2004年 · 第27卷第12期

为纪念我国近代结核病防治事业的先驱——裘祖源教授，由北京市结核病胸部肿瘤研究所主办，中国防痨协会、中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心、中国疾病预防控制中心结核病防治临床中心、北京结核病控制研究所、中华医学会结核病学分会、中华结核和呼吸杂志等单位协办的“裘祖源教授诞辰100周年纪念会”于2004年9月24日在北京举行。出席会议的有卫生部、

工作在上世纪的结核病防治工作者大多熟悉裘祖源教授的名字,许多人还聆听过这位朴实的老教授的学术演讲,也有不少人长期或短期在裘教授的身边工作过."裘祖源教授"是中国结核病防治史上一个响亮的名字.他不仅是裘教授本人的声名,而且代表着一个学者在结核病防治事业上孜孜不倦的追求和努力,代表了半个多世纪以来,结核病防治工作者的辛勤探索和结核病防治道路的艰辛历程。

裘祖源教授是我国著名的医学教育家,也是我国结核病防治事业的创始人之一,他60年如一日耕耘在科研、教学的园地上.治学严谨、一丝不苟、兢兢业业、硕果累累,医治了许多患者,培养了成百上千计的学生和结核病防治人才,深得国际和国内同道的景仰和爱戴。

裘祖源教授是本刊的创始人之一,历任<中华结核病科杂志>第一、二届总编辑,<中华结核和呼吸杂志>第一届总编辑.在编辑部现有同仁中,我是惟一聆听过他亲切教诲的人了.值此纪念裘老诞辰100周年之际,追思裘老对杂志的贡献,以此鞭策我们更努力地工作。

噬菌体是微生物学的一个重要分支,是一种专性感染并寄生于相应活的细菌体内的非细胞原生物,称为细菌病毒.噬菌体基本上包括裂解型和温和(溶原)型两类,与其他病毒有一些共同的生物学特性[1]:个体小,结构简单,有滤过性;没有独立的代谢酶系,只能在活的处于代谢状态的宿主菌体内繁殖;噬菌体感染细菌具有种属特异性,即一种噬菌体只能感染一个细菌种属,甚至于一个种属的几株细菌.噬菌体技术在各种细菌感染性疾病的诊断、治疗与预防方面已成功得到应用.从首次分离分枝杆菌噬菌体至今已有50多年历史,从不同来源分离出噬菌体达250种之多.尽管在分枝杆菌噬菌体的分类、结核病流行病学以及实验治疗、分子遗传学的应用等方面做过一些研究[2],但是在这期间所发表的论文和应用实例并不多.近几年来,由于结核病诊断、治疗与预防领域仍然存在着一些亟待解决的棘手问题,国外研究者又开始探索研究分枝杆菌噬菌体在结核病快速诊断、药敏试验及实验性治疗中的应用,取得了若干进展。

目的 建立噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件.方法应用分枝杆菌噬菌体感染结核分枝杆菌,比较各种检测条件对测定结果的影响,并将所建方法用于痰标本检测,结果与BIOTEC Lab公司产品比较.结果 1×109噬菌斑形成单位(PFU)/ml的噬菌体,37℃感染 60 min可检出200～500条/ml结核分枝杆菌.杀毒剂100 mmol /ml,室温作用5 min可完全灭活受试噬菌体.指示细胞浓度在1×108条/ml 时,形成的噬菌斑清晰,便于计数.加热灭活的细菌和指示细胞不被噬菌体感染.H37Rv、H37Ra和牛分枝杆菌参考菌株检测结果均为阳性,7种非分枝杆菌和16种常见非结核分枝杆菌检测结果为阴性,4种非结核分枝杆菌(偶然、胞内、金色、草分枝杆菌)在高浓度时(>1×105条/ml)检测结果为阳性.重复试验结果表明,本法批间和批内变异系数均<15%.痰标本氢氧化钠-半胱氨酸液化方式的阳性检出率为94%(49/52),显著高于氢氧化钠液化结果的62%(32/52,χ2＝15.06,P<0.01);预培养1 d的阳性检出率为65%(51/78),显著高于未预培养结果的40%(31/78,χ2＝18.05,P<0.01).临床标本检测结果表明,我们的试剂与进口试剂检测结果基本相同.结论噬菌体生物扩增法快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆菌的快速检测,但是测定条件的选择极为重要。

目的 对噬菌体生物扩增法快速检测和鉴别标本中分枝杆菌的方法学进行探讨. 方法对噬菌体生物扩增法的条件:感染时间、杀灭胞外噬菌体的药物浓度和时间进行探讨和比较;观察不同分枝杆菌应用此法的检测灵敏度和特异性,以及对呼吸道常见细菌的特异度;观察实验中所用噬菌体、杀菌剂、辅助细菌在28～40周内的稳定性.结果 (1)结核分枝杆菌与噬菌体感染3～4 h时感染效率较高,4%硫酸亚铁胺100 μl作用5 min能全部杀灭1.1 ml中1×109噬菌斑形成单位(PFU)的噬菌体;(2)80～200 集落形成单位(CFU)/ml的结核分枝杆菌活菌能用此法检测出阳性结果,非结核分枝杆菌≤1×103CFU/ml时仅耻垢分枝杆菌出现阳性结果,特异性为95%,而≥1×104CFU/ml时结果依据不同的菌株而不同,呼吸道常见的非分枝杆菌细菌用此法的检测特异性为100%;(3)液体4℃保存实验中的主要成分,稳定性均较好.结论应用噬菌体方法可以快速检测和鉴别结核分枝杆菌,所需试剂的稳定性较好,为广泛应用于临床检测提供了依据。

目的 建立快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌利福平耐药性测定中的应用价值.方法应用噬菌体生物扩增法测定524株结核分枝杆菌利福平耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC). 结果噬菌体法测定524株结核分枝杆菌临床分离株利福平敏感301株、耐药223株,绝对浓度法敏感313株、耐药211株;两法测定均为敏感288株、均为耐药198株.在38株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,35株噬菌体法与MIC测定结果相符合.如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定利福平耐药性的敏感性为93.8%、特异性为92.0%、阳性预测值为88.8%、阴性预测值为95.7%、准确性为92.7%.结论噬菌体生物扩增法测定利福平耐药性只需2天时间,操作简便,不需特殊仪器设备,可作为结核分枝杆菌利福平耐药性的快速筛选方法。

目的 探讨和评价噬菌体生物扩增技术(phage amplified biologically assay, PhaB)用于检测结核分枝杆菌耐药性的应用价值. 方法本研究共选取了91株利福平(RFP)耐药株(其中82株为耐多药结核分枝杆菌)、42株RFP敏感株、75株氧氟沙星(OFLX)耐药株、40株OFLX敏感株,应用PhaB、DNA序列分析法和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)3种检测方法,同时对同一菌株应用该3种方法进行耐药性检测,以资分析与评价PhaB法的临床应用价值.结果以绝对浓度法药敏试验结果为标准,检测RFP的药物敏感性,PhaB法的准确性为93%,敏感性为92%,特异性为95%;DNA序列分析法的准确性为93%,敏感性为90%,特异性为100%;PCR-SSCP法的准确性为90%,敏感性为86%,特异性为100%.检测OFLX(OFLX)的药物敏感性,PhaB的准确性为95%,敏感性为95%,特异性为95%;DNA序列分析法的准确性为80%,敏感性为71%,特异性为98%;而PCR-SSCP法的准确性为75%,敏感性为63%,特异性为98%.结论 PhaB法是一种操作简便、快速、敏感、与绝对浓度法符合率高的结核分枝杆菌耐药性检测方法,在48～96 h内可获得试验结果,具有良好的临床应用前景。

目的 总结2004年4月北京首例严重急性呼吸综合征(SARS)病例的临床特点,为今后临床医师及时有效准确诊断SARS疑似病例并进行相应鉴别诊断提供参考线索.方法对1例外院转入病例的临床资料进行分析,并总结其临床特点.结果 (1)地区性首例SARS患者的诊断难度大,短期内难以确定其流行病学史;(2)SARS患者发病早期可表现出一般肺炎的特点,无特征性改变.结论重视流行病学调查,早发现、早报告、早隔离和早治疗,对改善SARS患者的预后和控制其蔓延有着十分重要的意义。

目的 了解肺泡蛋白沉积症(PAP)患者血清中抗粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)抗体及GM-CSF的含量以及血清癌胚抗原(CEA)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平,探讨PAP的血清学指标对发病机制、诊断及病情监测的意义.方法采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测17例PAP患者[特发性PAP(I-PAP)16例,先天性1例],18例其他肺部疾病患者(疾病对照组),40名正常人(健康对照组)的血清中抗GM-CSF抗体的水平.采用ELISA检测各血清标本中GM-CSF及CEA的含量.采用速率法测定血清LDH水平.结果 I-PAP组、疾病对照组及健康对照组血清中抗GM-CSF抗体的吸光度(A)值分别为1.263±0.047、0.835±0.018和0.246±0.009.如果以健康对照组均值的4倍为截断点,抗GM-CSF抗体诊断I-PAP的敏感性和特异性分别为93.8%和100%.18%(3/17)的PAP患者和5%(1/19)的疾病对照组血清中检测出GM-CSF含量,余标本中GM-CSF的含量均未检测出(＜0.7 pg/ml).I-PAP患者血清LDH和CEA水平均较疾病对照组或健康对照组升高(P＜0.05),与肺泡气-动脉血氧分压差[P(A-a)O2]相关(r分别为0.769和0.552),两者之间亦存在相关性(r=0.518).PAP患者LDH含量在灌洗治疗前[(348.38±38.88)U/L]、后[(242.88±30.71)U/L]比较差异有显著性(P＜0.05).结论 I-PAP是一有自身免疫机制参与发病的疾病.血清特异性抗GM-CSF抗体在I-PAP的诊断中有较高的敏感性和特异性,其检测有望成为I-PAP的一种血清学诊断方法.血清CEA和LDH水平可作为PAP疾病监测的参考指标。

目的 在长时间机械通气患者撤离呼吸机(简称撤机)时,评价浅快呼吸指数(RSBI)、气道闭合压(P0.1)及常规撤机参数的价值.方法采用前瞻性研究方法,对通过自主呼吸试验并满足常规撤机标准的80例患者,检测呼吸运动协调性、痰量、肺部啰音、咳嗽能力、呼吸频率(RR)、潮气量(VT)、分钟通气量(MV)、呼吸系统顺应性(C)、经皮脉搏容积血氧饱和度(SpO2)、动脉血pH值等10项常规撤机参数及RSBI和P0.1.根据撤机结果分为失败组和成功组.采用单因素(t检验、χ2检验)及多因素Logistic回归进行统计学分析.结果 16例患者撤机失败.单因素分析显示撤机失败组与成功组之间的年龄、RSBI和P0.1差异有显著性(P<0.05).以撤机结果为因变量进行Logistic回归分析显示:仅RSBI和P0.1是回归模型中差异有显著性的两个参数.两组RSBI分别是(71±23)次·min-1·L-1和(53±13)次·min-1 ·L-1(OR＝1.03),P0.1分别是(7.4±2.1)cm H2O和(3.6±1.4)cm H2O(OR＝6.87).以RSBI≤105 次·min-1·L-1为标准,预测撤机成功的敏感性为90%,特异性为36%,准确性为78%.以P0.1≤4.5 cm H2O为标准,预测撤机成功的敏感性为87%,特异性为66%,准确性为82%.10项常规参数中无一项差异有显著性.结论长时间机械通气患者撤机时,RSBI和P0.1对判断撤机能否成功有价值,而常规撤机参数价值有限。

目的 观察川芎嗪对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型气道重塑的抑制作用并探讨其作用机制. 方法 32只SD大鼠按随机数字表法分成正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、小剂量川芎嗪组(C组,40 mg/kg)和大剂量川芎嗪组(D组,80 mg/kg),以卵白蛋白(OVA)致敏并长期吸入激发制备大鼠慢性哮喘模型.采用免疫组化半定量法测定气道壁胶原和转化生长因子β1(TGF-β1)含量,同时测定气道内、外径及平滑肌层、网状基底膜的厚度.结果 D组气道平滑肌层、网状基底膜的厚度为(11.3±1.3)μm、(11.3±1.7)μm,B组分别为(19.7±1.8)μm 、(19.8±1.6)μm,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01),但D组与A组[(10.6±1.2)μm、(9.8±1.6)μm]、C组[(11.6±0.9)μm、(12.3±1.8)μm]比较差异无统计学意义(P均>0.05);D组气道内外径比值为0.77±0.06,B组为0.63±0.05,D组与B组比较差异有统计学意义(P<0.01);D组气道壁Ⅲ型胶原及TGF-β1含量吸光度 (A)值分别为21±5、26±5,B组分别为55±7、69±14,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),D组与C组(32±8、38±10)比较差异有统计学意义(P<0.05),C组与B组比较差异也有统计学意义(P<0.01);D组Ⅰ型胶原含量的A值为39±8,分别与B组(44±8)、A组(34±13)及C组(36±8)比较差异均无统计学意义(P均>0.05).TGF-β1的表达与Ⅲ型胶原的含量呈显著正相关(r=0.844 2, P<0.01).结论川芎嗪可以减少气道壁胶原沉积和平滑肌增生而抑制哮喘气道重塑,其部分机制可能通过抑制TGF-β1的表达实现的.

目的 研究白细胞介素13(IL-13)对小鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型肺组织"钙激活的氯通道"成员gob-5和黏蛋白基因MUC5AC表达的影响,了解其在哮喘发病中的作用.方法 45只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组和IL-13组,每组15只.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定方法和免疫组化法分别检测gob-5 mRNA、MUC5AC mRNA和MUC5AC蛋白在肺组织的表达.结果对照组小鼠肺组织中gob-5 mRNA表达为0.000±0.000,哮喘组为1.136±0.007,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);IL-13组小鼠肺组织中gob-5 mRNA为1.246±0.008,哮喘组为1.136±0.007,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组小鼠MUC5AC mRNA(0.070±0.004)和蛋白(2只小鼠阳性)表达与哮喘组(分别为0.161±0.011和7只小鼠阳性)比较,差异均有统计学意义(P分别<0.01、0.05);经IL-13处理后的哮喘小鼠肺组织中MUC5AC mRNA (0.250±0.014)和蛋白(13只小鼠阳性)的表达与对照组(分别为0.070±0.004、2只小鼠阳性)、哮喘组(分别为0.161±0.011、7只小鼠阳性)比较,差异均有统计学意义(P均<0.05);哮喘组和IL-13组小鼠肺组织中gob-5 mRNA表达与MUC5AC mRNA表达均呈直线正相关(r分别=0.986和0.961,P均<0.05). 结论IL-13是导致哮喘发病的重要细胞因子,而gob-5可能是导致哮喘气道黏液过度分泌的重要基因之一。

目的 探讨电压依赖性延迟整流钾通道(KV)、钙激活钾通道(KCa )和ATP 敏感性钾通道(KATP)对人支气管平滑肌细胞(HBSMCs)增殖与凋亡及其相关基因表达的影响.方法支气管组织取材于5例肺癌切除术患者癌旁正常的肺组织,将培养的HBSMCs 分为4组:(1)对照组(用不含药物的无血清培养基处理);(2)4-氨基吡啶(4-AP)组(含4 mmol/L的4-AP);(3)四乙铵(TEA)组(含1 mmol/L的TEA);(4)格列本脲(Glib)组(含0.1 mmol/L的Glib).采用流式细胞术观察细胞的周期;应用荧光光度法检测细胞内钙;四甲基偶氮唑盐(MTT)微量比色分析法检测细胞的增殖;原位末端标记法( TUNEL)检测细胞的凋亡;免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡相关基因Fas和FasL的表达,以观察3种钾通道阻断剂对培养的HBSMCs增殖及凋亡的影响.结果(1)对照组HBSMCs吸光度(A)值为0.30±0.08,4-AP组为0.67±0.14,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组PCNA的阳性率为(23±5)%,4-AP组为(89±7)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组细胞内Ca2+浓度为(98±7)nmol/L,4-AP组为(255±17)nmol/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组S+G2M期细胞数为(12.6±4.8)%,4-AP组为(28.8±2.4)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).而TEA组和Glib组HBSMCs的A值均为0.30±0.07, 两组PCNA的表达率分别为(21±5)%、(20±4)%, 两组细胞内Ca2+浓度分别为(97±7)nmol/L、(99±6)nmol/L及两组细胞S+G2M期细胞数分别为(12.8±4.4)%、(11.0±4.4)%,上述各指标与对照组比较差异均无统计学意义(P均> 0.05). (2) 对照组HBSMCs凋亡率及其相关基因Fas和FasL的表达分别为(4.36±0.66)%、(2.92±0.25)%、(4.0±0.6)%,4-AP组分别为(0.84±0.13)%、(0.92±0.16)%、(1.4±0.6)%,与对照组比较差异有统计学意义(P均< 0.01).TEA组及Glib组的凋亡率为(4.47±0.93)%、(4.33±0.77)%,两组Fas和FasL的表达分别为(2.87±0.23)%、(4.2±0.8)%、(2.91±0.26)%、(4.2±0.9)%,与对照组比较差异均无统计学意义(P均> 0.05).结论抑制HBSMCs KV的活性可提高细胞内Ca2+浓度,促进细胞的增殖,抑制其凋亡;而KCa和KATP对HBSMCs的增殖及凋亡均无明显作用。

国内外细胞免疫学的基础研究已经证实哺乳动物外周血中存在CD+4CD+8双阳(DP)T淋巴细胞,并证实其在胞内感染性病原所致疾病中有重要免疫保护作用[1-4].笔者曾在结核病患者外周血T淋巴细胞亚群分析中偶然发现DPT淋巴细胞与抗结核保护性免疫力有相关性[4].为了进一步明确DP细胞与抗结核保护性免疫的相关性,我们观察了卡介苗(BCG)接种对大鼠外周血中T淋巴细胞亚群的影响。

为检测支气管哮喘(简称哮喘)患者血清中可溶性CD86(sCD86)的水平,并分析sCD86与哮喘病情严重程度、肺功能、外周血白细胞计数和分类的关系,我们探索了sCD86在哮喘发病机制中的可能作用。

噬菌体生物扩增法(phage amplified biologically assay,PhaB)是由Wilson等[1]于1997年建立.该技术简便、快速,非常适合缓慢生长的结核分枝杆菌(MTB)的实验研究.近年来,该技术发展迅速,已用于MTB耐药性的快速测定和临床标本中的MTB检测研究[1,2].我国也在"十五"攻关课题"耐多药结核病的快速检测技术研究"中采用该方法,并且取得了很大进展.现就PhaB检测方法、研究进展情况综述如下。

患者女性,14岁,维吾尔族,牧民.因右眼流脓性分泌物1年,于1992年5月来我院门诊就诊.患者1年前无明显诱因出现右眼流脓性分泌物,初为少量,晨起较多,后逐渐增多至持续流出,在当地医院诊断为"眼部炎症",给予口服抗生素治疗,初起有效,脓性分泌物减少,后又持续流出.为进一步诊治,来我院检查.眼部检查:右眼结膜充血,右内眦轻度肿胀,见隆起包块,有脓性分泌物流出,按压有干酪样物流出,但无局部骨片,右耳前后和右颌下触及3个黄豆大小淋巴结。

临床医生在使用无创正压通气(NIPPV)呼吸机治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)高碳酸血症性呼吸衰竭时需要准确了解吸氧浓度,以达到控制性给氧的目的.目前国内外多个厂家提供的多种无创正压通气机除美国伟康公司生产的双水平气道正压通气(BiPAP)Vision无创呼吸机能够调节氧浓度外,其他所有呼吸机都不能准确调节氧浓度[1].因此,很有必要对NIPPV时的供氧情况进行研究,寻找能够方便临床应用的氧浓度估计方法。

胸部疑难疾病的诊断一直是困扰胸科医生的重要问题。纵隔镜检查可活检获得病理组织以明确诊断。我们对21例诊断不清的纵隔疾病患者施行了纵隔镜手术，现总结如下。

中华医学会第六届全国呼吸病学学术会议于2004年9月17～20日在沈阳隆重召开.来自全国31个省、市、自治区的1 400多位代表出席了此次会议。

中华医学会第六届全国呼吸病学学术会议于2004年9月17～20日在沈阳隆重召开.来自全国31个省、市、自治区的1 400多位代表出席了此次会议。

编者按受卫生部委托,中华医学会于2004年4月9～11日在北京举办了严重急性呼吸综合征(SARS)研究新进展培训班.会议期间,针对2003年12月～2004年1月广东省发生的4例SARS病例,同时间北京、内蒙2例疑似病例,本刊编委会组织了部分专家召开了病例讨论会,期望通过正反两种类型病例的讨论,提高SARS的诊断与鉴别诊断水平,现将讨论会纪要整理发表,以飨读者。

近年的研究发现,在部分哮喘患者,特别是在重度哮喘患者的气道组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)和痰液中存在中性粒细胞增多,甚至有学者提出以中性粒细胞为主的气道炎症是部分哮喘的特征[1-3].中性粒细胞增多的机制、在哮喘发病中是否主动参与疾病过程,目前还不清楚.但最近的研究提示,中性粒细胞可能在哮喘的气道炎症甚至在气道重塑方面发挥重要作用[4,5]。

由于蠕虫感染时体内嗜酸粒细胞增多,其释放的一些酶(如组胺酶)可以降解由嗜碱粒细胞和肥大细胞释放的过敏性介质,所以人们推测嗜酸粒细胞在支气管哮喘(简称哮喘)发病过程中起到保护作用.随着对嗜酸粒细胞研究的进一步深入,人们开始注意到嗜酸粒细胞在哮喘发病过程中的负面作用:激活的嗜酸粒细胞释放颗粒相关蛋白引起气道上皮细胞损伤、黏液腺分泌增加、平滑肌收缩和微血管扩张[1].但并非所有哮喘患者的发病均与嗜酸粒细胞有关,因此对其作用应有客观的评价。

近年来,与其他学科一样,呼吸学科的科研工作也在不断发展和深化,但是不可否认的是目前呼吸病科学研究中存在值得引起大家重视的一些问题,反映在医学期刊论文存在的"三多三少现象":(1)实验室研究,特别是离体、动物实验研究多;而真正能够针对临床实际、解决临床实践中大家十分关注或感到棘手的研究太少.(2)重复性研究多,而真正有创新,尤其是高水平的原创性研究少.(3)一个单位和回顾性的科研论文多,而前瞻性多中心协作性科研论文少,特别是跨学科的协作研究更少.因此常常出现样本量较少、科研周期长等问题。