2018年 · 第41卷第05期

癫痫是最常见的儿童神经系统疾病之一，对儿童及其家庭造成沉重负担，随着基因检测技术的应用，更多遗传性癫痫患者将得到确诊，对儿童癫痫的诊断、治疗、预后评估及其家庭生殖咨询都具有重要意义。本文阐释了近年来基因检测诊断技术在儿童癫痫诊断中的应用，并对其检测结果解读面临的挑战进行探讨。(中华检验医学杂志，2018, 41：337-340)

维生素是人体不可缺少的营养成分之一，临床上维生素监测越来越受到重视。常用检测方法包括微生物法、荧光分析法、免疫学方法、高效液相色谱法、液相色谱质谱法、电化学法等，各方法学间的检测结果差异大。另外，维生素的参考区间和医学决定水平及不同人群特异性参考区间的确定还存在争议。因此建立标准化、规范化的维生素检测方法是一个亟待解决的问题。(中华检验医学杂志，2018, 41：341－343)

分子诊断在疾病的诊断、预后评估及疗效监测中发挥着越来越重要的作用，伴随国家相关政策的支撑及社会对精准医疗需求的逐步释放，分子诊断依托其准确、便捷、灵敏、无创和自动化的优势朝着精准检验的方向飞速发展。分子诊断自动化的应用无疑是分子诊断领域发展的催化剂，但其应用现状不尽如人意，有待逐步完善，日益标准。(中华检验医学杂志，2018, 41：344-347)

太赫兹(terahertz, THz, 1THz＝1012Hz)光谱技术作为一种新兴的、无标记、非侵入性的检测方法，已广泛应用于多个领域的研究中。在生物医学领域，THz光谱的独特优势显示了其在实时检测活细胞及组织中有着诱人的发展前景。在细胞检测中，其应用在以下几个方面有了较大发展：细菌细胞的鉴别、肿瘤细胞的鉴定和血细胞的检测。在组织检测中，THz光谱技术显示了其在活组织实时监测和疾病快速诊断中的潜力。并且，将THz光谱及THz成像结合于同一系统能够为组织检测增加敏感性并提供更加综合性的信息。然而，一些技术瓶颈的存在是实现THz波谱技术应用于临床亟需解决的问题。本文着重介绍了太赫兹波谱技术在细胞及组织检测中的应用现状，进一步讨论了面临的挑战及机遇，以期加速其在临床的实际应用。(中华检验医学杂志，2018, 41：348－351)

目的 探讨临床引起新生儿血流感染无乳链球菌的分子流行特征，以及致病菌与黏附相关的毒力基因。 方法 对分离自医院产科病房的6株无乳链球菌(其中4株分离自新生儿血液，2株分离自患儿母亲的阴道分泌物)采用纸片扩散法进行药敏试验；通过多位点序列分型(MLST)和脉冲电场凝胶电泳分型(PFGE)，分析各菌株之间的亲缘关系；应用PCR方法检测其主要介导黏附相关的毒力基因，并进行荚膜多糖基因分型。 结果 6株无乳链球菌其中编号7/13/37/66的4株无乳链球菌的药敏结果一致；而编号142/158的药敏结果一致。MLST分型结果显示菌株7/13/37/66的ST分型相同，均为ST－12，而菌株142/158则为ST－19。PFGE结果表明6株无乳链球菌中编号7/13/37/66的4株为同一克隆型，142/158为另一克隆型。编号7/13/37/66的4株菌为荚膜多糖基因型Ⅰb，编号142/158则为荚膜多糖基因型Ⅲ。编号7/13/37/66的4株菌含有bac、bca和alp2/3基因，编号142/158则含有ε基因；6株菌都含有PI－1和PI－2a基因。 结论 本研究新生儿血流感染的无乳链球菌中，既存在着母婴垂直传播，又存在着克隆传播，可能为院内感染。6株无乳链球菌皆含有黏附相关的致病基因，可能在菌株的黏附和播散方面发挥着作用。医院应加强孕妇产前无乳链球菌的筛查以及医院感染的控制。(中华检验医学杂志，2018, 41：352－355)

目的 探讨血浆肝素结合蛋白(HBP)对早期诊断新生儿脓毒症(NS)及脓毒症严重度分级的临床价值。 方法 回顾性研究方法，选取2016年12月至2017年8月在湖南省儿童医院NICU住院的一般脓毒症患儿39例、严重脓毒症患儿37例、脓毒性休克患儿16例分别作为相应试验组，并选取同时期在各新生儿科住院的局部感染患儿34例及非感染患儿35例分别作为相应对照组；分别测定各组患儿入院时的HBP、降钙素原(PCT)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平并采用非参数统计方法比较各指标组间差异的显著性；运用受试者工作特征曲线(ROC)比较各指标对感染和脓毒症诊断的效能。 结果 一般脓毒症组、严重脓毒症组及脓毒性休克组HBP(H＝91.764，P<0.01)、PCT(H＝51.757，P<0.01)及hs-CRP(H＝28.418，P<0.01)水平均显著高于局部感染组和非感染组，差异有统计学意义；严重脓毒症[52.35(33.65，88.15)(ng/ml)]和脓毒性休克组[73.55(60.61，145.51)(ng/ml)]血浆HBP水平明显高于一般脓毒症组[34.12(23.04，41.79)(ng/ml)]，差异有统计学意义(H＝24.092，P<0.01)；三组患儿血清PCT与hs-CRP水平差异无统计学意义[(HPCT＝1.909，Hhs-CRP＝0.292)，P>0.05]；HBP诊断新生儿脓毒症和新生儿感染的曲线下面积(AUC)分别为0.885和0.904，均高于PCT和hs-CRP；当诊断阈值(cut-off值)取19.8 ng/ml时，HBP诊断新生儿感染的敏感度和特异度分别为85.7%和82.9%，当cut-off值取28.0 ng/ml时，HBP诊断新生儿脓毒症的敏感度和特异度分别为80.4%和88.4%。 结论 HBP在新生儿脓毒症早期诊断及临床分级方面优于PCT和hs-CRP，可能具有较好的临床应用价值。(中华检验医学杂志，2018, 41：356-360)

目的 比较串联质谱(MS/MS)，包括非衍生标准曲线定量法(简称"标曲法")和衍生法、非衍生法及荧光法在苯丙酮尿症(PKU)随访患者血苯丙氨酸(Phe)浓度测定中的应用。 方法 收集上海新华医院随访的204例PKU患者干血滤纸片(DBS)样本；MS/MS标曲法、衍生法、非衍生法及荧光法测定Phe浓度，分为低、中、高，即<360、360～600和>600 μmol/L 3组，对Phe检测值进行一致性检验及非参数检验。 结果 MS/MS标曲法批内和批间精密度为4.0%～7.2%，回收率为93.2%～97.3%。一致性检验显示各组Phe检测值在95%一致性界限外的值不超过8.1%。低、中浓度组，荧光法、MS/MS标曲法和衍生法Phe检测值四分位数分别为176(118，251)μmol/L、174(94，273)μmol/L、153(94，242)μmol/L，和540(478，578)μmol/L、485(414，529)μmol/L、466(402，513)μmol/L；荧光法较MS/MS标曲法高4.8%～9.0%，(Z＝－3.787～－2.674，P<0.01)；MS/MS非衍生法较标曲法低3.9%～5.2%，(Z＝－7.474～－5.747，P<0.01)；高浓度组，MS/MS标曲法、衍生法、非衍生法和荧光法检测值为807(695，924)μmol/L，700(575，785)μmol/L，680(623，771)μmol/L和711(674，794)μmol/L，MS/MS标曲法较其他方法高10.9%～16.2%，(Z＝－4.458～－4.356，P<0.01)。 结论 MS/MS标曲法测定DBS中Phe浓度特异性和准确度较好，4种方法测定血Phe浓度一致性较好，虽检测值存在差异，但均可用于多数PKU患者的Phe浓度监测。(中华检验医学杂志，2018, 41：361－365)

目的 探讨一例科凯恩综合征(CS)家系的致病基因突变。 方法 采集先证者及其家系成员外周血并抽提基因组DNA，对先证者DNA进行全外显子组测序，通过生物信息学分析和家系分析，鉴定其致病基因突变，并利用Sanger测序技术对致病基因突变位点进行验证。 结果 先证者为ERCC8基因复合杂合突变：c．400－2A>G和c.394_398delATGTA(p.L132fs)，这2个突变均为新发现的突变。其中c.400－2A>G为剪切位点突变，来源于表型正常的父亲；c.394_398del ATGTA(p.L132fs)突变来自于表型正常的母亲，与先证者有类似表型的姐姐也为这两个位点的复合杂合突变。 结论 通过全外显子组测序，鉴定了该CS家系中的ERCC8致病基因及其c.400－2A>G和c.394_398delATGTA(p.L132fs)两个杂合突变位点。(中华检验医学杂志，2018, 41：366－369)

目的 探讨高分辨熔解曲线(HRM)技术对SLC4A1基因进行突变筛查的可行性。 方法 选用DNA测序确认为c.166A>G(p.Lys56Glu)杂合突变的2例遗传性球形红细胞增多症(HS)和30份健康体检者标本，使用Primer Premier 6.0软件设计相应的HRM引物，在LightCycler®480中进行检测和HRM分析。 结果 应用HRM法能有效检测出2例HS的SLC4A1基因c.166A>G杂合突变，且其检测的特异度与敏感度皆为100%。 结论 HRM技术能对SLC4A1基因c.166A>G进行突变筛查，为一种高效、准确和低成本的分子诊断方法。(中华检验医学杂志，2018, 41：370-373)

目的 分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中长链非编码RNA(lncRNA)表达谱，为PBC的发病机制、临床诊断和治疗提供新的方向。 方法 收集PBC及健康对照组外周抗凝血各30份，分离PBMC，从中各选取4份进行lncRNA表达谱芯片测定，并用逆转录PCR(RT－PCR)验证芯片结果。对芯片结果进行生物信息学分析，如Cis/Trans靶基因分析、Gene ontology(GO)分析、Pathway分析和共表达网络预测，并设计小干扰RNA(siRNA)干扰lncRNA的表达，进行靶点验证。 结果 相对于健康对照组，PBC患者PBMC中共发现749个异常表达的lncRNA，230个异常表达的信使RNA(mRNA)。PBC组核受体(NR4A3)基因表达水平下调78%，而在NR4A3基因下游20 000 bp左右的lncRNA linc－pbc的表达上调2.56倍。转染针对linc－pbc的siRNA后，PBMC中linc－pbc的水平下降，而NR4A3的mRNA表达水平及蛋白质水平均上调，叉头状转录因子(FOXP3)的表达也上调。 结论 linc－pbc或许通过招募多梳蛋白抑制性复合物(PRC2)，使NR4A3基因启动子区甲基化，下调NR4A3基因的表达水平，使其调控靶基因转录的活性降低，导致下游的靶基因FOXP3的表达下降，进而引起外周血及肝组织局部具有免疫抑制功能的调节性T细胞(Treg)细胞数量减少，打破机体免疫耐受平衡，促进PBC的发生和发展。(中华检验医学杂志，2018, 41：374－379)

目的 了解广州地区沙眼衣原体(CT)和解脲脲原体(UU)的感染现状，同时分析实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)与常规方法(乳胶免疫层析法检测CT和液体培养法检测UU)结果的一致性。 方法 收集2015年1月至2016年12月来中山大学孙逸仙纪念医院就诊患者的泌尿生殖道分泌物或尿液标本共12 120份，采用SAT技术对以上标本进行CT－RNA、UU－RNA检测，同时收集其中部分患者标本进行常规方法检测。采用χ2检验比较SAT技术与常规方法检测CT和UU的结果分别在不同性别和不同年龄段间的阳性率，同时采用Kappa检验分析不同检测方法结果的一致性。 结果 2015至2016年广州地区的CT阳性率为4.05%(356/8 781)，UU阳性率为33.69%(1 125/3 339)，UU阳性率显著高于CT，差异具有统计学意义(χ2＝1 981，P<0.01)。145份CT检测标本中，SAT法和乳胶免疫层析法结果的符合率为96.55%(140/145)，一致性强度为高度(Kappa值为0.65)。186份UU检测标本中，SAT法和液体培养法结果的符合率为92.47%(172/186)，一致性极强(Kappa值为0.81)。 结论 广州地区UU阳性率显著高于CT，应用SAT法与常规方法检测CT和UU的结果一致性较高，能为临床诊断CT和UU感染提供依据。(中华检验医学杂志，2018, 41：380－384)

目的 检测成都地区人型支原体对喹诺酮类药物的耐药性，探索拓扑异构酶基因gyrA、gyrB、parC和parE突变与耐药性产生的相关机制，提供本地区耐药支原体的流行病学资料。 方法 采用16SrRNA基因测序技术对支原体进行鉴定，微量肉汤稀释法进行抗生素敏感试验。耐药基因的扩增采用PCR方法，序列比对采用DNAMAN软件和BLAST进行分析。 结果 人型支原体对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星的耐药率分别为92.4%(61/66)、87.9%(58/66)、71.2%(47/66)和66.7%(44/66)。筛选出对喹诺酮类药物呈现不同药敏表型的人型支原体45株进行拓扑异构酶基因的扩增测序，其中对莫西沙星和加替沙星耐药的31株均发生了GyrA S153L的氨基酸变异，变异率68.9%(31/45)；对环丙沙星和左氧氟沙星耐药的41株均发生了ParC S91I的氨基酸变异，变异率91.1%(41/45)。另外发现2株高水平耐药株发生了ParE A463S新的氨基酸变异，GyrB无氨基酸变异发生。 结论 人型支原体对喹诺酮类的耐药主要与gyrA和parC基因突变导致的氨基酸改变密切相关，不同的喹诺酮类药物对人型支原体的作用靶位不同且高水平耐药与多个基因的突变有关。(中华检验医学杂志，2018, 41：385－389)

目的 评价FilmArray呼吸道测试条对肺炎支原体感染的临床诊断效果及应用价值。 方法 方法学评价。收集2016年11月至2017年5月上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心因社区获得性肺炎住院的患儿鼻咽拭子或痰标本360例，其中男197例，女163例，按年龄分组为0～2岁组185例，3～6岁组116例，7～16岁组59例，通过FilmArray呼吸道测试条及血清学方法检测肺炎支原体，并对FilmArray检测肺炎支原体所有阳性标本、FilmArray阴性但血清学检测阳性标本及通过简单随机抽样选取的两种检测方法均阴性的标本进行PCR验证，采用χ2检验对FilmArray和血清学检测的结果、不同年龄组间阳性率及混合病毒感染率进行统计学分析。 结果 所收集的360例社区获得性肺炎患儿的鼻咽拭子或痰标本中，FilmArray检测肺炎支原体阳性标本39例(10.83%，39/360)，血清学检测阳性标本93例(25.83%，93/360)，二者之间差异有统计学意义(χ2＝27.05，P＝0.00)，其中FilmArray检测为肺炎支原体阳性的39例标本经PCR验证为阳性，FilmArray阴性但血清学检测阳性标本61例及通过简单随机抽样选取的两种检测方法均阴性的标本22例经PCR验证为阴性。FilmArray检测为肺炎支原体阳性的标本中，7～16岁组患儿阳性率(28.81%，17/59)高于0～2岁组(5.95%，11/185)及3～6岁组(9.48%，11/116)，不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(χ2＝24.54，P＝0.00)；0～2岁组FilmArray阳性患儿中混合病毒感染的比例(81.82%，9/11)高于3～6岁组(45.45%，5/11)及7～16岁组(29.41%，5/17)，差异有统计学意义(χ2＝7.41，P＝0.03)。 结论 FilmArray检测是一种快速的检测方法，对肺炎支原体诊断及混合病毒感染的诊断有潜在临床应用价值。(中华检验医学杂志，2018, 41：390-394)

目的 探讨血浆Septin 9(SEPT9)基因甲基化检测对结直肠癌的临床意义。 方法 回顾性研究。2016至2017年复旦大学附属华山医院选择研究对象分为结直肠癌组(结肠癌65例，直肠癌19例)、癌前病变组(结直肠腺瘤50例)和对照组(20名健康体检者)。采用荧光PCR法检测外周血浆SEPT9基因甲基化状态。统计学方法采用卡方检验。 结果 结直肠癌组患者SEPT9基因甲基化阳性率为63.1%(53/84例)，显著高于癌前病变组10%(5/50例)(χ2＝35.993，P＝0.000)，对照组中未检出。SEPT9基因甲基化检测的敏感度为63.1%(53/84例)，联合癌胚抗原(CEA)检测的敏感度为75%(63/84例)。ROC曲线分析，SEPT9基因甲基化检测AUC为0.828，高于CEA检测结果(0.795)。SEPT9基因甲基化在结直肠癌Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者检测阳性率分别为51.4%(19/37例)和72.3%(34/47例)(χ2＝3.917，P＝0.048)，与患者年龄、性别和癌变部位无关。 结论 血浆SEPT9基因甲基化检测可能有助于结直肠癌早期诊断，且与结直肠癌进展有关。(中华检验医学杂志，2018, 41：395－398)

目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴别肺炎链球菌与口腔/缓症链球菌。 方法 收集2013年4月至2016年12月南京医科大学附属苏州医院和苏州大学附属儿童医院临床分离的110株肺炎链球菌和108株口腔/缓症链球菌，并选择肺炎链球菌ATCC49619作为质控菌株，以菌落形态、奥普托欣敏感性试验、胆汁溶菌试验及PCR法检测lytA、spn9802和recA等基因作为判定菌株鉴定结果的参考方法。应用MALDI-TOF MS对所有菌株进行鉴定。选取其中的143株细菌(73株肺炎链球菌和70株口腔/缓症链球菌)作为模型建立菌株，选取剩余的76株细菌(38株肺炎链球菌和38株口腔/缓症链球菌)作为模型验证菌株。采用ClinProTools软件对所有细菌的质谱图谱进行分组统计分析。 结果 通过GA、SNN和QC算法得出的敏感度均大于95%，而特异度均为100%。3种算法显示，质荷比为3 443、4 990、6 956和9 949 m/z的质谱峰是用于区分肺炎链球菌与口腔/缓症链球菌最为主要的特征性峰，其对应的曲线下面积(AUC)分别为0.884、1、0.999和0.972。峰统计图显示，肺炎链球菌组的3 443、4 990和9 949 m/z峰的强度高于口腔/缓症链球菌组，而6 956 m/z峰的强度低于口腔/缓症链球菌组。外部验证显示，除GA模型对肺炎链球菌组和口腔/缓症链球菌组的鉴定正确率分别为97.37%和100.0%，其余2种模型(SNN和QC)对两组细菌的鉴定正确率均为100.0%。 结论 MALDI-TOF MS联合ClinProTools可快速准确地鉴别肺炎链球菌与口腔/缓症链球菌，具有高敏感度、高特异度等特点，可为临床诊断肺炎链球菌感染节约时间。(中华检验医学杂志，2018, 41：405-407)