2007年 · 第87卷第27期

综观20世纪生命科学发展,从宏观向微观、由表型到机制的探求是其重要特征.以还原论为基础的经典结构生物学、分子生物学与细胞生物学的研究极大地增进了人们对生命本质的理解.人类基因组计划(HGP)完成后,生命科学研究进入到"功能基因组学"研究时代,转录组学、蛋白质组学、代谢组学开始迅速发展,生命科学的研究方法不再局限于以还原论为指导的微观拆分,开始注重宏观整合研究的方法,生命科学也升华到对定性现象的归纳与对定量规律的探求这两者相互结合、共同发展的更高层次。

目的 了解上海肺癌发病的时间趋势及影响生存的预后因素.方法 由上海全死因登记报告系统所获得的2002至2004年恶性肿瘤患者死亡个案资料,按国际癌症登记协会(IACR)的肿瘤登记计算指南进行计算.分别按粗率和标率计算1972年至2004年的年度变化百分比(APC),对上海市发病时间趋势进行估计.采用Cox比例风险模型对影响生存的多因素进行分析,参数包括性别、年龄、居住区域、病理类型、临床分期、首诊医院级别.结果 自1972年以来的32年,上海市中心区男性肺癌发病粗率APC增加1.723%,而女性增加2.036%,均呈逐渐增高趋势(P均＜0.01);但男性肺癌的标化发病率APC为-0.605%,呈下降趋势(P＜0.01),而女性为-0.136%,呈平稳趋势(P＞0.05).上海市肺癌发病患者中Ⅲ、Ⅳ期占大多数,分别占35.6%和42.2%.上海市女性肺癌的3年生存率为17.05%,中位生存期(MST)为0.83年,均高于男性的14.01%和0.77年(P均＜0.01),对各期肺癌的不同性别亚组的生存期分析显示女性生存期均较男性为高(P＜0.05).Cox多因素分析结果提示性别、年龄、居住区域、病理类型、期别、首诊医院级别对肺癌生存有影响(P均＜0.01);其中女性、年轻、居住市中心区、鳞癌、早期、高级别医院可能对生存有益,而男性、老年、居住郊区、小细胞癌、晚期、低级别医院这些因素可能对肺癌患者不利.结论 上海市肺癌的发病水平逐渐接近欧美国家.女性、年轻、市中心区居住、鳞癌、早期、高级别医院治疗对肺癌的生存有益.各期别女性肺癌的预后均优于男性,但原因尚不清楚。

目的 评价使用桡动脉和乳内动脉作为惟一桥材料进行全动脉化冠状动脉旁路移植手术的近期和中期结果.方法 从1999年1月到2005年1月共123例患者[男114例,女9例,平均年龄(51.9±9.4)岁]采用全动脉化冠状动脉旁路移植手术,目标血管桥在两根以上.术前左心室EF值30%～78%,24例患者(21.1%)心室收缩功能较差(EF＜50%).64例患者有陈旧性心肌梗死病史,4例患者因不稳定性心绞痛进行了急诊手术.36例左主干病变患者.74%的患者使用非体外技术进行吻合,每个患者平均吻合口数为2.6±0.4.结果 早期死亡率0.8%.术后并发症包括,7例患者出现一过性房颤(5.7%),1例患者因为低心排安装主动脉球囊反搏(IABP),3例患者因为心力衰竭、再发心绞痛和心律失常在术后1个月内再次入院.20例患者(1999-2001 年)进行了5年随诊[平均随诊(62±13)个月].3例患者在随诊中死亡,均为心脏原因.1例患者因再次心肌梗死而行二次冠状动脉旁路移植手术,另1例患者因原先动脉桥狭窄而行经皮冠状动脉内球囊扩张术(PCI).结论 使用桡动脉和乳内动脉作为桥材料进行全动脉化冠状动脉旁路移植近期效果较好,中期手术并发症较低。

目的 探讨外侧入路行膝外翻全膝关节置换手术技术.方法采用膝关节外侧入路对中重度固定膝外翻患者行膝关节置换术.术中行膝关节正中偏外侧皮肤切口,行髂胫束苹果派样延长,自髌骨外侧"Z"字成形切开关节囊.以松解髂胫束止点、股骨侧及胫骨侧外侧副韧带及后外侧关节囊为主进行软组织平衡.股骨远端内外翻截骨定为5°外翻,股骨远端旋转角度截骨采用Whiteside线结合内外上髁轴线定位,全部病例均行髌骨置换.屈曲位缝合关节囊,将关节囊外侧袖套结构(深层)与内侧支持带边缘(浅层)缝合.结果8例10个膝外翻骨性关节炎患者采用外侧入路行全膝关节置换术.其中男1例1膝,女7例9膝.平均年龄68.2岁(58～79岁).Krackow Ⅰ型外翻7例9膝,Ⅱ型1例1膝.临床分型均大于15°,属重度外翻.其中双膝关节同时置换2例4膝,单膝关节置换6例6膝.7例9膝采国产后稳定骨水泥型假体(TC-Dynamic,PLUS),1例1膝采用进口旋转铰链式假体(RT-PLUSTMSolution,PLUS).全部患者术后外翻畸形均得到完全矫正,出院时均能独立或习步架辅助行走距离平均超过100m.关节活动度由术前平均95.6°(85°～110°)提高到术后平均117.1°(100°～125°).被动内外翻活动度由术前平均12.6°(9°～15°)提高到术后0°.平均FTA角由术前的27.6°(20°～40°)提高到术后的6.8°(5°～9°).KSS评分及功能评分由术前22.7分(9～48分)及26.5分(12～55 分)分别提高到术后的86.4分(85～95 分)及89.1分(80～95分).术后平均随访时间19.6个月(1个月～51个月),随访期间股胫角无明显变化,关节稳定性良好.结论采用外侧入路,关节囊"Z"字成形切开方法能够直接松解外侧韧带及软组织结构,并有效地缓解了腓总神经压力,解决了外侧软组织覆盖问题。

目的 分析后外侧结构(PLS)断裂和重建后膝关节外旋稳定性的改变.方法 16具完整新鲜的下肢标本,膝关节保持0°、30°、60°、90°位置,对胫骨远端施加5 kg·m·s-2外旋扭力矩,测得胫骨的外旋角度值;依次切断后交叉韧带、腘腓韧带(PFL)和腘肌腱(PT),每切断一条韧带或肌腱后测量胫骨的外旋角度值;采用自体半腱肌、股薄肌关节镜下重建后交叉韧带,自体跟腱重建腘肌腱和腘腓韧带,每次重建后测量胫骨外旋角度值.结果 单独后交叉韧带切断后,胫骨外旋角度没有增加(屈曲60°:正常组外旋14.1°,PCL切断组14.57°;q=0.47;P＞0.05);腘腓韧带切断后,屈曲60°和90°时胫骨的外旋角度大于正常膝关节(屈曲60°:PFL切断组外旋16.94°;q值2.84,P＜0.05);腘肌腱切断后,0°～90°范围胫骨外旋角度均增加至最大(屈曲60°:外旋28.1°;q=14.01,P＜0.05).单独后交叉韧带重建后胫骨外旋角度仍大于正常膝关节(屈曲60°:外旋27.67°;q值0.425,P＜0.05);后交叉韧带和后外侧结构联合重建后胫骨的外旋角度与正常膝关节相比有一定的差异性(屈曲60°:外旋14.51°;q=0.412,P＜0.05),但变化幅度未超过1°.结论 单独后交叉韧带的损伤对膝关节的外旋稳定性没有影响,但联合后外侧结构损伤后导致膝关节外旋不稳;腘肌腱断裂后膝关节产生了最大角度的过度外旋;单独后交叉韧带的重建部分恢复联合损伤后膝关节的过度外旋;后外侧结构和后交叉韧带联合重建后膝关节外旋稳定。

目的 探讨微意识状态患者是否保存大范围的视觉神经网络,是否存在视觉意识,从而研究视觉图片被动呈现刺激促进脑功能康复的可能性.方法正常对照组为10例健康成年男性,实验组为从重型颅脑损伤和脑出血中恢复的微意识患者9例;对两组对象选取标准化国际情感图片系统(IAPS)图片,采用组块设计被动呈现视觉刺激功能磁共振扫描,AFNI软件处理图像数据.结果10例正常对照志愿者全部被激活了初级视觉皮层枕叶和次级视觉相关皮层颞叶、梭回、顶叶、眶回、前额叶等完整的视觉神经网络.微意识患者组中有2例与对照组相似完整地激活了视觉神经网络.3例患者部分激活了视觉神经网络的相关区域,4例完全无脑区激活.结论IAPS图片的被动呈现视觉刺激功能磁共振扫描探讨视觉神经网络是可行的、可靠的和具有良好的重复性.微意识患者在恢复相互交流能力之前,可保留有完整的视觉神经网络,可能有利于脑功能的康复。

目的 探讨RCAS1与雌激素受体亚型在正常子宫内膜、增生症内膜和内膜癌组织中的表达及相关性,分析它们在内膜癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组化、RT-PCR法检测20例正常子宫内膜组织、42例子宫内膜增生症组织及50例内膜癌组织中RCAS1和雌激素受体α(Erα)雌激素受体β(Erβ)的表达,免疫印迹法检测各组内膜中RCAS1蛋白的表达.结果 免疫组化显示RCAS1在正常、简单型和复杂型增生内膜中均为P表达模式,不典型增生内膜中30%(6/20)为D表达模式,内膜癌中均为D模式.正常内膜、简单型和复杂型增生、不典型增生、内膜癌RCAS1蛋白高水平表达率分别为0%(0/20),9.1%(2/22),45.0%(9/20),68.0%(34/50),各组间差异有统计学意义(P＜0.05).RCAS1蛋白高表达与患者肌层侵犯深度、脉管侵犯、Erα阳性相关(P＜0.05).免疫印迹法、RT-PCR结果与免疫组化结果一致.RCAS1 mRNA的表达水平与Erα mRNA呈显著正相关,而与Erβ mRNA表达未显现相关性.结论 RCAS1高表达与表达模式的改变可能参与子宫内膜从良性到恶性转变的过程,RCAS1协同Erα表达与子宫内膜癌的发展、浸润转移有关。

目的 观察人脑出血后血肿周围皮质内神经元血红素氧合酶-1(HO-1)与凋亡调节蛋白Bcl-2的表达规律.方法 剖解39例脑出血后不同时间死亡患者的脑组织,自出血灶边缘向外1～3 cm及出血灶对侧相应部位的脑皮质组织进行取材,出血灶对侧设为对照组.采用免疫组化技术观察不同时间点出血灶周围HO-1与Bcl-2的表达和变化规律,实验结果应用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果(1)人脑出血2 h后就有HO-1的表达,2～10 h血肿周围神经元HO-1阳性细胞数开始增加[(5.1±2.0)个/高倍视野],17～30 h达到高峰[(11.3±0.9)个/高倍视野],120～216 h后逐渐减弱[(8.6±0.8)个/高倍视野],240～408 8 h时仍有HO-1阳性神经元[(6.4±0.6)个/高倍视野](F=42.80,P＜0.001).对照组没有HO-1表达.(2)Bcl-2阳性神经元在脑出血2～10 h后就有表达[(4.2±1.7)个/高倍视野],17～30 h血肿周围神经元Bcl-2阳性细胞数开始增加[(6.6±0.5)个/高倍视野],36～96 h达到高峰[(8.9±1.1)个/高倍视野],240～408 h后逐渐减弱[(4.7±0.6)个/高倍视野](F=29.59,P＜0.001).对照组没有Bcl-2阳性神经元的表达.(3)HO-1和Bcl-2变化规律存在一定相关性(r=0.66,P＜0.001).结论 人脑出血后出血灶周围皮质神经元内HO-1与Bcl-2的表达增加,参与了脑出血后脑保护与脑损伤的作用机制。

目的 观察预充6%羟乙基淀粉(万汶,(R)HES130/0.4)对体外循环(CPB)心内直视术患者血清S100B蛋白水平及脑氧代谢的影响,探讨其在CPB心内直视术期间是否具有脑保护作用及其可能作用机制.方法 选择拟在浅低温不停跳CPB下行房间隔缺损或室间隔缺损修补术的患者40例,美国麻醉学会(ASA)Ⅱ～Ⅲ,随机分为万汶(HES130/0.4)组和明胶(琥珀酰明胶)组,每组20例.预充液胶体为:万汶组,6%HES130/0.4 20～25 ml/kg;明胶组,琥珀酰明胶20～25 ml/kg.两组采用统一的术前用药、麻醉方案和体外循环方法.分别于转机前(T0)、转机后20 min(T1)、停机即刻(T2)、停机后60 min(T3)、停机后24 h(T4)采中心静脉血液2 ml离心,用ELISA法测定血清中S100B蛋白.并于上述时点同时取颈内静脉、桡动脉血行血气分析及血糖测定,计算出脑氧耗和脑糖耗比值(CMRO2/CMRGLu).结果 万汶组和明胶组S100B蛋白均在转机后(T1)上升、停机即刻(T2)达到高峰、停机后回落.但在T1、T2、T3时点万汶组S100B蛋白明显低于明胶组(P＜0.01).SjvO2和CMRO2/CMRGLU于转机20 min(T1)时两组均升高,停机即刻(T2)回落,停机后(T3、T4)逐渐回升.组间比较,T1、T2、T3万汶组明显高于明胶组(P＜0.05).结论 体外循环心内直视术患者血清S100B蛋白水平升高,停机时达高峰,停机后逐渐回落.HES130/0.4可能通过改善脑组织氧代谢,从而减少脑损伤,降低转机过程中及停机后1 h血清S100B蛋白水平。

目的 探讨从创伤性离断肢体切取游离皮瓣修复前臂残端软组织缺损的临床效果.方法 应用这种技术修复5例(男4例,女1例)前臂截肢残端软组织缺损创面,年龄22～43 岁,平均32岁.右侧3例,左侧2例.皮瓣面积为8 cm×9 cm～9 cm×12 cm.结果1例术后发生表浅感染,经更换敷料逐渐愈合,皮瓣全部成活,所有患者随访1.5～3.5 年,平均2.6年.受区外形和肘关节功能恢复较好,获得了满意的治疗效果.结论 废弃肢皮瓣具有血管解剖恒定、血管蒂长和切取容易等优点,该手术可保留创伤性截肢残端有功能的长度或肘关节功能。

目的 探讨胸部手术后肺(叶)扭转的原因.方法 回顾性分析8例胸部手术后并发肺(叶)扭转病例,其中男5例,女3例,平均年龄(55±8)岁,肺叶切除术4例(左上叶和右上叶各2例),食管癌切除术2例,右上纵隔巨大神经鞘瘤切除术和降主动脉置换术各1例.结果 术后发生扭转的肺叶中,右中叶2例,右上叶1例,左上叶3例,左下叶1例,左全肺1例.术后48 h内平均体温38.4℃(37.8～40.2 ℃),血白细胞数10.6×109/L(9.3～14.9×109/L).术后胸部X线片提示肺浸润和容积减少6例,完全实变2例.确诊肺扭转距初次手术的平均时间为4 d(2～14 d),再次手术时行扭转肺(叶)切除6例,均痊愈;行病肺复位2例,均死亡.再次手术后并发呼吸衰竭2例,房颤2例,平均住院日为24 d(10～56 d).结论 胸部手术后(残)肺门游离和肺不张是发生扭转的主要原因.早期确诊肺扭转较难,高度怀疑时应立即手术;宜采取病肺切除术。

目的 检测转化生长因子(TGF)β1能否在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变(EMT),以及Smad7基因转染能否阻止此种转变及相关信号转导机制.方法 采用脂质体法转染Smad7基因到大鼠肺泡Ⅱ型上皮(RLE-6TN);实时荧光PCR及免疫印迹法检测转染前后上皮细胞标志物(E-cadherin,CK19)、间质细胞标志物(FN、Vimentin及α-SMA)及Smad信号通路相关蛋白表达变化;相差显微镜观察TGFβ1诱导的肺泡上皮细胞形态改变,其超微结构改变采用透射电镜观察.结果 成功转染Smad7到RLE-6TN;转染前,在TGFβ1作用下,RLE-6TN间质标志物的表达在mRNA和蛋白水平上调,而上皮标志物表达下调;转染后,其间质标志物下调的同时上皮标志物上调;转染前RLE-6TN在TGFβ1作用下p-Smad2/3表达上调,转染后其表达无明显改变;形态学上,TGFβ1能诱导肺泡上皮发生EMT,Smad7转染则能阻止EMT;超微结构上,TGFβ1能诱导肺泡上皮特有板层小体变性、肿胀并随其时间延长最终完全消失.结论 TGFβ1能在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮向间质细胞转变,其机制部分与Smad信号转导途径相关,Smad7转染能在一定程度上阻止该转变。

目的 探寻正常大鼠脊髓实质内注射,液体量大小及药物对脊髓神经功能的影响及适用于脊髓损伤基因治疗的安全注射量.方法 采用(4×3)析因实验设计将96只成年健康SD大鼠随机分为12组,每组大鼠依分组情况分别于T13椎体水平注射NS或病毒缓冲液或Ad-LacZ(1×109 pfu/ml)2、4、6、10 μl.另取6只成年健康SD大鼠作为手术对照组,只行椎板减压术,不进行微注射.术后不同时间采用BBB评分标准对每组大鼠进行后肢运动功能检查.术后1、2、4周处死大鼠,病理学分析确定有效组织保留率.Ad-LacZ各组切片行X-gal染色,观察重组腺病毒在脊髓中的表达.结果 神经功能损伤及组织损伤程度随注射量增大而加重,不同注射液体量间比较差异有统计学意义(P=0.000).不同注射药物间进行比较,Ad-LacZ组损伤程度重于NS组及病毒缓冲液组,差异有统计学意义(P=0.044).NS组与病毒缓冲液组比较,差异无统计学意义(P=1.000).Ad-LacZ不同液体量各组均可完成对脊髓灰质神经细胞和胶质细胞的转染,术后4周阳性细胞数减少.结论 脊髓实质内微注射本身就可引起组织损伤及神经功能障碍.重组腺病毒可引起组织的免疫反应,加重脊髓损伤.对于正常大鼠脊髓,4 μl的重组腺病毒为相对安全注射量;6 μl为临界注射量,应谨慎把握。

目的 探讨软骨细胞与骨髓基质细胞(BMSC)共培养体外构建复合物体内植入形成成熟软骨组织的可行性.方法体外培养扩增猪BMSC,经绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染标记后,与猪关节软骨细胞按1:1比例混合,以5.0×107/ml的细胞终浓度接种于聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA)材料支架作为共培养组,以相同终浓度的单纯软骨细胞和单纯BMSC分别接种PGA/PLA作为阳性对照组及阴性对照组.各组标本均于体外培养2周后植于裸鼠皮下,8周后取材,通过大体观察、激光共聚焦显微镜观察、糖胺聚糖含量测定、生物力学、组织学以及免疫组织化学等方法对新生软骨组织进行全面评价.结果各组细胞均与材料黏附良好.体内植入8周后,共培养组及阳性对照组标本基本保持植入前的大小和形状,外观类似软骨组织,组织学显示两组均有连续的软骨陷窝样结构形成,免疫组织化学显示有大量Ⅱ型胶原沉积.定量测定结果显示,共培养组的糖胺聚糖含量和弹性模量均达到软骨细胞构建软骨组织的80%以上.共聚焦显微镜观察可见EGFP标记细胞形成了软骨陷窝.阴性对照组标本的体积较植入前明显缩小,组织学及免疫组织化学均未见软骨样组织形成.结论软骨细胞与BMSC共培养构建的复合物植入体内后能继续形成成熟软骨组织,这表明植入体内后软骨细胞仍能保持对BMSC的诱导作用。

目的 探讨生存素(survivin)与人肺癌多药耐药株H460/cDDP获得性耐药的关系.方法 采用RT-PCR、Western印迹法检测耐药株H460/cDDP与敏感株H460的生存素表达;用针对生存素的小干扰RNA(siRNA)经脂质体介导转染入耐药株H460/cDDP,抑制生存素表达;用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测顺铂(DDP)、紫杉醇(Taxol)对耐药株H460/cDDP的细胞毒作用.结果 耐药株H460/cDDP的生存素mRNA和蛋白质表达均高于敏感株H460.生存素siRNA转染耐药株H460/cDDP后72 h,生存素蛋白质的抑制率为92.3%.耐药株H460/cDDP和敏感株H460对DDP的IC50分别为(6.3±0.6)mg/L、(0.8±0.1)mg/L,对Taxol的IC50分别为(12.7±1.2)mg/L、(1.5±0.3)mg/L;生存素siRNA作用后,H460/cDDP对DDP、Taxol的IC50分别为(4.0±0.9)mg/L(P=0.002)、(8.1±1.7)mg/L(P=0.003).结论 生存素高表达与耐药株H460/cDDP的获得性耐药有关,生存素有可能成为逆转肺癌耐药性的有效靶点。

我们引进第二代后路显微椎间盘镜手术系统(microendoscopic discectomy,MED),采用后正中纵行切口"双开窗"手术入路的方法治疗中央型椎间盘突出症合并神经根管或侧隐窝狭窄,疗效良好,现报道如下。

人类的脊柱由23个椎间盘将椎体连接在一起,从颈椎到腰椎,椎间盘约占脊柱长度的20%～30%[1],其有着使脊柱具有活动性及缓冲各向应力的作用.人类椎间盘退变从20岁开始,在尸体标本上,在49岁时,大约有97%的椎间盘已经退变或有退变迹象[2]。

在支气管哮喘治疗指南中推荐在支气管哮喘轻度持续患者中规律使用吸入激素,尽管长期应用小剂量吸入激素副作用很小,但由于存在顾虑及疗程长,导致这部分患者治疗的依从性很差。

患者男,56岁,因下肢间断肿痛6年,间断发热2.5年,高热7 d于2005年10月8日入院.患者1999年6月无明显诱因出现右下肢腓肠肌侧肿痛,双下肢交替红肿,每次应用抗生素3～5 d症状可减轻,偶有发热,体温37.0～38.0 ℃,无皮疹、关节肿痛,双下肢无可凹性水肿.2001年9月外院诊断为血管炎,给予泼尼松30 mg,1日1次治疗,1个月后减量为30 mg,隔日1次,一直维持用至2004年3月.2003年4月无诱因出现发热,体温波动于38.0～39.0 ℃。

患者男,57岁,2004年12月,无诱因出现活动后气短,在当地医院行超声心动图示:左心房肿物,于2005年2月1日入院.发病以来,无发热、乏力、体重下降.既往:1989年行甲状腺腺瘤摘除术.吸烟20年,40支/d.体格检查:无阳性发现。