2009年 · 第47卷第08期

目的 了解Rett综合征(RTT)患儿致病基因甲基化CpG结合蛋白2基因(MECP2)的突变亲源起源和X染色体失活(XCI)的影响。 方法 选取15例临床典型RTT并经DNA测序证实存在新生MECP2突变和一个已知单核苷酸多态性位点的患儿，分别对患儿及父母外周血DNA进行等位基因特异性PCR扩增，通过DNA测序和凝胶电泳判定患儿突变的亲源起源；用雄激素受体基因(AR)的三核苷酸多态性进行基因型分析判定XCI是否发生偏斜和失活X染色体的亲源性。 结果 15例RTT患儿中13例是由于C→T碱基转换引起的点突变，2例为移码突变。13例点突变患儿的突变全部来自父源，2例移码突变中1例突变来自父源，另外1例来自母源。突变来自父源的RTT患儿占选取病例总数的93.3%；XCI分析除2例由于无AR多态性信息无法判定外，其余13例中有8例XCI为随机失活，5例为非随机失活。5例非随机失活的患儿均表现为父源X染色体优先失活。 结论 散发RTT患儿新生MECP2突变几乎全部来自其父源X染色体，XCI多为随机失活，部分非随机失活均表现为其父源X染色体优先失活。

目的 分析全面性癫伴热性惊厥附加症(generalized epilepsies with febrile seizures plus, GEFS＋)的临床特点，并对部分患者进行SCN1A基因筛查，寻找基因突变。 方法 收集两个GEFS＋家系的临床资料，并进行分析；留取先证者和部分家系成员的血液标本，通过变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)等方法进行SCN1A基因筛查、测序及序列分析。 结果 (1)两个家系共101名成员，其中受累者28例(男、女各14例)。发作表型有热性惊厥(FS)7例、热性惊厥附加症(FS＋)6例、FS＋伴失神发作1例、FS＋伴肌阵挛发作1例。未发现严重发作表型。另外，有肯定的临床发作，但由于不能获得详细的临床资料而不能进行发作分类者13例；两个家系都符合常染色体显性遗传，其中一个家系存在双系遗传现象。(2) GEFS＋家系B的先证者和家系正常对照均发现SCN1A第9外显子存在A>G突变(c.1212A>G)，系一多态性位点；SCN1A其余外显子未发现突变。 结论 本研究在GEFS＋家系B仅发现G/A多态现象，未发现SCN1A致病性突变，支持其遗传异质性；病因学有待进一步研究。

目的 探讨依达拉奉(edaravone，ED)对幼年大鼠惊厥持续状态(Status convulsion，SC)后脑组织海马中白介素1β(IL-1β)、核因子κB(NF-κB)表达及细胞凋亡的影响。 方法 将195只SD幼年雄性大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、惊厥持续状态组(SC组)和依达拉奉干预组(ED组)，每组65只，各组又均按时间点分为4、12、24、48、72 h五个亚组，每组13只。采用氯化锂-匹鲁卡品化学点燃法制备幼年大鼠SC模型。应用免疫组织化学法检测大鼠海马中IL-1β、NF-κB蛋白表达情况，逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测NF-κB mRNA表达，TUNEL法检测神经细胞凋亡数的变化。 结果 (1)免疫组织化学法检测SC组幼年大鼠海马中IL-1β(12~72 h组分别为30.83±3.81，41.00±5.61，36.32±6.78，28.48±4.61)和NF-κB(4~72 h组分别为67.60±5.81，74.61±7.94，82.43±10.67，70.70±5.85，68.22±9.67)表达增强，与NS组(IL-1β：12~72 h组分别为11.74±2.32，12.93±2.49，13.02±2.83，12.98±5.29；NF-κB：4~72 h组分别为48.67±16.14，44.62±7.82，53.16±14.45，54.27±5.25，55.56±7.56)比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；与SC组比较，ED组IL-1β(12~48 h组为22.01±4.45，28.28±4.50，26.00±5.34)和NF-κB(4~72 h组为58.56±6.37，59.86±6.73，70.00±10.09，64.78±7.56，64.45±6.51)表达明显降低，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；(2)RT-PCR法检测结果显示NF-κB mRNA表达趋势与蛋白基本相似；(3)SC组在惊厥后12 h(11.41±2.37)h时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数已显著高于NS组(P<0.01)，48 h(28.78±5.11)h达峰，而ED组TUNEL阳性细胞数在12~48 h时间点(分别为8.98±2.22，13.09±2.54，20.57±4.89)均较SC组显著下降(P<0.01或P<0.05)，但仍高于NS组(6.22±1.50，6.57±1.61，6.72±1.14)(P<0.01或P<0.05)，在4 h时间点三组(NS组6.29±1.49，SC组6.61±1.71，ED组5.75±1.41)间TUNEL阳性细胞数差异无统计学意义(P＝0.759)。 结论 依达拉奉可抑制匹鲁卡品致大鼠海马IL-1β和NF-κB的表达，并使神经元凋亡数减少；提示依达拉奉对SC引起的脑损伤可能有保护作用。

目的 了解国内小儿感染性心内膜炎治疗的现状。 方法 多中心回顾性总结研究感染性心内膜炎268例临床资料，着重分析抗生素、外科治疗及治疗结果。平均年龄8.94岁(18 d~18岁)。 结果 应用的抗生素共有56种，主要为头孢菌素类(15种)、青霉素类(8种)、 β内酰胺酶抑制剂的复合制剂(8种)、氨基糖苷类(4种)及肽类抗生素(3种)等。应用1种抗生素33例(12.3%)，2种抗生素83例(31.1%)，3种抗生素44例(16.5%)，4种抗生素57例(21.3%)，5种抗生素25例(9.4%)，6种及以上抗生素25例。应用时间为1~98 d, < 2周19例(7.1%)，2~< 4周74例(27.7%)，4~6周122例(45.7%)，>6周52例(19.4%)。123例接受外科治疗。全组186例痊愈，4例转院手术治疗，60例自动出院，18例死亡(6.7%)。抗生素及手术治疗组中，除4例转院手术外，111例痊愈，5例死亡，3例自动出院。单纯抗生素治疗组中75例治愈，57例自动出院，13例死亡。二组的转归差异有统计学意义(χ2＝61.7，P＝0.000)。多因素logistic回归分析显示，血培养为金黄色葡萄球菌(χ2＝4.40，P＝0.036)，先天性心脏病术后(χ2＝9.40，P＝0.002)及伴发心力衰竭(χ2＝10.36，P＝0.001)是与死亡相关的危险因素。 结论 本研究结果客观地反映了国内小儿感染性心内膜炎治疗的现状，目前应用的抗生素种类多而方法不一。迫切需通过多学科合作制定小儿感染性心内膜炎治疗方案，并组织开展随机对照研究评估和优化治疗方案，进一步提高小儿感染性心内膜炎的治疗水平。

目的 分析12例小儿致密物沉积病(DDD)的临床病理及治疗反应，旨在提高诊断治疗水平、改善预后。 方法 对临床肾脏病理：光镜(LE)、免疫荧光(IF)及电镜(EM)诊断的DDD，确诊为原发DDD的12例患儿的临床病理资料及疗效进行分析，并对其预后转归进行随访。 结果 (1)12例患儿男7例，女5例，起病年龄为5~13岁，平均(9.1±3.9)岁，至活检时的病程为1个月至5年，随访时间1~9年。(2)临床特征：全部病例都有肾病水平的蛋白尿，持续镜下血尿及反复肉眼血尿，轻度高血压7例(≥140/100 mm Hg，1 mm Hg＝0.133 kPa)，伴一过性或反复性肾功能损害5例及轻-重度贫血8例，全部病例血补体C3持续降低(0.15~0.55 g/L)，临床诊断为肾病综合征者9例，肾病伴部分脂营养不良者1例，急性肾炎综合征者2例。(3)病理特征：肾活检全部病例IF可见C3为主呈线状或条带状沉积于肾小球基底膜内(GBM)或伴肾小管基底膜(TBM)及肾小囊壁沉积。表现为膜增生性肾小球肾炎(MPGN)特征者9例，局灶节段性肾小球硬化(FSGS)1例，增生硬化1例，毛细血管内增生1例。电镜EM全部病例均表现为GBM内致密物呈飘带样沉积，或伴有致密层线状沉积。部分病例见TBM、肾小囊壁沉积及系膜区颗粒及团块状电子致密物沉积。(4)治疗及随访：激素中长疗程法全部为耐药型，反复甲强冲击后转为部分耐药及激素依赖型，随访1~9年，完全缓解3例，部分缓解5例，均较稳定，进入终末肾病(ESRD)2例，失访2例。 结论 DDD是一组具有临床病理多样化特征的独立性的少见疾病。临床表现为急性肾炎综合征、激素耐药型肾病综合征、持续低补体血症者应高度警惕DDD。免疫荧光检查以C3为主在GBM沉积，确诊依赖电镜检查，GBM致密层呈飘带样电子致密物沉积者，无论光镜是否诊断为MPGN均可确诊为DDD。激素小量，隔日、长期维持治疗伴CTX冲击可以改善预后。

目的 探讨ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA)指导恶性实体瘤患儿临床化疗的意义，为恶性肿瘤患儿的个性化治疗提供参考。 方法 应用ATP-TCA检测50例恶性实体瘤患儿(15例恶性神经源性肿瘤、8例恶性生殖细胞肿瘤、10例肾母细胞瘤、10例肝母细胞瘤、6例横纹肌肉瘤、1例肾上腺皮质癌)标本的8种单独用药和8种联合用药方案的敏感性。 结果 (1)50例儿童恶性实体瘤标本中，46例结果具有可评价性，ATP-TCA总可评价率为92%(46/50)。(2)不同个体的肿瘤在药物敏感方面具有明显的异质性。(3)各种恶性实体瘤患儿体外敏感率较高的药物组合如下：恶性神经源性肿瘤：卡铂＋表阿霉素＋异环磷酰胺(12/15、80.0%)、长春新碱＋环磷酰胺＋顺铂＋氮烯脒胺(11/15、73.3%)；恶性生殖细胞肿瘤：顺铂＋长春新碱＋博来霉素(8/8、100%)、金喜素＋更生霉素＋异环磷酰胺(8/8、100%)、三氧化二砷(As2O3)(7/8、87.5%)；肾母细胞瘤：长春新碱＋更生霉素(6/7、85.7%)、卡铂＋依托泊苷(6/8、75.0%)；肝母细胞瘤：长春新碱＋环磷酰胺＋顺铂＋依托泊苷(8/9、88.9%)、卡铂＋异环磷酰胺＋替尼泊甙(7/9、77.8%)、顺铂＋依托泊苷＋金喜素(7/9、77.8%)；横纹肌肉瘤：长春新碱＋环磷酰胺＋顺铂＋依托泊苷(5/5、100%)；肾上腺皮质癌：药物体外抑制率最高者为长春新碱＋环磷酰胺＋阿霉素。(4)As2O3对儿童恶性生殖细胞肿瘤、恶性神经源性肿瘤单药敏感率较高，分别是87.5%(7/8)、46.7%(7/15)。紫杉醇对恶性神经源性肿瘤和横纹肌肉瘤化疗敏感性较高，分别为40.0%(6/15)、 60.0%(3/5)，吉西他滨对儿童生殖细胞肿瘤和横纹肌肉瘤敏感性较高，分别为50.0%(4/8)、60.0%(3/5)。 结论 ATP-TCA是一种适用于儿童实体瘤药敏检测并与临床相关性较好的实验技术，对抗儿童恶性肿瘤药物筛选、已有药物新适应证研究、联合化疗方案筛选和评估具有实际应用价值。

目的 探讨Menkes病的临床和实验室特点。 方法 对3例确诊为Menkes病患儿的临床、实验室检查及影像学资料进行回顾性分析。 结果 3例患儿均婴儿早期生后3~6个月起病，有皮肤白、头发黄短、稀疏卷曲、眼距宽和眼裂小等特殊面容及毛发改变，均表现智能发育落后，3例患儿的头发在光镜下观察均有扭曲、串珠样改变；血浆铜蓝蛋白分别为32.3 mg/L、72.5 mg/L和60.7 mg/L，均明显减低；头颅影像学示弥漫性脑萎缩，脑白质髓鞘化落后，脑血管走行紊乱扭曲；例1和例2基因学检查示X染色体上14号外显子分别缺失或无义突变。 结论 Menkes病为遗传性的铜代谢障碍性疾病，以进行性加重的神经损害为主要表现，有特殊面容和毛发改变，以及脑萎缩和脑血管的形态改变。

目的 在我国建立糖原累积症(GSD)ⅢA的酶学诊断方法，并测定中国人群的正常值范围。 方法 肌肉标本来自正常对照组35例、GSD ⅢA组12例和其他肌病组9例。GSD ⅢA患者均发现明确的AGL基因致病突变。制备肌肉匀浆后，以淀粉葡萄糖苷酶以及磷酸化酶分别降解匀浆中的糖原，通过测定葡萄糖产量以明确糖原含量以及糖原形态；以极限糊精为底物，测定匀浆中的糖原脱支酶(GDE)活性。 结果 (1)GSD ⅢA患者组的肌肉中糖原含量显著高于另外两组，葡萄糖-1-磷酸与总葡萄糖的比率(G1P/G)以及GDE活性均显著低于另外两组(P<0.01)，其他肌病组与正常对照组三项指标的差异均无统计学意义。(2)正常值范围：肌肉中糖原含量0.31%~0.43%，G1P/G为22.37%~26.43%，GDE活性0.234~0.284 μmol/(g·min)。(3)三项指标综合诊断GSD ⅢA的酶学诊断方法与基因诊断方法诊断效果相同，并且两种方法的敏感性均为91.7%，特异性均为100.0%。 结论 首次建立了GSD ⅢA的酶学诊断及糖原含量、糖原形态测定方法，确定了中国人群的正常值范围，可于临床推广应用。

目的 分析免疫抑制治疗儿童获得性重型再生障碍性贫血的转归因素。 方法 回顾性分析2000年1月-2006年6月应用兔抗胸腺细胞球蛋白联合免疫抑制治疗的获得性重型再生障碍性贫血患儿。56例患儿均应用兔抗胸腺细胞球蛋白(R-ATG)[3-5 mg/(kg·d)×5 d]＋环孢菌素A(CSA)。所有患儿治疗均同时加用康力龙或丙酸睾丸酮治疗。CSA血药浓度调整到谷浓度100 μg/L以上，峰浓度300 μg/L以上。 结果 免疫抑制治疗的总反应率为62.5%，完全缓解率为37.5%；应用ATG时伴有感染治疗组总反应率低，死亡率高；骨髓涂片分类中红系≥10%患儿，对治疗反应率、完全缓解率高，早期死亡率低；骨髓涂片粒系≥10%的患儿早期死亡率低。 结论 ①应用ATG时伴有感染治疗组总反应率低，死亡率高；②骨髓涂片分类中红系≥10%的患儿预后好。

目的 了解苏州地区儿童人类偏肺病毒(hMPV)呼吸道感染的流行情况及临床特征。 方法 收集2006年1月-2007年12月我院呼吸科4702例急性呼吸道感染住院患儿的呼吸道分泌物，用逆转录-聚合酶链反应法检测hMPV N基因，随机挑选部分阳性PCR扩增产物进行核苷酸测定并将所测序列在GenBank中进行比较分析。 结果 4702例标本中，检测到376份RT-PCR阳性扩增产物，阳性率为8%；2006，2007年hMPV检测阳性率分别为8.4%、7.6%。hMPV检测阳性率分别在1、2、3月和11、12月呈现高峰，hMPV感染患儿的平均年龄为22.56个月，376例hMPV感染患儿中临床诊断为上呼吸道感染12例(3.2%)；喉炎8例(2.1%)；毛细支气管炎102例(27.1%)；肺炎210例(55.9%);哮喘急性发作44例(11.7%)。20份hMPV N基因部分核苷酸片断与GenBank中hMPV N基因序列同源性为99%~100%。 结论 (1)苏州地区部分儿童的呼吸道感染与hMPV有关。(2)全年均存在hMPV感染，流行高峰在冬春季。(3)hMPV感染的临床特征无特异性。

目的 介绍胰腺胸膜瘘引起大量血性胸腔积液患儿的早期临床特点及诊治要点。 方法 报道1例胰腺胸膜瘘患儿临床症状、体征、辅助检查及诊治方法。 结果 4岁男孩，间断发热、咳嗽、胸闷和胸痛1个月，胸腔闭式引流3次均为血性胸液，腹部无阳性体征，腹部B超提示胰腺回声粗糙，血和胸腔积液胰淀粉酶分别为495 U/L和35 938 U/L，开胸探查发现有一瘘管从胸腔通向胰腺，经全胃肠外营养、静脉滴注生长抑素以及内镜逆行胰胆管造影在胰管内放置支架治愈。 结论 胰腺胸膜瘘患儿早期以呼吸症状为主，缺乏腹部症状，易造成诊治延迟。胸腔积液中胰淀粉酶显著增高是诊断本病的重要线索和依据，本病如保守治疗失败需行内镜逆行胰胆管造影检查和治疗。

目的 研究胆汁淤积性肝病(CLD)患儿的主要病因学特征，并探讨SLC25A13基因突变类型在CLD的分子流行病学分布。 方法 2003年10月至2009年3月间我科诊治的CLD患儿63例，其中男36例，女27例。采用临床横断面研究，收集整理研究对象的临床资料，分析总结其病因及临床转归；应用课题组已建立方法常规筛查SLC25A13基因的13~17种突变类型；在部分患儿中通过基因组DNA直接测序寻找SLC25A13基因突变。 结果 63例CLD患儿中有24例病因不明，另外39例病因明确。在已明确的CLD病因中，遗传代谢病居首位，包括citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)、暂时性半乳糖血症、酪氨酸血症Ⅰ型、半乳糖激酶缺陷病、鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷病和糖原累积病Ⅰ型等6种疾病共27例患儿，其中NICCD 21例；其次是获得性因素，包括全胃肠道外营养相关胆汁淤积症、巨细胞病毒肝炎和先天性梅毒共7例；再次为先天性胆道畸形，包括胆道闭锁、Caroli病和胆囊息肉共5例。55例随访CLD患儿中有10例已夭折，其余45例临床改善或痊愈。44例CLD患儿接受了SLC25A13突变分析，其中来自20个家庭(共40个等位基因)的21例患儿被发现携带基因突变。检测到的7种突变类型分别为851-854del(23/40), IVS6＋5G>A(6/40), IVS16ins3kb(3/40), 1638-1660dup(2/40), A541D(1/40), R319X(1/40)和G333D(1/40)，还有3个等位基因中的新突变有待识别(3/40)。 结论 虽部分CLD患儿病因不能明确，但遗传代谢病，尤其是NICCD，是CLD的常见病因。少数CLD患儿预后不良，但大部分患儿可获临床改善甚至痊愈。本组检测到SLC25A13基因突变类型7种，其中前4位最常见者依次是851-854del, IVS6＋5G>A，IVS16ins3kb和1638-1660 dup。

目的 探讨儿童重度哮喘气道中性粒细胞(NEU)炎症的发生机制。 方法 选择轻-中度哮喘患儿28例和重度哮喘患儿16例，健康对照组16例，进行肺功能测定，采用诱导痰检查方法对痰炎性细胞进行分类计数；采用酶联免疫吸附测定法检测痰和外周血IL-8浓度；同时在NEU中分别加入痰上清液、IL-8、地塞米松、米非司酮、磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)进行培养，观察NEU凋亡的变化。 结果 (1)重度哮喘组诱导痰NEU百分比(%)为59.54(41.99~74.65) ，高于轻-中度哮喘组[30.03(15.94~47.71)]和健康对照组[29.72(16.53~45.74)](P均<0.01)；重度哮喘组痰上清IL-8 (ng/L)为2907.78(331.67~3457.93)，高于轻-中度哮喘组[287.58(130.75~656.84)]和健康对照组[179.2(58.55~346.59)](P均<0.01)。(2)体外培养NEU凋亡率(%)：LPS＋NEU组(10.57±1.97)、重度哮喘痰上清＋NEU组(11.82±2.96)、地塞米松＋NEU组(9.93±1.95)、IL-8＋NEU组(10.47±1.93)、重度哮喘痰上清＋米非司酮＋NEU组(12.15±2.86)均低于PBS＋NEU组(17.98±2.27)、健康对照痰上清＋NEU组(17.37±2.50)、轻-中度哮喘痰上清＋NEU组(16.35±3.26)、米非司酮＋NEU组(17.89±2.38)、地塞米松＋米非司酮＋NEU组(17.06±2.59)(P均<0.01)。 结论 部分重度哮喘患者气道NEU增多可能与NEU凋亡受抑制有关，并同时伴有痰IL-8浓度的升高。