超速离心-高效液相色谱法测定高、低密度脂蛋白胆固醇的研究——β定量法的改良与验证王思明 董军 李红霞 牟洪娜 杨睿悦 周伟燕 陈文祥
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-8158.2019.08.008
目的
建立一种比现有参考方法样本量更小和操作步骤更简便的小体积β-定量法,用于人血清高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的测定。
方法
方法学建立。所用血清样品为胆固醇参考方法实验室网络室间比对血清,由美国CDC统一提供。0.8 ml血清超速离心获得底部组分(含高密度脂蛋白和低密度脂蛋白),用肝素-锰离子试剂沉淀底部组分中的含载脂蛋白B的脂蛋白,上清液获得高密度脂蛋白,采用高效液相色谱参考方法分别测定底部组分胆固醇和上清液中高密度脂蛋白胆固醇,两者相减得低密度脂蛋白胆固醇。用小体积β-定量法与目前国际公认的美国CDC所建β-定量参考方法进行对比,评价所建方法的精密度、准确性。
结果
小体积β-定量法测定高、低密度脂蛋白胆固醇的总不精密度分别为0.65%~1.75%和0.63%~1.11%,测定结果与现有参考方法测量结果一致。
结论
小体积β-定量法方法可靠、精密、简便,血清用量、实验通量、可操作性等方面均优于现有参考方法,可望用作测定高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇新的参考方法。
同位素稀释液相色谱串联质谱定量检测血清载脂蛋白E及其表型分型的方法学建立李卿 居漪 孙贺伟 范霄宇 张素洁 金中淦 孙立山
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-8158.2019.08.009
目的
采用同位素稀释液相色谱串联质谱技术(ID-LC-MS),建立一种对血清载脂蛋白E定量检测并分型的方法。
方法
方法学建立。以同位素标记精氨酸的肽段为内标,对标本进行变性、烷基化和胰蛋白酶酶解处理,液相色谱部分采用SB-C18色谱柱分离,质谱部分采用正离子模式和多反应监测定量和分型。评价该方法的精密度、准确度和线性范围等。收集上海市东方医院2018年10至12月40份血清标本对ID-LC-MS和免疫法进行方法学比较。Deming回归和Bland-Altman分析用于方法学比较。SPSS 24软件用于线性评价中的多项式回归分析。
结果
ApoE的所选酶解肽段在4 h内即达释放峰值,SE肽段3 h时达到释放峰值。对ApoE分型发现E3/E3、E2/E3和E3/E4型。实验室内不精密度均值为5.2%。低浓度和高浓度准确性评价标本的测定值与靶值的相对偏差分别为7.6%和3.6%。与免疫法比对,Deming回归的截距的95%置信区间为6.44~11.44(P<0.05),斜率的95%置信区间为0.77~0.89(P<0.05),两者的相关性r=0.97。两者差值的均值是-2.95 mg/L,95%置信区间为-4.26~1.65 mg/L。本方法在16.9~58.5 mg/L内呈线性关系。
结论
本研究建立的ID-LC-MS方法可用于定量血清ApoE,并对ApoE进行蛋白分型。
APOE和SLCO1B1基因多态性与冠心病严重程度的相关性研究龙彦 马寅婷 孙媛媛 刘畅 高华 赵晓涛 刘心语 刘继轩
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-8158.2019.08.010
目的
检测APOE、SLCO1B1基因多态性,探讨其与冠心病发病风险及严重程度的相关性。
方法
病例对照研究连续募集2017年3月至11月期间,在北京大学人民医院心血管内科就诊的疑似冠心病患者1 267例,经冠脉造影及纳排标准筛选后,最终入选冠心病患者391例为病例组、非冠心病患者223例为对照组,应用Gensini评分对冠心病患者严重程度进行评估。Real-time PCR法检测APOE(388T>C,526C>T)、SLCO1B1(388A>G,521T>C)位点突变,并采用Sanger测序法验证。结合环境因素,探讨APOE和SLCO1B1基因多态性与冠心病发病风险、病情严重程度的关系。
结果
两种方法检测APOE、SLCO1B1基因多态性的结果符合率为100%,二者基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡。APOE在病例组和对照组中,均以ε3/ε3基因型和ε3等位基因最为常见,分别为ε3/ε3(70.8%,73.1%)、ε3(83.5%,85.2%);APOE各基因型及等位基因在两组间差异无统计学意义(P>0.05);ε4+在病例组Gensini≥72的亚组中分布比例较高(P<0.05)。SLCO1B1在病例组和对照组中均以基因型*1b/*1b和等位基因*1b比例最高,分别为*1b/*1b(37.3% vs 36.8%)、*1b(60.1% vs 61.7%)。SLCO1B1基因型及等位基因频率分布在两组间及不同冠心病疾病严重程度亚组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
结论
本研究未发现APOE和SLCO1B1基因多态性与冠心病发病风险有关,但APOE ε4+可能增加冠心病的疾病严重程度。
载脂蛋白C4在妊娠期高血压疾病内皮细胞损伤中的作用刘非 龙燕 韩梦如 江敏 赵学芹 高飞 麻庆玲 杨红玲
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2019.08.011
目的
通过研究妊娠期高血压患者(HDP)疾病发生前血浆脂代谢相关蛋白的改变,初步探讨血浆载脂蛋白C4(APOC4)升高在HDP发生中的作用机制。
方法
采用巢式病例对照研究,收集2014年11月至2017年3月在广州市妇女儿童医疗中心常规产检,并分娩或剖宫产孕妇血浆。采用非标记质谱法筛选12对HDP患者与正常妊娠者20周前血浆脂代谢相关蛋白的表达差异,并采用48对HDP患者与正常妊娠者20周前血浆样本进行验证;研究两组差异倍数最显著的脂代谢相关蛋白APOC4对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)单层通透性和一氧化氮分泌的影响。组间比较使用One-way ANOVA,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果
与正常对照相比,HDP患者妊娠20周前血浆脂代谢相关蛋白APOC4、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、载脂蛋白E(APOE)、载脂蛋白C3(APOC3)和β2糖蛋白1(APOH)分别上调至1.94倍、1.82倍、1.59倍、1.55倍和1.38倍,磷脂转运蛋白(PLTP)下调至0.78倍,差异有统计学意义(t值分别为2.499,2.497,2.081,2.098,2.426和2.564,P均<0.05)。细胞实验显示50 ng/ml APOC4可增加20% HUVEC细胞的通透性(F=455.4,P<0.01),使血管舒张因子一氧化氮水平下调25%(F=61.92,P<0.01)。
结论
HDP发生前,患者血浆脂质代谢蛋白水平已发生改变,存在脂代谢异常。其中,APOC4可能通过增加血管内皮细胞通透性,抑制内皮源性NO分泌,造成内皮细胞损伤和功能障碍。
应用液相色谱-串联质谱法系统检测糖尿病肾病和糖尿病神经病变患者尿儿茶酚胺水平沈莹 罗霞 管青 孙自镛 程黎明
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-8158.2019.08.012
目的
研究尿儿茶酚胺水平与Ⅱ型糖尿病肾病及神经病变的关系。
方法
病例对照研究。收集华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的Ⅱ型糖尿病患者130例(年龄27~81岁,男75例,女55例)和健康对照118名(年龄27~76岁,男67名,女51名)的24 h尿液。另收集Ⅱ型糖尿病患者115例(年龄27~77岁,男75例,女40例)和健康对照93名(年龄25~74岁,男57名,女36名)的随机尿。根据尿白蛋白清除率的检测结果,Ⅱ型糖尿病患者分为肾病组(24 h尿:37例,随机尿:32例)和非肾病组(24 h尿:32例,随机尿:35例);根据问卷调查,定量感觉试验及自主功能试验,Ⅱ型糖尿病患者分为神经病变组(24 h尿:31例,随机尿:23例)和非神经病变组(24 h尿:30例,随机尿:25例)。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定尿儿茶酚胺(CAs)的含量,包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和总儿茶酚胺(总CAs)的含量,并探讨不同分组患者儿茶酚胺的水平。采用χ2检验、独立样本t检验和Mann-Whitney非参数检验对结果进行分析。
结果
Ⅱ型糖尿病肾病患者24 h尿液E(0.74±0.24)μg/24 h,NE(9.22±4.02)μg/24 h,DA(64.77±21.68)μg/24 h和总CAs(74.72±25.65)μg/24 h低于非肾病组[E:(4.23±0.50)μg/24 h,U=10,P<0.001;NE:(32.31±1.74)μg/24 h,t=-2.72,P=0.011;DA:(219.58±27.51)μg/24 h,t=-2.88,P=0.007;总CAs:(256.02±30.65)μg/24 h,t=-3.02,P=0.005]且差异具有统计学意义(P<0.05)。在随机尿液中糖尿病肾病组NE、DA和总CAs含量与非肾病组的差异亦具有统计学意义(P<0.05)。
结论
本研究结果表明糖尿病肾病患者尿儿茶酚胺含量低于非肾病患者,可能与糖尿病肾病的发生发展有关。
血清AMH与抑制素B检测对多囊卵巢综合征的辅助诊断应用张倩岚 岳朝艳 应春妹
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2019.08.013
目的
探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清抗苗勒管激素(AMH)与抑制素B(INHB)的检测及其临床意义。
方法
回顾性研究,选取2018年1月至10月在复旦大学附属妇产科医院就诊的240例PCOS患者,同期纳入复旦大学附属妇产科医院体检中心240名健康女性作为对照组。检测并分析两组患者血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、性激素结合球蛋白(SHBG)、AMH与INHB的水平。采用单样本Kolmogorov-Smimov检验、独立样本T检验和Logistic回归分析等统计学方法对数据进行分析。
结果
PCOS组AMH、INHB、E2、LH、FSH、T、SHBG和INHB/AMH检测值分别为(8.55±3.17)ng/ml、(101.7±15.2)pg/ml、(63±50)pg/ml、(13.0±5.8)mIU/ml、(6.5±1.5)mIU/ml、(0.68±0.23)ng/ml、(62±52)nmol/ml和(24.03±26.35);对照组各项检测值分别为(4.34±2.07)ng/ml、(83.3±7.7)pg/ml、(66±25)pg/ml、(7.1±3.7)mIU/ml、(7.2±1.9)mIU/ml、(0.40±0.11)ng/ml、(67±37)nmol/ml和(42.83±62.22)。其中PCOS组AMH、INHB、LH、T和SHBG检测值均高于对照组(t值分别为9.843、7.373、9.021、9.349和3.867),且差异均有统计学意义(P<0.05);E2和FSH检测值均低于对照组(t值分别为0.762和-1.342),差异无统计学意义(P>0.05);INHB/AMH比值低于对照组(t值为-2.332),差异有统计学意义(P<0.05)。AMH、INHB及AMH与INHB联合检测PCOS的曲线下面积分别为0.762、0.677与0.789;AMH预测多囊卵巢综合征的cut-off值为6.96 ng/ml,敏感度为61.0%,特异度为82.1%。INHB预测多囊卵巢综合征的cut-off值为94.9 pg/ml,敏感度为59.0%,特异度为74.1%。AMH与INHB联合检测预测多囊卵巢综合征的敏感度为83.6%,特异度为60.6%。PCOS组超声、T、AMH与INHB检测指标阳性率分别为51.25%、61.25%、69.58%和66.25%。
结论
AMH与INHB联合检测可能会提高对PCOS诊断的敏感度和特异度,其血清水平检测较为稳定。
血清补体C1q水平与代谢综合征的相关性研究唐浩能 刘首娉 陈若虹 付瑶阳 庄思琪 胡敏 唐玲丽
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2019.08.014
目的
分析代谢综合征(MS)患者血清补体C1q水平的变化,探讨MS患者血清补体C1q水平与体内糖、脂代谢指标的相关性。
方法
采用横断面研究,选取2017年7月至2018年6月在中南大学湘雅二医院就诊的患者及健康体检人群作为研究对象。共纳入152例确诊的MS患者及90名健康对照人群进行研究。测量体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)等人体测量学参数;检测血糖(GLU)、血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及C1q水平;比较各组之间的差异,并进行相关性分析。
结果
MS患者的血清C1q水平(244.34±62.66)mg/L显著高于健康对照人群(202.37±35.92)mg/L(t=-6.250,P=0.000)。Spearman相关性分析显示MS患者血清C1q水平(244.34±62.66)mg/L与血清TG水平[2.34(1.89,3.62)]mmol/L(r=0.245,P=0.001)、TC水平(4.91±1.26)mmol/L(r=0.398,P=0.000)、LDL-C水平(3.23±1.03)mmol/L(r=0.325,P=0.000)呈显著正相关;肥胖的MS患者C1q水平(258.92±69.59)mg/L与收缩压(SBP)(144.76±22.94)mmHg(r=0.388,P=0.018)、血清TG水平[2.65(1.87,3.82)]mmol/L(r=0.482,P=0.003)、TC水平(5.18±1.31)mmol/L(r=0.529,P=0.001)均具有显著的正相关关系。以C1q为因变量进行多元逐步回归分析显示在校正性别、年龄等其他混杂因素后,血清TG水平是MS患者(β=0.302,P=0.000)以及肥胖的MS患者(β=0.653,P=0.000)C1q水平的独立影响因素。
结论
MS患者血清C1q水平显著升高,C1q水平与血脂代谢谱的水平密切相关,血清TG水平为代谢综合征患者C1q水平的独立影响因素。
外周血循环肿瘤细胞和游离DNA联合检测在乳腺癌辅助诊断中的临床价值张潇分 贾春平 陈宏梅 施英娟 鞠少卿 王旭东 储海丹 丛辉
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2019.08.015
目的
探讨外周血液中循环肿瘤细胞(CTCs)和循环游离DNA(cfDNA)检测在乳腺癌患者中的临床价值。
方法
收集2017年7月至2018年4月就诊于南通大学附属医院的47例乳腺癌患者(Ⅱ期7例、Ⅲ期19例、Ⅳ期21例),24例乳腺良性疾病患者,以及同期28名健康体检者外周血液标本。采用基于尺寸的高通量微流控芯片捕获CTCs、基于Alu序列的实时荧光定量PCR检测游离DNA长、短片段(247 bp、115 bp),并以长、短片段扩增产物比值作为DNA完整性指标。采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验比较各组差异,分析CTCs和cfDNA与乳腺癌临床参数的关系。绘制ROC曲线并计算曲线下面积(AUC)用于评价血细胞CTCs及血浆cfDNA检测作为诊断标准的可行性。
结果
47例乳腺癌患者CTCs(13.98±12.36)个/ml、cfDNA的完整性(Alu 247/115)(0.768 7±0.386 8)与正常对照组的(1.14±1.35)个/ml、0.509 4±0.245 6相比,差异有统计学意义(U值分别为126.5、359.0,P均<0.001);ROC曲线下面积为:CTCs:0.885(95%CI:0.805~0.965),cut-off值为7.68个/ml,灵敏度为80.4%,特异度为96.4%;Alu 247/115:0.727(95%CI:0.608~0.847),cut-off值为0.431,灵敏度为71.7%,特异度为71.4%。CTCs和Alu 247/115联合检测时曲线下面积为0.919(95%CI 0.854~0.984),高于各指标单项检测。
结论
CTCs与cf DNA可能是乳腺癌辅助诊断的潜在生物学指标,CTCs与cf DNA联合检测可能提高乳腺癌患者的诊断率。
白细胞分化抗原160对慢性淋巴细胞白血病的诊断及预后意义赵四书 刘露 刘芳 仇海荣 范磊 李建勇 吴雨洁
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-8158.2019.08.016
目的
探讨CD160抗原在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的表达及在临床诊断中的价值,以及CD160抗原表达与患者的遗传学异常的相关性。
方法
回顾性研究。收集2015年1月至2017年12月南京医科大学第一附属医院(江苏省人民医院)收治的初诊的成熟小B细胞淋巴瘤336例。依据2008年第4版《造血和淋巴组织肿瘤的WHO分类》诊断200例CLL患者,根据英国马斯登皇家医院免疫标志积分系统又分为典型CLL122例,其中男80例,女42例,年龄45~82岁(中位年龄65岁);不典型CLL78例,其中男48例,女30例,年龄43~76岁(中位年龄60岁);49例套细胞淋巴瘤(MCL)患者,其中男39例,女10例,年龄27~70岁(中位年龄56岁);以及87例CD5-的小B细胞淋巴瘤(SBL)患者,其中男60例,女27例,年龄38~80岁(中位年龄63岁)。应用多参数流式细胞术(FCM)检测336例患者肿瘤细胞CD160的表达率和平均荧光强度(MFI),同时采用荧光原位杂交(FISH)技术检测145例CLL患者P53缺失、107例CLL患者13q14缺失、110例CLL患者ATM缺失、104例CLL患者6q23缺失、104例CLL患者+12,以及138例CLL患者IGH重排,比较CD160+CLL患者与CD160-CLL患者遗传学和分子生物学特点。
结果
122例典型CLL患者中CD160阳性表达率为59.8%(73/122),MFI范围为14.9~173.9,78例不典型CLL患者中CD160阳性表达率为64.1%(50/78),MFI为范围为29.6~193.7,而MCL患者中CD160均为阴性。CD160在典型及不典型CLL中的阳性率均明显高于MCL,差异有统计学意义(χ2分别为51.16,51.81,P<0.01);在CD5-的SBL中CD160+阳性率为1.1%(1/87),CD160在典型及非典型CLL中的阳性率均明显高于CD5-的SBL,差异有统计学意义(χ2分别为80.00,80.02,P<0.01)。51例CD160-的CLL中IGH重排率为31.6%(18/51),87例CD160+CLL患者的IGH重排率为62.1%(54/87),CD160+CLL患者的IGH重排率高于CD160-CLL患者,差异有统计学意义(χ2=9.24,P<0.05)。
结论
CD160+对于辅助诊断CLL有重要价值,尤其有助于不典型CLL和MCL以及其他类型SBL的诊断和鉴别诊断。
艰难梭菌核酸检测试剂盒诊断艰难梭菌感染的多中心研究吴湜 周芬芬 倪语星 胡云建 陈烨 俞云松 黄海辉
中华检验医学杂志2019年 42卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2019.08.017
目的
评价Xpert艰难梭菌核酸(DNA)检测试剂盒(实时荧光PCR法)快速诊断艰难梭菌感染在中国的应用价值。
方法
2012年1月至2014年4月复旦大学附属华山医院、上海交通大学医学院附属瑞金医院、北京医院、南方医科大学南方医院和浙江大学医学院附属邵逸夫医院同时采集急性医院获得性腹泻患者粪便标本行产毒细菌培养(金标准)和Xpert艰难梭菌核酸检测试剂盒检测,结果不一致时粪便标本送第三方tcd B基因测序。采用SAS9.3计算Xpert艰难梭菌核酸检测试剂盒的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。
结果
共采集745份粪便标本,其中46份标本由于细菌复苏失败,未能进行细胞毒中和试验,因此有效标本数为699份。与金标准相比,Xpert艰难梭菌核酸检测试剂盒的敏感度为94.1%(144/153)(95%CI:89.1%~97.3%);特异度为93.2%(509/546)(95%CI:90.8%~95.2%);阳性预测值为79.6%(144/181)(95%CI:72.9%~85.2%);阴性预测值为98.3%(509/518)(95%CI:96.7%~99.2%);总一致率为93.4%(653/699)(95%CI:91.3%~95.1%);Kappa值为0.819。其中对于分离到不产A毒素仅产B毒素菌株的粪便标本,Xpert试剂盒的敏感度和特异度分别为98.4%(62/63)(95% CI:90.3%~99.9%)和93.2%(509/546)(95% CI:90.8%~95.2%)。两种方法结果不一致的粪便样品经测序并再次分析后,以金标准为参考Xpert试剂盒敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别上升至98.8%(171/173),98.1%(516/526),94.5%(171/181)和99.6%(516/518)。
结论
与产毒细菌培养法相比,Xpert艰难梭菌核酸检测试剂盒的敏感度为94.1%(144/513),特异度为93.2%(509/546)。同时由于该试剂盒操作简便,能在1 h内获得检测结果,有助于艰难梭菌感染的早诊早治。