2013年 · 第36卷第08期

自身抗体检测对自身免疫病的诊疗具有重要价值。自身抗体临床检测的普及应用促进了临床对自身免疫病的认识和诊治水平的迅速提高，后者又导致对自身抗体检测的需求不断增加，对检测质量的要求不断提高。为了充分发挥自身抗体检测结果在自身免疫病临床诊疗中的应用价值，自身抗体检测人员应该全面了解自身抗体检测结果的各种影响因素，重视自身抗体检测质量管理，不断提高检测质量;充分认识自身抗体的复杂性和特殊性，积极参与自身抗体检测项目的选择和正确解释自身抗体检测结果的临床意义;重视自身抗体检测的临床应用，做好自身抗体检测的推广普及。（中华检验医学杂志,2013,36:673-676）

表观遗传是指基因组DNA序列不发生变化，但基因表达发生了可遗传的改变。其涉及机制包括DNA甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA调控等。研究表观遗传因素在自身免疫病中的作用已成为目前热点研究领域之一。类风湿关节炎（RA）是一种慢性自身免疫性疾病，全球发病率为0.5%~1.0%，发病机制目前尚不明确。近年来的研究发现，表观遗传学改变在RA发病中有重要作用，其中DNA甲基化和组蛋白修饰异常是造成免疫耐受功能受损和RA发生的主要表观遗传学机制，这些表观遗传变化可能为治疗自身免疫病提供新的个性化治疗方案。（中华检验医学杂志,2013,36:677-680）

微小RNA（miRNA）是近年来发现的一类在转录后水平对基因的表达进行调控的短序列、非编码的小分子RNA，广泛参与多种生理和病理过程，在免疫细胞的增殖、发育、分化、凋亡等方面起着重要的调控作用。（中华检验医学杂志,2013,36:681-684）

近年来，随着人们饮食结构及环境等因素的改变，炎症性肠病的发病率不断上升，逐年引起人们的重视。对于炎症性肠病的诊断、疾病活动性评估、治疗效果监测、疾病复发的预测等方面尚缺乏简便、无创且相对特异的方法，其中以内镜及组织病理活组织检查最为准确，但因其有创、耗时，患者常难以接受。近年来，随着对炎症性肠病机制研究的不断深入，一些无创、简便、特异性较高的生物标志物不断出现，尤其是某些粪便生物标志物，为炎症性肠病的诊疗提供了较大的帮助。（中华检验医学杂志,2013,36:685-688）

微小RNA（miRNA）是一类内源性非编码小分子RNA，其可与靶mRNA结合从而抑制靶蛋白的合成，在转录后水平调控基因的表达。现有研究发现，miRNA参与多种生理及病理过程，其表达异常可用于疾病的辅助诊断、治疗监测和预后判断等，而这些研究都需要建立理想的miRNA检测方法才能够完成。近年来miRNA检测方法迅猛发展，从定性逐步发展到半定量，再到精确定量，从单个miRNA检测到高通量筛查。同时各种检测方法不断改良，其特异度和敏感度显著提高，检测程序变得简单易行，检测时间明显缩短，检测成本也不断降低，使miRNA检测用于临床实践成为可能。（中华检验医学杂志,2013,36:689-692）

目的探讨中国汉族人群中与其他自身免疫性疾病相关的FAM167 A-BLK和TNFSF4基因区域多态性是否与原发性干燥综合征（pSS）存在遗传相关性。方法临床对照研究。选取2008年11月至2011年12月北京协和医院515例中国汉族pSS患者和567名健康体检者，对所有候选单核苷酸多态性（SNP）位点采用时间飞行质谱生物芯片系统（Sequenom Mass Array）进行基因分型。采用χ2检验、logistic回归分析对SNP位点的基因型、等位基因、上位效应和单体型进行相关性分析，并在3种遗传模型（加性、显性和隐性）下对各SNP位点进行相关性分析。结果FAM167A-BLK基因区域的rs7812879和rs2254546位点在pSS组的基因型频率为：TT 6.2%，TC 28.5%，CC 65.2%;AA 6.0%，AG 30.0%，GG 64.0%;在健康对照组的基因型频率为：TT 4.7%，TC 38.2%，CC 57.1%;AA 5.1%，AG 39.3%，GG 55.6%，差异有统计学意义（χ2=11.09、9.91，Pa<0.05）。且在显性遗传模型下，rs7812879（OR=0.71，Pa=0.044）、rs2254546（OR=0.70，Pa=0.037）和rs2736340（OR=0.71，Pa=0.039）3个SNP位点基因型分布在pSS组和健康对照组之间差异均有统计学意义。rs7812879、rs2254546和rs2736340位点组成的CGT单体型在pSS组和健康对照组的频率分别为75.7%和70.8%，差异有统计学意义（χ2=6.36，P=0.012）。在各种分析中未发现FAM167A-BLK基因区域的rs2248932和TNFSF4（rs2205960和rs704840）基因多态性与pSS相关（P均>0.05），且FAM167A-BLK和TNFSF4基因区域内未发现所选SNP位点存在上位效应（P均>0.05）。结论在汉族人群中FAM167 A-BLK基因区域的rs7812879、rs2254546和rs2736340位点与pSS的遗传易感性密切相关，而FAM167A-BLK基因区域的rs2248932以及TNFSF4基因区域的rs2205960和rs704840与pSS的易感性无明确相关性。（中华检验医学杂志,2013,36:693-698）

目的分析探讨分支DNA（branched DNA，bDNA）技术定量检测胃癌患者血清游离DNA（cell free DNA，cf-DNA）水平与临床病理特征间的关系，及其在胃癌辅助诊断中的应用价值。方法病例对照研究。收集2011年9月至2012年2月南通市肿瘤医院经病理诊断确诊的99例胃癌患者和100名健康人血清标本，2010年3月至2012年2月南通大学附属医院经病理诊断确诊的32例胃良性肿瘤患者血清标本。用bDNA技术检测其cf-DNA浓度，化学发光法检测其癌胚抗原（CEA）、糖抗原（CA）19-9、CA50、CA72-4含量。用Dunn′s检验比较胃癌组与对照组（良性肿瘤、健康人）cf-DNA含量的差异;绘制受试者工作特征（ROC）曲线评估上述5项指标诊断胃癌的效能；Mann-Whitney检验分析血清cf-DNA浓度与患者性别、年龄的相关性；Kruskal-Wallis检验分析血清cf-DNA浓度与患者肿瘤部位、肿瘤分化程度、肿瘤淋巴转移分类（AJCC）分期的相关性。结果胃癌组、胃良性肿瘤组和健康对照组血清cf-DNA含量分别为2316.0（1028.7~3742.1）、423.3（256.3~519.2）、317.5（172.5~499.7）μg/L，胃癌组cf-DNA含量显著高于胃良性肿瘤组（q=7.612，P<0.01）及健康对照组（q=7.062，P<0.01），而胃良性肿瘤组与健康对照组差异无统计学意义（q=0.598，P>0.05）。胃癌患者血清cf-DNA含量在不同年龄（t=1388.000）、性别（t=845.000）、肿瘤部位（H=3.471）、肿瘤分化程度（H=0.288）、AJCC分期分组（H=6.053）间的差异无统计学意义（P均>0.05）。胃癌组血清cf-DNA与CEA、CA19-9、CA50、CA72-4无相关性（R2值分别为0.0385、0.0159、0.0029、0.0079，P均>0.05）。当上述5项指标的最佳诊断临界值分别为973.6μg/L、4.0μg/L、32.8 kU/L、12.8 kU/L、5.1 kU/L时，胃癌组血清cf-DNA的ROC曲线下面积及诊断敏感度[0.94，76.8%（76/99）]均高于血清CEA[0.66，31.3%（31/99）]、CA19-9[0.63，16.2%（16/99）]、CA50[0.83，44.4%（44/99）]、CA72-4[0.67，35.4%（35/99）];血清cf-DNA特异度[96%（96/100）]与血清CEA[98%（98/100）]、CA19-9[78%（78/100）]、CA50[97%（97/100）]、CA72-4[98%（98/100）]较接近。结论bDNA技术定量检测胃癌患者血清cf-DNA比血清CEA、CA19-9、CA50、CA72-4有较高敏感度及特异度。且对胃癌辅助诊断有一定的指导和应用价值。（中华检验医学杂志,2013,36:699-703）

目的采用基于液态芯片的K-ras基因分型检测方法分析非小细胞肺癌（NSCLC）组织样本中的K-ras基因突变水平，指导非小细胞肺癌患者个体化靶向治疗和预后评估。方法实验诊断技术研究方法。对液态芯片的K-ras基因分型检测方法进行灵敏度和重复性的评估。选取2011年11月至2012年2月上海市胸科医院的100例非小细胞肺癌患者新鲜组织样本，提取基因组DNA，通过采用PCR-连接酶检测反应（LDR）结合液态芯片技术，对待测样品K-ras基因2号外显子上12、13密码子上8个突变位点进行分析，并通过测序验证结果。结果液相芯片技术检测灵敏度为10%~20%，高于传统测序法的1%。平均CV值<1%，表现出很好的重复性。从100例NSCLC患者组织样本中共检出5例突变，其中3例为Gly12Val突变，2例为Gly12Asp突变。结论基于液态芯片与PCR-LDR技术的K-ras基因分型检测方法检测通量高、灵敏度高、重复性好，是NSCLC患者个体化治疗及预后判断的K-ras基因突变分析的合理方法。（中华检验医学杂志,2013,36:704-707）

目的探讨血清胃泌素前体释放肽（ProGRP）对小细胞肺癌（SCLC）疗效监测的临床意义，评估ProGRP水平与SCLC预后的关系。方法临床诊断研究。用ELISA检测2005年12月至2008年10月期间山西省肿瘤医院呼吸与放疗科治疗、有完整资料的SCLC患者413例，非小细胞肺癌（NSCLC）418例、良性疾病患者120例及200名健康人的血清ProGRP、NSE水平。2005年12月至2011年10月随访368例SCLC患者ProGRP水平。以413例SCLC患者标本绘制ProGRP、NSE受试者工作特征曲线（ROC）；Kaplan-Meier法分析SCLC患者生存时间，Cox比例风险模型分析影响SCLC患者预后的因素。结果ProGRP诊断SCLC的ROC曲线AUC为0.798（95% CI：0.746~0.850），以45.3μg/L为临界值，其敏感度、特异度分别为79.2%，98.1%；NSE诊断SCLC的ROC曲线AUC为0.786（95% CI：0.726~0.746），以12.4μg/L为临界值，其敏感度、特异度分别为71.9%，96.7%；ProGRP与NSE联合诊断SCLC的敏感度、特异度分别为88.1%，95.8%。SCLC患者治疗前血清ProGRP为1758.7（368.4~2967.3）μg/L，高于NSCLC患者组[21.3（18.6~35.2）μg/L]、肺良性疾病组[36.8（26.3~43.4）μg/L]和健康对照组[6.89（5.3~8.6）μg/L]，差异有统计学意义（H=103.66，P=0.000）。Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期SCLC患者血清ProGRP分别为543.3（256.8~843.2）、1440.6（1042.4~2543.3）、1897.6（1586.5~3958.7）μg/L，差异有统计学意义（H=25.974，P=0.000）。完全缓解（CR）的165例患者治疗后ProGRP水平[226.3（69.3~456.7）μg/L]比治疗前[1025.2（436.8~1060.9）μg/L]明显下降（U=11.65，P<0.01）；部分缓解（PR）的146例患者治疗后ProGRP水平[563.7（246.2~869.4）μg/L]与治疗前[1351.5（859.5~1883.4）μg/L]相比有所下降（U=9.17，P<0.01）；治疗后病情无变化（NR）的63例患者[1575.6（1025.8~2596.5）μg/L]与病情进展（PD）的39例患者[2418.7（1869.2~4362.3）μg/L]与治疗前ProGRP水平[分别为1280.2（863.4~1968.7）、1867.6（1689.3~3025.4）μg/L]相比，则明显升高（U值分别为3.314、2.54，P均<0.01）。随访至少3年的SCLC患者368例，随访率为89.1%（368/413）。119例治疗前ProGRP<1000μg/L的SCLC患者死亡56例，中位生存时间为16（4~23）个月，249例治疗前ProGRP>1000μg/L SCLC患者死亡159例，中位生存时间为12（2~18）个月，2组差异有统计学意义（χ2=11.04，P=0.001）。经Cox多因素分析，ProGRP为影响SCLC患者总生存（OS）的独立预后因素（ward=18.35，OR=4.12，P=0.000）。结论血清ProGRP水平可评价SCLC患者治疗疗效和预后，治疗后密切随访ProGRP，对高危复发SCLC患者的识别和转移病灶的发现有指导意义。（中华检验医学杂志,2013,36:708-712）

目的探讨胰腺癌APC基因启动子的甲基化对表达的影响以及和临床病理资料的相关性。方法病例对照研究。选取郑州大学第一附属医院2010年8月至2011年1月手术切除的胰腺癌标本60份，另取20份同期胰腺良性疾病组织作为对照组。使用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）、实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）技术，检测60份胰腺癌、42份转移灶和20份胰腺良性疾病组织中APC启动子甲基化和基因表达水平，分析甲基化与APC表达及临床资料之间的关系。采用χ2检验进行统计学分析。结果在胰腺癌、转移灶和胰腺良性疾病组织中APC基因CG位点甲基化率分别是48.53%、46.67%和1.16%。胰腺癌和转移灶中APC基因启动子甲基化率明显高于对照组（χ2=12.903、14.402，P均<0.05）。各组织中APC基因表达差异无统计学意义（P>0.05）。APC基因甲基化与临床分期相关（χ2=6.801，P<0.05），而与患者性别、年龄及肿瘤大小、组织学分级、有无转移无关（χ2分别为0.727、1.311、0.372、0.148、0.017，P均>0.05）。结论APC基因启动子甲基化与胰腺癌形成有密切关系，并且与胰腺癌的临床分期有关，但不影响其表达。（中华检验医学杂志,2013,36:713-717）

目的评价补体C3、C4水平在自身免疫性肝炎（AIH）活动期中的应用价值。方法回顾性研究。收集2006至2009年北京佑安医院收治的AIH患者72例（活动期48例，缓解期24例），分析AIH患者外周血补体C3、C4水平与其肝脏炎症活动程度的关系。采用t检验、秩和检验、χ2检验进行统计学分析。结果AIH活动期患者外周血C3和C4水平[（0.88±0.04）g/L、（0.15±0.01）g/L]低于缓解期[（1.05±0.04）g/L、（0.21±0.01）g/L]，差异有统计学意义（t=2.743、4.756，P均<0.01）；C3水平与天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）成负相关（r=-0.2560、-0.3948、-0.4112，P均<0.05）。18例AIH活动期患者肝脏病理组织穿刺检查的HAI病理评分与C4水平成明显负相关（r=-0.5967，P<0.001）。结论AIH活动期C3、C4水平下降，其变化可作为AIH患者活动期诊断的辅助指标。（中华检验医学杂志,2013,36:718-721）

目的建立一种Taq Man real-time PCR探针杂交法，用于快速检测人rs12979860位点多态性。方法从人各不同组织器官中提取基因组DNA，利用小沟结合蛋白（MGB）探针的高度特异性，设计相应的引物探针，根据实时荧光定量PCR过程中产生的信号在2个检测通道的强弱变化来鉴别等位基因差异。最后所测样本经DNA测序验证结果的准确性。采用χ2检验进行统计分析。结果利用Taq Man MGB蛋白作为探针，能够区分只有1个碱基差异的目标基因组片段。该方法最低检测浓度为1.5 ng/μl，扩增有效率达97.6%。不同组织器官（肾、心脏、子宫、血浆）及分泌物（鼻咽部）的DNA均可以用于检测。在随后对40例高加索人和50例黄种人的检测中亦证实，rs12979860位点的基因型及等位基因频率存在差异，高加索人以CT基因型为主（26/40），而黄种人以CC基因型为主（40/50），差异有统计学意义（χ2=18.75，P<0.05）。在两种族人群中，抗病毒治疗血清学转换与患者基因型之间差异无统计学意义（P均>0.05）。结论Taq Man MGB法能快速并准确地区分rs12979860位点多态性，具有高度特异性和灵敏度，适用于多种样本的临床检测，是对丙肝患者抗病毒个体化治疗进行遗传分析的理想工具。（中华检验医学杂志,2013,36:722-726）

目的建立一种新型免疫磁珠方法，检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞（CTCs）。方法实验探索性研究。选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者，其中Ⅰ期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例，健康志愿者20名。将不同数量（50、100、200、500、1000个）的肺癌细胞株（A549）混入2 ml健康成人血标本中以模拟肿瘤患者的血样，对该血样进行红细胞裂解和离心，沉淀所得细胞与经过免疫磁珠标记的上皮细胞黏附分子（EpCAM）的抗体反应，然后经一套自制的检测装置对细胞进行富集和分离，与磁标记的EpCAM抗体反应后的上皮细胞因为磁力的作用被集中在一张玻片上，最后用经典的HE染色鉴定循环肿瘤细胞并计数。计算肿瘤细胞的回收率验证该方法的敏感性，同时检测20名健康志愿者血标本验证该方法的特异性。用上述方法检测42例肺癌患者的CTCs，将检测到的结果根据患者的临床特征进行分组，以卡方检验分析CTCs的检出率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小等临床特征的相关性，同时以直线相关法研究掺入细胞数与回收细胞数的相关性。结果掺入肿瘤细胞回收试验的回收率在68%~82%之间，掺入细胞间回归方程为Y=0.6419X+8.8875，回收的细胞与添加细胞间数量有显著的相关性（相关系数R2=0.9916，P<0.05）。42例肺癌患者中有18例（42.9%）CTCs阳性，其中，Ⅰ期CTCs检出率为0，Ⅱ期CTCs检出率为11.1%，Ⅲ期CTCs检出率为62.5%，Ⅳ期CTCs检出率为70%。CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显关系（P>0.05），而与临床分期（TNM）有密切关系（P<0.05）。特异性检测结果为20名健康志愿者外周血标本均未检测到CTCs。结论新型免疫磁珠富集技术可以有效分离和鉴定肺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞，有较高的敏感性和特异性;随着肺癌患者分期增高和肿瘤增大，肺癌细胞发生远处转移逐渐增多，CTCs检出的水平亦增高，对于早期发现肺癌隐形微转移和重新确定肺癌分期具有重要意义，但其临床价值仍需进一步多中心、大样本病例的临床研究加以证实。（中华检验医学杂志,2013,36:727-732）

目的探讨两种常用的蛋白水解酶（Glu-C和Lys-C）在质谱法测定糖化血红蛋白（HbA1C）中的差异性研究。方法病例对照研究。收集2012年2至4月北京朝阳医院门诊和住院患者剩余血液合计200 ml，患者来源中男90例，女70例，年龄20~60岁，平均年龄（44±16）岁。依据国际临床化学协会（IFCC）推荐的基于质谱法的HbA1C参考测量方法处理收集的血液样本（样本编号为：201201、201202、201203），分别应用两种常用的蛋白水解酶（Glu-C和Lys-C）酶解样本中的血红蛋白，使用固相萃取的方法进行质谱前处理，设定最适实验条件后，应用液相色谱串联质谱测定样本中HbA1C的含量。使用Sequest软件对制备的实验样本进行血红蛋白变异体的筛查，所有由液相色谱串联质谱获得的质谱结果都需使用Sequest软件针对人类国际蛋白指数（IPI）数据库搜索RAW文件，检索结果与血红蛋白变异体网站上公布的4种常见的血红蛋白变异体（HbS、HbC、HbD、HbE）进行比对。采用SPSS 13.0统计软件和Excel 2003对测量结果进行相关性分析，组间比较采用独立样本t检验。结果经液相色谱串联质谱检测结果可知，在检测HbA1C浓度时，分别用Glu-C和Lys-C酶解血液样本201201、201202、201203，其中经Lys-C酶解的样本HbA1C检测结果分别为（34.70±2.80）、（51.76±1.60）、（73.39±1.11）mmol/mol，经Glu-C酶解的样本糖化血红蛋白检测结果分别为（33.12±1.48）、（54.54±2.50）、（75.40±3.60）mmol/mol，组间比较差异无统计学意义，两种方法测定结果绘制相关曲线，R2均>0.995。经Sequest进行人类数据库检索，未筛查出4种常见的血红蛋白变异体的存在。结论在质谱法检测HbA1C时，应用上述两种常用的蛋白水解酶酶解血液样本时，可以得到较为一致的结果，两种方法检测结果相关性良好。（中华检验医学杂志,2013,36:733-737）

目的建立一种应用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）测定血清中镁（Mg）含量的候选参考方法。方法验证性研究。以铝（Al）作为Mg的内标，用重量法加入到标准溶液和血清中，样品经过硝酸消解、稀释，以ICP-MS测定其24Mg/27Al同位素比值，选择与样品相邻的一对标准溶液校准样品中Mg的浓度，采用包括法定量。对方法的线性范围、精密度、回收率以及正确度进行验证，并计算测量不确定度，参加国际比对。结果该方法的线性范围为0~0.5μg/g（R2=0.999 98），测定2份血清中Mg的分析回收率分别为100.22%和100.11%（n=3），测定3份血清的重复性CV分别为0.35%、0.36%和0.41%（n=9）。正确度验证显示测定标准参考物质SRM909b和SRM956b的结果均在认定值范围内，SRM909b两水平血清测定总变异系数分别为0.54%、0.53%，SRM956b三水平血清测定总变异系数分别为0.30%、0.50%和0.47%。参加国际参考实验室间比对结果理想。结论本研究建立了ICP-MS测定血清Mg的测量程序，具有良好的线性范围、精密度和回收率，且此法操作简单快速，有望成为血清Mg测定的候选参考方法。（中华检验医学杂志,2013,36:738-742）