2013年 · 第93卷第32期

目的建立并优化大疱性类天疱疮（BP）抗BP180NC16A IgG抗体亚型的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法，评估其敏感性和特异性。方法通过在大肠杆菌中表达并纯化GSTBP180NC16A重组蛋白，建立抗BP180NC16A IgG亚型的ELISA检测方法，检测2009至2012年北京协和医院136例BP患者血清中抗体水平，以20名健康体检者血清作为对照；阳性界值为健康对照血清测得的均值加3倍标准差，高于该界值的判断为阳性。并利用Western印迹法检测其中4种抗体均阳性的患者血清，和ELISA方法进行比较。结果ELISA法检测的特异性IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的阳性界值分别为0.113、0.196、0.154和0.120，20名健康对照4种IgG亚型检测值均低于阳性界值水平，使本检测方法特异性较好。136例患者抗BP180NC16A IgG1、IgG2、IgG3及IgG4抗体亚型阳性率分别为67.6%（92/136）、45.6%（62/136）、50.7%（69/136）和54.4%（74/136）；其中4种IgG亚型均阳性者29例，占21.3%；至少一种IgG亚型为阳性者112例，占82.4%，即4种亚型综合敏感度为82.4%。而Western印迹检测20例经ELISA证实4种IgG亚型抗体均阳性的患者血清显示IgG1和IgG4阳性人数分别为15、14例。结论本研究建立的ELISA方法的特异性较好，敏感性尚需进一步提高。

目的系统评价肺血栓栓塞症（PTE）患者全因死亡相关危险因素。方法系统检索PubMed数据库、西文生物医学数据库、中国期刊全文数据库、中国生物医学数据库1995年1月至2011年5月公开发表的关于PTE全因死亡相关危险因素的研究文献，并查阅各个研究中引用的参考文献来补充。观察性研究（队列研究和病例对照研究）参考关于观察性研究方法学质量评估的建议进行评价；随机对照研究利用Jadad量表进行评价。应用Cochrane协作网提供的Rev Man 5.1软件，进行一致性检验，使用固定效应模型及随机效应模型进行合并，计算相对危险度（RR)，结果以RR值（95% CI）表示。结果最终纳入35篇文献，共计19 613例PTE患者，全因死亡率为0.5%~30.0%，平均（10.7±7.6）%，患者全因死亡率的相关危险因素分别为：右心功能不全[2.18（1.64~2.89)，P=0.000]，D-二聚体阳性[5.19（1.93~13.96)，P=0.001]，血清肌钙蛋白升高[4.01（2.77~5.81)，P=0.000]，低血压[2.76（1.25~6.09)，P=0.010]，恶性肿瘤[2.65（2.01~3.50)，P=0.000]，充血性心力衰竭[1.90（1.62~2.22)，P=0.000]，慢性肺脏疾病[1.40（1.18~1.66)，P=0.000]，心动过速[1.65（1.23~2.20)，P=0.000]，长期卧床[1.74（1.36~2.21)，P=0.000]，年龄>65岁[1.24（1.13~1.37)，P=0.000]，并且当多因素共存时死亡风险明显增加。结论PTE患者全因死亡相关危险因素包括D-二聚体持续阳性、血清肌钙蛋白水平升高、低血压、恶性肿瘤、右心功能不全、长期卧床、充血性心力衰竭、心动过速、慢性肺脏疾病、年龄>65岁等。

目的了解山西省2011年胃肠道间质瘤（GIST）的发病率、分布规律、临床特征等信息。方法通过医保检索及医院调查的方法收集山西省2011年1月1日至12月31日所有新诊断的及可疑GIST病例，所有病例石蜡切片后不经过染色及免疫组织化学处理由山西省肿瘤医院两位病理科医师重新分析诊断符合诊断标准的病例，分析GIST的发病率和地区及年龄分布情况等。数据采用计数资料描述。结果2011年山西省新发现GIST病例153例，发病率为4.3/100万（2011年山西省总人口35 932 786人)，中国年龄标化发病率3.6/100万，世界年龄标化发病率为2.8/100万。山西省各个地区发病人数不同，散在分布，太原和长治较多，均为25例。153例GIST患者中男83例（54.2%)，女70例（45.8%)，男女之比为1.19∶1。山西省统计局公布2011年人口普查男性人口数18 437 500人，女性人口数17 495 200人，男性发病率4.5/100万，女性发病率4.0/100万，男性发病率与女性发病率之间差异无统计学意义（P>0.05）。发病年龄24~ 79岁，中位年龄59岁，高发年龄段为55~59岁（33例）。153例GIST中139例有病变部位的记载，其中发生在胃88例（63.3%)，小肠21例（15.1%)，大肠7例（5.0%)，十二指肠6例（4.3%)，食管3例（2.2%)，胃肠道外14例（10.1%）。113例GIST有肿瘤最大径的记载，中位数（范围）为5.78（0.3~ 25.0）cm，≤2 cm 30例（26.5%)，>2~5 cm 33例（29.2%)，>5~10 cm 36例（31.9%)，>10 cm 14例（12.4%）。141例有细胞类型的记载，其中梭形细胞112例（79.4%)，上皮型11例（7.8%)，混合型18例（12.8%）。结论山西省GIST是一种散在的、发病率低的疾病，男女之间发病率差异无统计学意义，太原与长治发病例数相对较多。

目的评价并行体外循环下不停跳冠状动脉旁路移植术在冠状动脉左主干病变中的应用价值。方法回顾性分析郑州大学人民医院心外科2009年1月至2012年1月114例接受冠状动脉旁路移植术的冠状动脉左主干病变患者术前及围手术期临床资料，其中48例在传统的体外循环心脏停跳下手术（简称停跳组)，另66例在并行体外循环不停跳下手术（简称并循组）。结果术后并循组的临床效果优于停跳组，并循组体外循环时间、呼吸机辅助时间、重症监护病房停留时间、肌钙蛋白恢复时间均短于停跳组，差异均有统计学意义[（89±25）比（117±28）min，（15±14）比（27±19）h，（57±27）比（79±34）h，（6.2±1.8）比（7.0±2.4）d，均P<0.05]。两组血浆肌钙蛋白I在术前差异无统计学意义，但在转机后各时间点比较差异均有统计学意义[并循组比停跳组：转机0.5 h：（0.132±0.022）比（0.265±0.014）μg/L，转机1 h：（0.341±0.027）比（0.572±0.046）μg/L，术后1 h：（0.641±0.036）比（0.932±0.047）μg/L，术后6 h：（1.212±0.765）比（1.627±0.542）μg/L，术后24 h：（1.496±0.263）比（1.734±0.328）μg/L，均P<0.05]。结论并行体外循环下不停跳冠状动脉旁路移植术可以降低冠状动脉左主干病变患者术中风险，减轻心肌损伤，是一种安全、有效的手术方式。

目的探讨早期生长反应因子3（EGR3）在口腔鳞状细胞癌（简称鳞癌）组织及肿瘤细胞系中的表达及其对肿瘤细胞生物学行为的影响。方法收集2008年10月—2009年12月北京口腔医院口腔修复科及河南省肿瘤医院肿瘤外科收治的口腔鳞癌患者肿瘤组织样本、配对癌旁样本共20例，对照组口腔黏膜样本7例。明确EGR3在20例口腔鳞癌肿瘤组织、癌旁组织及人口腔鳞癌细胞系KB和Tca-8113的表达情况。构建EGR3全长基因的表达质粒，转染并观察其对口腔鳞癌细胞系Tca-8113细胞增殖、细胞凋亡作用的影响。结果EGR3 mRNA在口腔鳞状上皮细胞及癌旁组织相对表达量较高，分别为2.108±0.996和1.721±1.196，在肿瘤组织及口腔鳞癌细胞系中表达量较低，分别为0.007±0.005和0.007±0.001（均P<0.05）。转染48 h后，EGR3转染组肿瘤细胞Tca-8113增殖指数显著低于空质粒对照组（0.35±0.11比0.82±0.21，P<0.05)，Tca-8113中晚期凋亡率（膜联蛋白V/碘化丙啶双阳性细胞群）与空质粒对照组相比差异具有统计学意义（23.12%±6.65%比5.96%±0.98%，P<0.05）。结论EGR3在口腔鳞癌呈现低表达或表达缺失，EGR3的过表达可显著抑制口腔鳞癌生长、促进肿瘤细胞的凋亡。

目的评估新型双极射频装置Habib 4X在肝肿瘤切除术中的价值。方法回顾性分析从2010年3月至2011年7月在浙江大学第二附属医院手术治疗的98例肝肿瘤患者的临床资料，并根据所行术式分为Habib组（44例）和对照组（54例，采用传统手术方法）。观察评估指标为：肝肿瘤切除时间、Pringle′s肝门阻断法使用、术中出血量、输血量、术后肝功能恢复及术后并发症、病死率、复发情况等。结果Habib组和对照组平均切肝时间分别为（67±22）和（93±23）min，差异有统计学意义（P=0.000）。Habib组需要肝门阻断率低于对照组[22.7%（10/44）比57.4（31/54)，P=0.001]，平均肝门阻断时间也较短[（7±2）vs（18±6）min，P=0.001]。Habib组平均出血量显著低于对照组[（243±132）比（500±421）ml，P=0.002]。术后Habib组肝功能恢复优于传统组，且Habib组术后无住院死亡患者，术后随访18个月无切缘复发病例。结论Habib 4X双极射频预凝固辅助肝肿瘤切除可以显著减少手术出血量，安全可靠且缩短手术时间，减少肝门阻断时间甚至无需阻断肝门，最大程度的减少了对肝功能的影响。

目的分析食管异物嵌顿后并发症发生的相关影响因素及软式内镜的治疗效果。方法回顾性分析北京大学第三医院消化科2005年1月至2012年12月经北京大学第三医院消化科软式内镜下治疗的101例食管异物病例资料，其中男52例、女49例，年龄（49±21）岁。所有患者在行咽部局部麻醉并禁食4 h以上后于消化科内镜中心行软式内镜下治疗。t检验或χ2检验比较组间差异。结果（1）异物嵌顿于食管上段及中段占到了所有食管异物的87.1%（88例)，异物嵌顿后至异物取出的间隔时间在食管上、中、下段差异无统计学意义（P>0.05）。（2）82.2%（83例）的食管异物患者在24 h内就诊，99.0%（100例）的食管异物患者在48 h内就诊。嵌顿的异物中食物类（包括食物团块、鱼刺、鸡骨及枣核）占到了76.2%（77例）。（3）上消化道造影诊断食管异物阳性率91.3%（21/23)，胸部或腹部X线片诊断食管异物阳性率为24.1%（7/29)，软式内镜取食管异物成功率94.1%（95例）。（4）所有异物中义齿取出难度最大，11例义齿嵌顿中4例失败。（5）并发症（除轻度划伤）发生率为48.5%（49例)，穿孔率为3.0%（3例）。异物嵌顿食管后是否出现并发症与患者年龄、嵌顿位置、嵌顿时间、异物大小均无关（均P>0.05)，而与异物是否刺入食管壁、合并食管狭窄、异物种类有关（均P<0.01）。异物嵌顿食管壁后是否出现穿孔则与上述因素均无关。结论异物在嵌顿食管后尤其是边缘锐利、刺入食管壁的异物，应尽可能在24 h内取出。

目的制订肿瘤患者手术备血策略（SBOS)，探讨肿瘤患者手术备血、用血的影响因素。方法回顾性分析2002年10月至2012年5月中国医学科学院肿瘤医院手术备血患者的22 643人次备血申请资料和7430人次手术用血资料，并对入选资料的患者信息和检验结果进行分析。结果手术输血率为32.81%（7430/22 643）。根据患者手术部位和手术治疗备血、输血数据，建立肿瘤患者SBOS：用血百分比<30%的手术归入血型定型和抗体筛选，不用备血；其余类型手术采用交叉配血，备血量主要取决外科患者具体情况。多因素Logistic回归分析显示肿瘤患者的性别、血红蛋白、红细胞压积、血小板、总蛋白、白蛋白对手术是否输注红细胞有影响（OR=0.797、9.614、1.949、0.437、0.444、2.038，均P<0.05）；肿瘤患者的性别、血红蛋白、红细胞压积、活化部分凝血酶时间、凝血酶原时间、白蛋白、总蛋白对手术是否输注血浆有影响（OR=0.851、1.367、1.801、1.652、2.922、2.224、1.362，均P<0.05）。结论肿瘤患者手术备血，应充分考虑患者的血常规检查结果、凝血功能、蛋白水平的影响，合理进行备血申请和输血，保证用血科学、安全。

目的分析腹部创伤并严重腹腔感染患者的腹腔脓液细菌菌群分布及体外药物敏感情况。方法2001年1月至2012年5月南京军区南京总医院全军普通外科研究所收治的腹部创伤并发严重腹腔感染病例41例，获得腹腔脓液标本共123份，回顾性分析微生物实验室菌群及药敏结果，输入WHONET 5.4软件进行耐药性分析。结果41例患者腹腔脓液标本共分离出297株菌，平均（7.2±2.3）株。革兰阳性细菌占44.1%（131/297)，革兰阴性细菌占55.2%（164/297)，真菌占0.7%（2/297）。分离率前5位的细菌依次为大肠埃希菌（72株，24.2%）、金黄色葡萄球菌（66株，22.2%）、肺炎克雷伯菌（34株，11.4%）、粪肠球菌（28株，9.4%）和铜绿假单胞菌（21株，7.1%）。大肠埃希菌对头孢哌酮和亚胺培南的敏感率较高，均超过90%，分别为91%和98%。革兰阳性球菌对替考拉宁和利奈唑胺的敏感率均为100%，金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感率为100%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南的敏感率为100%、对阿米卡星的敏感率为79%。铜绿假单胞菌对环丙沙星敏感率最高（90%）。结论腹部创伤并严重腹腔感染患者腹腔感染菌尽管以革兰阴性菌为主，但革兰阳性菌，特别是金黄色葡萄球菌感染比例也较高；头孢哌酮、环丙沙星、亚胺培南、万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺具有较高的抗菌活性。

目的了解乳腺癌雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER-2）免疫组织化学检查结果的可靠性并探讨影响因素。方法收集2004至2010年北京大学肿瘤医院148例浸润性乳腺癌治疗前肿瘤穿刺标本，重新切片染色（ER：SP1，PR：1E2，HER-2： 4B5)，自动化影像分析系统Ariol MB-8及一位高年资病理医师分别复核ER、PR与HER-2表达水平，并与原始报告比较。结果原始报告与自动化影像复核报告的一致率分别为ER：76.35%，PR：49.32%，HER-2：63.51%，Kappa值分别为0.12（P=0.020）、0.18（P=0.002）、0.08（P=0.200）；高年资病理医师复核报告与自动化影像复核报告的一致率分别为ER：93.92%、PR：81.08%、HER-2：76.35%，Kappa值分别为0.77、0.67、0.32（均P<0.001）。结论对于ER、PR、HER-2的表达，原始报告与自动化影像复核报告的一致性差。抗体，染色方法及读片方法差异可能是导致两者不一致的主要原因。

目的探讨气道剪应力（SS）作用下黏蛋白（MUC）5AC胞外极向分泌的主要介导分子。方法常规培养16HBE细胞，使用Stata软件产生随机数字随机分为5组并分别进行如下处理：A组（对照组）：10%胎牛血清（FBS）+DMEM高糖培养液继续培养，不再予任何刺激；B组（SS组）：只给予节律性旋转装置产生的SS刺激；C组[SS+Rac-1特异性抑制剂（NSC23766）组]：给予SS刺激前30 min，加入NSC23766（10μmol/L）；D组（SS+微丝肌动蛋白解聚剂组）：给予SS刺激前30 min，加入细胞松弛素D（100μg/L）；E组[SS+皮层肌动蛋白结合蛋白（Cortactin）小干扰RNA（siRNA）转染组]：用成功转染Cortactin-siRNA的细胞予以SS刺激。每个实验组设6个复孔，重复3次实验用于统计学分析。采用节律性旋转装置模拟呼吸时气流对气道产生的SS作用。用Cortactin-siRNA转染抑制Cortactin功能。酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞培养上清液中MUC5AC的胞外分泌量；Western印迹法检测Cortactin及其磷酸化（p-Cortactin）水平和转染效果；激光共聚焦显微镜观察微丝肌动蛋白的聚合情况。结果Cortactin-siRNA转染成功。A、B、C、D、E组MUC5AC相对含量分别为0.210±0.013、0.631±0.025、0.473±0.112、0.330±0.067、0.272±0.019，B组均显著高于其他各组（P=0.000、0.043、0.000、0.000）；B组Cortactin相对表达水平为0.670±0.048，显著高于E组的0.132±0.014（P<0.01)，但与A、C、D组的0.641±0.016、0.622±0.012、0.653±0.027比较差异均无统计学意义（均P>0.05）；B组p-Cortactin相对表达水平为0.582±0.067，显著高于A、C、E组的0.131±0.011、0.393±0.045、0.170±0.016（P=0.000、0.021、0.000)，而D组（0.511±0.029）与B组差异无统计学意义（P=0.246）。结论Rac-1、Cortactin和微丝肌动蛋白是气道SS作用下MUC5AC胞外极向分泌的主要介导分子。

目的对比分析分离人脐带间充质干细胞（MSCs）常用方法的效果，筛选比较高效的分离方法。方法采集足月剖宫产手术胎儿的脐带组织（n=15)，充分洗涤后去除3条脐血管及脐带外膜，将其剪碎至1 mm3的组织块，洗涤离心确定组织块的总体积，平均分为4组，分别采用组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法，分离获得人脐带MSCs，行锥虫蓝染色计数细胞；倒置相差显微镜观察细胞形态；使用免疫荧光染色检测细胞表面标志物CD105、CD90、CD73、CD31、CD44、CD45、人类白细胞抗原Ⅰ（HLA-Ⅰ）和人类白细胞抗原Ⅱ类分子（HLA-DR）的表达情况，进行细胞鉴定；噻唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖曲线。结果组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法4种方法均可分离获得干细胞，但获得细胞的数量和增殖能力不同。4种方法获得的细胞数量分别为（5.44±0.21）×105、（4.03±0.24）×105、（4.91±0.33）×105和（5.94±0.40）×105，胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著多于其他3种方法，差异均有统计学意义（均P<0.05）。组织块法种植后第9~ 11天观察到细胞在组织块周围生长，而其他3种方法种植后第2天即可见贴壁生长的细胞。4种方法细胞达到90%~ 95%融合的时间分别为（18.5±3.5）、（8.0±1.0）、（7.5±1.5）、（3.5±0.5）d，胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著短于其他3组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。组织块法原代细胞的形态多为多角形，不规则，细胞的体积较大，单纯胶原酶Ⅱ消化法和胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法原代细胞的形态均较短小，而胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法细胞形态呈细长的梭形。4种方法得到的细胞均阳性表达CD105、CD90和CD73，弱表达HLA-Ⅰ，不表达CD31、CD45和HLA-DR。胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法细胞的增殖速率显著快于其他3种方法。结论胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法是一种高效的提取人脐带MSCs的方法。