2006年 · 第44卷第08期

目的 采用持续血液净化(Continuous Blood Purification, CBP)救治儿童严重脓毒症合并脏器功能障碍，观察其临床疗效。 方法 对2003年8月—2005年8月，我院收治的22例儿童严重脓毒血症进行持续静脉静脉血液透析滤过(Continuous Vein－Vein Hemodialysis Filtration, CVVHDF)，观察心率、血压、血管活性药物使用、自主呼吸频率、氧合指数的变化以及预后。 结果 22例均顺利置管并完成CBP，CBP持续时间为(64.4±34.5)h。CBP前均存在心动过速，CBP 4 h下降(45±13)次/min；CBP后，未休克的7例血压平稳；10例早期休克患儿CBP后血压维持正常，血管活性药物1～5 h下调，2～8 h撤除；5例难治性休克患儿CBP 4 h后血压明显上升，升高幅度为(25.2±10.7)mm Hg(1 mm Hg＝0.133 kPa)，8 h恢复到该年龄正常水平，血管活性药物在CBP 2～8 h下调，4～16 h停用，较早期休克患儿略延长。呼吸频率增加的患儿CBP 4 h后自主频率减慢(7±4)次/min；合并呼吸衰竭患儿CBP前氧合指数(PO2/FiO2)为(177.7±53.1) mm Hg，CBP后4 h上升至(341.0±60.2) mm Hg，(5.3±2.1) h全部达到正常；吸入氧浓度FiO2 2～4 h降至50%以内。危重评分入院时62.2±7.4，24 h升高至危重评分86.6±9.0，提高24.5±10.8；CBP治疗后存活16例，存活率72.7%，治疗有效率90.9%。置换液采用改良Ports方案可导致血钙、血糖和血渗透压的升高。CBP在脓毒症患儿应用可能引起转流初期的血压轻度下降和转流过程中的出血现象。 结论 持续血液净化有改善严重脓毒血症儿童重要脏器的作用。

目的 观察连续血液净化(CBP)对儿童脓毒性休克的疗效并探讨其机理。 方法 用CBP的连续性静－静脉血液滤过模式治疗了9例脓毒性休克患儿，检测CBP治疗前及治疗中各时相点血气、生化、中分子物质浓度等指标及毛细血管再充盈时间(CRT)、血管活性药物用量、血压、尿量等临床症状、体征变化。 结果 9例脓毒性休克患儿体重3.1～14 kg(平均8.3 kg±3.5 kg)，治疗时合并急性肾功能衰竭6例、急性呼吸窘迫综合征3例、细菌血培养阳性5例，全部需升压药维持血压。CBP治疗前pH 7.14±0.23，BE(－11.3±4.25) mmol/L, MMS (3532±519) U/L，PO2/FiO2 188±33，CRT≥5s，尿量(0.85±0.52) ml/(kg·hr)，肾上腺素用量(1.36±0.48) μg/(kg·min)，多巴胺用量16.35±3.27 μg/(kg·min)。CBP治疗24 h后pH 7.38±0.16，BE(－0.28±1.37) mmol/L, MMS (2576±375) U/L，PO2/FiO2 285±63，肾上腺素用量(0.08±0.04) μg/(kg·min)，多巴胺用量(8.53±6.72) μg/(kg·min)，CRT <2s，治疗结束时尿量(2.9±1.6) ml/(kg·hr)。与CBP治疗前比均(P<0.05)或(P<0.01)差异有统计学意义。经过3～12 d的治疗，2例死于MODS(肠套叠并肠坏死1例、大面积烫伤1例)，1例肠扭转术后肠漏放弃治疗，6例治愈出院。 结论 CBP联合其他综合治疗可明显提高脓毒性休克患儿的氧合能力、纠正酸中毒、稳定血压、改善组织器官灌注、清除中分子物质，值得进一步研究和应用。

目的 研究脓毒性休克大鼠脑损伤时血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的变化，以期探讨血清NSE在脓毒性脑病时变化的意义。 方法 选5～6周龄清洁级Wistar大鼠，随机分正常对照组和内毒素休克组(每组10只)。内毒素休克组静脉注射脂多糖(LPS，Escherichia coil O55：B5型)25 mg/kg制作脓毒性休克模型，正常对照组注射等量生理盐水(NS)。6 h后取静脉血测血清NSE浓度，并麻醉致死取脑观察脑组织形态学改变。 结果 内毒素休克组血清NSE浓度显著高于正常对照组10.0781±0.526(μg/L) vs 3.7188±0.602(μg/L)，(P<0.05)，且两组间NSE浓度值无重叠。光镜观察见内毒素休克大鼠脑组织神经元有明显坏死，电镜下可见血脑屏障损害。而正常对照组大鼠脑组织形态学大致正常。 结论 脓毒性休克6 h可致大鼠严重神经元坏死；血清NSE的浓度变化可作为反应脓毒性休克大鼠脑损伤的一种血生化指标。

目的 探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌胶原的保护机制。 方法 选健康18日龄Wistar大鼠121只，每个时间点随机取11只按腹腔注射药物不同分为：(1)生理盐水对照组(0 h)；(2)内毒素(LPS)；(3)谷氨酰胺治疗(Gln)组。后两组又分为2、4、6、24及72 h时点。在各时点分离心脏，8只用逆转录－聚合酶链反应(RT－PCR)方法测定基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP－3) mRNA表达，另3只用于石蜡切片，用免疫组化方法测定金属心肌基质蛋白酶3(MMP－3)及其TIMP－3，以及用原位杂交方法测定MMP－3 mRNA表达。 结果 (1)LPS组各时点MMP－3及其mRNA表达较0 h组增强，在6 h达高峰，到72 h虽然有所下降仍高于对照组，P<0.01；Gln组各时点MMP－3 mRNA及其蛋白质表达也较0 h组增强，但较LPS组各时点为弱，最高点在24 h，P<0.01；(2)LPS组各时点TIMP－3以及mRNA表达较0 h组明显减弱，在6 h最低，P<0.01；Gln组各时点TIMP－3以及mRNA表达也较0 h组减弱，但较LPS组为强，最低点在24 h，P<0.01。(3)脓毒症组比Gln组心脏，超微结构改变明显。 结论 (1)在脓毒症时MMP－3及其mRNA表达增强，而TIMP－3及其mRNA表达受抑制。(2)谷氨酰胺可以减轻这种影响，而且使这种损伤作用时间向后推迟。

目的 探讨新生儿肺透明膜病(HMD)支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞(AM)核转录因子κB(NF－κB)和核转录因子抑制物κB－α (IκB－α)的表达及其在HMD中的发病机制。 方法 31例HMD机械通气治疗的早产儿，分为存活组22例和死亡组9例，另19例无呼吸系统疾病的早产儿为对照组。收集BALF，分离和培养AM；离体实验用细菌内毒素(LPS)刺激各组AM,提取细胞核蛋白。NF－κB的表达检测采用电泳迁移率实验(EMSA)；应用免疫斑点杂交(Western blot)检测IκB－α的表达；用酶连免疫法(ELISA)测定BALF上清液中细胞因子IL－1β和IL－8的含量。 结果 存活组在上机后24地h和72 h AM中NF－κB表达均明显高于对照组。死亡组在上机后24 h AM中NF－κB表达明显增高，而72 h时减低，并经LPS刺激后无NF－κB表达明显增高。在上机后24和72 h对照组的AM中IκB－a表达高于存活组和死亡组。死亡组在上机后24和72 h，AM中IκB－α表达差异无统计学意义，并经LPS刺激后也无IκB－α的再表达。NF－κB表达与IL－1β和IL－8呈明显正相关。 结论 NF－κB的过度表达参与了新生儿肺透明膜病的病理生理发病机制，其途径可能降低IκB－α的表达和增加了IκB－α降解或两者都有。

目的 观察单纯控制食谱、控制食谱联合有氧运动或降脂药对实验性肥胖大鼠血脂和血管内皮功能的影响。 方法 Wistar大鼠随机分为：F组：饲予高脂饲料；N组：饲予基础饲料；A组：高脂饲养8周后予单纯控制食谱12周，B组：高脂饲养8周后予控制食谱联合游泳12周，C组：高脂饲养8周后予控制食谱联合藻酸双酯钠12周。干预12周后，处死全部大鼠，测定Lee指数；血脂指标：总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)；血管内皮因子：血浆内皮素(ET)、血清一氧化氮(NO)，血浆血管性假血友病因子(vWF)，免疫组化法检测腹主动脉细胞间黏附分子1(ICAM－1)蛋白的表达，逆转录－聚合酶链反应(RT－PCR)法检测腹主动脉ICAM－1 mRNA的表达。 结果 A组的TC、TG、ET低于F组(均P<0.05)；B、C组的Lee指数、TC、TG、ET、vWF、ICAM－1蛋白和mRNA表达水平均低于F组(均P<0.05)；A、C两组NO均高于F组(均P<0.05)，与N组比较差异无统计学意义(均P>0.05)，B组NO同时高于F组和N组(P<0.01)。 结论 单纯控制食谱能改善血脂和血管舒缩功能，控制食谱联合有氧运动或联合降脂药藻酸双酯钠在减重、降脂和改善血管舒缩、凝血、黏附功能方面均有效，而控制食谱联合有氧运动改善舒缩功能的效果更为显著，因此是单纯肥胖早期血管内皮功能障碍的最佳干预选择。

目的 回顾性总结伴膜部瘤的室间隔缺损(VSD)介入治疗病例，对如何选择封堵器的型号和安放位置进行分析，以期促进室间隔缺损介入治疗的进一步规范。 方法 对2004年5月至2005年5月入院治疗的伴膜部瘤形成的室间隔缺损患儿进行造影、超声和介入过程分析。测量膜部瘤的7条径线，并与封堵器型号和封堵位置进行归纳，寻找可能的选择规律。 结果 35例患儿被纳入研究。VSDs直径为2.7～11.9 mm，平均(6.4±2.6) mm。膜部瘤的破口最大径为1.5～4.1 mm，平均(2.9±0.9) mm。VSDs边缘距主动脉瓣距离为2～7 mm，平均(4.3±1.7) mm。32例介入治疗手术成功。封堵器采用双侧对称伞，从4～14 mm不等。封堵器左室盘封堵缺损左室面者29例、封堵膜部瘤破口左侧者3例。 结论 封堵器左室盘放置位置取决于右室盘能否在右心室侧复型。首选位置是缺损的左心室面。当右室盘不能正常复型时，可选择在膜部瘤破口左侧放置左室盘。封堵器型号选择应根据封堵器安放位置决定。在左心室面释放左室盘，一般选择型号与左室面直径相等或大1～2 mm。在膜部瘤破口左侧释放左室盘时，如果为单破口型，选择同上；如果为多破口型，选择能遮盖相距最远的两破口间距离的最小封堵器。

目的 构建一种由缺氧反应元件(hypoxia responsive element, HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus－thymidine kinase, HSV－TK)基因的真核表达载体，观察HRE能否增强HSV－TK/GCV(gancyclovir，GCV)系统对乏氧环境中的人Ewing′s肉瘤细胞系SK－ES细胞的杀伤作用，为弥补放、化疗的不足，探索有效的治疗方法。 方法 (1)将合成的HRE片断，插入到pIRES2－EGFP(pIRES2－EGFP)的双顺反子荧光蛋白报告基因的真核启动子的增强子部位，获得重组质粒pHRE；以PCR法扩增HSV－TK基因中TK基因片断，将其克隆到pIRES2－EGFP及pHRE的双顺反子荧光蛋白报告基因上游的多克隆位点，获得重组质粒pTK及pHRE－TK。(2)通过脂质体将pHRE－TK、pHRE、pTK及pIRES2－EGFP导入SK－ES细胞，分别在乏氧(O2浓度为3%)和富氧(O2浓度为21%)环境中培养，荧光显微镜观察报告基因增强性绿色荧光蛋白表达变化，并进行荧光吸光度分析；再予以GCV处理5 d后，用MTT法检测GCV对培养细胞的杀伤效果。 结果 (1)测序结果证实，重组质粒pHRE含HRE片断，pTK及pHRE－TK含HSV－TK片断，均为单拷贝正向插入，序列正确。(2)对比各组细胞EGFP荧光吸光度值发现：①在乏氧环境中培养，pHRE和pHRE－TK组细胞荧光吸光度值高于在富氧环境培养的荧光吸光度值(P<0.01)；②在乏氧环境培养，pHRE组和pHRE－TK组细胞荧光吸光度值高于pTK组和pIRES2－EGFP组(P<0.01)；③在富氧环境培养的各组细胞之间荧光吸光度值差异无统计学意义(P>0.05)。(3)对比GCV对各组细胞杀伤效果发现：①在乏氧、富氧两种环境培养的pHRE－TK和pTK组细胞对GCV的敏感性均高于pHRE组细胞(P<0.01)，敏感性随GCV浓度增加而增大；②在乏氧环境培养的pHRE－TK组细胞对GCV的敏感性高于pTK组(P<0.01)，而在富氧环境中培养的pHRE－TK组与pTK组细胞对GCV的敏感性差异无统计学意义(P>0.05)；③在乏氧环境培养的pHRE－TK组细胞对GCV的敏感性高于在富氧环境中培养的pHRE－TK组细胞(P<0.01)；而在乏氧、富氧两种环境培养的pTK组细胞对GCV的敏感性差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 (1)成功地构建了含有HRE及HSV－TK基因片断的真核表达载体。(2)在缺氧的SK－ES细胞内，HRE使报告基因EGFP表达增强。(3)HRE能增强HSV－TK/ GCV系统对乏氧环境中的SK－ES细胞的杀伤效率。