2013年 · 第36卷第06期

科学合理的应用诊断标志物，对心血管疾病的早期发现和指导临床治疗具有重要意义。心肌特异性肌钙蛋白的出现及其高敏检测方法的发展使得急性心肌梗死的早期无创性诊断成为可能，利钠肽用于诊断心力衰竭更是心脏标志物发展史中的亮点。随着新方法学研究的不断深入，可能会发现更多具有潜力的新型早期标志物和疾病风险预测因子，在为心血管疾病的早期诊断和治疗带来新的发展前景的同时，也为临床医师和检验工作者带来更多的挑战。（中华检验医学杂志,2013,36:481-484）

心肌梗死是全球疾病中致死致残的首要因素。随着医学发展心肌梗死的定义也在不断的更新。在2012年欧洲心脏病年会上发布的第3次心肌梗死定义更新专家共识中，明确指出肌钙蛋白(cTn)的临床应用价值，建议对可疑患者监测cTn动态变化，强调临床鉴别诊断的重要性。在共识中也提到高敏肌钙蛋白的应用可导致假阳性的出现，同时指出在心脏介入手术或搭桥手术患者中，cTn合理界值点尚存争议。除急性冠状动脉综合征外，很多疾病都会出现cTn升高，而随着检测敏感度的提高，cTn低水平的升高将更为多见。急性和慢性心力衰竭时，cTn都有升高，而ACS可能是急性心力衰竭或慢性心力衰竭加重的原因，应区别cTn的升高是单纯来自于心力衰竭时的心肌损伤还是ACS导致的心肌坏死。现有心肌梗死发病率的升高与cTn的广泛应用有很大关系。在不同国家和地区，诊断心肌梗死的技术条件不同，导致心脏标志物和影像学技术临床应用中弹性很大。(中华检验医学杂志，2013，36：485–488)

抗血小板治疗和冠状动脉内支架植入术作为冠心病患者主要的药物治疗和血运重建方式可以显著降低患者的死亡率。研究显示在一部分冠心病患者接受了常规阿司匹林和氯吡格雷抗血小板治疗后仍然会发生不良心脏事件，因此对阿司匹林及氯吡格雷的抵抗现象越来越引起关注。通过临床监测血小板功能可以及时识别这部分患者并且制定个体化的治疗策略，从而可能使这部分患者获益。目前为止很多的血小板功能检测手段已经应用于临床，用来监测及评价冠心病患者预防和治疗血栓事件的疗效。这些检测方法可以针对不同的抗血小板药物包括阿司匹林、氯吡格雷以及血小板膜糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa）拮抗剂。通过不同检测方法测定的抗血小板药物抵抗的结果不同，并且和临床不良事件的相关性需要进一步的验证。（中华检验医学杂志,2013,36:489-493）

心血管疾病（CVD）是我国最常见的疾病之一，是导致人口死亡的重要原因。心脏标志物的检测对早期CVD的诊断、预后判断以及指导治疗至关重要。床旁检验（POCT）是一种新兴的检验模式，是检验医学发展的一种新趋势。心血管领域POCT技术的应用是所有POCT技术中发展最快的部分。由于心脏标志物在急危重症CVD诊断中的重要价值与快速获取结果之间的矛盾需求，推动了心血管领域POCT技术的应用和发展。随着POCT技术发展的多样化，检测设备不断推陈出新，检测结果参照中心实验室（CLT）标准化，应用将会越来越广泛，会以共生互补的方式与传统检验模式共同推动检验医学的发展。（中华检验医学杂志,2013,36:494-497）

呼吸困难因发病急骤，病因繁多，一直是临床鉴别诊断的要点和难点。既往依据患者症状、体征和实验室检查进行鉴别，但因临床表现有相似性和重叠性，且缺少特异而敏感的实验室检测指标，故容易误诊。B型利钠肽（BNP）等实验室指标是心力衰竭诊断敏感且特异的指标，其应用使得快速准确的实验室检查用于鉴别呼吸困难的病因成为现实。随着近年来新型诊断试剂和方法的不断涌现，使呼吸困难的鉴别诊断水平不断提高，正逐步改变着临床诊治面貌。（中华检验医学杂志,2013,36:498-501）

载脂蛋白M（apoM）是一种于1999年新发现的载脂蛋白，属载脂蛋白超家族，apoM的基因（APOM）主要表达于肝、肾并且受转录因子、细胞因子及激素等高度调控。系列研究显示apoM在脂蛋白尤其是高密度脂蛋白代谢中起重要作用，而高密度脂蛋白与动脉粥样硬化的关系已有较明确认识，因此apoM被认为对动脉粥样硬化具有潜在重要影响。（中华检验医学杂志,2013,36:502-505）

半乳糖凝集素3（gal-3）属于半乳糖凝集素家族成员之一和心脏纤维化及心脏重构直接相关。近来美国食品药品监督管理局批准gal-3作为心力衰竭患者预后帮助指标。gal-3与年龄、肾功能、BNP相关，与BNP的诊断特性相比，gal-3长期预后的价值高于诊断的价值。高浓度gal-3是心脏纤维化指标，增加充血性心力衰竭发生和致死率的风险。（中华检验医学杂志,2013,36:506-510）

目的探讨1p13.3 rs12740374，rs646776和rs599839单核苷酸多态性与心肌梗死发生及患者血脂水平的关系。方法本研究属于病例对照研究。选取新疆阿克苏地区维族心肌梗死患者150例和健康维族人123名，通过高温连接酶检测法（PCR-LDR）检测rs12740374，rs646776和rs599839位点基因型。同时，检测病例组样本血脂水平，分析其与患者基因型的关联。采用χ2检验及Fisher确切概率法分析。结果病例与对照组间rs12740374（χ2=5.65，P<0.05）、rs646776（χ2=4.88，P<0.05）和rs599839（χ2=5.1，P<0.05）的等位基因频率差异均有统计学意义，在显性突变模式下rs12740374 GG与GT+TT（χ2=5.01，P<0.05），rs646776AA与AG+GG（χ2=4.50，P<0.05）和rs599839 AA与AG+GG（χ2=4.00，P<0.05）基因型频率差异均有统计学意义，采用Logistic回归矫正性别及血脂等因素后差异仍有统计学意义（P<0.05），携带rs599839位点不同基因型的患者总胆固醇水平间差异有统计学意义（χ2=6.25，P<0.05）。结论rs12740374，rs646776和rs599839位点可能与维族人群心肌梗死发病有关，rs599839位点基因型可能与总胆固醇水平有关。（中华检验医学杂志,2013,36:511-515）

目的探讨血清唾液酸（SA）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）与高血压前期的关系及临床意义。方法本研究属于临床病例对照研究。收集中日友好医院2011年的181名体检者标本，测量血压、身高、体重，调查生活习惯、疾病史等情况，按照血压水平分为血压正常组（n=50）、高血压前期组（n=61）、高血压组（n=70）检测血糖、血脂、血清SA、血压、hs-CRP、体质量指数（BMI），采用多元线性逐步回归分析血清SA、hs-CRP对血压的影响。结果三组间收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、SA、hs-CRP、BMI和高密度脂蛋白（HDL）水平比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。低密度脂蛋白（LDL）、总胆固醇（TC）、空腹血糖（FBG）在高血压组和对照组间有显著性差异（P<0.05）。多元线性回归分析显示，FBG、BMI、SA、hs-CRP与SBP独立相关（P<0.05），LDL、BMI、SA、hs-CRP与DBP独立相关（P<0.05）。结论血清SA和hs-CRP与血压独立相关，可以作为高血压前期的检查指标。（中华检验医学杂志,2013,36:516-518）

目的探讨线粒体DNA（mt DNA）ND2基因C5178A多态性与2型糖尿病（T2DM）患者并发心脑血管病的关系。方法本研究属于病例对照研究。选择2010至2011年期间在浙江省人民医院住院的448例无血缘关系的T2DM患者，男274例，女174例，采用PCR产物直接测序法对所有患者的mtDNA ND2基因5178位点进行测序，同时收集每例患者的临床资料。根据测序结果分为5178C和5178A两组，检测所有患者的体重指数、血压、血脂、血糖，通过t检验和χ2检验，分析这些指标在T2DM患者5178C基因组和T2DM患者5178A基因组两组之间的差异以及不同性别的患者中的差异。结果在448例T2DM患者中共检测出348例5178C，100例5178 A，mtDNA 5178A组的T2DM患者收缩压为（124.6±9.0）mm Hg，高密度脂蛋白（HDL）为（1.3±0.2）mmol/L，而5178C组的患者收缩压为（127.8±10.7）mm Hg、HDL为（1.2±0.3）mmol/L，两组之间比较5178A组收缩压降低，HDL升高（t=2.700，P=0.007；t=2.968，P=0.003）。5178A组脑梗死的发生率为8.0%（8/100），5178C组脑梗死的发生率为21.0%（73/348），脑梗死的发生率在两组之间的差异有统计学意义（χ2=8.832，P=0.003）。C5178A的变异在不同性别之间的分布没有统计学差异（P>0.05），进一步分析发现在女性T2DM患者中，5178A和5178C组的三酰甘油水平分别为（1.5±0.8）mmol/L和（1.8±1.0）mmol/L，收缩压分别为（123.6±6.6）mm Hg和（128.0±9.0）mm Hg，两组之间比较5178A组女性患者三酰甘油和收缩压明显降低（t=2.601，P=0.011；t=2.887，P=0.004）。女性5178A患者脑梗死的发生率为5.3%（2/38），5178C女性患者脑梗死发生率为21.3%（29/136），两组之间的差异有统计学意义（χ2=5.232，P=0.022）。在男性T2DM患者中，5178A组和5178C组的脑梗死发生率分别为9.7%（6/62）和20.7%（44/212），HDL水平分别为（1.4±0.2）mmol/L和（1.2±0.3）mmol/L，两组比较5178A组男性患者脑梗死发生率明显降低，HDL水平明显升高（χ2=3.946，P=0.047；t=3.511，P=0.001）。结论在T2DM患者中，mtDNA C5178 A为多态性位点，该位点的改变与T2DM患者并发心脑血管病存在相关性，其对血压、血脂等的影响可能有利于抵抗T2DM患者心脑血管并发症的发生发展。（中华检验医学杂志,2013,36:519-522）

目的评价13种葡萄糖常规检验系统的正确度;并探讨标准物质对改进常规检验系统结果一致性和正确度的作用。方法本研究为试剂评价研究。以同位素稀释液相色谱串联质谱（IDLC/MS/MS）法为比对方法，选取瑞士罗氏、北京中生、深圳迈瑞、上海科华、四川迈克、上海丰汇、日本和光7个生产厂家的13种血糖试剂盒（葡萄糖氧化酶法或己糖激酶法）及其配套校准品在日立7170A生化分析仪上组成的常规检验系统作为待评价方法，分别测定从2011年1月1日至6月30日卫生部北京医院糖尿病门诊患者实验室检测剩余血清收集的20份新鲜冰冻血清和美国国家标准和技术研究院（National Institute of Standards and Technology，NIST）葡萄糖标准物质SRM 965a中的2、4水平中的葡萄糖浓度；将比对方法和每一待评价测定20份冰冻人血清葡萄糖的结果进行直线回归分析，拟合的直线回归方程用于估算医学决定水平上预期偏倚（Bias）；利用两个水平的SRM 965a认定值与待评价方法测定值之间的数学关系，对各个待评价方法测定结果进行再校准（Recalibration），比较再校准前后13种常规方法检测20份人血清葡萄糖的方法间CV、平均偏倚及预期偏倚的变化。结果各待评价方法具有较好的精密度（CV<1.63%）；13种待评价方法与比对方法测定20份新鲜冰冻人血清葡萄糖的结果间具有良好的相关性（R2均大于0.998，P均<0.01），13个评价方法测定20份患者血清葡萄糖的偏倚范围为-0.11~0.27 mmol/L（-1.4%~3.92%），在5.6、7.0及11.1 mmol/L 3个医学决定水平的预期偏倚范围分别为-0.08~0.23 mmol/L（-1.43%~4.11%），-0.10~0.26 mmol/L（-1.43%~3.71%）和-0.18~0.37 mmol/L（-1.62%~3.33%）。13种待评价方法测定20份新鲜冰冻血清样本葡萄糖时，方法间CV均值2.11%（1.55%~2.39%），利用标准物质再校准后，各样本的方法间CV均有所减小，均值1.34%（0.95%~1.82%）；13种待评价方法测定20份新鲜冰冻血清样本相对偏倚平均值1.11%（1.72%~4.85%），再校准后其绝对值有所增加，平均值为-2.52%（-5.12%~1.32%）。结论13种葡萄糖常规检验系统均具有良好的正确度，其溯源性得到验证。利用标准物质再校准有助于提高不同常规方法检验结果的一致性。（中华检验医学杂志,2013,36:523-528）

目的建立一种表面增强拉曼光谱（SERSp，也称拉曼分子指纹谱）分析技术检测滤纸干血片方法，探索用于筛查新生儿先天性甲状腺功能减低症（CH）的可能性和可靠性。方法本研究为病例对照研究。新生儿滤纸干血片标本和有关CH-hTSH筛查检测结果与诊断结论由作者在上海儿童医院新生儿筛查中心提供，SERSp实验在大连理工大学合作完成。选取经常规时间分辨荧光免疫法检测促甲状腺素（TSH）浓度筛查CH（CH-hTSH）后确诊阴性和阳性滤纸干血片标本各6份，检测滤纸干血片水溶液表面增强拉曼光谱，以725 cm-1谱线为内标，分析得到的拉曼分子指纹谱；使用特征谱线分析，主成分分析方法（PCA）及PCA分群散点图分析，比较TSH检测结果。结果用725 cm-1拉曼峰为内标，对照CH阴/阳性标本的SERSp实验结果，发现1373和1400 cm-1两谱线用于分析CH的阴性和阳性的相对峰高差最大，提示1373和1400 cm-1两条谱线可能为CH的特征谱线;而TSH的三条拉曼特征谱线（785、827和853 cm-1）的阴性/阳性的相对峰高差异很小，用于TSH的特征峰进行CH-拉曼筛查尚存在困难;12例SERSp检测结果用主成分分析方法、PCA分群散点图和1373和1400 cm-1两条CH特征谱分析方法均证实，CH-拉曼筛查与用荧光免疫检测CHhTSH筛查的结果基本相符，其符合率为91.7%，CH-拉曼筛查方法的灵敏度为100%，特异性为83.3%。结论初步成功地开拓了一种采用SERSp检测分析的CH-拉曼筛查新方法，证实将足跟滤纸血片-SERSp分析技术应用于新生儿CH筛查有很好的前景。（中华检验医学杂志,2013,36:529-533）

目的对F8基因大片段缺失所导致的重型血友病A患者进行基因断裂点分析，探讨其分子发病机制。方法筛查患者凝血功能相关指标，明确血友病A表型诊断。采用长距离PCR及序列特异PCR进行内含子22和内含子1倒位的检测，并对F8基因的所有外显子及其侧翼序列直接测序。基因步移的方法确定F8基因断裂点。断裂点特异双重PCR对携带者进行诊断。多重荧光PCR法检测6个微卫星DNA位点（F8Up226、F8Up146、F8Int13、F8Int25、F8Down48、DXS1073）多态性对家系进行遗传连锁分析验证。结果先证者FⅧ活性<1%，诊断为重型血友病A。患者F8内含子22及内含子1倒位均为阴性。F8基因4~7号外显子多次PCR扩增后电泳未见相应条带，其余外显子测序未发现突变。基因步移PCR扩增产物经测序发现F8基因共缺失27 685个碱基，并在断裂点融合处存在2个微小同源碱基，且插入7个碱基（CTCTTCC）。断裂点特异性双重PCR结果显示胎儿及该患者的女儿均为缺失携带者，与基因连锁分析结果相吻合。结论F8基因4~7号外显子缺失导致患者发生重型血友病A，微小同源介导的末端连接等机制可能介导了缺失的发生。断裂点特异双重PCR为携带者的诊断提供了一个可靠的方法。（中华检验医学杂志,2013,36:534-537）

目的建立儿童新发呼吸道病毒的多重实时荧光定量PCR检测方法，并利用该方法进行临床标本的检测。方法根据人类偏肺病毒、冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、人博卡病毒、KI多瘤病毒和WU多瘤病毒的保守区域设计并合成引物和探针，确定引物和探针的特异性，优化引物和探针的组合浓度，通过检测具有类似临床症状的其他病原体的标本评价该多重荧光定量PCR方法的特异性，构建质粒标准品用于分析检测该方法的灵敏度和重复性；并对2009至2012年湖州市妇幼保健院及湖州市中心医院收集的322例呼吸道感染患儿的痰液标本进行检测分析。结果成功建立了这6种新发呼吸道病毒的多重荧光定量PCR检测方法，能够同时或分别对其进行检测。体系中筛选的引物和探针具有很好的特异性，并优化出适合的引物探针组合浓度，灵敏度分析最低检测限为10拷贝数/μl，重复性分析中批内变异系数（CV）为1.2%~3.4%，批间CV为0.08%~0.85%，均小于5%。322份临床标本中，人类偏肺病毒阳性17份，阳性率5.28%，人博卡病毒9份，阳性率2.80%，未检到冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、KI多瘤病毒和WU多瘤病毒。结论多重荧光定量PCR方法具有简单快速，灵敏性和特异度高等特点，并且能实现多种新发病毒同时并行检测，可为儿童呼吸道新发病毒感染的临床诊治提供技术支持。（中华检验医学杂志,2013,36:538-542）

目的建立肉眼直接判读检测结果的铜绿假单胞菌OprD2耐药基因环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。方法对2011年12月至2012年6月西南医院微生物室收集的47株铜绿假单胞菌标本进行前瞻性研究。利用LAMP针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因设计两对引物，特异性识别OprD2的6个独立区域来快速扩增。通过在LAMP反应体系中加入核酸染料羟基萘酚蓝（HNB），建立可直接用肉眼判读检测结果的LAMP反应体系，并用该方法检测和分析47株铜绿假单胞菌OprD2耐药基因的分布情况及其与抗生素耐受性的相关性。结果设计出针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因可直接肉眼判读结果的恒温扩增检测方法，其检测体系的灵敏度为17.414μg/L，比常规PCR方法（灵敏度：174.14μg/L）高10倍。49%（23/47）的菌株OprD2基因缺失，OprD2基因缺失株的头孢噻肟、左氧氟沙星、氨曲南、哌拉西林、亚胺培南和美罗培南耐药率分别为100%（23/23）、57%（13/23）、48%（11/23）、48%（11/23）、48%（11/23）和43%（10/23）。与OprD2基因阳性株相比，OprD2基因缺失株的亚胺培南、左氧氟沙星和美罗培南耐药比例明显升高，差异有统计学意义（χ2值分别为9.155、4.846、4.037，P值分别为0.002、0.028、0.045）。结论建立了可直接肉眼判读检测结果的铜绿假单胞菌OprD2耐药基因LAMP快速技术。OprD2基因缺失导致铜绿假单胞菌以亚胺培南为主的耐药，因此明确OprD2基因分布状况有助于临床抗菌药物的选用。（中华检验医学杂志,2013,36:543-547）

目的探讨副溶血弧菌（VP）临床分离株的毒力特征及分子分型特征。方法收集2009至2011年北京同仁医院肠道门诊腹泻患者分离的152株VP，采用PCR技术检测溶血毒素基因（tdh、trh）、两个Ⅲ型分泌系统2（T3SS2α、T3SS2β）及O3∶K6克隆群系统性毒力基因（tox RS/new、orf8）。采用多位点序列分型（MLST）技术对菌株进行分子分型研究。结果152株VP tdh阳性率为96%（146/152），trh阳性率为2%（3/152），T3SS2阳性率为100%（152/152）。实验中分离到大流行株（tdh+、toxRS/new+、trh-）107株，致病株（tdh+或/和trh+）38株，非致病株（tdh-且trh-）6株。其中非致病株均含大流行株系统性毒力基因orf8和tox RS/new，仅1株致病株含orf8基因；另发现一分离株含全部毒力基因。MLST分型将152株VP分为16个序列型（ST型），其中ST3为优势序列型，包含113株菌，并发现4种新ST型。结论本研究副溶血弧菌90%以上携带tdh，以ST3型为主要流行株，通过毒力基因检测和MLST研究可快速追踪流行株致病性和分子进化信息。（中华检验医学杂志,2013,36:548-552）

目的对临床实验室危急值的历史数据进行统计分析，探讨建立合理的危急值报告制度。方法横断面研究。统计福建医科大学附属第一医院检验科2008年11月至2012年10月危急值63 794件，计算危急值的年内发生率、项目分布及病区分布；比较危急值项目信息化、个性化报告前后的及时率和漏报率；对比门诊危急值报告流程改造前后的临床响应时间。结果福建医科大学附属第一医院每年危急值报告1.5万~1.8万件，占年检测数1.53%（63 794/4 166 267），主要来源于住院患者（约占80%），以PLT、K+、APTT出现的频率最高；危急值分布不平均，集中分布于ICU、血液科、急诊科及肝病中心等病区；电话报告危急值耗时3~8 min（中位数5 min），漏报率7.53%（949/12 596），信息化发送危急值报告仅需5~10 s，未见漏报；个性化报告使血液科、肝病中心的危急值报告工作量分别由13.85%、12.77%降为11.24%、8.43%；采用新的门诊危急值流程（班内及班外不同模式），危急值临床响应时间由20 min降为7 min。结论实现危急值信息化管理提高危急值报告效率和准确率。建立合理可行的危急值报告制度，可以减少错误发生。（中华检验医学杂志,2013,36:565-568）

目的体外检测阿司匹林、氟康唑单用或联合对生物膜白念珠菌的抑菌活性，评价两药联合的抗菌效果。方法分别测定阿司匹林和氟康唑对生物膜白念珠菌的MIC50值，采用分级抑制浓度指数检测阿司匹林与氟康唑之间的抗菌作用关系。并应用荧光定量PCR检测分析阿司匹林对生物膜白念珠菌表面蛋白ALS3及HWP1表达的影响。结果阿司匹林对生物膜白念珠菌标准株ATCC64550，临床分离株14215、15346、15538及16335的MIC50分别为>1440 mg/L、>1440 mg/L、1440 mg/L、720 mg/L及1440 mg/L，氟康唑对标准株及临床株生物膜白念珠菌的MIC50均>64 mg/L。联合用药对氟康唑耐药株ATCC64550作用增强不明显，对4株临床分离株分级抑制浓度（FIC）指数分别为0.75、0.5、0.75、0.75，表现为协同或相加作用。在阿司匹林作用下，与白念珠菌生物膜形成相关的表面蛋白ALS3和HWP1表达明显下降。结论阿司匹林能抑制白念珠菌生物膜的形成，可能促进生物膜白念珠菌对氟康唑的敏感性。（中华检验医学杂志,2013,36:569-572）

心血管疾病的发病率和病死率逐渐升高，临床上进行血液检验是疾病诊断、判断预后、发现病情变化和提供治疗依据的重要手段。已经证实心血管疾病患者的血液检测前标本的质量控制受多种因素影响，如采血时间、采血方式等，需要客观的分析不同采血时间和采血方式对心血管疾病检验数据的影响。（中华检验医学杂志,2013,36:573-574）