2008年 · 第28卷第03期

目的 应用蛋白质组学方法 分析胰腺癌胰液与慢性胰腺炎、胆总管结石患者胰液问差异蛋白质的表达,初步探索胰液中可能的胰腺癌标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据.方法 内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)放置鼻胰引流管收集患者胰液,双向凝胶电泳(2-DE)分离5例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和3例胆总管结石患者等量混合胰液的蛋白质,运用图像分析软件进行比较和分析,识别差异表达蛋白质.应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定部分差异蛋白质点.结果 收集到胰液总量35～200 ml,Bradford法测定蛋白质浓度为0.8～4.6 μg/μl.胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者等量混合胰液凝胶的蛋白质点数分别为196±12、209±15和199±10,三组间两两对比后的平均匹配率均在75%以上.部分差异蛋白质点经MALDI-TOF-MS鉴定显示:相比胆总管结石和慢性胰腺炎,转甲状腺素蛋白(TTR)二聚体支链A在胰腺癌患者胰液中表达增高;载脂蛋白A1(ApoA-1)支链A、胰石蛋白支链、Reg1β再生蛋白前体表达降低.结论 人胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者胰液的蛋白质谱存在一定的差异,TTR、ApoA-1、胰石蛋白和Reglβ再生蛋白可能成为胰腺癌胰液中的肿瘤标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据。

目的 检测高发区食管癌及癌前病变患者血清蛋白质谱,建立蛋白指纹图谱模型并探究其筛查价值.方法 收集38名健康对照者、63例食管鳞状上皮不典型增生患者(I级26例,Ⅱ级26例,Ⅲ级11例)和36例进展期食管癌患者的内镜活检和血清标本,用CM10蛋白芯片及表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测标本的蛋白表达谱.支持向量机算法分别建立食管癌及癌前病变诊断模型,并经留一法交叉验证.结果 ①区分进展期食管癌和健康对照的诊断模型特异性为89.47%,敏感性为83.33%.②区分进展期食管癌和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级不典型增生的诊断模型的特异性分别为92.31%、80.77%、90.91%,敏感性分别为80.56%、83.33%、94.44%.③在上述诊断模型中,质荷比(m/z)峰值在相对分子质量4291、5644、5664、8775处重复出现.结论 SELDI-TOF-MS技术和支持向量机算法的应用,为高发区高危人群中食管癌及癌前病变的早期筛查和诊断提供了一条新途径.4291、5644、5664、8775 4个质荷比峰对食管各级病变有相似的分类作用,可能是与食管癌变过程中相关的生物学标志物。

目的 观察5-羟色胺7受体在肠易激综合征(IBS)不同亚型模型大鼠大脑和消化道组织中表达和分布的差异,探讨其在IBS发病中的作用.方法 45只成年SD大鼠分均为对照组、腹泻型IBS(IBS-D)组和便秘型IBS(IB-C)组.乙酸加束缚应激法制备IBS-D模型,冰水灌胃法制备IBS-C模型.免疫组化法和实时定量PCR法检测各组大鼠大脑、空肠、回肠、近端结肠、远端结肠中5-HT7受体的分布及表达差异.放射免疫法测定以上各组织中环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果 免疫组化结果 显示,IBS-C组和IBS-D组海马及下丘脑、IBS-C组回肠、近端结肠、远端结肠5-HT7受体表达强于对照组(P＜0.05).实时定量PCR结果 显示,IBS-C和IBS-D组海马和下丘脑、IBS-C组回肠、近端结肠及远端结肠5-HT7受体mRNA明显高于对照组(P＜0.05).IBS-C和IBS-D组海马和下丘脑、IBS-C组近端结肠和远端结肠cAMP含量显著高于对照组(P＜0.05).结论 两组大鼠脑组织及IBS-C大鼠结肠5-HT7受体表达及cAMP水平明显增高,可能与IBS-C胃肠动力障碍和内脏感觉异常有关。

目的 观察球囊扩张合并支架置入治疗单纯肝静脉阻塞型布-加综合征(Budd-Chiari-syndrome,BCS)的疗效.方法 2001年7月至2006年9月采用多普勒超声引导下经皮经肝穿刺肝静脉并肝静脉造影术、经颈静脉行肝静脉成形术、肝静脉球囊扩张及支架置入术治疗肝静脉阻塞型BCS患者43例.结果 术前43例肝静脉平均压力为32.5 cm H2O(1 cm H2O=0.098kPa),支架置入后立刻下降为20 cm H2O(t=11.5,P＜0.01),再次肝静脉造影显示肝静脉支架通畅,肝内肝静脉侧支消失.其中38例症状立刻消失,5例部分好转.术后43例随访期间(1～62个月,平均31.5个月),1例出院后1个月因上消化道大出血死亡,其余42例症状体征均无再发,术后多普勒超声检查肝静脉均通畅.治疗成功率为100%,所有患者均未出现严重并发症.结论 多普勒超声引导下经皮经肝穿刺肝静脉和经颈静脉途径开通肝静脉,球囊扩张成形及支架置入治疗单纯肝静脉阻塞型BCS安全、有效。

目的 比较药物性肝病两种临床评分系统的一致性以及在诊断中的灵敏度和特异度.方法 收集2000年1月-2006年12月住院诊断为"药物性肝损伤"的332例患者,采用回顾性研究方法 ,记录患者的临床表现、肝功能等指标,并记录治疗后肝功能改变情况及治疗转归,以肝损害因果关系评价表(RUCAM)及药物性肝损害评分系统(CDS)进行量化评分.结果 以确定(高度提示)、可能性大、可能、可能性小、排除表示.并用Spearman相关分析法评估.两种评分系统的一致性、灵敏度及特异度.结果 332例中两种评分系统结果 完全符合91例(27.41%),相差1级219例(65.96%),相差2级22例(6.63%),两种评分系统一致性较好(r=0.485,P=0.001).在重症药物性肝病组(65例)中两种评分标准完全符合12例(18.46%)(r=0.578,P=0.001),表明两者之间存在一定的正相关.在非重症药物性肝损伤组(267例)中,两种评分标准完全符合79例(29.59%)(r=0.382,P=0.001),表明两者之间存在一定的正相关.在重症药物性肝病组和非重症药物性肝病组,CDS的灵敏度分别为25%及57%,特异度均为100%.结论 两种评分系统一致性较好,但RUCAM简化评分系统敏感性高于CDS,特别在重症药物性肝病组尤为明显。

目的 观察肠内免疫微生态营养(EIN)对重症急性胰腺炎(SAP)模型猪肠道屏障功能的影响.方法 家养猪20头注入5%牛磺胆酸钠和胰蛋白酶建立SAP模型.24 h后将18头成功造模猪均分为肠外营养(PN)组、肠内要素营养(EEN)组和EIN组,分别进行相应营养支持8 d.分别于造模前、后各时间点检测各组血淀粉酶、外周血内毒素及肠道通透性.8 d后处死动物取外周静脉血、胰、脾、肝、肺和肠系膜淋巴结进行细菌定性及定量检测,同时观察回肠末端黏膜形态及胰腺组织病理学改变并作病理评分.结果 各组血淀粉酶均明显升高,但组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).营养8 d后EIN组外周血内毒素为(1.50±0.18)EU/L,肠道通透性为(42.8±20.0)×10-3,明显低于EEN组[(1.98±0.20)EU/L,(67.4±23.0)×10-3]和PN组[(3.96±0.40)EU/L,(197.2±47.4)×10-3](P值均＜0.05).EIN组胰腺和远隔脏器细菌数及细菌移位率亦明显低于PN组和EEN组(P＜0.05);三组间胰腺病理评分差异无统计学意义(P＞0.05).EIN组小肠绒毛高度、隐窝深度、黏膜厚度和绒毛形态正常率分别为(398.27±52.93)μm、(269.72±41.66)μm、(681.98±58.33)μm和79%,EEN组分别为(305.70±42.72)μm、(1 92.52±38.17)μm、(507.31±68.23)μm和47%,PN组分别为(218.32±35.81)μm、(145.76±23.34)μm、(376.20±48.23)μm和13V0,EIN组以上指标值均高于EEN组和PN组(P值均＜0.05).结论 EIN能保护SAP猪肠道屏障功能,降低肠道通透性,减少细菌及内毒素移位。

目的 研究血吸虫卵对小鼠三硝基苯磺酸(TNBS)所致结肠炎的预防作用及其机制.方法 TNBS灌肠诱导小鼠结肠炎模型.60只小鼠均分为对照组(不予任何处理)、干预组及模型组.干预组小鼠于造模前第14天和第3天分别腹腔内注射冰冻灭活的血吸虫卵10000个.模型组小鼠造模前腹腔内注射0.9%氯化钠溶液.造模后第7天处死存活小鼠,统计小鼠死亡率.观察结肠形态和病理特征.实时PCR法测定结肠组织中干扰素(IFN)-γ及白细胞介素(IL)-10 mRNA表达.ELISA法测定血清中IFN-γ及IL-10活性.结果 干预组小鼠死亡率较模型组显著下降(20%比50%,P＜0.05),结肠组织炎性反应显著减轻(Ameho-criteria评分:1.58±0.5比4.18±0.8,P＜0.05),结肠组织及血清中IFN-γ活性显著下降[血清:(29.79±6.97)pg/ml比(48.33±16.59)pg/ml,结肠:(2.31±1.08比7.23±3.52)P＜0.053、IL-10活性显著升高[血清:(38.22±9.96)pg/ml比(28.87±5.74)pg/ml,结肠:7.44±3.04比3.68±1.58 P＜0.05].结论 腹腔内注射血吸虫卵能减轻TNBS所致小鼠实验性结肠炎肠道炎性反应,可能与血吸虫卵提高结肠组织和血清中IL-10活性、降低INF-γ活性有关。

目的 探讨诱导分化的骨髓间充质干细胞(MSC)不同途径移植治疗慢性肝损伤的可行性.方法 密度梯度离心法联合贴壁培养分离、扩增骨髓MSC,体外诱导向肝系细胞分化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学法检测肝系细胞标志,电镜观察超微结构的变化.清洁级Wistar大鼠120只,其中114只建立慢性肝损伤模型(实验组),另6只作为正常对照组.实验组8周内自然死亡12只,将剩余96只根据三种移植途径及体质量分层随机均分为门静脉移植实验组、门静脉移植对照组、脾脏移植实验组、脾脏移植对照组、尾静脉移植实验组和尾静脉移植对照组,各移植实验组移植4',6-二脒基-2'-苯基吲哚(DAPI)标记诱导分化14 d的MSC,观察移植后细胞的迁徙、定位,血清肝功能指标,肝脏组织病理学及移植效果.结果 诱导后第7、14天均检测到甲胎蛋白(AFP)mRNA表达,第14、21天检测到白蛋白(ALB)mRNA、兔抗鼠细胞角蛋白18(CK18)和肝细胞抗原表达.诱导后MSC胞体增大,胞质中含有较多线粒体、粗面内质网、高尔基体、溶酶体和糖原颗粒等.各移植实验组大鼠均发现DAPI标记细胞且丙氨酸转氨酶等肝功能指标及肝脏病变程度均较其移植对照组改善,以脾内移植途径更为显著[(98.13±8.22)U/L比(145.85±15.88)U/L,P＜0.05].结论 诱导分化的骨髓MSC通过三种移植途径均对慢性肝损伤具有修复作用,且脾内移植优于门静脉及尾静脉移植。

目的 研究肿瘤转移抑制基因Kangai-1(KAI1)对胰腺癌细胞增殖功能及转移潜能的影响.方法 建立经腺病毒(Ad)成功构建的重组载体(Ad-KAI1),并转染胰腺癌PANC Ⅰ细胞.用血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子(EGF)作为诱导剂,按照不同诱导时间点(3、5、7 h)将PANC Ⅰ细胞进行实验分组,比较感染前后细胞形态.采用Transwell方法 对PANC Ⅰ细胞转染Ad-KAI1前、后的迁移作用进行比较.采用免疫细胞化学法检测细胞粘附分子-1(ICAM-1)和金属蛋白酶-9(MMP-9)在PANC Ⅰ细胞转染Ad-KAI1前、后的表达水平.结果 在VEGF和EGF诱导下,转染Ad-KAI1后与转染前相比,PANC Ⅰ细胞的迁移能力明显下降(P＜0.05).免疫细胞化学研究提示,PANC Ⅰ细胞中ICAM-1、MMP-9均呈阳性表达,转染后均呈阴性表达.结论 KAI1基因抑制胰腺癌转移可能是通过抑制ICAM-1和MMP-9的表达。

目的 评估复方消化酶(商品名:美尼)治疗消化不良的疗效和安全性.方法 采用随机双盲、安慰剂平行对照的多中心研究.应用视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS),食欲不振、饱胀、腹部不适和腹胀症状总积分≥20分的消化不良患者240例,随机均分为安慰剂组和治疗组,分别服用安慰剂和复方消化酶2粒/次,3次/d,疗程为2周;评价两组在治疗1、2周和停药后1周消化不良症状的缓解程度和不良反应的发生.结果 216例患者完成本研究,其中治疗组105例,安慰剂组111例.治疗组在治疗1、2周及停药1周消化不良总症状积分下降程度明显优于安慰剂组(P＜0.01);治疗组在治疗1、2周和停药后1周总有效率分别为64.76%、77.05%和66.99%,明显高于安慰剂组的27.93%、37.84%和29.36%(P＜0.05).两组在治疗过程中及停药后均未出现严重不良反应.结论 复方消化酶治疗消化不良具有良好的疗效及安全性。

质子泵阻滞剂是当今公认治疗消化性溃疡(peptic ulcer,PU)的首选药物,但黏膜保护剂与其治疗的作用不可忽视。

功能性胃肠病(FGID)的研究近20年来发展迅速.罗马Ⅲ诊断标准的问世,使人们对FGID的认识有了观念上的转变.随着神经胃肠病学的进展,标志着FGID研究进入新的时代。

患者男,59岁.因左上腹部间歇性隐痛4个月余,加重2个月入院.患者疼痛与饮食、活动无关,无恶心、呕吐,无腹泻、腹胀,无畏寒、发热.体检:上腹部轻压痛,无反跳痛,未扪及肿块.实验室检查:血白细胞19.3×109/L,中性粒细胞0.83,大便隐血阴性,肝、肾功能正常。

患者女,68岁,因右上腹阵发性胀痛3年,加重伴全腹痛、发热、巩膜黄染1周入院.患者3年前,反复出现右上腹痛、饱胀不适,伴恶心、纳差,无发热、寒颤,无呕吐,全身皮肤及巩膜黄染,进食油腻食物后可加重,曾多次拟诊胆囊炎、肝炎、胰头占位病变等,经补液、抗感染、解痉、利胆等治疗,腹痛消失,黄疸消退,但症状反复出现,且进行性加重,入院前2年因上述表现反复发作且诊断不明确入住我院。

患者男,62岁.因2 d内解柏油样便3次、呕血1次入院.患者2 d前无明显诱因下解柏油样便2次,每次约200 g,伴乏力,纳差,当天中午12点呕鲜红色液体1次,约300 ml,伴血凝块,有心慌、头晕。

患者男,60岁,因腹胀20余d于2007年lO月5日入院,腹胀呈持续性,进行性加重,与进食无明显相关,腹围逐渐增大,大便次数及大便量较前减少,伴食欲不振,曾予铋剂和奥美拉唑治疗无明显好转,无腹痛、发热、盗汗、咳嗽,否认有肝炎、结核病史,否认有药物食物过敏史。

例1患者男,18岁,因右上腹疼痛20 d入院.20 d前无明显诱因出现右上腹压痛,随即出现全身黄疸,体温37.8～39℃.CT示:肝内外胆管扩张,胆囊肿大.患者接受剖腹探查术。

胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)是以反酸、烧心、反食等反流症状为主的症候群,严重影响患者的生活质量[1,2]。

1996年,Kinzler等提出结肠腺癌的"腺瘤-癌"遗传学模式理论.许多线索亦支持"腺瘤-癌"顺序是结肠腺癌发生的主要机制.结肠腺体异型增生是结肠腺癌最直接的癌前病变,其中以重度异型增生与癌变的关系最为密切。

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种非特异性的结肠炎性反应,病变主要累及结肠黏膜和黏膜下层.肠易激综合征(IBS)是十分常见的功能性胃肠疾病(FGID),分为便秘型(IBS-C)、腹泻型(IBS-D)、便秘腹泻交替型(IBS-A)和未定型(IBS-M)。

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,近30年其发病率迅速上升,已高居西方国家死亡病因的第2位,中国的第4位.越来越多的研究表明,肿瘤发生的分子学机制包括原癌基因激活和抑癌基因失活。

胃癌是我国高发的恶性肿瘤之一,其形成是一个多因素、多阶段、多步骤的发生发展过程,但其致瘤分子机制尚未阐明.在各种致病因素作用下,胃黏膜在经历慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠型化生、不典型增生和癌的一系列序贯性形态学变化过程中,细胞趋向更为恶性的生物学行为。

胃癌的发生是一个多因素及多阶段过程,各种致病因子可能单独或协同作用于不同阶段,幽门螺杆菌(Hp)感染、宿主和环境因素均可在其中起重要作用.为此,我们在福建省胃癌高发的浪歧地区进行流行病学调查,了解有胃癌家族史人群白细胞介素(IL)-1和IL-10基因多态性(宿主因素)的分布情况。

结直肠癌患者合并肝转移是一个重要的预后不良因子,其诊断方法主要依靠影像学检查,但仍有部分患者在术中探查时始被发现.甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原(CA)19-9和CA50是结直肠癌患者常用检查指标,本研究通过分析以上各指标在结直肠癌合并肝转移患者术前的差异,为该病的诊断治疗提供依据。

肝纤维化患者易发生细菌感染,其原因为肠黏膜屏障受损.本研究通过检测大鼠24 h尿99mTc-二乙三胺五乙酸(DTPA)排泄率,电镜下观察肠黏膜损伤情况,分析肝纤维化大鼠肠黏膜屏障损伤的特点,同时观察应用微生态制剂后的改善情况。

在肿瘤发生、发展和转移的各阶段,至少有两个或以上功能不同的异常激活癌基因相互配合,协同促进癌变.本研究应用免疫组化技术检测CD15、髓过氧化物酶(MPO)、P53、Rb在溃疡性结肠炎(UC)、结肠腺瘤、结肠癌组织中的表达,并结合临床病理指标,探讨多个基因与结肠癌的关系及MPO基因多态性对结肠癌早期诊断的意义,从而为结肠癌基因治疗提供理论依据。

西方国家胃贲门癌发病率逐渐增加[1].早期贲门癌少见淋巴结转移,尤其黏膜内癌似从不出现淋巴结转移,提示对黏膜内癌可行局部切除术或最小范围的淋巴结清扫术而不影响手术结果,提高患者生活质量[2]。