方法 采用回顾性研究收集2013年12月至2016年6月首都儿科研究所附属儿童医院住院诊断为JIA，治疗并随访超过1年的患儿144例，其中男66例（46%），女78例（54%），诊断时年龄1岁5个月至15岁9个月。在诊断初期，进行AKA、ACPA、APF、TNFα等指标的检测。应用卡方检验或Fisher精确检验比较不同亚型之间3种抗体的阳性率；并分别应用Mann-Whitney非参数检验以及卡方检验或Fisher精确检验分析抗体阳性组与抗体阴性组之间预后的差异。 结果 144例患儿中，全身型49例（34%）；多关节炎型28例（19.4%）；少关节炎型61例（42.3%）；附着点炎相关型6例（4.2%）。诊断初期检测3种抗体，任一抗体或联合抗体阳性者共52例（36.1%），其中AKA阳性者14例（9.7%），ACPA阳性者44例（30.6%），APF阳性者12例（8.3%）。ACPA、AKA、APF3种抗体阳性检出率在不同亚型之间对比，差异有统计学意义（χ2分别为33.863、26.860、14.395，P分别为<0.01、<0.01、<0.05）；多关节炎型3种抗体阳性检出率均高于全身型及少关节炎型；非全身型患儿95例中，抗体阳性组诊断初期细胞因子TNFα水平高于抗体阴性组（Z=4.785，P<0.01）；144例患者随访1年，抗体阳性组与抗体阴性组相比，应用生物制剂治疗者（50% vs 25%）以及关节畸形者（17.3% vs 2.2%）、重要关节（髋关节及中轴关节）受累者（59.6% vs 14.1%）例数明显增多，差异有统计学意义（χ2分别为9.249、10.875、32.392，P均为<0.01）；同时，抗体阳性组患儿受累关节数（7.07±3.85）个明显多于抗体阴性组患儿（2.31±1.64）个（F=63.822，P<0.01）。 结论 AKA、APF及ACPA这3种关节炎抗体是JIA早期分型诊断的重要血清学依据，并可能与JIA患儿预后相关。

目的 探讨新生儿脐血IgE水平与36月龄儿童过敏性疾病（特应性皮炎、食物过敏、喘息和过敏性鼻炎）的相关性。 方法 采用队列研究设计，2012年10月1日至2014年5月31日在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院产科收集779例足月产孕妇分娩时新生儿脐血。随访幼儿至36月龄638名儿童，问卷调查特应性皮炎、食物过敏、喘息和过敏性鼻炎的患病情况。采用化学发光免疫分析法检测样本IgE水平，多元Logistic回归分析脐血IgE水平与儿童过敏性疾病的关系。 结果 本研究共纳入638对孕妇与儿童。孕妇年龄（29.7±3.3）岁，脐血中IgE水平分布范围在0.1~8.43 IU/mL。在剖宫产产妇中，脐血IgE升高与儿童致敏以及特应性皮炎、喘息及过敏性鼻炎发病风险增高有关（OR=1.87，P<0.01；OR=1.86，P=0.01；OR=1.28，P=0.01；OR=1.98，P=0.01）。 结论 在剖宫产中，脐血IgE水平升高与儿童过敏性疾病的发生有一定的相关性。

目的 探讨抑制性受体TIGIT基因在类风湿关节炎（RA）患者外周血NK细胞中的表达情况及其临床意义。 方法 病例对照研究。选择2018年12月至2019年6月江西中医药大学附属医院风湿免疫科58例RA患者作为RA疾病组（其中疾病活动亚组30例，疾病缓解亚组28例），健康对照组（HC）22名。收集受试者的相关临床资料，应用流式细胞术比较两组外周血NK细胞TIGIT基因表达水平，ELISA法检测外周血细胞因子IFN-γ分泌水平，并分析TIGIT基因与疾病活动度及IFN-γ分泌水平的相关性。两组间比较采用t检验或者非参数检验，两变量之间相关性采用Pearson相关分析。 结果 RA疾病组外周血NK细胞数为（13.88±4.56）×107个/L，HC组为（25.69±2.48）×107个/L，RA疾病组相较于HC组减少（t=-2.036，P=0.041），外周血NK细胞上TIGIT基因表达的百分率在RA疾病组（39.73±9.37）%与HC组（45.64±9.91）%之间的差异无统计学意义（t=-1.241，P=0.218）；但TIGIT基因表达的平均荧光强度（MFI）降低，RA疾病组为（7.21±2.03），HC组为（9.01±3.29），（t=-2.947，P=0.004）。疾病活动亚组TIGIT基因在NK细胞上的MFI为（6.72±2.01），低于疾病缓解亚组（8.75±2.64），（t=-3.316，P=0.002），且疾病活动亚组TIGIT基因在NK细胞上的MFI与DAS28评分呈负相关（r2=0.649 6，P<0.000 1）。RA疾病组细胞因子IFN-γ分泌水平为（67.13±14.84）pg/ml，高于HC组（57.21±14.23）pg/ml（t=2.757，P=0.017），且疾病活动亚组细胞因子IFN-γ分泌水平与TIGIT基因在NK细胞上的MFI呈负相关（r2=0.662 2，P<0.000 1）。RA疾病活动亚组外周血单个核细胞刺激实验结果显示刺激后相较于刺激前细胞因子IFN-γ分泌水平降低（t=11.38，P<0.000 1）。 结论 RA患者外周血NK细胞TIGIT基因表达异常，与疾病的活动性及IFN-γ的分泌水平相关。

目的 探讨联用7项肿瘤相关自身抗体（7-tumor associated autoantibodies，7-TAAB）检测辅助诊断非小细胞肺癌（NSCLC）的临床应用价值。 方法 本研究为横断面研究。收集2017年2月至2018年6月在同济大学附属东方医院就诊的81例NSCLC初诊患者作为NSCLC组，同时选择肺部良性疾病患者46例及体检健康对象55名分别作为疾病对照组（BLD）和健康对照组（HC），采用ELISA方法检测p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE的7项TAAB在肿瘤组与对照组血清中的浓度。同时检测所有入组对象血清肺癌肿瘤标志物CEA、NSE、SCC和CYFRA21-1的水平。三组间比较采用Kruskal-Wallis检验，两组间比较采用Mann-Whitney检验，阳性率比较采用卡方检验及Fisher精确检验，并绘制ROC曲线。 结果 7-TAAB中有6项（p53、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1和CAGE）的血清水平在NSCLC组均分别高于BLD组（p53：Z=-4.370，P=0.000；SOX2：Z=-4.412，P=0.000；GAGE7：Z=-4.250，P=0.001；GBU4-5：Z=-2.678，P=0.025；MAGE A1：Z=-4.504，P=0.002；CAGE：Z=-4.646，P=0.001）和HC组（p53：Z=-3.543，P=0.000；SOX2：Z=-3.383，P=0.002；GAGE7：Z=-4.893，P=0.001；GBU4-5：Z=-3.381，P=0.025；MAGE A1：Z=-3.369，P=0.001；CAGE：Z=-2.981，P=0.002），差异有统计学意义，PGP9.5项在NSCLC组与BLD组间的差异有统计学意义（Z=-2.871，P=0.044）、与HC组无差异（Z=-2.280，P=0.05），7-TAAB的单项水平在BLD组和HC组差异均无统计学差异（p53：Z=-1.917，P=0.917；PGP9.5：Z=-1.228，P=0.966；SOX2：Z=-1.789，P=0.325；GAGE7：Z=-0.563，P=1.000；GBU4-5：Z=-0.315，P=0.985；MAGE A1：Z=-2.310，P=0.857；CAGE：Z=-2.822，P=0.703）。将7-TAAB检测结果以阴阳性判断，单项自身抗体对NSCLC的特异度均≥89%，但敏感度≤39.5%。以7项中任意1项为阳性即判读为7-TAAB阳性，7-TAAB在早期（Ⅰ、Ⅱ期）NSCLC患者中的阳性率高于传统肺癌肿瘤标志物（7-TAAB：52.94%，CEA：23.53%，NSE：8.82%，CYFRA21-1∶20.59%，SCC：14.71%），对于晚期（Ⅲ、Ⅳ期）和提示预后不良的中低分化NSCLC患者敏感度更高。7-TAAB辅助诊断NSCLC的AUC为0.734，敏感度66.67%，特异度80.20%；协同CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC后AUC为0.917，敏感度为87.70%，特异度为81.20%。 结论 7-TAAB是一组有临床应用价值的辅助NSCLC诊断的血清标志物，对早期NSCLC患者的检出率优于传统血清肿瘤标志物，并且7-TAAB联合CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC可以提高NSCLC患者的诊断敏感度。

目的 探讨胸腹水中基质金属蛋白酶3（MMP-3）、腺苷脱氨酶（ADA）和乳酸脱氢酶（LDH）的水平，评估其指标联合检测在良性和恶性胸腹水中的应用价值。 方法 病例对照研究。选取2018年8月至2019年7月在湖南中医药大学第一附属医院住院治疗的278例胸腹水患者为研究对象，检测其胸腹水中MMP-3、ADA和LDH的水平，分析良性组（208例患者）和恶性组（70例患者）胸腹水MMP-3、ADA、LDH的检测值、受试者工作特性（ROC）曲线、敏感度和特异度，并对结果进行综合比较。 结果 （1）良性组胸水MMP-3水平为（89.21±61.93）ng/mL，ADA水平为（9.08±8.89）U/L，LDH水平为（143.34±68.63）U/L，恶性组胸水MMP-3水平为（205.63±98.16）ng/mL，ADA水平为（10.96±5.04）U/L，LDH水平为（243.44±131.20）U/L，良性组腹水MMP-3水平为（84.91±73.48）ng/mL，ADA水平为（3.48±2.80）U/L，LDH水平为（99.48±69.53）U/L，恶性组腹水MMP-3水平为（174.89±82.48）ng/mL，ADA水平为（6.31±4.42）U/L，LDH水平为（0191.86±94.52）U/L，恶性组胸水、腹水MMP-3、ADA、LDH水平均高于良性组，差异有统计学意义（Z1值分别为5.215、2.549、3.212，Z2值分别为6.188、4.524、6.38，P1和P2均<0.05）。（2）MMP-3诊断肺癌胸水、肝癌腹水和胃癌腹水的曲线下面积（AUC）分别为0.853、0.826、0.763，敏感度分别为76%、96.9%、92.3%，特异度分别为80%、64.5%、61.6%。MMP-3对肺癌胸水、肝癌腹水的诊断效能均高于ADA（AUC分别为0.672、0.691）和LDH（AUC分别为0.717、0.804），而对胃癌腹水的诊断效能低于ADA（AUC为0.808）和LDH（AUC为0.849），以LDH最佳。（3）MMP-3、ADA、LDH指标联合诊断肺癌胸水、肝癌腹水和胃癌腹水的AUC分别为0.861、0.842、0.879，敏感度分别为64%、96.9%、84.6%，特异度分别为92.9%、63.8%、80.4%。在肺癌胸水、肝癌腹水和胃癌腹水中，三项联合检测的诊断效能均优于MMP-3和LDH联合检测（AUC分别为0.86、0.839、0.872）、MMP-3和ADA联合检测（AUC分别为0.845、0.831、0.855）、LDH和ADA联合检测（AUC分别为0.713、0.791、0.846）。 结论 MMP-3对良性和恶性胸腹水鉴别诊断有重要意义，可能作为良性和恶性胸腹水鉴别诊断的重要指标之一，MMP-3分别与ADA和LDH联合检测和三项联合检测的诊断效能优于单项指标，对于鉴别诊断良性和恶性胸腹水有一定的临床价值。

目的 建立一种间接ELISA法定量检测IgG型抗人IgE自身抗体，并初步评估慢性荨麻疹（CU）患者血清抗IgE含量。 方法 选取2018年1至12月于上海市第一人民医院首诊的75例CU患者及120名健康体检者，收集相应血清样本及临床资料。以人IgE包被微孔板，加入人源化抗人IgE标准品（奥马珠单抗）或待检血清，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgG，建立间接酶联免疫法，并进行条件优化及方法学评价。采用Mann-Whitney U检验、卡方检验分析CU患者及健康人血清IgE水平，采用受试者工作曲线（ROC）分析抗IgE对CU的诊断效能。 结果 IgE包被量5.0×10-4 mg/ml，血清稀释度1∶300，酶标抗体稀释度1∶100 000；标准曲线R2=0.996；批内及批间变异系数3.9%~7.5%、6.0%~8.2%；血红蛋白≤1.3 g/L、三酰甘油≤4.6 mmol/L、胆红素≤171 μmol/L时，对检测结果无明显影响；低、高浓度样品回收率95.9%、108.4%；空白限5.8×10-4 mg/ml，检出限1.8×10-3 mg/ml，定量限2.0×10-3 mg/ml；线性范围约2.0×10-3~354.4 mg/ml；抗IgE达354.4 mg/ml时未见钩状效应；血清4 ℃过夜、反复冻融6次后抗IgE水平保持稳定。CU患者血清抗IgE水平[19.0（1.9，58.6）mg/ml]显著高于健康人血清抗IgE水平[0.7（0.002，11.1）mg/ml]，P<0.001；当抗IgE截断值定为15.3 mg/ml时，CU患者阳性率为54.7%，显著高于健康对照（18.3%），P<0.001，AUC达0.736。 结论 成功建立血清抗IgE的间接ELISA法，CU患者血清中存在抗IgE自身抗体。

目的 探讨不同生化血清非定值质控品的瓶间差、开瓶稳定性及互换性。 方法 于2016年5月在检验科分别对Pretrol®生化非定值质控品与伯乐生化非定值质控品进行了比对相关检测。瓶间差是连续测定多瓶质控品结果的批间不精密度，并剔除同一瓶质控品连续测定结果的批内不精密度，计算质控品的瓶间差。开瓶稳定性是按厂商说明书要求复溶，并分别计算在2~8℃条件下保存7 d，及在-20 ℃条件下保存30 d的不精密度。互换性是计算不同质控品间在不同仪器上的同一个项目的不精密度。 结果 Pretrol®生化非定值质控品中，常规生化13个评估项目的瓶间不精密度（CV浓度1/CV浓度2）分别为钾（0.26%/0.42%）、钠（0.26%/0.21%）、磷（0.00%/0.62%）、胆固醇（0.56%/0.54%）、总蛋白（0.52%/0.33%）、白蛋白（0.44%/2.00%）、谷丙转氨酶（1.72%/0.57%）、γ-谷氨酰氨基转移酶（0.52%/0.62%）、谷草转氨酶（3.10%/1.09%）、乳酸脱氢酶（0.76%/0.91%）、碱性磷酸酶（1.13%/0.97%）、淀粉酶（0.30%/0.39%）和葡萄糖（0.00%/0.40%），均符合临床生物化学检验常规项目分析质量指标（WS/T 403-2012）内规定的CV%要求；常规生化13个评估项目，在2~8 ℃条件下保存7 d及在-20 ℃条件下保存30 d的不精密度（保存在2~8 ℃条件下的CV浓度1/CV浓度2；保存在-20℃条件下的CV浓度1/CV浓度2）分别为钾（1.06%/0.36%；0.74%/0.48%）、钠（0.49%/0.59%；0.72%/0.65%）、磷（0.95%/0.80%；1.43%/0.84%）、胆固醇（1.49%/1.58%；2.17%/1.80%）、总蛋白（0.84%/0.75%；1.60%/1.68%）、白蛋白（1.33%/2.28%；1.94%/2.43%）、谷丙转氨酶（1.41%/0.51%；3.24%/1.60%）、γ-谷氨酰氨基转移酶（1.16%/1.16%；2.85%/2.49%）、谷草转氨酶（4.37%/2.14%；2.99%/1.31%）、乳酸脱氢酶（2.70%/2.54%；3.84%/2.97%）、碱性磷酸酶（2.63%/1.96%；2.31%/2.10%）、淀粉酶（0.95%/2.19%；1.58%/1.38%）和葡萄糖（0.60%/0.48%；1.41%/1.55%），均符合临床生物化学检验常规项目分析质量指标（WS/T 403-2012）内规定的CV%要求。Pretrol®生化非定值质控品与伯乐生化非定值质控品用于常规生化项目检测的不精密度（CVp浓度1/CVp浓度2；CVq浓度1/CVq浓度2）分别为钾（0.52%/0.46%；2.39%/0.47%）、钠（0.30%/0.17%；0.81%/0.47%）、磷（2.72%/1.11%；4.57%/2.07%）、胆固醇（0.29%/1.38%；2.94%/1.81%）、总蛋白（0.66%/2.46%；1.85%/2.54%）、碱性磷酸酶（2.67%/4.66%；3.58%/8.55%）、总胆红素（5.71%/5.09%；9.55%/7.41%）、白蛋白（1.10%/2.61%；4.79%/1.93%）、谷丙转氨酶（6.42%/1.25%；5.74%/1.63%）、γ-谷氨酰氨基转移酶（2.27%/4.35%；4.38%/0.74%）、谷草转氨酶（0.56%/2.84%；0.91%/2.11%）和乳酸脱氢酶（2.36%/2.47%；3.10%/1.52%）。Pretrol®生化非定值质控品与伯乐生化非定值质控品相比，对于真实患者样本的互换性更优。 结论 本研究两种生化血清非定值质控品的瓶间差、开瓶稳定性及互换性均较好，可达到临床实验室常规开展室内质控的要求。

目的 探讨应用全外显子组测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因诊断Alport综合征的临床价值并拓宽基因突变谱。 方法 观察性研究。先证者为一名6岁女孩，4岁时偶然发现镜下血尿。收集患儿的临床资料，采集患儿及其父母、哥哥、姐姐外周静脉血3 ml，提取基因组DNA，应用全外显子组测序检测基因的编码区序列，通过突变分析筛选到COL4A4的缺失突变，Sanger测序对筛选到的c.1826delC的突变进行验证。 结果 全外显子测序未发现患儿存在COL4A3和COL4A5基因突变，但在COL4A4基因（NM_000092）外显子25上检测到c.1826delC（p.Pro609Glnfs*44）杂合突变，经分析，为移码突变。其父亲和姐姐均携带该突变，其母亲和哥哥该位点为野生型。该家系符合常染色体显性遗传型Alport综合征。 结论 应用全外显子组测序可以对临床疑似Alport综合征患儿明确诊断。本研究中新发现的COL4A4 c.1826delC突变，拓宽了COL4A4基因对Alport综合征的突变谱。

外泌体是一类由多种细胞类型分泌的大小约40~100 nm，具有脂质双层膜结构的细胞外囊泡。它们天然存在于多种体液中，是细胞间通讯的重要介质。研究表明，外泌体与结直肠癌的发生发展、侵袭转移以及化疗耐药密切相关。本文综述了结直肠癌来源的外泌体在肠癌发病机制、诊断预后和治疗应用中的作用，以期为寻找结直肠癌治疗新靶点提供思路。

真核生物转录组中含有大量非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA），ncRNA在基因表达调控和各种细胞生理、病理进程中发挥着重要作用。近年来，ncRNA在肿瘤早期诊断领域的研究是热点。本文将以ncRNA中的微小RNA（microRNA，miRNA）、长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）和环状RNA（circular RNA，circRNA）为代表，阐述3种ncRNAs作为乳腺癌外周血诊断标志物的研究进展，展望ncRNA在乳腺癌临床研究及临床转化中的前景，以期为乳腺癌早期诊断标志物的发现及诊治过程的监控提供思路。

本文对国家自然科学基金委员会2010至2018年检验医学领域有关肿瘤标志物项目的资助情况进行分析总结。对肿瘤标志物项目涉及的常见肿瘤种类、标志物生化性质进行了分类统计分析，并分析总结了9年来"肿瘤标志物"项目特点，指出了今后本领域研究的发展趋势。