国产丙型肝炎诊断试剂评价质控体系的建立卜秋宁 王玲 刘鹏 王晓娟 韩建 陈香梅 朱永红 鲁凤民
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.009
目的建立丙型肝炎诊断试剂考评用质控体系。方法收集自2009年2至6月期间4080份献血员血清标本,用酶免疫实验检测筛选出抗-HCV阳性和抗-HCV阴性的146份标本。分别使用2种进口(Murex、Ortho)和4种国产抗-HCV EIA试剂(分别为英科新创、中山生物、万泰和科华公司)对筛选出的标本进行重复检测;使用Chiron的RIBA HCV 3.0和HCV RNA PCR试剂进行确认试验;采用Roche和Abbott HCV RNA定量试剂进行HCV RNA定量检测,RNA阳性标本进行HCV基因型检测。选择不同强度的或不同含量的确认阳性和阴性的标本及系列稀释标本建立抗-HCV和HCV RNA诊断试剂评价质控体系。结果构建了抗-HCV和HCV RNA诊断试剂评价质控体系。每种质控体系均由50份标本组成。分别包括20份抗-HCV/HCV RNA阳性标本、20份抗-HCV/HCV RNA阴性标本及10份用于灵敏度评价的系列稀释标本。阳性标本包括强、中和弱阳性,并包含国内常见HCV基因型和亚型。阴性标本包括样本吸光度值/临界值接近临界值的标本。结论本研究所建立的质控体系背景资料丰富、检测结果稳定可靠,为新研制和改进后国产丙肝诊断试剂的性能评价提供参考数据。(中华检验医学杂志,2012,35:137-140)
重型肝炎中骨桥蛋白与IL-17的表达及临床意义崔光莹 康垒 陈佳宁 王海 鲁伟 刁宏燕
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.010
目的探讨慢性重型乙型肝炎患者外周血中骨桥蛋白(OPN)和白细胞介素-17(IL-17)的表达及临床意义。方法于2009—2010年期间收集浙江大学医学院附属第一医院传染科住院的乙型肝炎引起的慢加急性肝功能衰竭(ACLF)患者20例,其中男11例,女9例,年龄37~65岁,中位数为39岁。并收集同期健康体检者40名作为对照组,其中男20名,女20名,年龄25~55岁,中位数35岁。采用ELISA法检测血浆中OPN及血清中IL-17的水平。并应用刀豆球蛋白A(ConA)诱导的小鼠暴发性肝炎模型,分析外周血及肝脏中OPN和IL-17的水平随时间的变化。分离人外周血单个核细胞(PBMC),在ConA刺激的基础上,添加肿瘤坏死因子(TNF)-α或anti-TNF-α培养后,收集细胞培养上清,检测OPN和IL-17的水平。采用SPSS统计软件进行统计学处理,两组间比较采用t检验,OPN与IL-17之间关系采用Pearson相关性分析。结果慢性重型乙型肝炎组IL-17和骨桥蛋白的水平[(42.4±12.9) pg/ml和(1460.1±523.1) ng/ml]高于健康对照组[(10.6±4.8) pg/ml和(472.8±67.5) ng/ml],差异有统计学意义(t=2.387和3.570,P均<0.05)。小鼠肝炎模型中,ConA注射后6 h,外周血中的OPN即达到高峰,在12 h后OPN水平回落;而IL-17在24 h内逐渐升高。注射后6 h,肝脏组织中的OPN水平有一小的下降后逐渐升高并在12 h达到高峰;IL-17在ConA注射后6 h达到高峰。慢性重型乙肝患者中骨桥蛋白与IL-17水平呈正相关(R2=0.582,P=0.026),TNF-a增加淋巴细胞对骨桥蛋白的分泌(P<0.05)。结论重型肝炎发生与骨桥蛋白和IL-17的表达水平有关,骨桥蛋白与IL-17水平呈正相关。TNF-α能促进淋巴细胞产生骨桥蛋白。(中华检验医学杂志,2012,35:141-144)
一步熏蒸对麦管冻融人类精子运动能力的影响王峰 刘锋 孟颖 李铮
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.011
目的比较一步熏蒸法和程序降温法对人类精子冷冻复苏后运动能力的影响。方法25份精液标本取自2011年5至7月上海市人类精子库25名精液捐赠者,应用麦管为冷冻载体,按照1∶1的比例添加改良甘油-卵黄-柠檬酸钠作为冷冻保护剂,将液化后的每份精液标本平均分为2份,分别进行一步熏蒸法和程序降温法冷冻。按照世界卫生组织推荐标准对冷冻前后的标本进行精液常规分析,利用IVOS精子分析仪进行精子密度、总活动率、前向运动精子百分率、运动参数(包括平均路径速度、平均直线速度、平均曲线速度、平均鞭打频率)的测定。精子形态学染色使用改良巴氏染色,采用人工分析办法,显微镜下计数200条精子,计算其形态正常率。同一种冷冻方法进行冷冻前、后上述各指标的比较,以及两种不同冷冻方法精子复苏后上述各指标的比较均采用配对t检验。结果冷冻前,精子总活动率、前向运动精子百分率、平均路径速度、平均直线速度、平均曲线速度、平均鞭打频率分别为(91.36±4.96)%、(81.28±6.41)%、(59.29±9.30) μm/s、(49.80±8.40) μm/s、(83.39±15.70) μm/s、(16.68±3.36) Hz,采用一步熏蒸法冷冻复苏后,分别为(46.04±20.14)%、(40.22±18.42)%、(48.00±11.60) μm/s、(41.11±8.50) μm/s、(71.55±17.19) μm/s、(15.94±14.30) Hz,与冷冻前比较,除平均鞭打频率差异无统计学意义外(t=0.258,P>0.05),其余指标差异均有统计学意义(t=11.324、11.958、4.266、3.964、3.620,P均<0.05)。采用程序降温法冷冻复苏后,上述各指标分别为(48.05±18.27)%、(42.47±15.62)%、(45.30±6.51) μm/s、(38.08±4.99) μm/s、(64.23±11.75) μm/s、(14.00±2.99) Hz,与冷冻前比较,差异均有统计学意义(t=10.337、10.874、7.154、5.510、6.494、3.244,P均<0.05)。一步熏蒸法和程序降温法冷冻复苏后,精子复苏率、总活动率、前向运动精子百分率、形态正常率在两种方法间差异均无统计学意义(t=0.425、0.364、0.622、0.676,P>0.05);而一步熏蒸法的平均路径速度、平均直线速度、平均曲线速度、平均鞭打频率均高于程序降温法,其中平均直线速度和平均曲线速度的差异有统计学意义(t=2.489、2.822,P均<0.05)。结论麦管可作为精子冷冻的载体。与程序降温法相比,一步熏蒸法操作简便,冷冻复苏后精子具有较高的运动能力,是一种值得推荐的精子快速冷冻方法。(中华检验医学杂志,2012,35:145-149)
精子质量与短时受精后受精结局关系的研究郭海彬 殷宝莉 张翠莲 李杭生 夏松 张天 贾楠 杨锦建
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.012
目的探讨精子质量对短时受精后受精结局的预测价值。方法选取2009年1月至2010年6月在河南省人民医院生殖医学中心进行早期受精观察的常规体外受精胚胎移植(IVF-ET)的患者,筛除年龄> 38岁,且第2次减数分裂中期(MⅡ) 卵母细胞数< 3个的患者,共有558个周期。按是否进行补救卵胞浆内单精子显微注射术(Re-ICSI)分为常规体外受精(IVF)组(472周期)和Re-ICSI组(86周期)。按既往妊娠史将IVF组和Re-ICSI组分为原发不孕和继发不孕,其中IVF组原发不孕269周期,继发不孕203周期;Re-ICSI组原发不孕64周期,继发不孕22周期。IVF组和Re-ICSI组患者胚胎种植率、临床妊娠率、早期流产率的比较采用χ2检验,活产率的比较采用Fisher精确概率检验。IVF组和Re-ICSI组间不孕年限、前向运动精子数量、精子畸形率、精子顶体酶活性的比较采用Mann-Whitney U检验。结果IVF组胚胎种植率、临床妊娠率、早期流产率、活产率分别为29.4%、44.9%、13.4%、37.0%,Re-ICSI组分别为25.7%、34.6%、10.7%、29.6%,差异均无统计学意义(χ2=0.869、2.963、0.010,P=0.351、0.085、0.922、0.098)。IVF组中,原发不孕患者的不孕年限、前向运动精子数量、精子畸形率、顶体酶活性分别为4.00(3.00~6.00)年、58.37(33.64~102.27)×106条、81.09%(79.41%~88.69%)、76.30(48.50~92.46) μIU/106条精子,Re-ICSI组分别为5.00(3.25~8.00)年、36.33(20.59~64.43)×106条、85.50%(81.28%~89.02%)、47.14(31.61~90.24) μIU/106条精子,差异均有统计学意义(Z=-2.617、-3.505、-3.553、-3.530,P=0.009、0.000、0.000、0.000)。IVF组中,继发不孕患者的不孕年限、前向运动精子数量、精子畸形率、顶体酶活性分别为5.00(3.00~7.00)年、63.00(34.20~107.73)×106条、81.29%(79.90%~86.09%)、78.34(53.87~98.00) μIU/106条精子,Re-ICSI组分别为5.00(3.75~7.00)年、 28.80(18.57~48.56)×106条、 88.79%(84.04%~95.64%)、54.70(39.73~76.77) μIU/106条精子,除不孕年限外,其他各项指标差异均有统计学意义(Z=-0.338、-3.505、-3.553、-3.530, P=0.735、0.000、0.000、0.006)。结论患者的不孕年限、前向运动精子数量、精子畸形率、顶体酶活性对短时受精后是否出现受精失败有预测价值。(中华检验医学杂志, 2012,35:150-155)
北京和上海地区部分健康人群血清甲状腺激素参考区间的初步调查宋新 刘向祎 文江平 万晓华 郭拥军
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.013
目的建立北京和上海地区表面健康人群血清三碘甲状腺原氨酸(TT3)、甲状腺素(TT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺素(TSH)的参考区间。方法按照美国国家临床生化学院检验医学应用准则中关于甲状腺疾病诊断与监测的实验室支持中的筛选要求,在北京、上海地区筛选体格检查和相关实验室检查均正常的表面健康人群390名(男221名,女169名),年龄18~65岁。采集受检者空腹血清,使用美国 UniCel DXI 800全自动化学发光分析仪进行TT3、TT4、FT3、FT4、TSH的检测。不同性别、地区间上述各种甲状腺激素水平的比较采用两独立样本t检验,不同年龄组间的比较采用方差分析,两两比较采用LSD法。参考区间采用P2.5~P97.5表示。结果对各种激素水平进行性别间比较,男性组TT3、TT4、FT3、FT4、TSH水平分别为(1.90±0.32) nmol/L、(116.77±18.02) nmol/L、(5.28±0.67) pmol/L、(11.54±1.97) pmol/L、(1.92±1.12) mIU/L,女性组分别为(1.82±0.32) nmol/L、(115.73±14.39) nmol/L、(5.04±0.59) pmol/L、(10.94±1.45) pmol/L、(2.37±1.86)mIU/L,TT3、FT3、FT4、TSH差异均有统计学意义(t分别为2.377、3.642、3.471、2.520,P均<0.05)。不同地区间结果比较,只有FT3在地区间差异有统计学意义,北京和上海分别为(5.01±0.63)、(5.41±0.61) pmol/L(t=6.410,P<0.01),其他指标差异均无统计学意义。相关分析结果表明,TT4与年龄呈正相关(r=0.22,P<0.01);TSH与年龄呈负相关(r=-0.12,P<0.05)。TT3、TT4、FT3、FT4、TSH参考区间分别为(1.22~2.50) nmol/L、(83.37~149.37) nmol/L、 (3.88~6.48) pmol/L、 (7.70~14.86) pmol/L、(0.38~5.58) mIU/L。结论北京和上海地区人群血清甲状腺激素水平与进口试剂盒给定的参考区间有差异,建立我国甲状腺激素参考区间具有重要意义。(中华检验医学杂志,2012,35:156-159)
多重连接依赖探针扩增技术在染色体非整倍体快速产前诊断中的应用罗彩群 谢建生 吴维青 袁晖 徐志勇 罗福薇 耿茜 张华坤 郝颖 刘红
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.014
目的探讨多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术在大样本羊水染色体非整倍体快速产前诊断中的临床应用前景。方法收集自2009年10月至2010年12月在深圳市妇幼保健院产前诊断中心进行染色体异常产前诊断的孕妇羊水标本1229份,采用MLPA技术对5种常见染色体非整倍体异常(即13、18、21、 X和Y染色体非整倍体)进行快速分子诊断,同时进行G显带染色体核型分析双盲检测。然后比较两种方法的检测结果,验证MLPA技术的敏感性和特异性。结果在1229份羊水标本中,G显带核型技术确诊5种染色体非整倍体标本38份,其中非嵌合体非整倍体标本34份,非整倍体嵌合体标本4份;MLPA技术检测非嵌合体非整倍体与G显带核型分析结果一致,MLPA技术检出2份非整倍体嵌合体,漏检2份非整倍体嵌合体。结论MLPA技术对13、18、21、X和Y非嵌合体非整倍染色体异常的检测敏感度和特异度较好,可应用于染色体非整倍体快速产前诊断。(中华检验医学杂志,2012,35:160-164)
PTEN和COX-2在髓系白血病中的表达及作用机制探讨成志勇 张昕 王哲 王卫红 孙雪姗 李琳 王亚丽 颜晓燕 潘崚
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.015
目的探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten gene,PTEN)及环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在髓系白血病细胞中的表达及相互作用。方法收集2007至2009年保定市第一医院及河北医科大学第二医院住院及门诊患者30例,其中10例慢性粒细胞白血病慢性期(chronic myeloid leukemia-chronic phase,CML-CP)患者、10例慢性粒细胞白血病急变期(chronic myeloid leukemia-blastic crisis,CML-BC)患者及10名健康人,分析所有研究对象骨髓单个核细胞内PTEN、COX-2 信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)表达水平变化。将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞系K562。流式细胞仪检测转染效率;四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethyl-2-thiazolyl]-2,5-dip,MTT)法检测细胞增殖抑制率及黏附功能;荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测PTEN、COX-2 mRNA水平变化,蛋白质印迹(western blot,WB)检测PTEN、p-Akt蛋白表达水平的变化,细胞化学染色检测COX-2蛋白表达变化。结果CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平(0.022±0.021)低于CML-CP(1.134±1.124)及健康对照组(1.059±0.595,F=7.16,P<0.01),而COX-2 mRNA在CML-BC(0.761±0.418)患者中均高于CML-CP(0.211±0.158)及健康对照组(0.165±0.152,F=12.58,P<0.01)。以MOI=200转染K562细胞后,Ad-PTEN-GFP组K562细胞最大增殖抑制率为38.67%±4.30%,明显高于Ad-GFP组抑制率(5.34%±0.31%,t=13.39,P<0.01),转染3 d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内COX-2 mRNA表达水平(0.013±0.001)均明显低于Ad-GPF组(0.199±0.018)及未转染组COX-2 mRNA(0.217±0.021,F=499.45,P<0.01)。p-Akt及COX-2蛋白表达水平亦明显减低。结论PTEN可能通过抑制COX-2表达从而抑制白血病细胞增殖、黏附功能。(中华检验医学杂志,2012,35:165-169)
异常血红蛋白合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症患者一例的基因分析莫宗平 张玲 胡朝晖 冯文莉
中华检验医学杂志2012年 35卷 02期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.02.016
目的对1例异常血红蛋白合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(HPFH)患者进行基因分析。方法患者男,26岁,2010年9月到广州金域医学检验中心进行体检,经血液学分析、血红蛋白电泳、红细胞渗透脆性分析后,疑为异常血红蛋白合并HPFH病患者。应用常规血液学检查、碱性琼脂糖凝胶血红蛋白电泳对先证者进行表型分析;通过对HBB基因直接测序检测异常血红蛋白的突变类型;应用多重连接酶依赖探针扩增技术(MLPA)检测整个β-珠蛋白基因簇有无缺失及缺失的大致范围;应用跨越断裂点聚合酶链反应(gap-PCR)进行跨越断裂点PCR扩增,对此扩增产物进行基因测序分析,并将其结果与参考序列NC_000011.9进行比对,判断具体的断裂位点。结果通过对HBB基因进行直接测序,发现该异常血红蛋白为Ta-Li(HBB:c.250G>T),通过MLPA结合gap-PCR以及对产物进行基因测序,发现患者存在β-珠蛋白基因的大片段缺失,缺失范围为NC_000011.9:g.5222878_5250288del,即患者的基因型为异常血红蛋白Ta-Li合并东南亚型遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(SEA-HPFH)。结论联合应用MLPA、gap-PCR和基因测序技术可能有助于明确先证者的基因型。(中华检验医学杂志,2012,35:170-173)