2013年 · 第36卷第04期

抗菌药物敏感性试验是指导临床医生正确使用抗菌药物的重要工具。正确理解和运用药敏试验结果要求临床医生和临床微生物工作者具备药敏试验和药敏折点的相关知识，并能使用药代动力学/药效学原理优化抗菌药物治疗。(中华检验医学杂志，2013，36：289–291)

国内外监测数据显示，碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌（CRE）不断增多，给临床抗感染治疗带来极大的挑战，已成为全球关注的焦点问题。高度关注临床微生物实验室的能力建设，积极开展肠杆菌科细菌碳青霉烯耐药机制研究，切实提高实验室对CRE的检测水平，加强抗菌药物临床合理应用的监管，严格执行手卫生和消毒隔离制度，是预防CRE院感发生的有效措施。（中华检验医学杂志,2013,36:300-302）

目的应用多位点序列分型技术对浙江省碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌进行分子流行病学研究。方法收集浙江省11个地区11家三级医院2009年和2010年临床分离的302株亚胺培南或美罗培南耐药鲍曼不动杆菌，应用多位点序列分型技术对碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌进行分子流行病学研究；应用eBURST软件对多位点序列分型结果进行分析；应用PCR检测鲍曼不动杆菌携带的OXA型碳青霉烯酶基因。结果多位点序列分型将302株鲍曼不动杆菌分为17个ST型。eBURST分析发现其中11个ST型均属于克隆复合体92（CC92），其遗传背景对应欧洲克隆Ⅱ谱系。CC92是浙江省最主要的碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌流行克隆，占所有碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌的94.4%（285/302），且在所研究的11家医院均有分布。97.4%（294/302）的菌株blaOXA-23型碳青霉烯酶基因阳性。结论碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌CC92在浙江省内多家医院流行播散。blaOXA-23是浙江省碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌携带的最主要的碳青霉烯酶基因。（中华检验医学杂志,2013,36:303-307）

目的研究替加环素对临床常见多重耐药菌的体外抗菌活性。方法2009至2010年回顾性收集11个城市15家医院分离到的临床常见多重耐药菌（不含铜绿假单胞菌），采用琼脂稀释法检测替加环素的MIC值，数据分析采用WHONET5.6软件。结果收集到的938株临床常见多重耐药菌中，革兰阳性球菌521株（55.5%），革兰阴性杆菌417株（44.5%）。根据FDA和EUCAST中替加环素的折点判定标准，替加环素对ESBL阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的敏感率分别为99.1%/99.1%和97.1%/68.6%，对碳青霉烯类药物不敏感大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌及其他肠杆菌科细菌的敏感率依次为：100%/95.7%、100%/79.2%、80.2%/-和94.9%/56.4%。替加环素对多重耐药革兰阳性球菌、肠杆菌科细菌和鲍曼不动杆菌的MIC50/90范围分别为（0.125~0.25）/（0.125~0.5）mg/L、（0.5~1）/（1~2）mg/L和2/4 mg/L。96.8%（121/125）厄他培南不敏感肠杆菌科细菌、80.2%（93/116）亚胺培南不敏感鲍曼不动杆菌和98.3%（173/176）头孢噻肟不敏感的肠杆菌科细菌对替加环素敏感。结论替加环素对铜绿假单胞菌以外的临床常见多重耐药菌具有很好的体外抗菌活性，可作为今后临床抗感染治疗的新选择。（中华检验医学杂志,2013,36:308-312）

目的研究不同标本分离的金黄色葡萄球菌临床分离株Panton-Valentine杀白细胞素（PVL）的表达及与agrA表达的相关性。方法收集2003年1月至2010年12月4家医院从临床各种标本中分离的金黄色葡萄球菌，所有菌株均为非重复株。采用普通PCR和DNA测序检测PVL基因。采用实时荧光定量PCR检测lukSmRNA和agr AmRNA的量。结果经过PCR扩增及测序共筛检出96株PVL阳性的金黄色葡萄球菌，其中58株为医院获得株，28株为社区获得株，10株由于临床资料不全不能区分；54株分离自血液标本，33株分离自脓液标本及9株分离自痰液标本；67株分离自成人的临床标本，29株分离自儿童的临床标本。分离自脓液标本和血液标本的菌株lukSmRNA的相对表达量的中位数分别为1.500和0.818，分离自脓液标本菌株的lukSmRNA的表达量明显高于分离自血液标本菌株的量（U=634，P=0.025）；分离自儿童和成人的菌株lukSmRNA的相对表达量的中位数分别为1.292和0.540，儿童分离株的lukSm RNA的表达量明显高于成人分离株的量（U=660，P=0.013）；社区分离株和医院分离株lukSmRNA的相对表达量的中位数分别为1.034和0.536，社区获得株的lukSmRNA的表达量明显高于医院获得株的量（U=338，P=0.012）。在总的分离株中，lukSmRNA与agrAmRNA的表达量存在正相关性（r=0.592，P<0.01）；分离自脓液标本菌株的lukSmRNA与agrAmRNA相关系数较高（r=0.810，P<0.01），但分离自血液标本菌株的两者相关性系数较低（r=0.543，P<0.01）。分离自儿童标本菌株的lukSmRNA与agrAmRNA量之间相关性更高，为0.804（P<0.01），而分离自成人标本菌株的两者相关系数为0.476（P<0.01）。社区获得株与医院获得株两者的相关系数分别为0.767（P<0.01）和0.556（P<0.01）。结论不同的感染类型lukS/F-PV基因的表达不同，agr系统可能对lukS/F-PV基因的表达具有正调节作用，尤其是在脓液和儿童分离株中发挥重要调节作用。（中华检验医学杂志,2013,36:313-317）

目的探讨临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌基因分型和菌株同源性。方法收集2011年1月至2012年6月临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌175株，采用MIC法检测菌株对药物的敏感性，纸片法表型确证试验检测超广谱β内酰胺酶（ESBL），改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型，PCR、DNA测序以及BLAST比对等方法确定菌株耐药酶基因型，重复序列聚合酶链反应（REP-PCR）分析菌株同源性。结果175株肺炎克雷伯菌中Hodge试验阳性140株，阳性率80.0%（140/175）。102株携带blaKPC-2基因，占58.3%（102/175），6株携带blaIMP-4基因，占3.4%（6/175）。11.4%（20/175）菌株携带blaDHA-1基因。28.6%（50/175）菌株ESBL表型试验阳性。有89.1%（156/175）菌株携带blaSHV基因，63.4%（111/175）菌株携带blaTEM基因，50.3%（88/175）菌株携带blaCTX-M基因。66.9%（117/175）菌株同时具有3种以上耐药基因。REP-PCR指纹图谱扩增条带数3~8条，产物最长1600 bp，最短200 bp，分为12个谱型，其中以G型为主，有71株（40.6%），其次为F型有35株（20.0%）。结论碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌以bla KPC-2基因型为主，其次为blaIMP-4基因型；ESBL以blaCTX-M-14基因型为主。在某些医院存在克隆株流行，北京A医院与杭州地区流行株不同，北京A医院以G型为主，杭州地区以F型为主。（中华检验医学杂志,2013,36:318-323）

目的通过对艰难梭菌毒素B受体结合区进行基因克隆、表达，获得目的蛋白，为建立快速检测艰难梭菌的方法奠定基础。方法复苏艰难梭菌，提取基因组DNA，PCR扩增目的基因，回收后与pGEM-T连接进行TA克隆，通过PCR、酶切及基因测序鉴定pGEM-T-CDB3。酶切pGEM-T-CDB3和pGEX-4T-1，回收CDB3和pGEX-4T-1，连接后转化大肠埃希菌BL21（DE3），构建重组质粒pGEX-4T-1-CDB3，然后应用IPTG诱导目的蛋白表达，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定目的蛋白大小和特异性。结果经PCR扩增获得了艰难梭菌毒素B受体结合区（CDB3）基因全长片段1851 bp。克隆质粒pGEM-T与CDB3重组获得了质粒pGEM-T-CDB3，片段长为4800 bp左右。构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-CDB3，目的蛋白经诱导后获得表达。结论原核蛋白表达载体pGEX-4T-1-CDB3构建成功，并大量表达出目的蛋白，将对艰难梭菌毒素B的快速检测和疫苗的研制奠定良好基础。（中华检验医学杂志,2013,36:324-328）

目的采用Meta分析方法综合定量评价国内外焦磷酸测序技术快速诊断异烟肼耐药的诊断价值。方法检索Pub Med、Web of Science、Elsevier、中国知识资源总库（CNKI）、万方和维普，制定文献纳入排除标准，对纳入文献进行质量评分，提取纳入研究的特征信息。检验异质性并根据其结果选择相应的效应模型;采用Meta-Disc1.4和Stata10.0软件进行综合定量分析;最后进行敏感性分析。结果检索相关文献114篇，最后纳入9篇。将焦磷酸测序与常规测序相比，其结果一致率100%。以细菌学药敏为金标准，焦磷酸测序检测katG基因时标本总数945份，加权敏感度、特异度及95%可信区间分别是0.77（0.73，0.80），1.00（0.99，1.00）。SROC曲线下面积为98.82%，纳入文献稳定性好。只检测inhA基因时的加权敏感度为0.19（0.15，0.24）、特异度为1.00（0.98，1.00）。结论焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性有很高的特异度，在异烟肼耐药初筛时具有很高的临床价值，是药敏检测的有效辅助手段。（中华检验医学杂志,2013,36:329-332）

目的研究建立同时进行HBV DNA定量与基因分型检测的双重分子信标实时PCR法（以下简称“定量与分型PCR法”），并探讨其应用价值。方法构建B、C基因型重组质粒作为标准品，通过设计B、C基因型特异性引物和分子信标（B、C基因型分子信标5′端分别标记FAM和Hex荧光基团），建立在1个反应体系中同时定量与分型PCR法。然后，用10倍梯度稀释的B、C基因型标准品（103~1011kIU/L）评价其检测线性范围和灵敏度；用丙型肝炎病毒感染者、单纯疱疹病毒感染者、人类乳头瘤病毒感染者、健康志愿者血清各5份评价其检测特异性；用高、中、低3份不同浓度的B、C基因型质粒标准品（108、106、104kIU/L）进行同批次和不同批次各10次重复检测，分别计算批内及批间Ct值的变异系数（CV）评价其检测重复性。然后，以湖南圣湘生物科技有限公司HBV核酸定量测定试剂盒为HBV DNA定量参照方法，申友公司HBV基因分型试剂盒为HBV基因分型参照方法，同定量与分型PCR法平行检测132例HBV感染者血清标本，评价自建定量和分型PCR法的准确性。最后，将132例HBV感染者分为无症状携带组（21例）、慢性乙型肝炎组（77例）、肝硬化组（25例）、肝癌组（9例），分析评价基因型、疾病进展的不同阶段与DNA载量间的相关性。结果用自建定量与分型PCR法检测B、C基因型的灵敏度均为103k IU/L；线性范围均为103~1011kIU/L；检测B基因型批内CV为1.51%~1.80%，批间CV为2.11%~3.03%，检测C基因型批内CV为1.79%~1.95%，批间CV为2.53%~2.91%；对其他病毒感染者和健康志愿者血清检测结果均为阴性。定量与分型PCR法检测132例HBV感染者的基因分型结果与HBV测序分型试剂盒总符合率为90.9%（120/132，Kappa=0.832，P<0.05）；其DNA定量结果[5.07（3.89~6.33）lg kIU/L]与HBV核酸定量测定试剂盒定量结果[5.19（4.15~6.32）lg kIU/L]有很好的相关性（R2=0.8477，P<0.05）。此外，定量与分型PCR法检出B基因型69例、C基因型51例、B/C混合基因型12例，DNA载量分别为4.54（3.83~6.17）、5.53（4.02~6.55）、4.58（3.68~4.98）lg kIU/L，C基因型感染者DNA水平高于B基因型和B/C混合基因型感染者（Z值分别为-2.195、-2.162，P均<0.05）；无症状携带组、慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组DNA载量分别为7.02（6.35~7.84）、4.94（4.16~6.25）、4.37（3.50~5.17）、3.45（3.25~4.92）lg kIU/L，无症状携带组DNA水平显著高于其他3组（Z值分别为-4.244、-4.568、-3.489，P均<0.001），慢乙型肝炎组DNA水平与肝硬化和肝癌组比较，差异均有统计学意义（Z值分别为-2.894、-2.413，P均<0.05），但肝硬化组与肝癌组的差异无统计学意义（Z=-0.995，P=0.335）。结论建立的定量与分型PCR法准确、灵敏、特异，可同时进行HBV DNA的定量和基因分型检测。（中华检验医学杂志,2013,36:333-338）

目的评价抗凝标志物蛋白C（PC）及其他凝血相关指标预测外科ICU患者死亡风险的能力。方法本研究为病例对照研究，纳入华中科技大学附属同济医院2011年8至12月252例外科ICU患者及30名健康对照者，检测其凝血、抗凝及炎症相关指标，包括活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、纤维蛋白原含量、D-二聚体含量、纤溶酶原活性、PC活性、抗凝血酶活性、血栓调节蛋白含量、C反应蛋白含量。同时获取其急性生理学与慢性健康状况Ⅱ（APACHEⅡ）评分等相关临床信息。采用单因素方差分析、Kruskal-Wallis检验及曼-惠特尼U检验比较存活组、死亡组与健康对照组间上述各指标的差异；各指标预测能力评价采用ROC曲线下面积；评估ICU结局的独立危险因素采用单变量及多变量Logistic回归分析。结果入院28 d后存活患者与死亡患者的PC活性分别为（70.2±22.7）%和（48.6±29.8）%，差异有统计学意义（t=2.84，P<0.01）；APACHEⅡ评分分别为（21.0±8.2）分和（29.5±10.9）分，差异有统计学意义（t=-2.51，P<0.05）；凝血酶原时间分别为（12.9±3.5）s和（18.8±10.2）s，差异有统计学意义（t=-2.13，P<0.05）；PC活性与APACHEⅡ评分联合预测外科ICU患者死亡风险准确性高于其他指标（曲线下面积=0.806）；在校正了一些凝血参数和患者临床特征的影响后，PC活性<47.5%[OR=6.40，95%可信区间（CI）：2.526~16.216，P<0.001]与APACHEⅡ评分（OR=1.123，95% CI：1.012~1.250，P<0.05）为外科ICU患者死亡的独立危险因素。结论PC活性降低预示外科ICU患者死亡风险增加，与APACHEⅡ评分联合应用可更准确地评估患者预后。（中华检验医学杂志,2013,36:339-342）

目的验证酶法检测血清糖化白蛋白（GA）性能，评价临床应用价值。方法本研究属于验证性研究。参考美国临床和实验室标准协会（CLSI）EP17-P、EP6-A、EP15-A、EP7-P方案对该项目的定量检测下限（LoQ）、线性范围、精密度、干扰因素进行验证，采用制造商提供的主校准品及3份通过高压液相色谱法（HPLC）赋值的冻干血清验证GA%正确度。使用该方法在BECKMAN AU5400、ROCHE MODULAR P、HITACHI7180及BECKMAN DXC600共4种不同品牌自动生化分析仪上，检测从2012年3月份门诊患者剩余血清标本中分类随机抽样选取50份新鲜血清标本，并比对结果一致性。参考CLSI C28-A3方案，从2012年2至3月查体人群中整群随机抽样选取452名表观健康人血清，对参考区间进行验证，分析选取2012年10至12月在北京协和医院内分泌科门诊就诊的61例2型糖尿病（T2DM）患者经口服降糖药治疗30~45 d，比较患者血清中GA%与糖化血红蛋白（HbA1c）的相关性。结果自动生化分析仪的LoQ为0.28 g/L；线性范围为0.28~36.1 g/L（R2=0.999 7）；重复性CV为0.6%~1.5%，实验室内再现性CV为1.3%~2.1%，均小于试剂盒声明不精密度；3种干扰物在试验浓度内（胆红素≤659μmol/L、血红蛋白≤0.966 g/L及乳糜≤1530 FTU）的偏差分别为-3.80%，-4.03%及-1.34%；正确度验证显示测定值与HPLC赋值偏倚为-1.2%~1.53%；4个生化检测系统GA%结果与均值的回归方程分别为Y=1.0216X-0.0449（R2=0.9991）、Y=0.9963X+0.0423（R2=0.9990）、Y=0.9776X+0.075（R2=0.9995）、Y=1.0245X-0.0367（R2=0.9906），偏差分别为0.5%~3.3%、-2.4%~1.9%、-2.9%~-0.7%、-1.9%~5.0%；452名表观健康人血清GA%的95%置信区间为11.3%~15.6%；GA%与HbA1c呈显著相关（r=0.812，P<0.01），回归方程为GA=2.345 HbA1c+1.549。结论应用于自动化分析仪的酶法测定GA试剂盒，具有良好的灵敏度、线性范围、精密度和抗干扰能力，各检测系统间结果互通性良好；可满足临床测试要求。已报道参考范围适用于本实验室。（中华检验医学杂志,2013,36:343-347）

目的探讨粪钙卫蛋白、髓过氧化物酶评估溃疡性结肠炎疾病活动性的应用价值。方法本研究属于横断面研究。选取2010年1月到2012年4月就诊于北京大学第一医院消化内科的溃疡性结肠炎（UC）患者49例，男32例，女17例，中位年龄40岁（13~80岁），留取患者血及粪便标本，同时搜集患者临床资料，采用Mayo评分系统将UC患者分为缓解期组（22例）和活动期组（27例），其中活动期组分为轻、中、重度3组（分别为6、9、12例）。选取无消化道症状、便常规及便潜血检查均阴性，经内镜检查排除UC诊断，排除有严重心、肺、肾脏疾患的健康体检者作为对照组，男23例，女12例，中位年龄43岁（24~75岁），留取其血清及粪便。采用ELISA检测两组粪提取液中钙卫蛋白、髓过氧化物酶含量。将各组中粪钙卫蛋白、髓过氧化物酶、ESR及血清C反应蛋白（CRP）分别进行比较，同时将其与Baron内镜分级、Mayo临床活动指数进行相关性分析，并绘制ROC曲线。结果UC活动期组粪钙卫蛋白含量显著高于缓解期组[6000.0（3050.8，8759.5）vs 336.8（227.5，1731.0），Z=-3.357，P=0.001]，缓解期组显著高于对照组[336.8（227.5，1731.0）vs 29.0（21.3，48.8），Z=-5.607，P=0.001]；UC活动期组粪便髓过氧化物酶含量显著高于缓解期组[1231.2（757.9，1481.1）vs 603.6（265.2，819.4），Z=-3.658，P=0.001]，缓解期组高于对照组[603.6（265.2，819.4）vs 453.5（140.8，750.2），Z=-1.033，P=0.302]；粪钙卫蛋白在轻度与中度活动组相比差异有统计学意义[5302.3（1140.5，9531.0）vs 5696.8（5510.0，7593.0），Z=-0.236，P=0.918]，在中度与重度活动组相比差异有统计学意义[5696.8（5510.0，7593.0）vs.6000（4284.0，9793.0），Z=-0.924，P=0.382]；粪髓过氧化物酶在轻度与中度活动组相比差异有统计学意义[667.3（467.5，1000.4）vs 1259.6（1213.3，1932.8），Z=-2.475，P=0.005]，在中度与重度活动组相比差异有统计学意义[1259.6（1213.3，1932.8）vs 1239.0（793.9，1403.0），Z=-1.350，P=0.193]。粪钙卫蛋白、粪髓过氧化物酶、ESR、血清CRP的测定值与Baron内镜分级相关系数分别为：r=0.382、0.499、0.359、0.246，相应P值分别为：P=0.007、0.001、0.010、0.093;与Mayo评分相关系数分别为：r=0.476、0.515、0.347、0.365，相应P值分别为：P=0.001、0.001、0.020、0.011。结论粪钙卫蛋白、髓过氧化物酶作为无创的生物标记物，在监测UC患者疾病活动性方面与指南中作为Mayo活动性评分组成的ESR、血CRP一样，与UC活动性均呈较好的相关性，粪钙卫蛋白在区分缓解期UC与对照组方面优于粪髓过氧化物酶。（中华检验医学杂志,2013,36:348-351）

随着现代医学检验技术的快速发展和临床医疗水平的提高，微生物科室和临床科室不协调的矛盾越来越突出。本文从分析微生物科室与临床科室目前存在的衔接问题入手，探讨如何做好互相沟通衔接的对策措施。（中华检验医学杂志,2013,36:375-376）

由于临床症状的复杂多变和不确切的发病机制，使白血病的诊断和治疗都面临巨大的挑战。CELL-SELEX技术不仅能获得与靶细胞相结合的高亲和力、高特异性的适配子，而且该适配子能够区分细胞所处的某种特定状态，如未分化与分化、正常细胞与癌细胞的区别等，使得该技术在白血病研究中具有极大潜能；本文阐述了CELL-SELEX技术的优越性及其在白血病特异性诊断、靶向治疗和肿瘤标志物发现方面的应用策略。（中华检验医学杂志,2013,36:377-379）