2013年 · 第36卷第05期

本文阐述了当前血细胞分析仪进展及应用中的问题，以及如何与时俱进地不断提高细胞学诊断水平，包括新技术、新思维、新模式不断引入血液分析仪后出现的新问题及解决办法。倡导既要考虑国情，又要紧跟时代步伐，以最佳证据为准则，采用方法学的优化组合，增强常规项目的诊断能力和预后评估能力。建议要从政策上支持形态学检验，适当提高技能和知识含金量高、费工、费时的形态学检查收费标准，体现其应有的价值。（中华检验医学杂志,2013,36:385-388）

目前，外周血细胞形态学检验诊断主要以人工显微镜观察为主，由于手工操作等因素严重制约了其临床应用和发展速度。近十年来，全自动数字图像分析技术的快速发展与初步临床应用为外周血细胞形态学检验诊断带来了突破性进展，并可能逐渐替代大部分人工显微镜形态学检查，将是未来外周血细胞形态学检验诊断的主要发展趋势。（中华检验医学杂志,2013,36:389-392）

针对建国以来一直无国人检验项目参考区间系统研究，而多引用国外人群参考区间的现状，在卫生部支持下，中华医学会检验医学分会启动了“中国人群重要常规临床检验项目参考区间的建立”研究工作。目前首批成人常用肝功能、电解质和血细胞分析项目参考区间已以卫生行业标准发布，建议各医疗机构在临床检验工作中参考使用。（中华检验医学杂志,2013,36:393-394）

目的探讨早幼粒细胞白血病（promyelocyte leukemia，PML）蛋白在髓系白血病中的表达及其对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的影响。方法采用实时荧光定量PCR技术检测了30例慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）患者及24名健康对照者外周血单个核细胞中PML mRNA水平的差异。构建PML的真核表达载体，转染K562细胞后筛选出稳定表达PML的细胞株，以稳定表达空载体的细胞为对照。四甲基偶氮唑盐（MTT）法和流式细胞术分别检测PML过表达对细胞增殖和细胞周期的影响，并进一步用反转录-PCR（RT-PCR）和蛋白质印迹技术（Western blot）检测增殖相关因子c-myc和p27kip1（p27）mRNA水平以及蛋白表达水平的改变。最后检测了CML患者及健康对照者外周血单个核细胞中c-myc和p27 mRNA水平的差异。结果CML患者外周血单个核细胞中PML mRNA表达水平（ΔCt=9.02±0.74）明显低于健康对照组（ΔCt=7.91±0.34），差异有统计学意义（t=5.07，P<0.001）。PML过表达能明显抑制K562细胞增殖，引起细胞周期G0/G1期阻滞。PML稳定表达的K562细胞中，c-myc的mRNA和蛋白表达水平降低，p27的m RNA和蛋白表达水平升高。CML患者外周血单个核细胞中c-myc的mRNA表达水平（ΔCt=7.13±0.43）显著高于健康对照组（ΔCt=9.35±0.82），差异有统计学意义（t=6.78，P<0.001），而p27的mRNA表达水平（ΔCt=4.56±0.58）则显著低于健康对照组（ΔCt=3.29±0.92），差异有统计学意义（t=2.93，P<0.01）。结论PML在CML患者中低表达，PML可能通过调节cmyc和p27的表达从而抑制白血病细胞的增殖。（中华检验医学杂志,2013,36:395-399）

目的分析血栓弹力图（TEG）异常图形，提高对TEG的分析识别能力，为临床提供有价值的TEG检测结果。方法本研究为回顾性研究。分析解放军总医院15 430例TEG结果，利用反应时间（R）、凝血时间（K）、凝固角（Angle）、最大振幅（MA）、血凝块溶解百分比（EPL）、30 min血凝块幅度减少速率（LY30）、凝血指数（CI）等参数对纤溶亢进组、肝素应用图形组、纤维蛋白二次激活组、血小板功能组、抗血小板药物监测组等进行分析。结果纤溶亢进组：原发性纤溶亢进组，参数EPL值19.3，LY30值19.3，CI值0.4；继发性纤溶亢进组，EPL值11.6，LY30值11.6，CI值3.2。肝素应用图形组：肝素测试（CKH）R值较普通测试（CK）缩短组，CKH的R值10.9 min，CK的R值50.8 min；CKH的R值较CK延长组，CK的R值12.2 min，CKH的R值15.7 min。纤维蛋白二次激活图形组：真性功能性纤维蛋白二次激活组，首次检测最大振幅MA值35.2，更换通道复测MA值34.7；假性纤维蛋白二次激活组，首次检测MA值73.4，更换通道复测MA值20.0。血小板功能组：血小板功能减低组MA值21.6；血小板功能亢进组MA值79.2。抗血小板药物监测组：二磷酸腺苷（ADP）类抑制剂无效组（代表药物氯吡格雷），ADP抑制率10.9%；花生四烯酸（AA）代谢途径抑制剂无效组（代表药物阿司匹林），AA抑制率7.5%。结论对血栓弹力图异常图形的正确判断，能确保结果的准确性，减少人为不良事件的发生。（中华检验医学杂志,2013,36:400-404）

目的检测冠状动脉粥样硬化性心脏病患者未服用及服用抗血小板药物后，在调整或不调整富血小板血浆（PRP）中血小板数量情况下的血小板最大聚集率，评价两种方法对监测抗血小板药物疗效的优劣。方法本研究为方法学比对研究。选择2012年5—6月首都医科大学附属北京安贞医院560例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者，以终浓度6μmol/L二磷酸腺苷（ADP）及0.5 mmol/L花生四烯酸（ARA）为诱导剂，分别测定不调整PRP中血小板数量（改良法）和调整PRP中血小板数量至200×109/L（原法）标本的5 min血小板最大聚集率，比较两种方法的相关性及差异性。结果以ADP或ARA为诱导剂时，在未服药组、服阿司匹林单药组及服阿司匹林和氯吡格雷双药组中，血小板最大聚集率和PRP中血小板数量均无相关性（-0.21≤r≤0.111，P>0.05）。以ADP作为诱导剂时，原法比改良法血小板聚集率显著降低；改良法较原法各组血小板最大聚集率变异均更小；两种方法测得血小板最大聚集率在各组均有相关性（未服药组、单服阿司匹林组、服双药小于1周组、服双药大于1周组r值分别为0.78、0.73、0.40、0.71，P均<0.01）。以ARA作为诱导剂时，在未服药组，原法比改良法血小板最大聚集率降低;改良法比原法血小板最大聚集率结果变异区间小，分别为62%~98%和5%~89%；在服阿司匹林单药组及服双药组，改良法和原法均能检测到血小板最大聚集率较未服药组显著降低。结论不调整PRP中血小板数量检测血小板聚集率的实验操作更简便、快捷，对血小板的体外影响更小，更适合临床实验室用于监测抗血小板药物疗效。（中华检验医学杂志,2013,36:405-409）

目的为了进一步提高临床实验室抗核抗体检测结果的重复性和可比性，探索可靠的制备方法，并且研制满足抗核抗体常规检测需要的质控血清。方法按照入选要求选择本室检测抗核抗体之后的患者血清制备质控血清；通过无菌实验、防腐实验、冻存、复温、浓度水平的设置等的研究，初步确定制备质控血清的方法和条件；通过对制备血清的外观、无菌性、批内及批间均匀性、稳定性等指标的评价，进一步优化制备方法和条件，确认制备的质控血清的性能。结果制备的质控血清在-20℃可以稳定保存270 d，室温复温后稳定8 h以上。冻存复温后批内及批间均匀性、稳定性与商品化质控性能无明显区别，与冻存前检测结果一致。结论探索出了抗核抗体检测质控物制备的合适方法和实验条件；制备的各个批号质控物具有良好的均匀性、稳定性；制备出的质控血清满足抗核抗体检测需求和质控要求。（中华检验医学杂志,2013,36:410-413）

目的探讨动脉粥样硬化（AS）患者单个核细胞（PBMC）唾液酸黏附素（Siglec-1）在刺激白细胞分化抗原（CD）4+和CD8+T淋巴细胞活化增殖中的作用。方法实验研究。用磁珠分离长征医院18例急性冠状动脉综合征（ACS）和41例稳定型心绞痛（SA）患者及32名健康对照者CD14阳性PBMC后，用不同浓度α-干扰素（IFN-α，0、2、5、10 ng/ml）刺激Siglec-1高表达，或用小干扰RNA或抗Siglec-1单抗靶向抑制Siglec-1表达，再与1名第三方健康献血者CD4+/CD8+T淋巴细胞共培养5 d。然后，将实验分为11组：健康人CD14（1组），健康人CD14+IFN-α 5 ng/ml（2组），健康人CD14+IFN-α5 ng/ml+anti-Siglec-1 2μg/ml（3组），ACS CD14（4组），ACS CD14+siRNA干扰对照组（Mock，5组），ACS CD14+siRNA 679 40 nmol/L（6组），ACS CD14+anti-Siglec-1 2μg/ml（7组），SA CD14（8组），SA CD14+Mock（9组），SA CD14+siRNA 679 40 nmol/L（10组），SA CD14+anti-Siglec-1 2μg/ml（11组）；每组测定10份标本。用CCK-8活细胞计数试剂盒检测共培养T淋巴细胞增殖，用ELISA检测共培养T淋巴细胞分泌白细胞介素（IL）-2、IL-10、IL-12、γ干扰素（IFN-γ）。测定各组PBMC刺激T淋巴细胞分泌细胞因子的计量数据用中位数（四分位数）表示，采用非参数秩和检验。结果靶向阻断Siglec-1后（6组），PBMC刺激CD4+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞的增殖能力减弱，PBMC刺激CD4+T淋巴细胞分泌IL-2、IL-12、IFN-γ分别为67.00（62.50~87.30）、0.86（0~1.63）、47.82（37.60~56.67）pg/ml，且分泌能力减弱；IL-10为56.00（46.25~67.40）pg/ml，且分泌能力增强；未处理组（4组）上述细胞因子分别为213.70（187.50~275.30）、6.87（4.90~8.93）、114.90（89.50~167.40）、21.08（15.70~33.20）pg/ml，二者差异有统计学意义（U值分别为8.50、17.00、8.50、87.50，P均<0.05）。当健康对照组单核细胞经IFN-α刺激上调Siglec-1表达后（2组），刺激CD4+T淋巴细胞分泌IL-2、IL-12、IFN-γ分别为220.44（174.30~312.30）、7.90（6.540~10.40）、143.75（78.20~210.00）pg/ml，且能力增强；IL-10为21.95（16.30~25.00）pg/ml，而能力减弱，与1组比较，差异有统计学意义（U值分别为89.50、98.00、100.00、0，P均<0.05）。抑制或增强Siglec-1对CD8+T淋巴细胞分泌的上述细胞因子无影响（P均>0.05）。结论IFN-α可刺激Siglec-1表达增加，Siglec-1可通过促进CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖或CD4+T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子参与AS发病过程。（中华检验医学杂志,2013,36:414-419）

目的建立简便HBV基因型S基因PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）分型方法（以下简称“简便PCR-RFLP法”），并评价其临床应用价值。方法临床诊断研究。查阅并比较GenBank中128株HBV（基因型A~D型）S基因片段（S区nt253-687），设计限制性内切酶HinfⅠ、EarⅠ、ApoⅠ鉴别A~D基因型分型方法，并评价简便PCR-RFLP法检测HBV DNA的最低检测下限、重复性；然后，用该方法检测50例慢性乙型重型肝炎患者的HBV基因型，同时用直接测序法验证简便PCR-RFLP法检测HBV基因型的一致性。结果建立了简便PCR-RFLP法HBV基因分型的方案，通过限制性内切酶HinfⅠ一次酶切就可分出我国流行的B型、C型、D型等毒株及B/C混合型。随机抽取3份标本，不同稀释浓度下，用简便PCR-RFLP法重复检测HBV基因型，分型结果均与原血清完全一致，且最低检测下限约为7~9 IU/ml。经HinfⅠ酶一步酶切后，用简便PCR-RFLP法从50例患者标本中，检出B型23份、C型10份；经直接测序法验证，从PCR产物中检出B型23份、C型10份，2种方法检测B、C型基因结果完全一致（Kappa=1.00，P=0.001），简便PCR-RFLP法检出B/C混合型9份，优于PCR产物直接测序法（0份，χ2=18.00，P=0.001）。HinfⅠ酶一步酶切后分出的ABD型8份，进一步酶切及应用PCR产物直接测序法检测均为B型变异株。结论建立的简便PCR-RFLP法对HBV基因分型有较高的灵敏度和重复性，且在检出混合基因型方面具有优势，更为简便。（中华检验医学杂志，2013：36：420-424）

目的研究环丙沙星不敏感化脓性链球菌的耐药机制及其同源性。方法对2012年3月北京地区分离自猩红热患者的48株化脓性链球菌采用稀释法检测环丙沙星及临床常用7种抗生素的MIC。对环丙沙星MIC≥4 mg/L的13株化脓性链球菌检测氟喹诺酮染色体介导的耐药基因gyrA，gyrB，parC，parE的突变，同时以环丙沙星MIC≤0.25 mg/L的4株化脓性链球菌做比对。采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对分离自北京不同地区的菌株进行同源性分析。结果化脓性链球菌对左氧氟沙星、氨苄西林和青霉素的敏感率均为100%。对四环素、红霉素和克林霉素的耐药率分别为91.7%（44/48）、91.7%（44/48）和89.6%（43/48）。环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的MIC50分别为2 mg/L、1 mg/L和≤0.25 mg/L；MIC90分别为4 mg/L、2 mg/L和0.5 mg/L。48株化脓性链球菌中有12株对环丙沙星MIC为4 mg/L，1株MIC为8 mg/L，菌株来自北京朝阳区。对这13株耐药基因检测结果显示，12株在parC基因上出现79位丝氨酸突变为苯丙氨酸或酪氨酸（Ser79Phe/Tyr），10株在parC基因的121位出现丙氨酸突变为缬氨酸（Ala121Val）。发现1株在parC基因上Ser79Phe突变合并parE基因上371位丝氨酸突变为亮氨酸（Ser371Leu）的化脓性链球菌，但该菌株对环丙沙星的MIC未显著增高（MIC=4 mg/L）。17株试验菌株的PFGE结果显示为7个克隆，其中克隆A均为环丙沙星MIC≥4 mg/L的菌株，主要分布在朝阳区、大兴区、丰台区、顺义区和石景山区，占MIC≥4 mg/L菌株的69.2%。克隆C菌株也为环丙沙星MIC≥4 mg/L菌株，均分布在怀柔区。克隆B、D、E、F和G分别分散在不同地区。结论par C基因突变是北京地区分离的化脓性链球菌对环丙沙星MIC略有升高的主要原因，PFGE分析显示化脓性链球菌感染在北京部分地区有小范围流行。（中华检验医学杂志,2013,36:425-429）

目的统计实验室报告周期（TAT），寻找有效缩短TAT的环节和方法。方法收集2011年1月1日至12月31日门诊及病房患者生化心肌损伤相关项目（肌酸激酶、肌钙蛋白I和肌红蛋白）的原始数据，其中门诊患者数据19 906个/年，病房患者数据22 973个/年。与实验室向临床承诺的TAT相比较，计算检验时效相关质量指标的中位数、平均中位数，并将相应数值转换为西格玛（σ）表示。流程中质量指标的σ≥4表示质量控制较好。根据对实验室流程分析结果，以质量工作会或临床座谈会的形式确定实验室对关键流程的TAT改进方案。通过2011至2012年度对门诊患者及临床医生的TAT满意度调查结果验证改进方案的效果。结果2011年门诊患者实验室外（标本采集-接收）超时报告平均中位数2.78%（3.5σ），病房患者实验室外（标本采集-接收）超时报告平均中位数17.82%（2.5σ）。门诊患者实验室内（标本接收-结果报告）超时报告平均中位数3.39%（3.4σ），病房患者实验室内（标本接收-结果报告）超时报告平均中位数2.96%（3.4σ）。门诊患者总TAT（标本采集-结果报告）超时报告平均中位数3.93%（3.3σ），病房患者总TAT（标本采集-结果报告）超时报告平均中位数12.18%（2.7σ）。2011和2012年度门诊患者TAT满意度调查结果显示分别为78%和79%，无明显变化。2011和2012年度临床医生TAT的满意度由80%提升至90%，其中非常满意选项由75%提升至79%。结论延迟TAT的关键环节是病房患者实验室外TAT。实施十项缩短TAT的改进建议，可合理有效地缩短TAT。（中华检验医学杂志,2013,36:457-460）

目的了解造血干细胞移植受者人巨细胞病毒（HCMV）UL97基因耐更昔洛韦（GCV）突变情况。方法前瞻性收集2008至2010年在北京大学人民医院血液病研究所行骨髓干细胞移植术后血浆HCMV DNA阳性时间至少持续2周的患者43例，其中男29例，女14例，平均年龄21岁。利用实时荧光定量PCR检测HCMV DNA的负荷，收集49份血浆标本检测UL97耐GCV突变。应用改进的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法（PCR-RFLP）检测UL97 M460V/I、H520Q、A591V、A594V、L595S/F及C603W共8种常见耐GCV突变；使用PCR直接测序法（PCRDS）检测UL97耐GCV突变；建立扩增阻滞突变系统实时PCR方法（ARMS RT-PCR）检测UL97 A594V耐药突变。结果PCR-RFLP分析方法未检测出8种已知的UL97耐GCV突变。PCR-DS方法未检测到已知的UL97耐GCV突变，新发现UL97 R494P、T502A、N558D及G561S突变。成功建立UL97 A594V ARMS RT-PCR检测方法，结合核酸提取试剂的使用，其检测下限至少达7.5×102拷贝数/ml，检测筛选的临床标本发现2例患者为阳性，UL97 A594V耐药突变率为4.7%（2/43）。结论构建的ARMS RT-PCR方法具有较高的敏感性，可用于临床监测UL97 A594V耐药突变。（中华检验医学杂志,2013,36:461-466）

目的对自行研制的干式血细胞分析仪与参考仪器（Sysmex XT-1800i）各参数之间的可比性进行分析。方法用国际血液学标准化委员会（ICSH）公布的血细胞分析仪评价方案，对2台仪器检测的HCT、Hb、粒细胞（GRAN）、淋巴及单核细胞（LM）、WBC和PLT共6个参数的结果进行对比。对待评价仪器的精密度、可比性、离群点及偏倚等指标进行分析，计算线性回归方程和预期偏倚区间。结果待评价仪器检测6项参数的批内CV均小于5%，批间CV均小于6%，表明该仪器精密度良好。2台仪器相关性分析显示，HCT、Hb、GRAN和WBC分类结果的相关性较好（r值分别为0.991、0.972、0.986、0.975，P值均<0.01），LM和PLT的相关系数稍低（r值分别为0.952和0.942，P值均<0.01）；在医学决定水平处，除了HCT在14%、70%，WBC在0.5×109/L、3×109/L以及PLT在10×109/L、50×109/L、100×109/L这些值的可接受偏倚在可信区间内，余均稍高于预期偏倚可信区间高值。结论干式血细胞分析仪与参考仪器Sysmex XT-1800i各参数之间测定结果一致，具有可比性，该仪器尤其适合于现场快速检测应用。（中华检验医学杂志,2013,36:467-469）

目前国内对Russell小体与Mott细胞的认识尚不统一，形态学描述也不一致，给初学者和临床诊断带来一定困难。笔者根据WHO（2008）造血和淋巴组织肿瘤分类和欧洲白血病网络形态学项目组提出的新观点，结合临床实践经验对Russell小体与Mott细胞的名称和形态学特点作一阐述。（中华检验医学杂志,2013,36:472-474）

肌球蛋白重链9（MYH9）异常是一组由MYH9基因突变引起的遗传性血小板减少症，包括May-Hegglin异常、Epstein综合征、Fechtner综合征和Sebastian综合征。MYH9异常常被误诊为原发性血小板减少性紫癜。本文对其发病机制、临床体征、实验室检查和鉴别诊断进行阐述，以进一步加深临床和实验室对MYH9的认识，同时引起临床的足够重视。（中华检验医学杂志,2013,36:475-478）