2013年 · 第36卷第09期

敏感而特异的心肌生物标志物对心血管疾病早期、正确的诊断和治疗至关重要。肌钙蛋白（超敏肌钙蛋白）、肌红蛋白、心型脂肪酸结合蛋白、缺血修饰白蛋白以及B型利钠肽和N端B型利钠肽原（BNP/NT-proBNP）的应用，大大提高了心血管疾病的早期诊断率，并在危险分层及预后方面有重要意义，但仍需进一步完善。同时具备高特异度、高灵敏度及检测方便等特点的心肌生物标志物仍然是未来研究的方向。（中华检验医学杂志,2013,36:769-772）

微小RNA（miRNA）是片段长度约为22个核苷酸的高度保守的内源性非编码单链小RNA，广泛存在于动植物及病毒体内。成熟的miRNA通过使靶基因mRNA降解或特异性翻译抑制从而调节靶基因的表达，广泛参与生物体内的生理和病理过程。乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白（HBX）是HBV病毒X基因编码的相对分子质量约为17 000的蛋白质，与肝细胞癌的发生发展密切相关。近年来研究发现一些特异的miRNA受HBX调控，参与调节肝癌细胞的增殖、分化和凋亡等多个生物学过程。（中华检验医学杂志,2013,36:785-788）

目的建立一种毛细管电泳法同时检测尿液百草枯（PQ）和肌酐（Cr）含量的方法。方法实验方法学研究。收集2011年1月至2012年6月连云港市第一人民医院就诊急性PQ中毒患者8例，男2例，女6例。在毛细管区带电泳模式下，以25 mmol/L pH 1.97甘氨酸-HCl（含40 mmol/L NaCl）为电泳缓冲液，在非涂层石英毛细管（47 cm×75μm内径）中进行电泳。尿液标本离心后用H 2O稀释10倍后直接压力进样4 s，20 kV电压分离后通过二级阵列管检测器检测，检测波长200 nm。对该法进行系统的方法学评价（线性范围及检测限，重复性实验，回收实验，干扰实验），测定中毒患者尿液中PQ和Cr含量。结果PQ和Cr均在5 min内基线分离。PQ和Cr分别在2~1000μmol/L、10~5000μmol/L范围内呈良好的线性，相关系数分别为0.9997和0.9999（P<0.01），检出限分别为1.0、5.0μmol/L。尿中PQ和Cr峰面积的平均日内（n=10）CV为2.84%、1.72%，平均日间（n=10）CV为3.62%、3.06%。PQ和Cr的平均回收率分别为88.6%、90.2%。敌草快（DQ）对PQ测定无干扰。PQ中毒患者（n=8）尿液标本的PQ/Cr（μmol/mmol）比值在8.9~2215之间。结论成功建立了毛细管电泳法快速测定尿液中PQ和Cr的方法。该法可同时检测PQ中毒患者尿液中的PQ和Cr含量，标本用量少，且离心后稀释直接进样，操作简便快速，结果准确，易于自动化，可用于PQ中毒患者尿液标本的快速测定。（中华检验医学杂志,2013,36:791-795）

目的参考美国病理学家协会（CAP）相关要求，验证本实验室自建的JAK2 V617F突变检测项目的各项性能参数。方法方法学建立。收集2010年4月至12月复旦大学附属华山医院已确诊的57例BCR/ ABL融合基因阴性骨髓增殖性肿瘤患者的外周血和骨髓液标本。采用荧光PCR结合熔解曲线法建立JAK2 V617F突变方法检测标本。在准确度、重复性、分析灵敏度、干扰物质的影响等各方面对检测方法的性能进行评估。准确性使用Kappa检验评估，重复性使用符合率，分析灵敏度使用配对t检验进行统计分析。结果荧光PCR结合熔解曲线方法（试验方法）与参考方法（测序法）相比有非常好的一致性（Kappa=0.89）；重复性符合率为100%；血脂（<24 mmol/L）和黄疸（<450μmol/L）对本试验无明显干扰；最低检测突变率为5%。结论基于荧光PCR结合熔解温度反应方法检测JAK2 V617F突变可应用于临床检测。（中华检验医学杂志,2013,36:796-800）

目的评价7种开放式胆固醇测定自动生化分析系统的精密度、线性、抗干扰能力、正确度。方法方法评价研究。选择2012年北京中生、北京柏定、上海复星长征、浙江东瓯、上海科华、四川迈克和日本和光7个厂家的胆固醇氧化酶法测定试剂及其校准品，与日立7170自动生化分析仪组成7种开放式分析系统。按照美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）的EP5-A2文件，对这7种系统进行重复性变异系数及实验室内变异系数评价；依据EP6-A文件进行线性评价，线性样本的浓度分别为0、2.07、4.14、6.21、8.28、10.35、12.93、20.69、25.86 mmol/L；按照EP7-A2进行干扰实验，干扰物质包括血红蛋白、维生素C（抗坏血酸）及乳糜；正确度评价采用我国血脂标准化计划的方式进行，样本为参考方法定值为2.88~5.42 mmol/L的10个浓度的血清盘。结果7种开放式系统测定低值样本（2.71 mmol/L）时重复性CV分别为0.54%、0.79%、0.56%、0.51%、0.56%、0.48%、0.49%，实验室内CV分别为1.00%、1.06%、1.28%、0.89%、1.08%、1.13%、1.05%；测定高值样本（5.12 mmol/L）时的批内CV分别为0.40%、0.41%、0.51%、0.48%、0.47%、0.45%、0.47%，实验室内CV分别为0.82%、0.69%、1.27%、0.70%、0.70%、1.08%、0.69%；系统A、B、D、F的线性范围上限为12.93 mmol/L，系统C、E、G的线性范围上限为20.69 mmol/L；乳糜浓度1.6%或血红蛋白4 g/L时对7种系统的无明显干扰；在干扰百分偏差的绝对值不超过4%的情况下，7种系统能耐受的维生素C干扰浓度分别为228、215、225、2840、2840、217、2840μmol/L。正确度验证中，7种系统的CV均满足≤3%的要求，偏倚（bias）分别为-0.72%、-1.15%、-2.03%、-2.51%、-0.21%、2.45%、0.78%。结论7种系统在精密度、线性、正确度、抗干扰能力方面的性能均能满足临床使用的要求；部分产品在抗干扰能力、正确度方面还有改进的余地。（中华检验医学杂志,2013,36:801-805）

目的比较4种市售国产酶法肌酐（Cr）（迈克、九强、中生、柏定，标为A、B、C、D）和2种进口酶法Cr试剂（积水、和光，标为E、F）的分析性能及准确度差异。方法实验性能验证。从2010年5月就诊于我院肾内科的患者和体检中心查体人群中选择慢性肾脏病患者和表面健康人的血清标本共70例进行性能验证实验。其中CKD患者30例（男15例，女15例），年龄18~80岁。表面健康人40名（男20名，女20名），年龄20~60岁。参考CLSI EP15-A方案用6种试剂分别测定2个水平质控血清，每天测4次，连续测5 d，计算批内及总不精密度（CV）；参考EP6-A方案，测定不同比例的高、低浓度混合血清和混合尿液标本评价线性范围；部分参考EP7-P方案，用测定含特定浓度干扰物（胆红素、血红蛋白、乳糜）的血清以评价抗干扰能力；验证血清样本的稀释准确性；测定50份新鲜患者血清比较各试剂测定结果的相关性和偏差。计算各试剂测定NIST SRM 967a、NIST SRM 909b标准物质的偏倚以验证各试剂的准确度。结果6种Cr试剂的批内CV在0.5%~1.2%之间，总CV在0.5%~1.9%之间，4种国产试剂与2种进口试剂的不精密度无明显差异，均小于来源于生物变异的允许不精密度（3.0%）。4种国产与2种进口酶法Cr验证的线性范围均较宽。当血清中结合胆红素≤332μmol/L、游离胆红素≤327μmol/L、乳糜浊度≤1 530 FTU时对6种Cr的测定均未产生明显干扰（百分偏差≤±10%）；血红蛋白（Hb）≤4.83 g/L时对试剂C、D、F检测Cr不受干扰；试剂A、B、E分别在Hb 3.381、3.864、4.347 g/L以下不受干扰。血清样本2~16倍稀释后与原倍测定结果的百分偏差在95.96%~108.62%之间。各试剂测定新鲜血血清样本结果与6种试剂测定均值之间的平均百分偏差在-4.91%~4.75%，相关均良好（r均为1.000）。各试剂检测NIST 967a水平1（66.5μmol/L）和水平2（346.2μmol/L）的百分偏倚分别为-1.85%~2.81%和-2.28%~2.05%，均未超出Cr来源于生物变异的允许偏倚（4.0%）。检测NIST 909b水平1（56.18μmol/L）和水平2（467.4μmol/L）的百分偏倚分别为-13.4%~1.01%和-6.49%~-1.79%，均超出靶值允许范围。结论4种国产酶法Cr试剂和2种进口试剂精密度良好，线性范围宽，稀释准确性满足临床需要，抗干扰能力较强，准确度均较高，国产和进口试剂的以上性能未发现明显差异。（中华检验医学杂志,2013,36:806-811）

目的研究4个免疫检测系统对CA19-9检测的差异和一致性，探讨实现CA19-9检测结果互认的基础。方法检测系统比对研究。汇集整理CA19-9室间质量评价活动批号的数据（卫生部200811~201215，浙江省080309~120211）；搜集120份不同CA19-9浓度的新鲜血样本；搜集2010年9月至2012年3月不同检测系统非肿瘤体检人群实测CA19-9数据。选择4个稳定的检测系统Abbott Architect i2000、Roche E170、Beckman Dxi800和Siemens Centaur XP作为研究对象，统计分析在卫生部和浙江省室间质评（冻干粉和液体血清）中的组间差异；参照CLSI EP9-A2进行120份新鲜血样本的比对分析；计算各检测系统实测CA19-9的95%置信区间并分析。采用散点图、加权回归方程进行统计比较。结果室间质评与新鲜血比对出现颠倒的结果。室间质评均表现出检测系统组间较大的偏倚，斜率bw在1.340到4.683之间，相关系数r较好；新鲜血比对中r不理想，但斜率b w接近于1。新鲜血比对中在推荐浓度27 U/ml时，检测系统两两间偏移分别为Abbott-Roche（-6.41%），Beckman-Roche（-5.07%），Siemens-Roche（13.15%），Beckman-Abbott（2.46%），Siemens-Abbott（22.52%），Siemens-Beckman（39.66%）。部分检测系统间实测95%置信区间差异有统计学意义。结论在研究检测系统差异时，在较低浓度CA19-9的结果在4个检测系统间具有互认的基础，但在高浓度时，检测系统间的差异明显增大，风险较高，尚无法实现互认。（中华检验医学杂志,2013,36:812-817）

目的探讨K-RAS第12、13密码子及B-RAF V600E突变在结肠癌（CRC）演化不同阶段的分布情况及其与相关临床参数的关系。方法临床回顾性研究。收集2011年1月至2012年1月于上海市长宁区中心医院进行肠镜检查患者130例，其中结肠息肉21例、腺瘤44例与肠癌65例，抽提DNA。建立使用带有高、低温内标的高分辨率熔解分析体系，检测上述DNA样本中的K-RAS第12、13密码子及B-RAF V600E突变，并使用Sanger测序法对K-RAS突变进行明确分型，使用Fischer确切概率法统计各突变在疾病演化不同阶段的分布及与癌组织体积大小、Dukes分期及瘤体分化情况等临床参数间的关系。结果在息肉增生、腺瘤及癌组织中分别发现K-RAS突变2例、8例及26例，B-RAF突变1例、1例和2例。K-RAS突变率在息肉增生（9.5%）、腺瘤（18.2%）与癌组织（40%）中逐渐升高，且在腺瘤与癌组织中的差异具有统计学意义（P=0.013）。K-RAS突变率在低分化癌中高于中、高分化癌（P=0.04），且第12密码子突变比率高于13密码子（P=0.028）。所发现K-RAS突变主要类型为c.35G>A、c.38G>A、c.35G>T与c.34G>T。B-RAF突变率较低，在息肉、腺瘤与癌中分别为4%、2.3%与3.1%，且未发现同时存在K-RAS与B-RAF突变的病例。结论在CRC演化过程中，K-RAS突变主要出现于腺瘤向癌转化过程。对CRC患者而言，进行K-RAS突变检测并进行明确分型对于判断肿瘤分化情况具有一定的辅助意义。（中华检验医学杂志,2013,36:818-822）

目的建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）联合等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）检测bcr/abl融合基因T315I点突变的方法，以提高bcr/abl基因T315I突变检出率。方法方法学建立。构建abl基因野生型和T315I突变型重组质粒作为检测对象，设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物，分别以野生型和T315I突变型质粒作为模板，PCR扩增出目的片段，经酶切初筛检测abl基因T315I突变情况，另设计一对仅针对T315I突变的特异性引物进行AS-PCR检测。并对具有该基因突变的1例慢性粒细胞白血病患者进行检测，同时对该方法的灵敏度和特异性进行检测。结果PCR扩增的目的片段（273 bp）经限制性内切酶DdeⅠ酶切后，野生型abl基因片段产生141、68、46和18 bp 4条片段，而T315I突变型abl基因片段酶切后产生159、68和46 bp 3条片段。PCR-RFLP方法可以检测T315I突变，检测灵敏度为6%。再以酶切产物作为模板进行AS-PCR，优化反应条件，AS-PCR所能检测到的T315I最低突变浓度为0.18%。所测临床标本结果显示，该患者发生了bcr/abl融合基因T315I突变。结论PCR-RFLP联合AS-PCR检测方法特异性好、灵敏度高，能够给临床检测abl基因T315I突变提供一种新型的检测方法。（中华检验医学杂志,2013,36:823-827）

目的建立同位素稀释电感耦合等离子体质谱法（ID-ICP-MS）测定血清钾的分析方法。方法方法学建立研究。收集2010年朝阳医院检验科体检血清，制备成不同钾浓度的冰冻混合人血清。血清样品处理前加入待测元素39K的富集同位素41K，1%硝酸将血清准确稀释100倍，选择和优化ICP-MS分析条件后，测定其同位素比值，用内插法计算待测血清39K的浓度。3个不同浓度水平的血清各测定3批，评价该方法的精密度，美国国家标准与技术研究所（NIST）血清标准物质SRM909b-Ⅰ、Ⅱ评价正确度，两份血清加入不同浓度钾标物评价回收率，计算不确定度。结果血清钾测定的总变异系数CV为0.14%~0.11%；NIST血清标准物质SRM909b水平Ⅰ、Ⅱ的总CV为0.39%~0.32%，相对偏差分别为+0.12%、+0.49%。两份血清钾测定回收率为99.68%~100.12%。结论成功建立的血清钾同位素稀释电感耦合等离子体质谱法精密度高、准确性好，是准确定量测定无机元素的理想方法。（中华检验医学杂志,2013,36:828-831）

目的尝试通过统一定标品，改善不同方法检测血脂项目的结果一致性，减少结果不一致可能对临床诊疗造成的影响。方法方法学评价。随机收集2012年3月13至19日复旦大学附属中山医院住院患者（年龄37~68岁，男238例，女162例）血清标本400份，每份标本均使用5种试剂[德国罗氏诊断（Roche）、日本和光纯药（Wako）、日本日东纺医疗（Nittobo）、德国德赛诊断（Diasys）、日本积水医疗（Sekisui）]分别检测血清TC，TG，HDL-c，LDL-c，ApoA-Ⅰ及ApoB。使用自制定值血清对各检测方法进行校正，并重复检测上述标本。使用变异系数描述同一标本在校正前后不同检测方法间的检测结果差异。按TG及LDL-c水平分别将标本分为4组及5组，使用t检验比较各组间血脂项目在校正前后不同检测方法检测结果差异。以TC≥6.22 mmol/L及LDL-c≥4.14 mmol/L作为判断标准，比较不同检测方法间检测结果差异对临床决策的影响。结果血脂项目不同检测方法间的检测结果存在差异（CV均值为4.50%~10.46%），定值血清校正后差异减小（CV均值为2.82%~6.71%）。根据LDL-c及TG水平将患者分组后，各组内检测结果差异明显（CV：LDL-c 4.03%~12.14%；TG 4.02%~18.42%），CV差异程度与LDL-c水平无关，但随TG水平的增高而增大。除TG高值组外（>5.65 mmol/L），其他各组检测差异均可通过定值血清校正加以改善（CV：LDL-c 2.35%~6.91%；TG 2.08%~8.91%）。不同检测方法间检测结果的不一致会明显影响临床决策，差异可达19.83%（TC）和34.48%（LDL-c）。结论不同检测方法间的检测结果存在较为显著的差异。各血脂项目使用相应的同一份定值血清进行校正后，不同检测方法间的结果差异明显减小但是无法完全消除。（中华检验医学杂志,2013,36:832-835）

目的建立蒙特卡罗法（MCM）评定参考测量程序不确定度的方法学。方法方法学建立。根据JCGM 101：2008建立MCM评定不确定度的方法学，并以γ-谷氨酰基转移酶（GGT）参考测量程序为例，通过MATLAB软件计算GGT活性浓度、不确定度与包含区间；GUM法评定其不确定度作为对照。结果GUM法评定时，标本A测量结果为（95.8±2.4）U/L（k=2），包含区间为[93.4 U/L，98.2 U/L]，标本B为（180.0±3.9）U/L（k=2），包含区间为[176.1 U/L，183.9 U/L]；MCM评定时，标本A测量结果为（95.8±2.4）U/L，包含区间为[93.4 U/L，98.2 U/L]，标本B为（180.0±3.9）U/L，包含区间为[176.2 U/L，183.8 U/L]；MCM模拟输出量为正态分布。结论当输出量是正态分布时，MCM与GUM法评定结果相近；当输出量分布未知时，可将MCM作为GUM方法的验证或确认方法。（中华检验医学杂志,2013,36:836-838）

自身免疫性疾病发病之前的无症状期可出现自身抗体，尤其对于具有遗传易感风险的个体。自身抗体的检测在疾病的发病、病情严重程度及器官受累等方面具有较高的阳性预测价值。（中华检验医学杂志,2013,36:859-862）