2019年 · 第42卷第06期

近年来，质谱技术因其高特异性、高灵敏度、一次可检测多个指标等特点，在临床检验领域的作用与优势日益凸显。目前质谱在临床应用中有突出优势和应用较为成熟的技术和领域，常用质谱技术的类型、主要的临床应用具有各自特点。我国质谱临床应用面临一些挑战，质谱技术未来必将拥有广阔的发展前景。

类固醇激素的水平能够反映体内的内分泌功能，为内分泌疾病的诊疗提供精准的信息。液相色谱-质谱技术具有高特异、高灵敏度的特点，更优于传统免疫学方法，成为临床类固醇激素检测的重要手段。我们需要围绕临床需求，规范地应用这项技术，推动其良性发展。

遗传代谢疾病又称为先天性代谢缺陷疾病，是指由于基因突变引起酶缺陷、细胞膜功能异常或受体缺陷，从而导致机体生化代谢紊乱，造成中间或旁路代谢产物蓄积，或终末代谢产物缺乏，而引起一系列临床症状的一组疾病。遗传代谢疾病多在儿童时期发病，呈进行性加重，出现不可逆的神经系统损害，甚至死亡。串联质谱技术（MS/MS）在国内外已广泛应用于新生儿疾病筛查中，该技术不但扩展了新生儿疾病筛查谱，同时提高了筛查效率及筛查特异度、敏感度，为疾病筛查开辟了新的领域。随着人们对各种遗传代谢性疾病机制认识的加深和质谱技术的日益成熟，串联质谱技术将会对更多的疾病进行筛查及诊断，临床应用意义重大。

动脉粥样硬化（AS）是许多心脑血管疾病的病理基础，易损斑块的破裂更是导致中老年人群残疾与死亡的重要原因。寻找到可靠的用于诊断、治疗和判断AS发展的血清标志物尤为重要。本研究旨在总结一些新发现的，可以通过调控内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞生物学功能来控制AS发生发展的microRNAs（miRNAs），及其作用的靶点与信号通路，为抗AS治疗提供新思路，并为寻找到可以评估AS发生及判断斑块稳定性的血清标志物提供理论基础。

目的 使用骨关节结核患者血清、类风湿关节炎患者血清及健康成人查体血清，寻找其中具有统计学差异的蛋白多肽峰作为鉴别标志峰并建立相关诊断模型，以辅助诊断骨关节结核。 方法 临床型研究。收集2018年8月至12月临床已确诊骨关节结核、类风湿关节炎患者入院首日治疗前的相应血清标本并同时收集健康成人查体相应血清标本作为对照。利用MALDI-TOF MS进行质谱检测后使用相关软件进行血清多肽指纹图谱数据分析，筛选差异较为明显的蛋白多肽峰以建立诊断模型。 结果 通过软件分析成功建立了以m/z 2 943.9、5 929.6、7 615.4、9 033.8为差异蛋白多肽的骨关节结核与健康成人查体诊断模型、以m/z 4 195.6、5 847.6、5 929.6、7 748.6为差异蛋白多肽的骨关节结核与类风湿关节炎诊断模型。经过验证组验证两种模型的灵敏度分别为95.00%、97.50%；特异度分别为85.71%、88.46%；准确率分别为89.58%、92.39%；ROC曲线AUC值分别为0.885 9、0.870 9。 结论 通过质谱检测及软件分析成功寻找出具有统计学差异的血清蛋白多肽标志物并建立了相关诊断模型，对于辅助诊断骨关节结核具有一定的参考价值。

目的 利用由50个靶基因所组成的测序panel，分析骨髓增殖性肿瘤（MPN）三种主要亚型原发性血小板增多症（ET），真性红细胞增多症（PV），以及原发性骨髓纤维化（PMF）的突变谱，以便为该病的诊断和预后提供有价值的信息。 方法 回顾性研究方式，收集2010年至2017年间来自华山医院以及长海医院血液科的MPN患者标本共53例。所有患者的诊断均符合2016年WHO的诊断标准，包括ET31例（男11例，女20例，中位数年龄55岁），PV17例（男12例，女5例，中位数年龄65岁），PMF5例（男4例，女1例，中位数年龄67岁），并进行其骨髓或者血液标本DNA的二代测序。根据COSMIC，dbSNP，Clinvar等公共数据库对测序结果进行分析，绘制MPN人群的突变谱，并结合患者的临床随访资料进行解读。 结果 除去典型的JAK2、CALR、MPL突变，还检测出了另外11种基因的致病性突变，以及4种与赋予个体MPN疾病易感性相关的寡核苷酸多态性（SNP）位点（rs4858647，rs9376092，rs58270997，rs621940）。平均每个患者的突变基因数目为2.3个。全部患者（53例）中，基因突变频率由高到低依次为TET2（40%），EZH2（26%），ASXL1（11%），MIR662（6%），SF3B1（6%），BARD1（6%），DNMT3A（4%），KIT（2%），RUNX1（2%），TP53（2%），NRAS（2%）。 结论 利用靶向基因二代测序技术，能实现一次性对多例典型的BCR-ABL阴性的MPN患者进行多基因外显子测序，检测周期可缩短至两天，可以发现除了JAK2、CALR、MPL突变之外其他的致病性突变，在临床有较好的应用前景。

目的 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术在碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（CRKp）同源性分析中应用的可行性。 方法 回顾性分析。收集2017年1月至12月全军细菌耐药监测网上海长海医院临床标本分离的肺炎克雷伯菌非重复菌株57株，新疆乌鲁木齐市第一医院临床标本分离的肺炎克雷伯菌非重复菌株36株；纳入标准：对亚胺培南、美罗培南或厄他培南当中任一药物耐药菌株并鉴定质谱蛋白峰数大于100的菌株，共计39株；以脉冲场凝胶电泳（PFGE）结果为依据，将待测菌株分为以下三组：高度同源组（包括产OXA-48型CRKp菌株17株）、中度同源组（产KPC型CRKp菌株16株）和非同源性组（包括携带其他耐药机制的CRKp菌株8株）。所有待测菌株经MALDI-TOF MS分析后，所获结果分别采用BioNumeric软件和质谱仪自带的同源性分析软件（SARAMIS数据库软件）的两种分析方法进行同源性分析。以PFGE分析结果为参考标准，评价其他三种分析方法所获结果的可靠性。 结果 对高度同源组菌株，采用SARAMIS两种分析方法分析KA-A型质谱数据Identical mass值高于80%，相似度高于85%，能够获得与PFGE分析结果较一致的结果；对非同源组的菌株，SARAMIS两种分析方法分析质谱数据Identical mass值低于80%，相似度不足85%，所获分型结果与PFGE结果有较好的一致性，能够反映菌株间的差异性；对中度同源组菌株，BioNumeric软件和SARAMIS数据库软件分析质谱数据KC-A型的identity mass值不足70%；相似度不足90%，所获得的结果与PFGE结果之间均存在着较大的差异，无法获得与PFGE结果相一致的分析结果。 结论 MALDI-TOF MS结果采用BioNumeric软件和SARAMIS数据库软件进行同源性分析可作为具有高度同源性和非同源菌株间同源关系的初筛方法，但仍需要其他方法加以验证；对同源关系多样的菌株，上述方法仍缺乏稳定性，不适于进行菌株间同源关系分析。

目的 探讨分离胶促凝管离心富集法和差速离心富集法联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS，简称MS）直接检测中段尿样本中病原菌的临床效果。 方法 收集2017年5月至2018年4月复旦大学附属华东医院门诊及住院患者的中段尿样本2 150份，其中男性934例，女性1 216例，年龄（72.0±17.5）岁。通过镜检定量后对细菌计数≥105cfu/ml的中段尿样本分别采用两种预处理方法富集细菌，再用MS进行直接鉴定，并同步采用中段尿常规定量培养和MS鉴定。以中段尿常规定量培养和MS鉴定结果为标准，分析比较两种富集方法对MS鉴定尿路感染病原菌的一致性。采用Pearson检验分析。 结果 2 150例患者中段尿样本中，镜检后细菌计数≥105cfu/ml的样本为464例（21.6%）。常规定量培养和MS鉴定结果中，单一病原菌感染的样本436例（94.0%），2种病原菌混合感染的样本28例（6.0%）。在单一病原菌感染的样本中，常规定量培养和MS鉴定的革兰阴性杆菌占78.9%（344/436），革兰阳性球菌占15.8%（69/436），真菌占5.3%（23/436）；分离胶促凝管离心富集法和差速离心富集法联合MS检测，总体一致性分别为86.7%（378/436）和81.9%（357/436），革兰阴性菌的鉴定一致性分别为92.4%（318/344）和89.0%（306/344），革兰阳性菌的鉴定一致性分别为68.1%（47/69）和62.3%（43/69），真菌的鉴定一致性分别为56.5%（13/23）和34.8%（8/23）。而对两种细菌混合感染样本中优势菌的检测两种方法一致性分别为64.3%（18/28）和60.7%（17/28）。 结论 分离胶促凝管离心富集法和差速离心富集法联合MS直接检测中段尿样本中病原菌的方法简单快速，对革兰阴性菌的鉴定一致性均很高，适用于中段尿样本细菌的快速筛检。

目的 对美国血脂参考方法网络中同位素稀释液相色谱质谱（LC/MS法）测定甘油三酯的方法和我国甘油三酯候选参考方法高效液相色谱法（HPLC法）进行方法比对研究，评价两法测定结果的一致性和可比性。 方法 方法学比对研究。用LC/MS法和HPLC法同时测定52份新鲜冰冻人血清中的总甘油，浓度范围为0.45~4.52 mmol/L。计算两法的精密度和准确度，对测定结果绘制散点图和偏差图，进行离群值检验，并选取最佳拟合模型进行回归分析，计算回归方程及各项参数。将两法测定结果进行统计学分析，计算甘油三酯医学决定水平处的预期偏差及95%的可信范围。以两方法测定结果回归方程的线性相关系数评价方法的一致性，以偏差评价方法可比性。 结果 HPLC法仪器测定的CV为0.29%（0~1.16%），测定样本的总CV为0.54%（0.04%~1.28%），分析国际有证参考物质的平均偏倚-0.22%（-0.43%~0.68%）。LC/MS法仪器测定的CV为0.55%（0~1.68%），测定样本的总CV为0.79%（0%~1.93%），分析国际有证参考物质的平均偏倚0.09%（-0.73%~1.29%）。经统计分析两法测定结果未出现离群点，可采用线性回归方法进行统计分析。两法测定新鲜冰冻人血清样品的线性回归参数如下：斜率b=0.998 8 mmol/L，斜率标准误Sb=0.003 5 mmol/L，截距a=0.003 7，截距标准误Sa=0.003 0，Y估计值的标准误Sy/x=0.023 6 mmol/L，相关系数r=0.999 7，n=52。同LC/MS法相比，HPLC法测定新鲜血清样品的绝对偏差为-0.001mmol/L（-0.070~0.056 mmol/L），相对偏差为0.13%（-2.01~2.83%）。t检验结果显示两个方法的测定结果没有统计学差异，P>0.05。在甘油三酯医学决定水平处的预期偏差均在正负95%的可信区间范围内，且预期偏差远远小于允许误差。 结论 现有的HPLC法同权威的测量原理LC/MS法测定血清甘油三酯的结果具有较好的一致性和可比性，且HPLC法比LC/MS法价格低廉、技术简单、仪器精密度更高，故HPLC法可望在甘油三酯的溯源过程中发挥重要作用。

目的 研究标本类型对急性髓系白血病（AML）患者c-KIT基因外显子17突变检测结果的影响。 方法 回顾性研究。收集2016年6月至2018年8月送检北京大学人民医院的骨髓标本共51份，采集自37例AML患者初诊或治疗后，其中男17例，女20例，送检时中位年龄33岁（1~82岁）。t（8；21）AML 24例，inv（16）/t（16；16）AML11例，非CBF-AML2例。标本同时提取RNA和DNA，采用Sanger测序法分别检测cDNA及DNA标本的c-KIT外显子17突变，比较配对标本的检测结果。 结果 （1）51对标本中14对均检出c-KIT突变，17对均未检出突变，其余20对均为cDNA检出而DNA未检出突变，不一致率为39.2%，cDNA突变检出率明显高于DNA标本（66.7% vs 27.5%，χ2=15.74，P=0.000 073）。（2）t（8；21）AML、inv（16）AML及非CBF-AML患者的配对标本均存在突变结果不一致现象，不一致率分别为36.4%（12/33）、27.2%（3/11）和71.4%（5/7）。（3）治疗后标本的不一致率明显高于初诊标本（72.7% vs 13.8%，χ2=18.22，P=0.000 03）。（4）5例具有c-KIT突变患者治疗随访中均可见cDNA与DNA标本结果不一致现象。 结论 对于Sanger测序法检测AML患者c-KIT外显子17突变，cDNA比DNA标本具有更高的检出率，在治疗后尤其普遍。

目的 探讨白细胞介素-23受体（IL-23R）rs6682925T/C位点单核苷酸基因多态性与汉族人群急性冠状动脉综合征（ACS）的发病易感性。 方法 病例对照研究。选取2017年1月至2018年4月在荆州市中心医院收治的180例ACS患者为疾病组，其中男性109例，女性71例，年龄（59.95±9.29）岁；90例冠状动脉造影正常者为对照组，男性49例，女性41例，年龄（58.39±9.43）岁。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测外周血血清IL-23R浓度。用Sanger测序法检测IL-23R基因rs6682925T/C的基因多态性。采用的统计学分析方法有正态分布检验、t检验、方差分析和卡方（χ2）检验，非条件Logistic回归分析IL-23R基因rs6682925T/C多态性与ACS易感性的关系。 结果 ACS组与对照组比较，性别、年龄、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇差异均无统计学意义（分别为：χ2=0.923，P>0.05；t=1.294，P>0.05；t=-0.574，P>0.05；t=-0.417，P>0.05），而甘油三酯、空腹血糖、高密度脂蛋白胆固醇、吸烟率、糖尿病与高血压比例差异均有统计学意义（分别为：t=5.411，P<0.05；t=5.828，P<0.05；t=-6.655，P<0.05；χ2=7.738，P<0.05；χ2=13.201，P<0.05；χ2=8.359，P<0.05）。与对照组相比，ACS组IL-23R rs6682925基因型TT、CT、CC分布和C等位基因频率差异有统计学意义（χ2=9.858，P<0.05；χ2=10.833，P<0.05），且ACS组C等位基因频率显著高于对照组，rs6682925 CC基因型携带者患ACS的风险是TT基因型的3.261倍（95%CI：1.553~6.847，P=0.002）。与对照组相比，ACS组患者外周血的血清IL-23R浓度显著增高[（353.20±140.79）pg/ml vs（187.41±123.36）pg/ml，t=9.495，P<0.01]。 结论 IL-23R rs6682925基因多态性与ACS的遗传易感性有关联，rs6682925 CC基因型可能为ACS的危险因素，且rs6682925 CC基因型携带者可能更易患ACS。

目的 探讨δ溶血素G10S突变（HldG10S）与β溶血素（β-toxin）联合检测对金黄色葡萄球菌ST59型的鉴定作用。 方法 收集中南大学湘雅三医院检验科2017年11月至2018年4月非重复分离的82株金黄色葡萄球菌临床菌株，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对菌株进行常规鉴定并获取菌株的质谱图，根据δ溶血素（Hld）的m/z表达强度，将所有菌株分为HldG10S（3 036±2.0）m/z、Hld（3 006±2.0）m/z及ND（无δ溶血素质谱峰）3个组，利用多位点序列分型（MLST）方法检测各组ST59型分布情况，并采用反向协同溶血试验进行β-toxin表型测定，比较HldG10S、β-toxin单项和联合检测鉴定ST59的敏感度、特异度和准确度。 结果 82株菌中21株表达HldG10S毒素，占25.6%；39株表达Hld毒素，占47.6%；22株不表达HldG10S与Hld毒素，占26.8%。HldG10S组中16株为ST59，占76.19%（16/21）；Hld与ND两组中均无ST59。HldG10S组中16株ST59菌株均产β-toxin，而5株非ST59菌株均未检测到β-toxin产生。HldG10S与β-toxin联合检测鉴定ST59的特异度（100%）与准确度（100%）显著高于HldG10S、β-toxin单项检测的特异度（92.4%，77.3%）和准确度（80.5%，81.7%）（χ2=19.472，P<0.001；χ2=17.792，P<0.001）。 结论 HldG10S与β-toxin联合检测能初步快速鉴定ST59，可辅助常规监测金黄色葡萄球菌流行变化趋势。

目的 分析2型糖尿病（T2DM）和糖尿病肾病（DKD）患者相对于健康对照肠道菌群失衡模式及功能变化，寻找两种疾病患者肠道菌群关键变化特征。 方法 收集2018年11月至2019年2月在南方医科大学珠江医院住院患者，纳入T2DM人群30例、DKD人群25例作为研究组，同时选取年龄、性别相匹配的健康体检者30名作为对照组，收集研究组和对照组粪便及血清标本，采用高通量测序技术对粪便标本16S rDNA-v4区测序，采用电化学发光法和免疫比浊法分别检测静脉血白细胞介素-6（IL-6）和C反应蛋白（CRP）。使用微生物组分析软件QIIME（v1.9.1）分析肠道菌群组成和多样性指标，使用微生物多样性分析方法LEfSe比较研究组与健康对照组差异有统计学意义的肠菌标志物。随机森林法建立诊断模型。PICRUSt预测肠道菌群功能变化特征。 结果 T2DM和DKD患者肠道菌群多样性与健康对照组明显不同（P<0.05）。T2DM和DKD患者肠道有较多一致的变化信号，如具有产短链脂肪酸能力的毛螺旋菌属、柔嫩梭菌属、罗斯菌属和粪球菌属显著下降（P<0.05），但两者间也存在疾病特异性的菌群失衡模式，T2DM患者拟杆菌属显著增多，DKD患者乳杆菌属、史雷克菌属、厌氧棒状菌属、嗜血杆菌和肠球菌属显著增多。功能预测也证实，T2DM和DKD患者肠道有较多一致功能变化。T2DM和DKD血清炎症指标与菌的关联性分析提示T2DM和DKD患者肠道有益菌的减少可能是导致血清炎症指标上升的原因。 结论 T2DM和DKD患者肠道菌群存在一致的变化，均为产丁酸菌减少，但两者之间也有疾病特异性的变化，为进一步研究通过肠道菌群评估T2DM患者肾病发生风险提供了数据基础。

维生素分为脂溶系列包括ADEK和水溶系列维生素B族及维生素C。目前只有对维生素D、B6、B9及B12开发了传统的免疫学的检测方法，但免疫法无法区分亚型比如维生素D2及D3以及在婴儿中含量较高的Epi同分异构体，因此免疫学方法检测经常会出现假阳性或假阴性。质谱技术以其快速、高分辨率、高灵敏度、高特异性等优点成为生物样本内小分子分析的金标准方法，广泛应用于临床研究及诊断，也为减少样品采集量及一次进样同时检测多种维生素提供了高效方法。

无创产前基因检测（NIPT）是利用母体血液中游离的胎儿DNA对胎儿进行相关疾病筛选的新型临床检测方法，与传统的产前孕检和疾病诊断技术相比，该技术具有无创、便利、准确等优点。自1997年发现孕妇外周血中存在游离胎儿DNA以来，随着高通量测序的发展，无创产前基因检测被广泛应用于临床产前筛查胎儿出生缺陷等相关医学研究中。本文就无创产前基因检测技术发展进行阐述。