2008年 · 第88卷第46期

产前诊断是一项高风险服务,疾病情况复杂、检测过程环节多,稍有疏漏就会出现差错.产前基因诊断有更强的针对性,不是通常意义上的确定胎儿是否异常,而是确定胎儿是否获得与先证者一样的基因型.本文就导致产前基因诊断差错的因素,从不同的环节给予分析。

线粒体病是一组有相似表现和共同发病机制、涉及各年龄段、各组织器官的重要缺陷,主要由位于核外的线粒体基因组突变所引发.这一由16 569bp环状双链DNA构成的线粒体基因组(mtDNA)是最早被全部测序的基因组之一,虽然在结构上仅编码37个基因,包括2个rRNA,22个tRNA和13个构成呼吸链的多肽,但具有与核基因组不同的一些特点,如多拷贝、无内含子、不等复制、母系遗传、变异的异胞质性(heteroplasmy)和阈效应(threshold effect)等.由于线粒体内膜内的高氧化环境,加之并无蛋白包裹的环状mtDNA易受损伤,各种突变累积很多,导致各种以能量缺乏为核心表现的疾病.因为不同组织器官对能量依赖程度不同,如脑、心、骨骼肌等为高能量需求组织,所以它们的线粒体功能异常发生的阈值较低,从而对线粒体代谢障碍更为敏感.由此延伸的很多研究涉及物种进化、人类起源和迁移、肿瘤发生、DNA修复病、运动损伤和老化[1]。

目的 分析一个汉族x-连锁鱼鳞病家系中类固醇硫酸酯酶(STS)基因的致病突变,明确家系中3名女性可能携带者身份,并比较不同方法在STS基因缺失突变检测中的应用.方法 采用普通PCR方法,对家系巾男性先证者进行STS基因10个外显子的扩增,明确是否存在缺失.采用多重荧光定量聚合酶链反应(QF-Pen)方法对x-连锁鱼鳞病家系部分女性成员进行STS基因定量分析.并应用荧光原位杂交(FISH)技术进行验证.结果 普通PCR方法检测到先证者STS基因第1～10号外显子缺失;多重QF-PCR方法榆测到先证者母亲为STS基因缺失突变携带者,先证者妹妹及表妹均不存在该缺失.FISH检测结果与QF-PCR结果相同.结论 对于STS基因完全缺失型患者及女性携带者,多重QF-PCR和FISH两种方法均能有效检测,但多重QF-PCR方法对STS基因缺失的检测操作方便、自动化程度高、检测通量高。

目的 研究携带A3243G突变的线粒体脑病-乳酸酸中毒-卒中样发作(MELAS)综合征患者及其母系亲属的外周血、尿、毛囊、唾液和部分患者的肌肉组织A3243G基因突变率,找到用于检测突变率更敏感的组织,建立更佳的、无创性的检查手段.方法 收集25例MELAS患者及其母系亲属33例的外周血、尿、毛囊、唾液和部分患者的肌肉组织提取DNA,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测各组织中A3243G突变,根据酶切产物电泳条带密度值问的比例计算突变型线粒体DNA的含量,比较各组织A3243G突变率的差异.结果 25例患者外周血、尿、毛囊、唾液均榆测到A3243G突变,尿液中A3243G突变率(62%±9%)明显高于外周血巾的突变率(36%±10%)(t=-11.13,P<0.01).5例患者进行了肌活检,肌肉突变率44.9%～75.1%,尿液中A3243G突变率和肌肉中A3243G突变率存在正相关,(r=0.900,P=0.037).33例母系亲属中有28例在至少一种组织中检测到A3243G突变,尿液中A3243G突变率33.0%(5.O%-70.4%)明显高于外周血中的突变率8.0%(0-33.3%)(z=-4.197,P<0.01).患者及其母系亲属唾液和毛囊组织中A3243G突变率与外周血相比筹别均不大.结论 在MELAS患者及其母系亲属巾,尿液中A3243G突变率均明显高于外周血,尿液A3243G突变率分析可能是优于外周血线粒体分析的一种无创性方法。

目的 探讨我国不同临床类型的线粒体脑肌病的线粒体DNA(mtDNA)突变特点以及基因型和表型之间的相关性.方法 对经临床和病理诊断为线粒体肌病/线粒体脑肌病的97例患者,提取其肌肉和/(或)白细胞mtDNA,用Southern杂交检测mtDNA的大片段缺失、以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测常见类型的点突变(包括A3243G、A8344G、T8993G、　T8993C、T3271C突变)、并对部分患者进行mtDNA伞长测序寻找有无其他的突变位点.结果 97例患者中有81例患者存在mtDNA突变,突变类型包括单一的大片段缺失21例,多发的大片段缺失4例,A3243G突变43例,A8344G突变6例,T8993G、T8993C、T3271C突变各1例.KSS/CPEO与单发的mtDNA大片段缺失相关、MELAS与A3243G点突变、MERRF与A8344G点突变、母系遗传的Leigh　病与8993位点的突变相关.另外在4例线粒体肌病患者中发现细胞色素b编码基因A15316G　(T194A)、G15221A(D159N),ATPase6编码基因G9196A(D224N)和16SrRNA C2835T突变各1例.结论 国人不同类型线粒体肭肌病的mtDNA突变类型与国外外的报道道基本一致.虽然线粒体脑肌病的临床表刑和基因型之间有一定的相关件,但不同的基因型和临床表型之间也存在一定的交叉,反映了线粒体病的异质性特点。

目的 检测甲基化特异性的多莆连接依赖的探针扩增(MS-MLPA)方法的敏感性和可靠性,以寻求一种简单、重复性好、精确度高的用于Prader-Willi综合征(PWS)和Angeiman综合征(As)的基因诊断方法.方法 DNA提取试剂盒提取基因组DNA,然后,用DNA纯化试剂盒进行纯化.用MS-MLPA试剂盒Me028对临床诊断的2例PWS和4例AS患儿进行基因检测分析.扩增的PCR产物用测序仪ABI 310进行基因型分析,最终所得数据用GeneMarker软件进行分析.MS-MLPA的检测结果用甲基化特异性聚合酶链反应进行验证.结果 4例AS中3例源于母源染色体15q11～q13缺失,1例源于父源染色体15q11～q13单亲二倍体或印记中心缺陷;2例PWS中1例源于父源染色体15q11-q13缺失,1例尚不能明确原因.结论 MS-MLPA是一种简单、高效、准确、可靠的基因检测方法。

目的 探讨多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术在脊髓性肌肉萎缩症(SMA)分子诊断中的应用.方法 从13例SMA患者、31名患者父母的外周血标本和10份胎儿羊水标本,以及50名正常人外周血标本中提取基因组DNA,应用MLPA技术进行分析,同时也行常规聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和位点特异性PCR分析.结果 MLPA分析结果与常规PCR-RFLP和位点特异性PCR结果相符:13例患者的运动神经元存活基因(SMN)1基因均呈纯合缺失,SMN2基因拷贝数的增加与SMA表型的严重程度(从I型到Ⅲ型)存在显著性差异(P<0.05);31名患者父母SMN1基因1拷贝的人数为29(占93.5%),2拷贝的为2(占6.5%);50名正常健康成人SMN1基因1拷贝的人数为1(占2.0%),2拷贝的为48(占96.O%);SMA患者父母组和健康正常成人组之间的SMN1基因拷贝数存在显著件差异(P<0.01);10例胎儿中2例存在SMN1的纯合缺失.结论 MLPA是一种准确可靠的SMA分子诊断新方法。

目的 分析缬更昔洛韦治疗造血干细胞移植(HSCT)后患者巨细胞病毒(CMV)血症的疗效和安全性.方法 选择2007年l至7月行HSCT的19例移植后CMV血症患者进行前瞻性研究.移植后应用定量多聚酶链反应(PCR)定期进行病毒DNA监测,CMV-DNA阳性,定量>6.0×102拷贝/ml的患者应用缬更昔洛韦900 mg 2次/d诱导治疗14 d,然后900 mg 1次/d维持治疗14 d.结果 HSCT后发生CMV血症的中位时间为移植后第40(20-83)天,诊断时CMV-DNA中位数3.346×103(9×102～4.2×103)拷贝/ml.缬更昔洛韦治疗的总有效率为94.7%,14 d转阴率84.2%.治疗前后CMV-DNA每日降低中位数0.084(0.045-0.25)10g 10拷贝·ml-1·d-1.常见不良反应为贫血、血小板下降和白细胞减少,且多为轻度;随访6个月无1例发展至CMV病.结论 缬更昔洛韦用于治疗HSCT后患者CMV血症安全有效。

目的 分析64排螺旋CT对慢件完全闭塞病变的介入术前评估和预测价值,以及其对介入治疗的术中指导性作用.方法 入选明确慢性完全闭塞病变患者,行64排螺旋CT血管造影和冠状动脉造影检查,对比分析两种手段测得闭寨段长度、钙化识别率.接受介入治疗的患者,分析病变特征对介入成功与否的预测作用.对所有闭塞病变血管进行三维重建,利用得到的图像指导介入治疗过程.结果 共入选15例患者,确诊17个慢性完全闭塞病变.螺旋CT血管重建可以显示所有17个闭塞病变的长度;螺旋CT的钙化识别率为76.5%,明显高于冠脉造影的钙化识别率(41.2%);螺旋CT可以对钙化处血管进行横断而截切,确定钙化程度<50%有3个,≥50%有10个.其中,11例患者的12个完全闭塞病变接受介入治疗,6例成功,6例失败.单因素分析展示,病变长度、闭塞近端有无分支、桥侧枝形成、闭塞断端形态以及造影提示的钙化情况与介入成功与否没有明显的相关性;失败组钙化而积I>50%的比例明显高于成功组(83.3%vs 16.7%,P=0.05).所有的完全闭塞病变均可以通过CT冠脉重建技术得到三维血管图像.结论 64排螺旋CT具有较高的钙化病变识别能力,可以进行冠脉血管三维图像重建,有效指导介入治疗。

目的 探讨候选抑癌基因凹陷蛋白(Caveolin)-1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与HCC侵袭、转移的关系.方法 对123例HCC标本以及MHCC-97L和MHCC-97H肝癌细胞株进行实时荧光PCR法、免疫组化法及Western印迹法检测Caveolin-1 mRNA及蛋白表达,分析其表达与肿瘤侵袭、转移性间的关系.结果 Caveolin-1在肝癌组织中较癌旁组织表达明显下调(P<0.05);HCC 中的表达水平与大/小肝癌(≥5 em或<5 cm)、AFP表达水平、有无大血管侵袭、肿瘤单发或多发及pTNM分期5个因素均呈显著负相关(P<0.05),其在MHCC-97H细胞株中的表达显著低于MHCC-97L(P=0.000);Caveolin-1与HBx表达显著负相关(P=0.044).结论 Caveolin-1表达与HCC侵袭转移密切相关,其表达下调,预示HCC的预后不良;有可能存在HBx蛋白下调Caveolin-1表达的机制。

目的 评价头颈部小细胞神经内分泌癌的治疗效果,寻找最佳治疗方案.方法 回顾性分析1983年10月至2006年8月我院收治34例头颈部小细胞神经内分泌癌患者,男性21例,女性13例,年龄17～71岁,中位年龄53岁.单纯手术5例,单纯放疗7例,手术加放疗7例,手术加化疗3例,放疗加化疗10例,术后放疗加化疗2例.随访截止于2007年8月1日.结果 皮肤的小身细胞神经内分泌癌预后较好.局部复发7例,其中单纯手术2例,手术加放疗2例,手术加化疗1例,放疗加化疗2例;颈部复发1例,为手术加放疗的患者;颈部淋巴结转移4例,其中单纯手术2例,手术加化疗1例,放疗加化疗1例;远地转移11例,其中单纯手术2例,单纯放疗2例,手术加放疗4例,放疗加化疗3例.中位牛存时间24个月,总的3年和5年累积生存率分别为65.37%和35.95%.结论 头颈部小细胞神经内分泌癌预后较差,不同部位的小细胞神经内分泌癌的预后不同,治疗方式也有所不同,多采用以放疗和化疗为主的综合治疗,手术可作为挽救性治疗措施。

目的 研究环氧合酶(COX)-2和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在胃癌中的表达,分析其与临床病理特征及生存期的关系.方法 用绀织芯片技术和免疫组化法检测甘肃省武威地区192例胃痛组织、56例癌旁组织中COX-2、uPA的表达,免疫组化双染测微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(MLD).取30例当地同期胃镜检查的正常胃黏膜标本作为对照.结果 COX-2在胃痛和癌旁组的阴性率(67.7%和62.5%)均显著高于对照组(40%,P<0.05),且与浸润深度和MVD有关(均P<0.05).uPA在胃癌、癌旁和对照组各组阳性率比较,差异均有统计学意义(78.1%、44.6%、6.7%,均P<0.01),且与淋巴结转移、浸润深度、Lauren分型、分化程度、MLD、MVD有关(P<0.05或<0.01).COX-2和uPA表达旱正相关(r=0.167,P=0.021).uPA阳件组平均生存期显著低于阴性组[(38±4)个月vs(54±6)个月,P<0.05],COX-2和uPA双阳性组平均牛存期显著低于单阳性组和双阴性组[(27±3)个月vs(58±4)个月,P<0.01].结论 胃癌中COX-2与uPA高表达,二者的表达呈正相关;COX-2和uPA参与胃痛发牛发展的早期过程,uPA的表达与生存期密切相关。

目的 调查行冠状动脉旁路移植术(CABG)患者手术前、后抑郁症的发生和变化以及生存质量(QOL)情况,并研究抑郁症对CABG患者生存质量的影响.方法 138例CABG患者在手术前一周内,术后1、3、6个月进行Beck抑郁问卷的自我评测并计分;并在手术前一周内,术后1、6个月采用SF-36量表测评患者的生存质量.根据患者是否存在抑郁症将患者分为抑郁组和非抑郁组,对比分析两组间术前、术后的生存质量状况.结果 术前抑郁症患者59例(42.7%),其中中度22例(15.9%),季度7例(5.1%);术后旱逐渐下降趋势;SF-36量表的生理健康内容和心理健康内容在术后均有不同程度改善;比较术后牛存质量评分发现抑郁组社会功能、情感职能、精神健康和躯体疼痛分项评分显著低于非抑郁组,其他分项和总评分差异无统计学意义,但平均值均低于非抑郁组.结论 行CABG的患者共病抑郁者在术后生存质量改善上明显低于无共病抑郁的患者,尤其是社会功能、情感职能、精神健康和躯体疼痛方面,需要引起重视。

目的 探讨早期胰岛素治疗对2型糖尿病大鼠骨骼核因子(NF)-κB炎症信弓通路的影响.方法 建立高脂喂养联合小剂馈链脲佐菌素诱导的2型糖尿病SD大鼠模型.糖尿病大鼠随机分为早期和晚期治疗组:早期治疗在血糖升高后3 d 开始,给予中效胰岛素或格列奇特治疗3周;晚期治疗在血糖升高后4周开始,给予中效胰岛素治疗3周.血糖控制目标足随机血糖<8 mmol/L.通过实时定量PCR和Western印迹检测骨骼肌葡萄糖转运子4(Glut4)基因和蛋白表达,胞质IkBα蛋白表达,肿瘤坏死因子(TNF)-αoL、白细胞介素(IL)-6、IL-1β基因表达,ELISA测定NF-κB P65 DNA结合活性.结果 糖尿病大鼠骨骼肌Glut4 mRNA表达水平比正常对照下降59%,膜上Glut4蛋白水平下降69%.与未治疗组比较胰岛素和格列奇特治疗使Glut4 mRNA表达增加了17%和13%,膜上蛋白表达增加23%和10%(0.12±0.02 vs 0.21±O.07和0.16±0.03,P<0.05),并且使胞质内Glut4蛋白水平降低.糖尿病大鼠骨骼肌IκBα蛋白比正常对照降低(0.28±0.02 vs 0.36±0.06,P<0.05);NF-κB P65 DNA结合活性增加,TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达上调.早期胰岛素和格列奇特治疗使IκBα蛋白比未治疗组表达增加(0.41±0.06和0.39±0.05 vs 0.28±0.02,P<0.05),NF-κBP65 DNA结合活性下降,骨骼肌TNF-α.基因表达下降.结论 早期胰岛素治疗可抑制2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞活化的NF-κB信号通路和炎症因子,其机制和早期代谢控制改善糖脂毒性有关。

目的 建立高灵敏、特异的酶联免疫分析法测定人脂肪细胞瘦素的分泌.方法 制备兔抗人瘦素多克隆抗体和鼠抗人瘦素单克隆抗体,建立生物素一亲和素放大酶联免疫分析方法(BAELISA),观测原代培养的人网膜前脂肪细胞分化过程中瘦素的分泌及曲格列酮对其影响.结果 BA-ELISA方法灵敏度可达0.03 ng/ml,曲线工作范围0.05～5 ng/ml,批内批间变异系数分别小于7.4%和9.3%,平均回收率97.8%.测定经柱层析分离的混合人血清或脂肪细胞培养上清,仅显示单峰游离瘦素.观测到人网膜前脂肪细胞随诱导分化成熟而瘦素分泌量递增;10 umol/L曲格列酮可使瘦素的分泌峰值增加1倍.健康成人空腹血清瘦素水平女性显著高于男性(均值:7.6 ng/ml vs 3.2 ng/ml,P<0.001),与体重指数均有较强的相关性(r=0.61、0.67;P<0.001).结论 建立了高灵敏的BA-ELISA测定游离瘦素水平,尤其适于瘦素浓度低的临床血样本测定及基础研究之用。

目的 采用比较蛋白质组学技术研究胆固醇结石患者胆囊汁汁的胆汁泡相与微胶粒相的蛋白质表达谱的差异,为探索胆石成因提供实验依据.方法 密度梯度超速离心法制备胆汁泡相和微胶粒相,提取蛋白,构建相应的蛋白质表达谱,ImageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息,质谱鉴定差异表达蛋白.结果 胆汁泡相与微胶粒相总蛋门浓度分别为(1.5358 4±0.0682)mg/ml、(7.1222 4±0.2022)mg/ml(P<0.01).两组组内蛋白质平均匹配点数分别为120 4±24和198 4±37,组间72 4±16个蛋白质点相互匹配,匹配率为45.30%.胆汁泡相与微胶粒相成功鉴定出差异蛋白质点8个,泡相中6个点表达上调,2个点表达下调.视黄醇结合蛋白(RBP)和白蛋白(HSA)丰度差异为免疫印迹法证实.结论 初步建立了胆同醇结石患者胆囊胆汁的胆汁泡相和微胶粒相蛋白表达谱,分析、鉴定了差异蛋白点,为筛选胆固醇结石形成关键调控子提供依据。

目的 研究REZ-1人工耳蜗电极对阻抗与电极对在鼓阶中位置和刺激频率的关系.方法 6例新鲜颞骨标本植入REZ-1人工耳蜗电极后,采用交流信号源,串联一个1 kΩ的标准电阻,分别测量标准电阻和电路中总的电压,从而计算出电极之间的阻抗.分别测量电极顶端到尾端相邻电极环、相隔一个电极环之间的阻抗,刺激频率分别采用2、10、100 Hz和1、10 kHz进行测试.结果 相邻电极对的阻抗从顶加回川到底回小断减小(线性同归,F=198.97,P<0.01).相隔电极对的阻抗从顶回到底回不断减小(线性同归,F=126.35,P<0.01).电极对阻抗随着刺激频率的增大而减小.结论 相邻电极对的阻抗和相隔电极对的阻抗从顶回到底回减小.刺激频率增大时阻抗减小。

临床上很多种疾病都可以导致骨骼肌萎缩,如脓毒症、癌症恶病质、严重创伤、烧伤、心肺功能小全等.骨骼肌萎缩不仅影响患者运动和康复,而上上易发生肺部并发症、下肢深静脉血栓、免疫功能低下等并发症。

血脂水平已被临床广泛用于评估心血管事件风险.通常,我们会要求患者在进行血脂榆测前至少禁食8 h.然而很多门诊患者常忽略了这点.正常饮食对血脂检测的影响有多大,其数据是否可用米评估心血管事件风险,丹麦哥本哈根大学医院的Nordestgaard教授等在<循环>杂志(Circulation,2008,118:2047-2056)上发表文章,通过对哥本哈根一般人群研究(Copenhagen General Population Study)及哥本哈根城市心脏研究(Copenhagen City Heart Study)中共4万余个体进行横断面研究验证了这一假设。

2008年全国小儿心血管疾病学术会议于2008年9月24至26开在山东省济南市召开.会议南中华医学会儿科学分会心血管学组组长、长江学者杜军保教授主持,来自全国27个省、市、自治区及香港、澳门特别行政区的222位儿科临床工作者及研究人员参加了会议,共收录论文330篇,其中大会交流71篇,专题讲座16篇。

目的 探讨和比较双气囊小肠镜(DBE)与腹部CT对小肠疾病的诊断价值.方法 2007年1月至2008年1月,共对70例疑患小肠疾病者行78次DBE检查,所有患者同时行CT榆查.两组资料行配对四格表资料的X2检验或Fisher精确概率检验.结果 70例患者DBE诊断阳性率明显高于CT[57.1%(40/70)vs 31.4%(22/70),P<0.01].对于黏膜面的炎症、糜烂等病变,DBE诊断阳性率高于CT,差异均有统计学意义(血管畸形4/6 vs 0/6,小肠憩室1/3 vs 0/3,过敏性紫癜2/2vs 0/2,非特异性炎2/2 vs 0/2,P<0.01);而对于肿瘤和克罗恩病,DBE的诊断阳性率与CT相比,差异并无统计学意义(P>0.05).结论 DBE可作为小肠疾病较好的检查方式,CT可为DBE检查途径提供参考,且可了解小肠壁及肠外情况.DBE和CT在检查小肠疾病时可优势互补,建议对疑患小肠疾病者进行联合检查。