2008年 · 第88卷第08期

手术治疗是乳腺癌治疗的重要手段,术后预防复发转移的辅助化疗、内分泌治疗、分子靶向治疗和术前新辅助治疗的合理应用,显著提高了可手术乳腺癌患者治疗效果,赢得更多治愈的机会。

恶性肿瘤(肿瘤)微环境由肿瘤细胞和其周围纤维母细胞、上皮细胞、固有及特异性免疫细胞、肿瘤血管和淋巴管结构的组成细胞、组织特异性的间叶细胞及它们的表达产物、代谢物质等成分构成,是肿瘤发生、生长的局部环境,除肿瘤细胞以外的所有成分统称为肿瘤间质。

目的 在动物水平和人体水平评价质子磁共振波谱分析(1H MRS)定量检测肝脏脂肪含量的稳定性和精确性,初步建立应用1H MRS无创性定量检测肝脏脂肪含量的方法.方法 建立Wistar大鼠脂肪肝动物模型,应用1H MRS测定并计算肝脏脂肪峰与水峰的峰下面积比值,与肝组织病理切片脂肪染色测定的脂肪含量百分比进行比较,应用1H MRS测定方法对11例脂肪肝患者进行初步检测评价.结果 应用1H MRS在高脂饮食组大鼠肝脏内检测到了脂肪峰,在脂肪肝患者中亦检测到稳定的脂肪峰.动物水平,脂肪峰与水峰的峰下面积比值(0.22)与病理学测定肝脏脂肪含量(5.45%)呈高度正相关(r=0.899,P＜0.001);人体水平,脂肪含量(45%)与面积比值(0.45)呈高度正相关(r=0.814,P＜0.001).结论 在动物水平建立了应用1H MRS定量检测肝脏脂肪含量的方法,并在人体水平验证其与病理学测定之间相关性良好。

目的 探讨联合半肝切除治疗肝门胆管癌的优势以及降低并发症和病死率的对策.方法 回顾性分析1998年-2006年北京大学临床肿瘤学院外科收治并手术治疗的50例肝门胆管癌病例.结果 手术治疗50例中,41例获得切除,切除率56.9%,RO根治性切除22例(53.6%).实施术前PTCD减黄30例.肝门胆管癌联合半肝切除19例,其中RO根治性切除14例(73.6%),手术死亡2例(10.5%).全组并发症发生率62%,半肝切除组78%.随访半肝切除组1年生存率57.1%,2年生存率27.3%.结论 联合半肝切除治疗肝门胆管癌能够提高手术的根治性改善预后,增加术中显露,简化了切除后重建,是肝门胆管癌尤其是Bismuth Ⅲ～Ⅳ型的安全而有效的术式.对于需联合大范围肝切除的肝门胆管癌病例术前减黄是必要的。

目的 探讨前列地尔预防断流术后门静脉系血栓形成的疗效.方法 选择2004年7月至2005年8月以肝硬化,门静脉高压症接受断流术治疗的76例患者,随机分为两组.治疗组40例,术后第3天始静脉滴注丹参注射液和前列地尔2周.对照组36例,术后第3天静脉滴注丹参,口服肠溶阿司匹林.定期观察PLT、PT、肝功能、门静脉血栓形成及腹水情况.结果 术后治疗组与对照组比较,门静脉系血栓形成发生率差异有统计学意义(P＜0.05);肝功能恢复差异有统计学意义(P＜0.05).但血小板恢复差异无统计学意义(P＞0.05);凝血时间未见明显延长,均无出血倾向.结论 前列地尔在断流术后早期应用能有效、安全预防门静脉系血栓形成、改善肝功能和降低腹水发生率。

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在乳腺癌中的表达,探讨其表达水平与乳腺癌临床病理特征、微血管密度(MVD)及预后的关系.方法 应用组织芯片技术,通过免疫组化染色检测MIF在121例乳腺癌和20例乳腺良性肿瘤和20例正常乳腺组织中表达,采用抗CD34免疫组织化学技术评价乳腺癌MVD;通过SPSS对所有结果进行统计学分析.结果 MIF在121例乳腺癌组织中表达阳性为36例(29.8%),高于乳腺良性肿瘤和正常乳腺组织,MIF表达和IL-8、MVD、HER-2呈正相关,且同无瘤生存率相关.结论 MIF阳性表达提示乳腺癌预后不良,可作为评价乳腺癌预后的一项指标;MIF有可能通过促进IL-8分泌途径参与促进乳腺癌血管形成。

目的 分析慢性丙型肝炎肝硬化患者第1次出现并发症后的临床特点及预后.方法 对89例失代偿性丙肝肝硬化患者进行5年的随访观察,并对临床失代偿发生因素进行单因素和多因素分析.结果 第1次出现并发症时,腹水最常出现占40例(44.9%),其次上消化道出血21例(23.6%),自发性腹膜炎18例(20.2%),肝性脑病10例(11.2%).在平均62个月(60～66个月)随访过程中,42例患者出现腹水(47.2%),16例出现自发性腹膜炎(18.0%),14例上消化道出血(15.7%),7例肝性脑病(7.9%),10例肝癌(11.2%).肝癌是患者的主要死亡原因(11.2%),每年的病死率4.5%.肝性脑病、腹水、消化道出血、自发性腹膜炎为第1个失代偿期并发症者5年的生存率分别为64.5%、85.0%、75.0%、83.3%,多因素回归分析结果显示食管胃底静脉曲张和胆红素为临床失代偿发生的惟一独立预测因素.结论 慢性丙型肝炎肝硬化是一个缓慢进行性疾病,肝癌是其重要并发症,并发症的出现对预后有影响,这些结果将有利于探讨失代偿期丙肝肝硬化患者的自然病程和临床预后。

目的 探讨慢性乙型肝炎患者CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)免疫抑制功能.方法 收集北京大学人民医院22例慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)以及18名健康对照的PBMC标本,以流式分析对PBMC中CD4+ CD25+ Treg的频率进行分析;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法评价CD4+ CD25+ Treg的免疫抑制功能;并同时通过磁珠分选去除CHB患者PBMC中的CD4+ CD25+ Treg,分别以MHC-肽-五聚体法和酶联斑点免疫法(Elispot)检测HBVcore18-27抗原肽刺激对HBV特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的频率以及IFN-γ的分泌.结果 CHB患者外周血中CD4+ CD25+ Treg细胞群所占CD4+T细胞群的比例明显高于健康对照(t=3.74,P＜0.01);CHB患者CD4+ CD25+ Treg细胞可非特异抑制自身活化的CD4+ CD25- T细胞,并呈剂量依赖的特点,且抑制能力与健康对照相比无明显差异;在经HBVcore18-27抗原肽诱导条件下,去除CD4+ CD25+ Treg CHB患者,HBVcore18-27特异性CTLs的频率以及CTLs分泌IFN-γ的频数与未去除CD4+ CD25+ Treg组比出现显著上调(t=4.75,t=7.828,P＜0.01).结论 CHB患者循环中CD4+ CD25+ Treg细胞频率升高.在体外去除CHB患者PBMC的CD4+ CD25+ Treg后可显著地增强HBV抗原诱导的抗HBV细胞免疫应答。

目的 探讨普伐他汀对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病的预防作用及机制.方法 3-4周龄NOD雌鼠分为4组,对照组(摄普通饲料,30只),小剂量组(普伐他汀1 mg·kg-1·d-1,29只),中剂量组(普伐他汀10 mg·kg-1·d-1,29只)和大剂量组(普伐他汀40 mg·kg-1·d-1,30只),观察糖尿病发病至30周龄.各组另取8只12周龄未患病NOD鼠,胰腺HE染色观察胰岛炎;制备脾细胞悬液后,流式细胞仪检测脾细胞中CD4+ CD25+ 调节性T细胞数量;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测脾细胞对特异性抗原的刺激增殖反应;ELISA法测特异性抗原刺激后脾细胞培养上清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;RT-PCR检测脾脏IFN-γ、IL-4mRNA的表达水平.结果 30周龄时,大剂量普伐他汀组NOD鼠糖尿病的发病较对照组明显降低(P＜0.01).12周龄时,大剂量普伐他汀组胰岛炎严重程度低于对照组(P＜0.001);大剂量普伐他汀组脾细胞培养上清中IFN-γ水平(42±20)Pg/ml,脾脏IFN-γmRNA表达水平(0.24±0.10)pg/ml均低于对照组(157±32)pg/ml,(0.81±0.18)pg/ml,均P=0.000),IL-4水平(91±22)pg/ml,脾脏IL-4mRNA表达水平(0.39±0.18)pg/ml均高于对照组[(44±20)pg/ml,P=0.000;(0.20±0.08)pg/ml,P=0.002)];小、中、大剂量普伐他汀组和对照组特异性抗原增殖指数分别为3.85±0.35、3.53±0.82、3.32±0.44、3.70±0.62,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05);小、中、大剂量普伐他汀组和对照组脾细胞中CD4+ CD25+调节性T细胞数量分别为(9.6±2.6)%、(10.2±2.4)%、(8.9±2.7)%、(10.0±2.4)%,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 早期使用大剂量普伐他汀进行干预,可以通过下调Th1细胞因子INF-γ,上调Th2细胞因子IL-4,促使免疫平衡向Th2方向偏移,从而减轻NOD鼠胰岛炎,预防NOD鼠糖尿病的发生。

目的 探讨热休克预处理(HS)对严重烫伤大鼠胃黏膜细胞线粒体的保护作用及机制.方法观察热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜细胞超微结构及线粒体超氧化物歧化酶(mSOD)和线粒体细胞色素氧化酶(mCCO)活力的影响.将Wistar大鼠随机分为烫伤组(40只):烫伤后即制作急性胃黏膜损伤模型,另取8只大鼠不致伤作为空白对照(伤前);HS组(40只):于烧伤前20h行热休克预处理,另取8只行热休克预处理不烫伤,作为实验对照(伤前).各组于伤后3、6、12、24、48h处死大鼠(每组每时相点8只大鼠)后留取标本检测大鼠胃黏膜损伤指数(UI)、胃黏膜细胞超微结构改变,热休克蛋白(HSP)60、HSP70、mSOD、mCCO变化,并进行相关分析.结果大鼠严重烫伤后胃黏膜损害明显(伤后24 h UI值12.7±1.9),胃黏膜细胞超微结构改变显著,mSOD和mCCO活力随烧伤时间延长而降低,伤后24h分别降至0.64±0.05、0.28±0.04.热休克预处理能诱导烫伤大鼠胃黏膜HSP60和HSP70表达显著增加.伤后24h分别为0.53±0.08和0.64±0.09,明显高于烫伤组0.31±0.04(P＜0.05)和0.27±0.04(P＜0.01),并明显减轻大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害(伤后24h UI值6.3±0.7 vs 12.7±1.9,P＜0.01);热休克预处理能显著降低胃黏膜mSOD的消耗(伤后24h值293±32 vs 108±11,P＜0.01),提高mCCO活性(伤后24 h值0.64±0.05vs 0.28±0.04,P＜0.01);电镜观察显示热休克预处理大鼠胃黏膜细胞超微结构受损程度减轻,线粒体改变不明显.相关分析结果显示,mSOD与HSP70呈显著正相关(r=0.436,P＜0.05);mCCO与HSP60呈显著正相关(r=0.679,P＜0.05).结论热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜细胞线粒体具有保护作用,可显著减轻大鼠烫伤后急性胃黏膜损害,保护线粒体机制与HSP60、HSP70保护抗氧化酶mSOD及呼吸酶mCCO活性密切相关。

目的 观察米非司酮对裸鼠乳腺癌(MCF-7,ER+/PR+)模型肿瘤生长速度的影响,同时观察其对微血管密度(MVD)、雌激素受体(ER)、激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、以及bcl-2、Ki67、p53、CerbB-2等相关蛋白的表达的影响,探讨米非司酮对乳腺癌作用的机制.方法 将指数生长期乳腺癌细胞系(MCF-7,ER+/PR+)接种裸鼠建立乳腺癌动物模型,随机将荷瘤裸鼠分为空白对照组(给予植物油0.5 ml/d),米非司酮治疗组(分为25 mg、50 mg、100 mg、200 mg/kg·d)共5组,肿瘤直径在0.5～1.0 cm时开始干预,每2 d测一次肿瘤体积,总共干预3周.于第2周随机处死其中部分动物;其余第3周处死.处死前测肿瘤体积;取肿瘤组织做常规病理学检查;免疫组化检测CD34、ER、PR,VEGF、bcl-2、Ki67、p53、CerbB-2等相关蛋白表达.结果 肿瘤直径:与空白对照相比,米非司酮明显减慢肿瘤的生长速度(P＜0.01),各组间呈时间、剂量依赖性(P＜0.01).肿瘤形态学观察:光镜下对照组裸鼠肿瘤异型性明显,病理性核分裂像多,核浆比例大,胞质深蓝色,间质少,仅肿瘤中央有局灶性坏死区.米非司酮治疗组肿瘤异型性小,异常核分裂像少,核浆比例小,胞质浅蓝,间质明显增多,肿瘤坏死区较大,而且上述变化与药物剂量,治疗时间成线性相关.免疫组织化学:与空白对照相比,治疗后凋亡相关蛋白表达有差异有统计学意义(P＜0.01),微血管密度显著降低(P＜0.01).结论 米非司酮对裸鼠乳腺癌模型肿瘤的生长有抑制作用;其生长抑制与促进细胞凋亡、抑制血管生成有关;且对ER+/PR+的乳腺癌细胞效果更明显。

目的 探讨缺血及二氮嗪预适应对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及机制.方法 Wistar大鼠30只,建立离体心脏灌注模型,分成3组,每组10只:(1)缺血再灌注组(I/R组):心脏平衡灌流30 min后,缺血30 min,再灌注1 h.(2)缺血预适应组(IPC组):心脏平衡灌流10 min,经2次缺血再灌注.(3)二氮嗪预适应组(DPC组):心脏平衡灌流10 min,给予2次含二氮嗪(100μmol/l)的K-H液灌注5 min再复灌不含二氮嗪的K-H液,缺血30 min,再灌注1 h.各组取心尖肌做冰冻切片行过氧化物酶体增生激活受体γ协同刺激因子1α(PGC-1α)免疫组织化学染色,电镜标本对心肌线粒体行Flameng评分.结果 IPC组、DPC组PGC-lα表达明显增高,与I/R组比较差异有统计学意义,但IPC及DPC两组间差异无统计学意义(P＞0.05).Flameng评分:IPC组(0.44±0.13)、DPC组(0.47±0.10)、I/R组(1.78±0.14);IPC及DPC两组与I/R组比较差异有统计学意义(均P＜0.01).结论 缺血及二氮嗪预适应对心肌线粒体有保护作用,这一作用可能与PGC-1α激活及高表达有关。

目的 明确结核分枝杆菌(MTB)异柠檬酸裂合酶(ICL)对耻垢分枝杆菌(MS)在巨噬细胞内存活的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 构建MTB-icl基因的穿梭表达质粒pUV15-icl,电转化法导入MS中后检测MTB-ICL在MS中的表达.分别用rMS-pUV15-icl和rMS-pUV15感染鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,于感染一定时间后测定细胞内存活的细菌数,评价MTB-ICL对MS在巨噬细胞内存活的影响.分别留取上述两组巨噬细胞的培养上清液,检测干扰素γ(IFN-γ)和一氧化氮(NO)的水平,同时采用原位TUNEL技术检测两组巨噬细胞的凋亡水平,探讨MTB-ICL对MS在巨噬细胞内存活影响的可能机制.结果 RT-PCR、Western印迹和荧光显微镜检测结果证实MTB-ICL可在MS中有效表达.与rMS-pUV15比较,rMS-pUV15-icl在巨噬细胞内的存活率明显高(P＜0.01),感染后24 h和48 h,其菌落数分别为(32.78±2.90)×103和(23.33 ±2.34)×103,而rMS-pUV15菌落数分别为(14.67±2.45)×103和(2.28 ±0.25)×103.MTB-ICL对巨噬细胞产生IFN-γ和NO没有明显影响.原位凋亡检测结果显示,与rMS-pUV15感染组比较,rMS-pUV15-icl感染组巨噬细胞的凋亡水平明显下降.结论 MTB-ICL可促进MS在巨噬细胞内的存活,其机制之一可能是抑制宿主巨噬细胞的凋亡。

目的 分析相关基因差异表达与血管衰老性重塑的联系,探讨血管衰老性重塑可能的基因调控机制.方法 常规观察主动脉组织形态及显微结构变化,应用基因差异表达技术、逆转录-聚合酶链反应、Western印迹分析验证健康衰老进程中,4、10、16、22个月龄大鼠血管衰老性重塑相关基因及其差异表达变化.结果 基因差异PCR共选出5条表达差异的片段,同源性对比证明分别与L型Ca2+通道α1c亚单位(Cacna1c)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NAD(P)H氧化酶α亚单位(p22-phox)、基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)、半胱氨酸蛋白水解酶-9(Casp9)基因高度同源.其中Cacnalc和p22-phox表达随龄增加,16月龄组(0.74±0.13;0.73±0.12)较10月龄组(0.12±0.05;0.20±0.03)增加.SDF-1α表达随龄降低.MMP-9和Casp9表达呈双相变化,16月龄组表达正向峰值(0.56±0.15;0.47±0.16).分别以平滑肌和胶原纤维为因变量作多元逐步回归分析,(r=0.92,P＜0.01);(r=0.93,P＜0.01)均呈正相关.结论 血管衰老性重塑并非恒速进行,存在缓慢起始、加速进展、减速维持的时相性过程.基因时相性差异表达变化同血管衰老性重塑高度相关.Cacna1c、p22-phox、SDF-1α基因时相性差异表达可能参与血管衰老性重塑。

目的 探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其核因子-κB(NF-κB)在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦(valsartan)和霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-κB的影响.方法 采用一侧肾切除腹腔注射STZ(55 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,将80只Wistar大鼠随机分为:对照组(NC)、糖尿病组(DM)、缬沙坦治疗组(DM+V)、霉酚酸酯治疗组(DM+M)、联合治疗组(DM+V+M).取材,检测各项生化指标,并采用荧光实时定量RQ-PCR方法检测肾皮质TRAIL及其NF-κB的mRNA的表达.免疫组织化学测定肾组织TRAIL及其NF-κB蛋白的表达.结果 ①DM组24 h尿蛋白和肾重/体重比均高于NC组(均P＜0.05),并随糖尿病时程延长逐渐增高,于DM12周时达到最大值;血白蛋白在DM8周组开始下降(P＜0.01),并逐渐降低;血肌酐、尿素氮于DM16周组开始下降(P＜0.01).各治疗组与DM8周组相比较,肾重/体重比变小(P＜0.05),24 h尿蛋白总量降低(均P＜0.05),血白蛋白回升(P＜0.05).以联合组最为明显.②荧光定量PCR显示TRAIL在12周前表达降低(均P＜0.01),16周时其表达量明显升高(P＜0.01).各治疗组与DM8周组比较表达增加(P＜0.05),以霉酚酸酯组和联合组最为明显(P＜0.01).DM组NF-κB的mRNA表达随时间延长逐渐增强(P＜0.01),各治疗组与DM8周组比较表达均降低(均P＜0.05),以联合组最为明显.③免疫组化显示TRAIL主要在肾曲小管表达,肾小球和脉管系统没有表达.DM各组在12周前表达均降低(均P＜0.05),差异有统计学意义;16周后表达明显增强(均P＜0.01).各治疗组阳性细胞数明显增加(均P＜0.05).NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,DM各组NF-κB表达量随时间逐渐增高,各治疗组可显著降低NF-κB表达.结论 TRAIL作为自身免疫系统的一个重要监控因子,其在糖尿病大鼠肾脏中的表达说明其密切参与了糖尿病肾病的发生发展,机制可能由NF-κB调节.早期缬沙坦和霉酚酸酯联合干预治疗可通过来增强TRAIL的表达,对肾脏产生保护作用。

目的 观察外源性后肾间充质细胞(MMCs)对缺血再灌注(I/R)后急性.肾小管损伤的防护作用,并探讨其可能的机制.方法 取孕13 d大鼠胚胎分离培养后肾间充质细胞,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记.建立缺血再灌注急性肾小管损伤大鼠模型,SD大鼠随机分为MMCs组、I/R组和假手术对照组(sham),MMCs组大鼠在成功建立肾脏缺血再灌注损伤后,即经下腔静脉输注BrdU标记后的大鼠后肾间充质细胞,分别于术后24、48、72、96 h处死各组大鼠,自动生化仪检测血清尿素氮(BUN)及血清肌酐(Scr)水平,常规HE染色观察肾脏病理改变,原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡情况,免疫组织化学染色法观察凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax在肾脏表达,荧光显微镜观察标记的MMCs在肾组织中的定位分布.结果 MMCs组各时相点大鼠BUN、Scr水平均显著低于同时相点I/R组(均P＜0.05),TUNEL结果显示,术后48 h凋亡的肾小管上皮细胞数量MMCs组[(13.4±3.2)/HPF]明显少于同时相点I/R组[(25.4±5.2)/HPF](P＜0.05),免疫组化结果显示I/R组Bcl-2、Bax蛋白表达水平均高于sham组,48 h达高峰,MMCs组Bcl-2表达水平高于同时相点I/R组,而Bax表达水平则低于同时相点I/R组,Bcl-2/Bax比值明显升高(均P＜0.05).MMCs组术后72 h肾组织内可见BrdU阳性细胞[(60±6)/HP],术后96 h阳性细胞明显增多,为[(143±8)/HP].结论 外源性后肾间充质细胞能够迁移、定居于缺血再灌注损伤后的肾脏小管上皮,MMCs输注后可抑制肾小管上皮细胞凋亡、坏死及炎症细胞浸润,对缺血再灌注急性肾小管损伤具有防护作用。

目的 通过一例常染色体隐性遗传型Alport综合征患者家系的基因突变分析,探讨常染色体隐性遗传Alport综合征的基因诊断方法.方法提取该患者外周血细胞的基因组DNA,应用基因组DNA PCR测序法对COL4A3和COL4A4基因各外显子进行突变筛查.对于基因组DNA序列异常者,从外周血细胞和EB病毒转染的细胞中提取总RNA,应用cDNART-PCR测序方法分析突变.同时在家系和正常人群中进行验证.结果使用基因组DNA样本经PCR直接测序法检测到COL4A3基因上两个致病性新突变(IVS39+1 G＞A剪接突变和c.1729-1737 de19bp缺失突变);经RT-PCR测序方法验证其与基因组DNA样本中检测到的突变一致,并证实剪接突变产生异常的转录产物.结论基因组DNA PCR测序法和cDNA RT-PCR-测序法均检测到Alport综合征患者COL4A3的致病突变,两种方法结果一致;cDNART-PCR测序法因为其相对快捷,并且可以了解突变转录情况而优于经典的基因组筛查突变方法。

患者男,72岁,头痛5 d入浙江大学医学院第二附属医院.入院后查体神经系统体征阴性.常规实验室检查各项指标均在正常范围.既往19年前有头部外伤较长昏迷史.影像学检查:外院头颅CT示左额叶低密度占位性病变。