2012年 · 第35卷第03期

疾病相关自身抗体是辅助诊断自身免疫性疾病（AID）的重要实验室指标，还可以用于疾病治疗反应的监测和疾病预后判断。但是，自身抗体存在显著异质性、检测方法的敏感度和特异度的一致性及标准化程度不理想等因素，因而导致自身抗体检测在临床应用有一定的局限性，其检测结果解释也存在不少困难。寻求新的可用于临床诊断的自身抗体，建立自动化综合检测平台，并进行标准化和质量管理，实施规范的大样本临床评估等是今后自身抗体研究和临床应用的重要领域。（中华检验医学杂志，2012,35：193-196）

自身免疫性疾病（AID）是指机体免疫系统对自身成分的免疫耐受被打破，引起自身组织损伤的疾病，其病因和发病机制至今不明。在此从遗传、环境、免疫调节和受损靶细胞的作用等方面对AID最新发病机制研究进展进行阐述，以进一步加深对AID发病机制的认识，为AID诊断和治疗提供新的思路。（中华检验医学杂志，2012,35：197-201）

微小mRNA（miR）是一类长约22个核苷酸的非编码RNA，通过作用于相应mRNA在转录后水平调节基因表达，在炎性反应和自身免疫病中发挥重要作用。近期关于miR-146a在自身免疫性疾病中发挥作用的研究备受关注。在此对miR-146a与几种常见自身免疫性疾病发病机制的相关性及其潜在临床应用价值进行阐述。（中华检验医学杂志，2012,35：202-206）

免疫球蛋白G（IgG）是血清中免疫球蛋白的主要成分，IgG抗体又分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4 4个亚类，IgG亚型的缺陷或比例失调是引起免疫反应的1项指征，4个不同的亚类抗体在疾病发生发展过程中发挥不同的作用。近年来，随着人们对IgG抗体及亚类认识的逐步深入，尤其是对IgG4相关性疾病的定义及研究，使IgG亚类在相关疾病中的临床意义逐步得到国际社会的关注和重视。（中华检验医学杂志，2012,35：207-211）

适配子是能通过特定三维结构与多种靶标紧密结合的寡核苷酸或肽。由于具有亲和力高，特异性好，分子量小，免疫原性低，结构稳定，易合成等优点，适配子替代传统抗体，在多种疾病的基础研究、药物筛选、临床诊断及疾病治疗中具有广泛的应用前景。现对适配子技术在自身免疫性疾病的诊断、治疗和致病机制研究中的应用现状及进展进行阐述。（中华检验医学杂志，2012,35：212-215）

目的观察细胞因子信号转导抑制分子（SOCS）在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者树突状细胞（DC）及其表型和分泌细胞因子的变化，以研究SOCS在PBC发病机制中的作用。方法对10例PBC患者和8名健康人，用流式细胞术(FCM)分析其DC表型CD83、CD86和人类白细胞抗原DR（HLA-DR），用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测DC培养上清液中细胞因子白细胞介素-10（IL-10）、IL-12和干扰素-γ（IFN-γ）含量，用免疫印迹法（WB）测定DC中SOCS1和SOCS3水平；并评价分析这些指标在2组中的变化特征。结果PBC患者外周血中DC细胞表型CD83、CD86和HLA-DR的表达率分别为(79.4±4.8)%、(86.5±6.3)% 和(90.0±3.5)%，均高于健康对照组的表达率［(68.3±4.1)%、(74.2±6.3)%和(83.6±7.6)%，t值分别为5.340、4.120和2.514，P均<0.05］；DC分泌的IL-12和IFN-γ含量分别为(53.5±11.1)、(32.0±9.0) ng/L，与健康对照组的细胞因子含量［(32.1±10.7)、(15.4±8.1) ng/L］相比，IL-12和IFN-γ均显著升高（t值分别为4.123和3.818，P均<0.01）；IL-10含量为(7.0±4.6) ng/L，与健康对照组［（5.8±4.2） ng/L］相比,差异无统计学意义（t=0.563，P>0.05）；WB检测PBC组DC中SOCS1和SOCS3的表达比健康对照组明显降低。结论PBC患者体内DC更倾向于成熟状态，其抗原递呈能力明显增强，SOCS的低表达可能与免疫平衡紊乱和免疫耐受破坏有关。（中华检验医学杂志，2012,35：216-220）

目的探讨监测复发性多软骨炎（RP）临床不同分期软骨蛋白聚糖酶及其降解表位变化对病情判断的意义。方法分别采用免疫组织化学和免疫印迹法（WB）检测40例RP患者（稳定期组22例、活动期组18例）和20例意外死亡健康者（正常对照组）耳廓软骨组织基质中软骨蛋白聚糖酶降解表位表达情况；同时分别采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和WB检测软骨蛋白聚糖酶-1, 2 mRNA及蛋白质表达水平；并分析比较各组中蛋白聚糖酶降解表位表达和蛋白聚糖酶-1, 2 mRNA及蛋白质表达的差异。结果实时荧光定量RT-PCR检测正常对照组软骨蛋白聚糖酶-1, 2 mRNA 2-ΔΔCt值分别为1.00±0.26、1.00±0.27，RP稳定期组分别为1.47±0.11、1.57±0.13，RP活动期组分别为2.09±0.12、2.09±0.19。经单因素方差分析，各组间差异均有统计学意义（F分别为 299.113和459.013，P均<0.01）。进一步两两比较，RP活动期组、RP稳定期组软骨蛋白聚糖酶-1, 2 mRNA水平比正常对照组显著升高（P<0.01），RP活动期组比RP稳定期组显著升高（P<0.01）。WB检测软骨蛋白聚糖酶-1, 2蛋白质表达水平，RP活动期组分别在相对分子质量约68 000、73 000处出现明显条带，RP稳定期组相应位置有较弱条带出现，而正常对照组无明显条带。WB检测RP活动期组降解表位NITEGE、ARGSV的表达分别在相对分子质量约70 000、48 000处出现明显条带，RP稳定期组相应位置有较弱条带出现，而正常对照组无明显条带出现。免疫组织化学检测NITEGE、ARGSV表位的表达，在正常软骨基质中无明显表达（无红色着染），RP稳定期组和RP活动期组表位表达明显增加（呈明显红色着染）。结论RP患者软骨蛋白聚糖酶在mRNA及蛋白质水平表达增强；蛋白聚糖降解增加，并与疾病的严重程度相关联。（中华检验医学杂志，2012，35：221-226）

目的制备氨基糖苷-3′′-腺苷酰基转移酶［AAD(3′′)］特异性抗血清，并探讨其在检测第1类整合子8种不同可变区启动子（PcS、PcH2、PcH1、PcW、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1-P2和PcW-P2）下游基因盒中aadA2基因表达水平的应用价值。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增aadA2基因，并克隆至表达载体pET19b中，诱导表达并纯化带组氨酸标签的重组AAD(3′′)蛋白，免疫大耳白兔制备抗AAD(3′′)特异性抗血清。以制备的抗AAD(3′′)抗血清为一抗，用免疫印迹法（WB） 检测不同可变区启动子下游基因盒中aadA2基因的翻译水平，用微量肉汤稀释法检测链霉素对含不同可变区启动子及其下游aadA2基因盒的大肠埃希菌JM109的最低抑菌浓度（MIC）。结果成功构建重组的AAD(3′′)蛋白表达质粒pET19b-aadA2，经测序确认转化大肠埃希菌BL21（DE3）获得1株高表达可溶性重组AAD(3′′)蛋白的工程菌株，发酵后用镍柱纯化获得纯度＞90%的重组AAD(3′′)蛋白，免疫大耳白兔获得效价＞1∶100 000的抗AAD(3′′)特异性抗血清。WB检测8种不同可变区启动子下游aadA2基因翻译产物AAD(3′′)蛋白的表达水平，设定启动子PcW 下游AAD(3′′)蛋白的相对表达水平为1，重复3次测得启动子PcS、PcH2、PcH1、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1-P2及PcW-P2下游AAD(3′′)蛋白相对表达水平依次为12.9±2.3、9.1±1.0、2.0±0.4、16.0±1.3、14.1±1.3、10.5±0.7、8.9±1.7，且不同可变区启动子下游AAD(3′′)蛋白的相对表达水平差异具有统计学意义（F=32.421，P＜0.01）。微量肉汤稀释法重复3次测得链霉素对含启动子PcS、PcH2、PcH1、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1-P2、PcW、PcW-P2及其下游aadA2基因重组质粒的大肠杆菌JM109的MIC平均值依次为256、256、64、128、32、128、4、64 mg/L，表明不同可变区启动子下游aadA2基因的表达水平不同可赋予宿主细菌对链霉素产生不同水平的耐药。结论成功纯化出可溶性重组AAD(3′′)蛋白，免疫大耳白兔获得高效价的抗AAD(3′′)特异性抗血清，为进一步研究整合子中整合酶基因与可变区基因盒表达之间的相互关系奠定基础。不同可变区启动子下游耐药基因盒的表达水平明显不同，赋予宿主细菌对相应抗菌药物的耐药水平明显不同，因此在对临床菌株进行第1类整合子分子流行病学调查时，应重视可变区启动子分类方面的研究。（中华检验医学杂志，2012,35：227-232）

目的探讨Tth-单链结合蛋白 （SSB）作为添加剂在用于单核苷酸多态性（SNP）分型的聚合酶链反应（PCR）测定中提高特异性的价值。方法先构建Tth-SSB质粒，在表达纯化出Tth-SSB后，将Tth-SSB添加到检测细胞色素P450超家族（CYP2C19*3）636G>A位点的PCR体系中;并摸索其扩增条件和最佳用量，然后用优化试验条件的PCR对30份脑缺血患者外周血标本进行SNP分型及直接测序，以验证添加Tth-SSB的PCR进行SNP分型的准确性。结果质粒表达获得的Tth-SSB蛋白经纯化后，纯度达85%，将其添加到PCR体系中最适用量为1 μg，与未添加的PCR结果相比，可消除非特异性条带，减低二聚体。添加Tth-SSB的PCR测定30份标本中CYP2C19*3位点分型为G/G纯合子26份，G/A杂合子4份，无A/A纯合子，与平行测序结果的符合率达100%。结论Tth-SSB作为一种添加剂，能通过消除非特异性条带提高反应特异性，从而显著提高PCR对SNP分型的准确性。（中华检验医学杂志，2012,35：233-236）

目的探讨北京社区获得性甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（CA-MRSA）流行和耐药情况。方法前瞻性选择2009年1月至2010年8月北京4家医院的门诊皮肤软组织感染的501例患者，对每例患者填写病例报告表收集病史信息，分析CA-MRSA感染的危险因素。对分离标本进行病原学检查，收集所有的分离菌株。对所有分离到的金黄色葡萄球菌进行抗生素的药敏试验和分子特征的研究。结果从皮肤软组织感染患者中总共分离到164株金黄色葡萄球菌，其中有5株被证实是CA-MRSA菌株。这5株CA-MRSA菌株SCCmec分型分别是SCCmecⅠ、SCCmecⅢ、SCCmecⅣ、SCCmecⅤ和1株未分型。药敏试验结果显示CA-MRSA对β内酰胺类抗菌药物、左氧氟沙星、红霉素和克林霉素具有较高的耐药性，而对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素和复方磺胺具有较好的敏感性。对分子特征的研究显示杀白细胞毒素（PVL）基因在社区获得性甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（CA-MSSA）和CA-MRSA中的阳性率分别为41.9%和2/5。其他毒素在CA-MSSA和CA-MRSA中的表达水平也相当。通过多位点序列分型（MLST）和金黄色葡萄球菌A蛋白（spa）分型发现CA-MSSA中主要的克隆是ST398-t034、ST7-t796、ST398-t571、ST1-t127和 ST188-t189；而CA-MRSA中主要的克隆是ST239-t037-SCCmecⅠ、ST239-t632-SCCmecⅢ、 ST59-t437-SCCmecⅤ和ST8-t008-SCCmecⅣ。结论CA-MRSA在北京地区的皮肤和软组织感染中的分离率较低，CA-MRSA的分子特征起源复杂，尚未在CA-MRSA中发现克隆传播现象，中国CA-MRSA菌株耐药率较高，甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）普遍对抗菌药物敏感，临床经验治疗需合理使用抗菌药物以减缓耐药的发生。（中华检验医学杂志，2012,35：237-242）

目的探讨降钙素原（PCT）定量检测在血流感染患者中的临床应用价值。方法采用回顾性研究，对解放军总医院1066例患者同时送检血液培养和PCT检测的结果进行分析，其中有效结果1010例。比较血培养结果与血清PCT浓度的关系及PCT浓度在革兰阴性细菌、革兰阳性细菌及假丝酵母菌之间的差异。并且对33例进行过多次PCT检测的血培养阳性患者预后进行了分析。三组间PCT值差异比较采用Mann-Whitney U检验；死亡率比较采用Fisher′s精确概率法。结果血培养阴性患者PCT为0.37(0.11～1.67) μg/L。血培养阳性患者PCT水平为2.24(0.57～11.59) μg/L；PCT在革兰阴性细菌、革兰阳性细菌及假丝酵母菌中的阳性率分别为86.6%、72.0%及75.7%。在33例多次PCT检测的血培养阳性患者中，PCT进行性减低者预后较好,PCT均值＞5 μg/L者预后较差。 结论定量检测PCT可作为快速排除和诊断血流感染的辅助检测手段。观察PCT变化趋势对预后判断有一定的参考价值。（中华检验医学杂志，2012,35：243-246）

目的研究大环内酯类不敏感卡他莫拉菌的分子流行病学特点及耐药机制。方法从2岁以下健康婴幼儿鼻咽部共分离出383株卡他莫拉菌，利用Etest法测定383株卡他莫拉菌对大环内酯类的最低抑菌浓度(MIC)；采用头孢硝噻吩色原法测定β内酰胺酶的产生情况；利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株分型；通过聚合酶链反应（PCR）及序列分析对大环内酯类耐药机制进行研究；采用χ2检验对6个城市（北京、上海、济南、南京、武汉、东莞）卡他莫拉菌对抗菌药物的不敏感率进行分析比较。结果按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）判定折点，383株卡他莫拉菌对红霉素和阿奇霉素的不敏感率分别为40%和23%；按照药物代谢动力学/药物效应动力学 (PK/PD) 判定折点，其对红霉素和阿奇霉素的不敏感率分别为59%和60%。不同城市间卡他莫拉菌对大环内酯类的不敏感率存在显著差别，相对靠北部城市如北京和济南，其不敏感率明显高于相对靠南部城市（P<0.05）。在383株卡他莫拉菌中，有92%(353/383)的菌株β内酰胺酶阳性；用PFGE方法将选取的37株高耐大环内酯类（MIC>256 mg/L）卡他莫拉菌分为14个型，其中有43%(16/37)的菌株被认为与A型相关。但未发现ermA、 ermB、 mefA及mefE等耐药基因。在23S rRNA中，A2982T、A2796T及A2983T等突变位点与大环内酯类耐药可能有关。其中A2982T和A2796T突变可能主要介导高水平耐药，A2983T突变可能介导低水平耐药。结论本研究发现大量大环内酯类不敏感的卡他莫拉菌；其耐药机制可能与23S rRNA位点发生突变有关，且突变位点与大环内酯类的MIC值存在一定关系。（中华检验医学杂志，2012,35：247-252）

目的建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）联用方法检测血清中胆汁酸表达的方法，并初步探讨胆汁酸亚型与肥胖的关系。方法采用固相萃取方法处理血清标本，经UPLC HSS T3色谱柱梯度洗脱后，用负离子多反应监测模式对血清中的胆汁酸组分进行质谱检测，并根据中国国家食品药品监督管理局（SFDA）的指导原则对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、不精密度和相对回收率进行性能验证。利用UPLC-MS/MS方法检测10例单纯性肥胖者和10名健康对照者血清胆汁酸浓度，并采用秩和检验进行统计分析。结果UPLC-MS/MS方法可同时检测人血清中14种胆汁酸亚组分，在10～20 000 nmol/L范围内线性相关良好。其对不同亚组分的最低检出限（LOD）为0.02~7.90 nmol/L，最低定量限（LOQ）为0.07~44.20 nmol/L；其日内不精密度为0.35%～12.41%；日间不精密度为1.11%～13.04%；相对回收率为89.8%～114.6%。初步临床应用显示，单纯性肥胖者及健康对照者血清胆汁酸谱色谱图有一定差异，单纯性肥胖者血清中游离胆汁酸和结合胆汁酸浓度分别为0.49 （0.45~1.90）、1.44（0.84~3.72） μmol/L，均低于健康对照组的0.98（0.53~3.06）、1.99（0.67~2.88） μmol/L，但差异均无统计学意义（Z=-0.958、-0.801，P均>0.05）。结论建立的UPLC-MS/MS方法可有效分离并定量检测血清中各种胆汁酸亚型，其线性范围广、灵敏度高、精密度好，可用于临床标本游离胆汁酸和结合胆汁酸的分析测定。（中华检验医学杂志，2012，35：253-256）

苯巴比妥（phenobarbital，PB）是临床抗癫痫、抗惊厥和稳定情绪类药物。其血药浓度与治疗效果密切相关，大部分患者血药浓度在10~40 μg/ml时可获得最佳疗效。浓度过高时可产生严重毒副作用，导致呼吸中枢衰竭甚至危及生命［1］。由于PB治疗的有效血药浓度范围狭窄，药物代谢在个体间存在显著差异，因此在治疗期间对患者血药浓度进行监测，对开展个性化治疗具有重要临床指导意义。本研究旨在建立一种简便、快速、全自动化的均相酶免疫分析PB方法，以满足国内大多数医院治疗监测需求。

单克隆免疫球蛋白（monoclonal immunoglobulin）即M蛋白，是由单克隆浆细胞分泌的异常免疫球蛋白，常在浆细胞病如多发性骨髓瘤、Waldenstrn巨球蛋白血症和原发性淀粉样变性等患者血中出现。目前，免疫固定电泳被认为是分析和鉴定M蛋白的最灵敏的方法。高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis, HPCE）是20世纪80年代迅速发展起来的一种新技术，与传统的凝胶电泳相比，其分辨率高，结果重现性好，分析快速。毛细管免疫分型将毛细管血清蛋白电泳和免疫技术相结合，可对M蛋白进行检测和鉴定，适于大批量标本的测定；但其测定结果与免疫固定电泳的结果是否具有一致性，测定的准确性和敏感度如何，是否能够应用于临床，目前仍存在争议。本研究采用琼脂糖凝胶、毛细管血清蛋白电泳、免疫固定电泳、毛细管免疫分型4种方法对350例患者的血清标本进行了测定，并评价分析这4种方法检测M蛋白的敏感性和准确性。

目的了解我国自身抗体检测现状，以改进和提高自身抗体检测质量。方法对2009年自愿报名参加自身抗体检测质量评价的102家实验室，于2009年10月发放日本MBL公司提供的抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（dsDNA）抗体、抗可提取核抗原（ENA）抗体、抗线粒体抗体（AMA）/抗平滑肌抗体（ASMA）和抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体各3份质控品，共15份质控样本。各单位按各自的常规方法检测，并将检测项目的定性结果（ANA、抗dsDNA 抗体、抗ENA 抗体、AMA/ASMA、抗CCP 抗体）、核型（ANA）、滴度（ANA、抗dsDNA 抗体、AMA/ASMA）以及检测所用方法等结果填入统一表格寄回。该15份质控标本也同时向希腊、意大利、日本、韩国、葡萄牙及中国台湾等其他地区的实验室发放，回报结果由日本MBL公司进行统计分析，中国实验室回报结果的统计分析由本实验室完成。质控样本发放和结果分析均采用双盲操作，采用Excel软件对回报结果进行统计及描述性评价。因自身抗体检测的特殊性，仅对定性结果采用正确率（3份样本检测结果均正确回报的实验室数/参加该项目检测实验室总数）进行描述性评价，定量结果仅供参考。结果以日本MBL公司2009年在各国家及地区自身抗体检测评价的揭盲结果为评判依据，ANA、抗dsDNA 抗体、AMA、ASMA、抗ENA抗体和抗CCP抗体质控样品的正确率分别为80.8%（80/99）、81.2%（78/96）、86.3%（44/51）、76.3%（29/38）、95.9%（93/97）和93.1%（67/72）。间接免疫荧光法检测ANA滴度的正确率较低，901号样本为12.7%（11/79），902号样本为7.6%（6/79）。抗CCP抗体不同厂家试剂盒检测结果波动较大，921号和923号样本检测值的波动范围分别为10.0~419.0、15.3~418.5 U/ml。结论2009年我国ANA、抗dsDNA 抗体、AMA和ASMA检测的正确率均低于90%，而抗ENA抗体和抗CCP抗体检测的正确率令人满意（均>90%）。ANA的核型与滴度、AMA和ASMA检测的室内质控以及抗CCP抗体检测的室间质控仍有待提高。（中华检验医学杂志，2012,35：265-270）

目的评价我国临床实验室检测自身抗体的能力。方法每年进行2次室间质量评价，每次发放5支质评样本；要求各临床实验室在规定时间内检测，并回报抗核抗体（ANA）定性结果、核型、滴度、抗可提取核抗原（ENA）抗体和抗dsDNA抗体定性结果，同时计算各项结果的符合率。结果2006—2011年期间采用IIF检测ANA的实验室比例从77.6%（149/192）增长到82.2%（342/416），采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测ANA的实验室比例在14.5%（53/365）至16.0%（52/326）之间。用IIF法检测ANA阳性符合率在2006—2011年期间均在98%以上，ELISA检测的阳性符合率均在90%以上，IIF法每年的阳性符合率均高于ELISA。ANA核型仅为颗粒型的质评样本，除0613和0624号样本外，核型回报结果正确率均>90%。ANA核型仅为均质型的样本，核型回报结果正确率均≥95%。ANA核型为着丝点型的样本，2007年核型回报正确率仅为88.5%（161/182）、79.0%（147/186），2010年提高到98.4%（299/304），核型回报正确率呈明显上升趋势。各阳性样本中，报告滴度代码结果为中位数的实验室比例最低的仅为36%（94/261），最高的为85.5%（224/262）。抗ENA抗体总符合率均>90%，dsDNA抗体总符合率均>85%。结论IIF法是我国临床实验室进行ANA筛查的主要方法，其次为ELISA，2种方法对ANA定性回报的结果均较为理想。临床实验室对单一着丝点核型的判断有了很大提高，但是对滴度结果的报告尚不理想。ANA检测还有待标准化。（中华检验医学杂志，2012,35：271-276）

播散性放线菌病临床上不常见，同时合并结核分枝杆菌感染的更为罕见［1-2］。现报道1例继发于流产术后年轻女性播散性放线菌病合并结核分枝杆菌感染的病例，经过积极的脓液引流、抗放线菌联合四联（异烟肼+利福平+乙胺丁醇+吡嗪酰胺）抗结核治疗痊愈。

患者女，53岁。因1个月前无明显诱因出现多关节肿痛、发热并加重，当地多家医院一般抗炎治疗无效，于2010年3月入院。患者自发病以来，无皮疹、口腔外阴溃疡，无关节晨僵、雷诺现象、皮肤硬化、光过敏等，无咳嗽、咳痰及咯血，无腹痛、腹泻及便血，无尿频、尿急及尿痛，饮食欠佳，睡眠差，二便可。患者既往体健，无高血压、冠心病等病史，无肝炎、结核等传染病史，未到过牧区、疫区及流行病暴发区，无性病冶游史。其父及女儿有结核感染病史。

患儿,女，8岁，辽宁省瓦房店人，学生。因“反复肝功能异常3年”到北京佑安医院就诊。2008年9月，患儿因“支气管肺炎”当地医院给予阿奇霉素静脉滴注、后口服罗红霉素，1周后出现乏力、食欲减退，尿黄如浓茶色，于当地医院就诊，查谷丙转氨酶（alanine transarninase，ALT）993 IU/L, 天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)819 IU/L，总胆红素 （total bilirubin，TBiL）103 μmol/L。甲型肝炎病毒(HAV IgM、IgG)、丙型肝炎病毒(HCV IgM、IgG)、戊型肝炎病毒（抗-HEV IgM、IgG）抗体均阴性；乙型肝炎表面抗体（Hepatitis B surface antibody，HBsAb）阳性, 乙型肝炎其他指标均阴性。由于患儿肝功能异常原因不明，发病前用阿奇霉素、罗红霉素治疗，当地诊断“药物性肝炎”可能性大，予保肝药物治疗，1个月后肝功能正常。2008年12月患儿再次因“上呼吸道感染”用“抗生素”输液治疗3 d （药名不详）后，再次出现乏力，于当地医院就诊，查ALT 807 U/L, TBiL均正常。给予保肝药物治疗1个月后，ALT恢复正常。2010年3月患者第3次复查肝功能，ALT 303 U/L，TBiL正常，白蛋白（albumin,ALB）：球蛋白(globulin, GLOB)、血清铜蓝蛋白、铁及铁蛋白和红细胞沉降率均正常。到解放军三二医院就诊，查抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）和抗肝肾微粒体抗体 (liver-kidney microsomes LKM-1)均阳性。诊断不除外自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）。于2010年3月行肝组织活检，病理报告提示药物性肝损害可能性大。给予保肝、降酶类药物治疗后ALT恢复正常。坚持服用保肝药物，每月定期检测肝功能，ALT波动于38~45 IU/L 之间。2010年9月复查肝功能，ALT 125 IU/L，患儿无明显不适。 2010年12月为进一步明确病因再次行肝组织活检，病理报告提示小叶性肝炎，轻度纤维化，G2~3/S2,与3月份肝穿相比较，病变性质一致，炎症较活跃。患儿因反复肝功能异常，为进一步明确病因和确定下一步治疗方案，到我院诊治，并收住院。患儿为顺产，母乳喂养，身体、智力发育正常。按时疫苗接种。无家族遗传病、输血史。

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，目前世界范围内其发病率已居所有恶性肿瘤的第三位［1］。2011年中国肿瘤登记年报公布的我国结直肠癌的发病率也位居全部恶性肿瘤第三位［2］。尽管40%~50%的结直肠癌患者可通过手术治愈，但大部分患者会发生转移或复发，并最终导致死亡。近年来，随着靶向治疗的兴起，2种针对表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的单克隆抗体类药物——西妥昔单抗和帕尼单抗在结直肠癌的治疗中显示出了很好的疗效，明显改善了患者的生存。最近研究显示，除EGFR本身因素外，其下游信号转导通路中的其他成员与这2种靶向药物疗效也密切相关；同时多项临床研究发现，EGFR靶向治疗不受益的结直肠癌患者中，kras基因的突变率较治疗受益者高。因此，临床上将结直肠癌靶向治疗的失败归因于kras基因突变，并提出了应将结直肠癌患者kras基因状态作为是否进行EGFR靶向治疗的筛选标准。