2010年 · 第48卷第01期

目的 研究温州地区汉族脓毒症(sepsis)患儿TLR4(Asp299Gly、Thr399Ile)和TLR2 (Arg753Gln)基因多态性的分布特征及与脓毒症严重程度的相关性。 方法 采用病例-对照研究和测序法对2006年1月至2008年6月期间收住温州医学院附属育英儿童医院的59例脓毒症患儿、38例严重脓毒症患儿(包括脓毒性休克20例)和57例健康对照组儿童进行TLR4(Asp299Gly、Thr399Ile)和TLR2(Arg753Gln)基因多态性检测，计算多态位点在三组中的分布频率，按Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验，比较不同组别之间各等位基因频率和基因型频率差异是否有显著性。 结果 59例脓毒症组患儿、38例严重脓毒症组患儿和57例健康对照组儿童中均未发现TLR4突变基因(Asp299Gly、Thr399Ile)；在38例严重脓毒症组患儿中发现2例TLR2突变基因(Arg753Gln)，且均为金黄色葡萄球菌感染休克死亡病例，而59例脓毒症组患儿和57例健康对照组儿童中均未发现TLR2突变基因(Arg753Gln)。 结论 TLR4基因(Asp299Gly、Thr399Ile)多态性与温州地区汉族儿童脓毒症易感性无明显相关性； TLR2基因(Arg753Gln)多态性是否与温州地区汉族儿童致命性阳性菌感染有关，尚需积累更多的儿童脓毒症病例进行研究。

目的 探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)对内毒素(脂多糖，lipopolysaccharide，LPS)致休克大鼠肺损伤后Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)2和TLR4 mRNA表达的影响。 方法 40只SD大鼠，随机分为LPS组(16只)、LPS＋VIP组(16只)和对照组(8只)。LPS组尾静脉注射LPS(E.coli O55B5)10 mg/kg；LPS＋VIP组尾静脉注射LPS 10 mg/kg后注射VIP 5 nmol/kg；对照组尾静脉注射等容量生理盐水。分别于注射后6 h和24 h处死，留取肺标本，RT-PCR检测肺TLR2/4 mRNA表达，并观察24 h时肺组织病理变化。 结果 (1)肺组织病理改变：制模24 h时，光镜和透射电镜下，LPS组见肺泡间隔弥漫性增宽、炎性细胞浸润，隔内毛细血管不同程度充血，肺泡壁增厚，肺泡腔结构破坏、炎性细胞浸润、出血、间质水肿、细胞器破坏，LPS＋VIP组病变较轻。(2)TLR2/4 mRNA表达：注射LPS后6 h、24 h，肺组织TLR2/4 mRNA表达升高(F＝16.638，P＝0.000；t＝5.876，P＝0.000)；24 h时LPS＋VIP组TLR2/4 mRNA表达低于LPS组(F＝16.676，P＝0.000；t＝3.946，P<0.001)。 结论 LPS致休克大鼠肺损伤时，肺组织TLR2/4 mRNA表达增强。VIP可减轻LPS所致肺损伤，其机制可能与下调重要炎症基因TLR2/4 mRNA表达有关。

目的 探讨肠道病毒71型(enterovirus 71，EV71)感染所致重症病例的临床特征、病理生理变化，评估治疗效果。 方法 对2008年湖北省9家定点医院收治的EV71感染重症手足口病(hand, foot and mouth disease，HFMD)病例的临床资料进行回顾性分析。 结果 12例重症病例经RT-PCR检查EV71核酸阳性，其中男10例，女2例，中位数年龄1.96岁。发热持续时间6.5 d，皮疹持续时间7 d，起病至出现重症表现时间为3.7 d。神经系统受累10例，合并呼吸循环衰竭5例。5例X线胸片显示两肺或单侧片状阴影，4例为肺部纹理增多。白细胞计数、血糖、血沉和C-反应蛋白无特征性变化。11例选择大剂量静脉注射丙种球蛋白，7例使用甲泼尼龙治疗；4例肺水肿-呼吸衰竭患儿经呼吸机辅助通气，平均支持72 (48~96)h。11例治愈，1例死亡。 结论 EV71重症主要发生在年龄小于3岁患儿，以中枢神经系统感染为主，半数可发展为呼吸循环衰竭。早期使用呼吸机辅助呼吸对纠正呼吸循环衰竭，防止多脏器功能不全和降低死亡率尤为重要。

目的 探讨我院建立首都区域性综合主动型新生儿转运网络(ANTN)组织在提高新生儿救治水平中的作用以及中心NICU建设在ANTN中的重要性。 方法 用回顾性统计学分析的方法，分析我院在建设ANTN过程中网络管理方法和分析有关网络建设效果的新生儿资料。 结果 新生儿转运网络规模逐渐扩大，网络医院由早期阶段(2004年7月至2006年6月)的19家增加到成熟阶段(2006年7月至2008年5月)的93家，转运患儿数由587例增加到2797例；新生儿转运成功率成熟阶段较早期阶段明显增高(χ2＝21.69，P<0.001);在成熟阶段出现低体温、低血糖、高血糖以及明显酸中毒的例数明显降低(P分别<0.01、0.05、0.01和0.05)。新生儿病死率明显降低，治愈率明显增高(χ2值分别为8.23和7.66；P均<0.01)；中心NICU的规模明显扩大，转运的早产儿的比例，特别是胎龄小于32周小早产的比例以及低出生体重儿人数成熟阶段较初级阶段明显增多(P均<0.05)，新生儿窒息及RDS的发生率明显降低(P<0.05，P<0.01)；提高了早产儿、新生儿窒息以及吸入综合征的治愈率(P均<0.05)。 结论 ANTN可以提高各级NICU的整体实力，对减低新生儿病死率至关重要；中心NICU具有专业的医护人员、科学的救治流程、丰富的临床实践经验及先进的设备，在ANTN中起主导作用。

目的 研究白细胞介素(IL-18)基因启动子多态性位点以及相应血清IL-18含量与儿童脓毒症(Sepsis)的关系。 方法 双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法、聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和测序的方法。两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，计数资料比较采用χ2检验。 结果 ①脓毒症患儿血清IL-18水平为(196.56±157.32) pg/ml，明显高于健康儿童的(66.16±41.63) pg/ml(P<0.01)，随着脓毒症患儿病情的加重，血清IL-18浓度呈上升趋势，非危重组[(152.87±114.96) pg/ml]明显高于对照组[(66.16±41.63) pg/ml]，危重组[(191.98±169.72) pg/ml]高于非危重组，极危重组血清IL-18浓度[(323.89±159.35) pg/ml]显著增高，差异有非常显著性(P＝0.000)，各组间比较差异均有显著性(P<0.01)，相关分析发现血IL-18水平与小儿危重病例评分呈负相关(P<0.01)。②健康儿童与脓毒症患儿均存在IL-18基因启动子多态性。健康儿童和脓毒症患儿-137G/C基因型频率分别为GG型(61.8%)、GC型(35.8%)、CC型(2.4%)和GG型(71.1%)、GC型(26.7%)、CC型(2.2%)；等位基因的频率分别为G型(79.7%)和G型(84.4%)。健康儿童和脓毒症患儿-607C/A基因型频率分别为CA型(61.0%)、CC型(26.8%)、AA型(12.2%)和CA型(76.7%)、CC型(21.1%)、AA型(2.2%)；等位基因的频率分别为C型(57.3%)和C型(59.4%)。③脓毒症患儿-607CA基因型分布频率(76.7%)显著高于健康儿童(61.0%)，AA基因型分布频率(2.2%)显著低于健康儿童(12.2%)，差异均有显著性(P<0.05)。④依-137CC、-137GC、-137GG顺序，健康儿童血清IL-18水平分别为：(45.67±28.36) pg/ml、(53.27±37.91) pg/ml、(76.91±42.44) pg/ml；而脓毒症患儿分别为：(140.50±60.10) pg/ml、(184.42±157.33) pg/ml、(237.02±161.76) pg/ml。依-607AA、-607CA、-607CC顺序，健康儿童血清IL-18水平分别为：(48.80±32.11) pg/ml、(68.41±42.53) pg/ml、(70.17±43.87) pg/ml；而脓毒症患儿分别为：(141.50±64.35) pg/ml、(151.21±121.19) pg/ml、(211.16±163.64) pg/ml。但差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 脓毒症患儿血清IL-18水平明显升高，且与病情的加重有关。IL-18基因启动子-607CA基因型携带者儿童更易罹患脓毒症，表明-607CA基因型可能为脓毒症易感基因型，而-607AA基因型可能对儿童患脓毒症具有对抗作用。

目的 探讨小儿血管迷走性晕厥的临床特征和血浆、血小板中5-羟色胺(5-HT)的变化。 方法 2006年10月-2009年2月在首都儿科研究所经直立倾斜试验(head-up tilt test，HUTT)确诊为血管迷走性晕厥(VVS)患儿41例(HUTT阳性组)，诊断标准参照基础HUTT对儿童不明原因晕厥的诊断研究，男17名，女24名，年龄6~14岁，平均年龄(10.5±1.8)岁。匹配健康儿童(对照组)：当地幼儿园和中小学36名健康小儿，男16名，女20名，年龄9~14岁，平均年龄(10.7±1.5)岁。分析晕厥诱因和先兆症状、HUTT反应方式、晕厥发作时间、VVS患儿静息状态各亚型血压和心率变化等临床特点。全体研究对象抽取静脉血3 ml，用双抗体夹心酶标免疫分析(ELISA)法对41例血管迷走性晕厥患儿及36名健康儿童的血浆和血小板中5-HT进行测定。 结果 ①41例血管迷走性患儿平均年龄为(10.5±1.8)岁，女童比例高于男童，为1.4∶1。②VVS先兆症状：患儿中33例存在晕厥先兆(80.4%)，其中头晕发生率高达78.8%。③VVS发生诱因：儿童VVS发作前常存在诱发因素，包括：长久站立、劳累、情绪影响等。其中长久站立比例最高，达90.2%。④HUTT平均反应时间及晕厥持续时间：基础直立倾斜试验(BHUT)阶段平均反应时间为(20.6±8.6)min；舌下含化硝酸甘油激发倾斜试验(SNHUT)阶段平均反应时间(5.0±2.2)min。晕厥持续时间均短于5 min。⑤HUTT不同反应类型的分布：血管抑制型61.0%，混合型24.4%，心脏抑制型14.6%。⑥血压和心率的比较：VVS患儿和正常儿童静息状态下基础心率、收缩压、舒张压相比差异无统计学意义；VVS患儿中血管抑制型、混合型和心脏抑制型静息状态下基础心率、收缩压、舒张压相比差异无统计学意义。⑦VVS患儿基础状态和HUTT阳性时血浆中5-HT较对照组差异无统计学意义[(27.51±1.32)μg/L vs.(27.28±2.48)μg/L, t＝0.518, P＝0.606; (27.51±1.32) μg/L vs.(28.05±1.40)μg/L, t＝2.044, P＝0.167]，基础状态下血小板5-HT与对照组之间差异无统计学意义[(82.30±6.06) 109 ng/L vs. (79.88±5.79) 109 ng/L, t＝1.788, P＝0.780]。⑧VVS患儿基础状态下和HUTT阳性时的血小板5-HT比较差异有统计学意义[(82.30±6.06) 109 ng/L vs. (97.90±6.59) 109 ng/L，t＝11.26, P＝0.00]。 结论 VVS患儿具有明显的临床特征；VVS患儿基础状态和晕厥(或晕厥先兆发生时)血浆中5-HT变化不明显；VVS患儿晕厥或晕厥先兆发生时血小板5-HT明显升高，提示中枢5-HT系统可能参与了VVS的发病过程。

目的 研究肾病综合征(nephrotic syndrome, NS)合并寻常性鱼鳞病(ichthyosis vulgaris，IV)患儿的临床特征，探讨FLG基因及NPHS2基因与疾病之间的关系。 方法 分析我院3例NS合并IV患儿的临床、病理资料，并采用聚合酶链反应-单链构象多态性、DNA测序法，分析患儿NPHS2基因及患儿和3个家系中的部分IV患者的FLG基因。 结果 ①3例NS合并IV患儿(1号女性，2号、3号为男性)对激素及多种免疫抑制剂治疗反应均差，随访观察1.5~4年未缓解。②1号患儿的兄长死于"尿毒症"，其他2个家系中无肾脏疾病患者。③初次肾活检，2例为轻度系膜增生性肾小球肾炎，1例为微小病变；其中2例患儿在第1次肾活检的1年半后，重复肾活检，进展为中度系膜增生性肾小球肾炎。④3例患儿及3个家系中部分IV患者均具有FLG基因常见的突变类型R501X和(或)2282del4，没有发现NPHS2基因突变。 结论 3例NS合并IV患儿对激素及免疫抑制剂均耐药，肾脏病理损害进展较快，提示患儿对激素及免疫抑制剂耐药可能与FLG基因相关联。

目的 研究核心蛋白聚糖抑制转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞-间充质细胞-转分化(EMT)的机制。 方法 将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为4组：(1)阴性对照组；(2)100 ng/ml核心蛋白聚糖组；(3)10 ng/ml TGF-β1组；(4)100 ng/ml核心蛋白聚糖和10 ng/ml TGF-β1组。 Western blot法检测信号通路ERK、PI3K、Smad3的磷酸化水平和β-catenin的蛋白水平；实时定量-PCR检测snail mRNA的表达情况，逆转录-PCR检测淋巴细胞增长因子1(LEF-1)mRNA的表达情况。 结果 (1)与对照组相比，TGF-β1诱导组ERK(1.11±0.09∶0.47±0.07)、PI3K(14.79±1.02∶2.48±0.06)、Smad3(0.95±0.02∶0.08±0.01)的磷酸化水平明显增高，snail(2.59±0.70∶1.02±0.13)、LEF-1(1.85±0.08∶0.30±0.11)的mRNA的表达量明显增高，β-catenin(1.46±0.20∶0.49±0.05)的量明显增高；(2)单纯核心蛋白聚糖组与对照组相比，所得结果差异均无统计学意义。核心蛋白聚糖和TGF-β1共同刺激组与TGF-β1组相比，ERK(0.58±0.08)的磷酸化水平及snail mRNA(1.24±0.03)的表达量明显降低而PI3K(15.84±1.64)，Smad3(0.90±0.04)的磷酸化水平，LEF-1的mRNA(1.64±0.07)、β-catenin(1.42±0.09)的量差异无统计学意义。 结论 核心蛋白聚糖抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞EMT可能是通过阻止ERK信号转导通路实现的。

目的 建立干血滤纸片和白细胞酸性α-葡萄糖苷酶(GAA)活性测定方法及正常参考值，用于糖原累积病Ⅱ型(GSDⅡ)患者的酶学诊断。 方法 利用GAA特异性水解荧光底物4-MUG的原理，采用阿卡波糖抑制其同工酶，建立干血滤纸片(DBS)和白细胞测定GAA活性方法。取700例DBS样本和100例白细胞样本作为正常对照建立DBS和白细胞测定GAA活性正常参考值，并对临床疑诊4例患者及其父母进行GAA活性测定。 结果 DBS法具有良好的精密度，室温或低于室温保存至少4周对DBS GAA活性无明显影响。正常新生儿和儿童-成人DBS的GAA参考范围分别为8.92~60.03 pmol/(punch·h)和8.00 ~37.43 pmol/(punch·h)；正常人白细胞GAA参考范围：12.56~50.26 nmol/(mg蛋白·h)，共检出4例GSDⅡ型患者。 结论 DBS法测定GAA活性具有敏感、快速、高通量等特点，适于GSDⅡ型高危人群筛查和诊断；白细胞法测定GAA活性也具有快速、特异性高等特点，适于患者的确诊。

目的 分析肺炎链球菌(SP)青霉素结合蛋白(PBP)2B、1A、2X保守序列氨基酸置换对其β内酰胺类抗生素抗菌活性的影响。 方法 用E-test法测定59株SP对6种β内酰胺类抗生素最小抑菌浓度(MIC)，并对其青霉素结合蛋白基因(pbp) 2b、1a、2x的编码片段进行套式PCR扩增和基因测序，根据氨基酸置换类型进行分型。PBP2B分为：PBP2BⅠ型(无变异)；PBP2BⅡ型[谷氨酰胺432→亮氨酸和(或)苏氨酸445/451→丙氨酸/丝氨酸、谷氨酸481→甘氨酸，其中1株存在431/432脯氨酸的插入]；PBP2B Ⅲ型(兼具PBP2BⅡ型变异及丙氨酸624→甘氨酸)。PBP1A编码基因变异分为：PBP1AⅠ型(无变异)；PBP1A Ⅱ型(苏氨酸574→天冬氨酸，丝氨酸575→苏氨酸,谷氨酰胺576→甘氨酸，苯丙氨酸577→酪氨酸，即574TSQF→NTGY)；PBP1A Ⅲ型(574TSQF→NTGY及苏氨酸371→丙氨酸/丝氨酸、脯氨酸432→苏氨酸)。PBP2X编码基因变异分为：PBP2XⅠ型(无变异)；PBP2XⅡ型(组氨酸394→亮氨酸或苏氨酸338→丙氨酸)；PBP2X Ⅲ型(苏氨酸338→丙氨酸，异亮氨酸371→苏氨酸、精氨酸384→甘氨酸和亮氨酸546→缬氨酸)；PBP2X Ⅳ型(兼具PBP2XⅢ型变异及蛋氨酸339→苯丙氨酸，蛋氨酸400→苏氨酸)。分析各型氨基酸置换与抗生素MIC的关系。 结果 59株SP对6种β内酰胺类抗生素的药敏分布(敏感株、中介株、耐药株)分别为青霉素(12、29、18)；阿莫西林(49、9、1)；头孢呋辛(16、16、27)；头孢曲松(47、1、11)；头孢噻肟(47、3、9)；亚胺培南(49、10、0)。PBP2BⅢ型、PBP1AⅢ型及PBP2XⅢ、PBP2X Ⅳ型SP对β内酰胺类抗生素的不敏感株(中介株＋耐药株)明显增多，SP的β内酰胺类抗生素MIC50明显升高。 结论 PBP2B、1A、2X保守序列中或附近的氨基酸置换可明显升高SP的β内酰胺类抗生素MIC值。

目的 探讨播散性卡介苗感染的临床表现、免疫学异常以及治疗转归。 方法 回顾性分析2000年1月至2007年12月首都医科大学附属北京儿童医院收治的18例播散性卡介苗感染患儿的临床资料。 结果 18例患儿中男13例，女5例，播散首先发生于接种部位同侧腋下淋巴结，同时播散至肺15例次，纵隔和腹腔淋巴结18例次，皮肤和软组织5例次，骨骼4例次，肝4例次，脾8例次，肾和肾上腺各1例次，脑膜1例次。18例中诊断原发免疫缺陷病12例，其中严重联合免疫缺陷病3例，慢性肉芽肿(CGD)7例，白细胞介素12/干扰素γ通路缺陷2例。18例中11例死亡，7例随访1~9年仍存活，其中4例有反复活动性皮肤和骨结核表现，3例易患反复其他病原感染。 结论 播散性卡介苗感染患儿多存在原发免疫缺陷病，其中CGD和IL-12/IFN-γ通路缺陷在此类患儿中比例较高，对此类患儿应进行特殊免疫功能检查。患儿多数预后不良，应尽早明确免疫缺陷类型，并进行针对性免疫治疗。