2007年 · 第87卷第17期

再生医学是近年来生物学和医学领域发展最为迅速并且已经初见成效的领域之一.随着人们认识的不断深入以及对科技投入的增加和大量高新技术的应用,使再生医学、特别是成体干细胞与再生医学的基础研究和临床治疗都取得了显著的成绩,为将来大规模的治疗性应用提供了重要的理论依据和实验基础。

目的 探讨K-Cl协同转运子1(KCC1)在宫颈癌组织中的表达及在宫颈癌发生、发展中的作用.方法 采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹及免疫荧光染色方法测定40例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和10例慢性宫颈炎组织中KCC1mRNA及蛋白的表达及定位情况.结果 宫颈癌组织中KCC1mRNA和蛋白的表达(灰度比值分别为1.29±0.17,1.18±0.27)均明显高于慢性宫颈炎(0.59±0.27,0.33±0.18)、CIN组织(0.50±0.28,0.27±0.15),差异有统计学意义(均P＜0.05).宫颈低、中分化癌组织中KCC1mRNA及蛋白的表达(灰度比值分别为1.39±0.12,1.37±0.15)明显高于高分化组(1.16±0.14,0.96±0.19),差异有统计学意义(P＜0.05);KCC1mRNA及蛋白在晚期宫颈癌组织中的表达与早期组差异无统计学意义,KCC1蛋白在宫颈癌及对照组织中的分布定位在细胞膜上.结论 KCC1基因可能在宫颈癌的发生发展中起重要的作用。

目的 研究骨组织对应力应变参数的生物学响应.方法 将微型电阻应变片粘贴在大鼠左尺骨表面,活体检测正常行走时尺骨应变参数.利用INSTRON材料试验机模拟体内应变参数对大鼠左侧尺骨实施不同频率的力学载荷,建立大鼠力学生物学模型.将60只大鼠随机分成4大组,正常组,5、10、15 Hz组,各实验组分为2000με组和3000με组;加载振幅为0.1 mm、半正弦波,10 min/d,加载2周,右上肢作为对照组.实验结束前后双能X射线骨密度测定仪(DXA)检测各组大鼠尺骨骨密度值(BMD);三点弯曲实验测试骨材料力学特性;免疫组织化学染色评价骨基质蛋白分泌情况;常规HE染色、盐酸四环素及钙黄绿素双荧光标记观察骨组织形态学变化.结果 在10、15Hz组中,2000με和3000με组促进了骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的分泌,双荧光标记可看到两条明显的黄色和绿色的荧光条带,且实验组骨密度值显著高于正常组,(102±8)mg/cm2比(113±6)mg/cm2,P＜0.05,但骨的力学性质却明显低于对照组(P＜0.05)和正常组(P＜0.01);在5 Hz组中未见骨密度明显增加.结论 成功构建活体大鼠骨力学生物学模型,并证实在一定应变范围内,短期的低幅高频的应力可促进骨生长。

目的 探讨肺移植及心肺联合移植治疗艾森曼格综合征的手术适应证和围手术期处理.方法 2002年9月至2006年3月共收治5例先天性心脏畸形伴艾森曼格综合征(Eisenmenger syndrome,ES)患者,其中先天性心脏畸形房间隔缺损2例,室间隔缺损2例,均进行了心脏畸形修补及同期右肺移植;另有1例为先天性心脏病房间隔缺损,采用介入房缺封堵后发生全心功能衰竭,紧急行心肺联合移植.结果 4例心脏畸形修补同期单肺移植中有1例术后20 d死于原发性移植物失功;1例心肺联合移植术后23 d因原发性移植物失功死亡.3例患者康复出院,现已分别存活5、8、22个月,生活质量良好.患者术后肺动脉压明显下降、血气分析结果改善明显.结论 心脏畸形修补同期单肺移植能有效治疗先天性心脏畸形伴艾森曼格综合征,匹配的供肺、良好的供肺切取和保护、完善的术后处理是患者术后存活的关键。

目的 探讨三维头颅模型技术指导下的模型外科在血管化自体腓骨移植修复下颌骨缺损中的应用.方法 对2001-2005年就诊的下颌骨缺损患者24例,采用CT扫描结合快速成型技术制作三维头颅模型,在三维头颅模型上进行模型外科,预制个性化下颌医用重建钛板,应用血管化自体腓骨移植修复下颌骨缺损,观察疗效.结果 三维头颅模型指导的因各种原因导致的下颌骨缺损患者修复术后,创口均Ⅰ期愈合.术后半年复诊,面部外形左右对称,开口无受限,健侧咬颌关系无偏斜,双侧颞下颌关节区无压痛,口腔内黏膜及颌下未见瘘管,下肢活动无任何障碍.口腔全景片示,移植的腓骨与下颌骨完全骨性愈合.三维CT扫描示,下颌骨外形恢复良好.结论 三维头颅模型能真实体现病灶,为准确诊断、确定治疗方案提供指导,为模拟手术提供仿真的平台,在下颌骨缺损修复中有良好的辅助作用。

目的 评价多节段颈椎Bryan Disc人工间盘置换术的影像学及临床效果.方法 回顾分析多节段Bryan Disc人工颈椎间盘置换术20例临床资料,其中双节段18例,三节段2例.从置换节段活动度,运动节段高度,相邻节段活动度测量,JOA评分、JOA改善率、NDI评分、Odom's标准等方面进行评价.结果 置换节段的活动度平均保留术前的86.2%,颈椎整体的活动度平均保留术前的87.3%.JOA评分术前平均为(12.7±3.0)分,随访平均为(16.1±1.6)分,差异有统计学意义(P＜0.05),JOA改善率平均为80.1%.随访NDI评分为(8.7±7.5)分.按Odom's标准:很好10例(50%);较好8例(40%);一般2例(10%).影像学测量术前与随访比较,差异无统计学意义.结论 多节段颈椎Bryan Disc人工椎间盘置换术的早期随访的临床效果及影像学结果满意,在保证颈椎活动度及颈前凸的同时,可以减少邻近椎体退变.在严格掌握手术适应证的前提下,颈椎人工间盘置换术为颈前路植骨融合术的良好替代选择。

目的 探讨长期持续气道正压(CPAP)通气能否降低阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血压水平.方法 用关键词途径从MEDLINE、中国期刊全文专题数据库计算机检索系统检索2000至2006年的相关文献,将观察对象限制为OSAHS患者,CPAP治疗≥4周,比较CPAP和非CPAP治疗对24h血压影响的所有临床随机对照研究数据进行荟萃分析.结果 7项研究共471例患者被纳入荟萃分析,其中3项研究支持CPAP可以降低OSAHS患者24 h平均舒张压;而另4项研究不支持.荟萃分析结果表明长期CPAP治疗可以降低OSAHS患者24 h平均舒张压加权均数差:-1.78(95% CI:-3.34,-0.22)].结论 长期CPAP治疗可以降低OSAHS患者24 h平均舒张压。

目的 探讨会阴子宫内膜异位症的临床诊断及治疗.方法 对30例会阴子宫内膜异位症(简称内异症)病例进行回顾性分析,术后随诊0.5～13年.结果 会阴内异症占院内同期内异症的0.32%,阴道分娩发生会阴内异症为0.0065%,发病潜伏期为4个月至13年.会阴内异症均表现为会阴伤口的周期性、痛性结节,CA125值无明显升高,病灶完整切除者可达到治愈.5例(16.7%)患者合并盆腔内异症.结论 根据典型的病史和体格检查可做出正确的诊断,会阴内异症可合并盆腔内异症存在,手术切除是主要的治疗方法,未累及肛门括约肌的患者由于手术可完整切除,复发率低于累及肛门括约肌的病例,是否累及肛门括约肌的术前评价至关重要。

目的 探讨复发性卵巢成熟性畸胎瘤的临床特点和复发规律.方法 回顾性分析20例保守手术后复发的卵巢成熟性畸胎瘤(复发组)的临床资料并与同期手术的40例未复发者(对照组)进行比较.结果 卵巢成熟性畸胎瘤保守手术后的复发率为2.5%.平均复发时间为(8±7)年.年轻的患者及双侧或多房的囊肿更易复发.复发组与对照组患者在孕产次、囊肿大小、手术方式及术中是否破裂等方面的差异无统计学意义.结论 对年轻的患者及双侧或多房的畸胎瘤应加强随诊.畸胎瘤的手术应尽可能采用腹腔镜的手术方式.单侧畸胎瘤术中不必常规行对侧卵巢的剖探。

目的 探讨可以预测铂类联合紫杉醇作为晚期卵巢癌术后一线化疔疗效的预测因素和预测分子.方法 回顾42例以铂类联合紫杉醇作为一线化疗的晚期卵巢上皮癌临床病理学资料,用免疫组织化学方法检测卵巢癌组织中的p53和PgP表达,计算一线化疗临床完全缓解率和早期复发率.分析年龄、残留病灶大小、病理学类型、分化程度、p53及PgP表达等指标作为化疗疗效预测因素或预测因子的可行性.结果 24例(57%)患者临床完全缓解,7例(17%)早期复发.单因素分析提示p53阳性患者完全缓解率(74%)有高于p53阴性患者(完全缓解率43%)的趋势;残留病灶＜2cm者早期复发率(4.2%)低于残留病灶≥2 cm者(33%).多因素分析提示残留病灶≥2 cm和Pgp阳性是早期复发的独立预后因素.结论 残留病灶大小、p53表达、Pgp表达可以作为铂类联合紫杉醇化疗疗效的预测因素,p53阳性者对化疗相对敏感,残留病灶≥2 cm、Pgp阳性者对化疗相对耐药。

目的 探讨环境毒素诱发蛋白水解应激在多巴胺能神经元变性死亡中的作用.方法 6-羟多巴(6-OHDA)、1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)、鱼藤酮作用于神经生长因子诱导的PC12细胞,MTT法检测各种药物的神经毒性作用,应用共聚焦免疫荧光双标染色观察药物处理后细胞内α-突触核蛋白及泛素化蛋白的表达及聚集.荧光分光光度计测量各组细胞蛋白酶体中各蛋白水解酶活性的变化.结果 3种神经诱变剂处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中6-OHDA 100 μmol/L、MPP+75μmol/L、鱼藤酮20 nmol/L作用24 h使细胞活力分别下降52%、44%、40%(P＜0.01).共聚焦显微镜观察显示药物处理后细胞胞质内α-突触核蛋白及泛素表达上调,并形成蛋白颗粒物.酶活性测定提示MPP+75μmol/L、鱼藤酮20 nmol/L处理使胰蛋白酶,糜蛋白酶及PgH水解酶活性明显下降(P＜0.05),而6-OHDA 100 μmol/L处理使细胞蛋白酶水解能力轻度降低,差异无统计学意义(P＞0.05),6-OHDA 200 μmol/L则诱导3种蛋白酶活性进一步下降,荧光指数分别为7.23±0.58,79.60±2.73和4.23±0.49(正常组为13.90±1.75,99.30±5.23和6.90±0.60,P＜0.01).结论 神经诱变剂可导致多巴胺能神经元泛素蛋白酶体功能失调及α-突触核蛋白和泛素化蛋白的积聚,诱发蛋白水解应激异常状态。

目的 探讨重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)能否促进兔骨骼肌卫星细胞的增殖.方法 通过组织块法培养、密度梯度离心法纯化获取兔骨骼肌卫星细胞,将不同浓度的rhaFGF加入细胞培养液中,设立对照组,通过MTr检测、流式细胞仪测定来评价rhaFGF对骨骼肌卫星细胞增殖的影响,并观察低分子肝素对此种影响的促进作用.结果 rhaFGF能够促进骨骼肌卫星细胞的增殖,20～60 μg/L是最佳浓度,浓度超过80μg/L促进作用将会降低,低分子肝素能够增强rhaFGF的上述作用.结论 一定浓度的rhaFGF能够促进骨骼肌卫星细胞的增殖。

目的 研究pirh2对肺癌生长的影响.方法 采用免疫组织化学法检测pirh2在肺癌组织中的表达;构建靶向pirh2基因的短发夹状RNA(shRNA)干扰质粒(psiRNA-Pirh2A和psiRNA-Pirh2B),并设计阴性对照(psiRNA-Con)组和空质粒(psiRNA-hH1)组,转染A549细胞;实时定量PCR和免疫印迹法分别检测pirh2的mRNA和蛋白的表达.CCK-8法检测A549细胞的增殖;参考CCK-8结果,选取抑制作用较强的一个pirh2干扰质粒进行裸鼠成瘤实验.结果 53例肺癌组织中有42例pirh2阳性(79.2%);psiRNA-pirh2A及psiRNA-pirh2B组细胞生长均慢于正常组(q值分别为6.82、5.63,均P＜0.05),而psiRNA-Con和psiRNA-hH1组细胞增殖能力差异无统计学意义.正常对照、阴性对照和干扰组裸鼠肿瘤组织重量分别为1.66 g±0.21 g、1.48 g±0.34 g和0.59 g±0.16 g,正常组与阴性对照组之间差异无统计学意义,而干扰组肿瘤重量明显低于正常组,差异有统计学意义(t=6.27,P＜0.05).结论 pirh2过度表达可能是肺癌发生过程中一个重要的环节,成功构建的shRNA表达载体可特异性抑制其在A549细胞中的表达,并在体内外抑制肺癌细胞的生长。

目的 研究替拉扎明(TPZ)联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂(LY294002)对人卵巢癌细胞株的体外抑制作用.方法 乏氧及空气条件下,TPZ单用及联合LY294002在不同药物浓度下分别作用于人卵巢癌细胞株HO8910PM和OVCAR-3,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法评价其抑癌效果.结果 在乏氧及空气条件下单独使用TPZ对HO8910PM的IC50分别为40.6 μmol/L和53.0 μmol/L,对OVCAR-3的IC50分别为65.9 μmol/L和97.4 μmol/L;乏氧及空气条件下TPZ联用LY294002,对HO8910PM的IC50分别为22.7 μmol/L和31.5 μmol/L,对OVCAR-3的IC50分别为49.1 μmol/L和51.0μmol/L.结论 TPZ对人卵巢癌细胞株有抑制作用,抑癌效果在乏氧条件下高于空气条件(P＜0.01);LY294002对TPZ有协同作用,与TPZ单独用药相比,二者联用显著降低了TPZ对癌细胞的IC50(P＜0.01)。

目的 探讨腺病毒载体转染后对大鼠移植静脉的影响.方法 选用Wistar大鼠间置移植颈静脉于同侧颈总动脉,术后移植静脉行HE染色和VG染色,观测血管内膜厚度.应用免疫组织化学染色,观察血管内膜平滑肌细胞(SMC)内增殖细胞核抗原(PCNA)表达及增殖情况.于倒置荧光显微镜,以紫外光激发观察测定腺病毒转染率.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western蛋白印迹检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平.结果 术后3 d,GFP表达较高;术后10 d,GFP表达有所下降;术后30 d,GFP几乎没有表达.移植术后10 d试验组及对照组可见明显内膜增生.移植术后30 d试验组及对照组内膜增生减轻.试验组及对照组与正常非移植静脉相比,内膜增生明显(P＜0.05),试验组较对照组内膜增生稍明显,但差异无统计学意义.实验中正常静脉平滑肌细胞PCNA阳性细胞极少,对照组与试验组术后10 d,内膜与中膜SMC的PCNA阳性细胞增多,增殖达到高峰.术后30 d中膜SMC的PCNA阳性细胞明显减少.试验组及对照组与正常非移植静脉相比,PCNA阳性细胞增高明显(P＜0.05).试验组较对照组PCNA阳性细胞稍多,但差异无统计学意义.正常静脉ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白表达很少,对照组移植后3 d部分细胞即出现阳性表达,10 d表达最强,30 d仍较高.与正常静脉组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).试验组较对照组表达更高,但与对照组比较,差异无统计学意义.结论 腺病毒载体能高效地进行体内基因转移,作用时间短暂.腺病毒载体促进移植静脉的血管内SMC活化、增多、血管内膜增生、ICAM-1、VCAM-1的表达的增加,腺病毒转染到移植静脉血管壁后产生炎症、内膜增生等效果,混淆了目的基因的效果。

目的 探讨血红素氧合酶-1的诱导对肺缺血再灌注损伤的保护作用.方法 将40只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为4组:假手术对照(sham)组、肺缺血再灌注(I/R)组(阻断左肺门30 min再灌注2 h)、氯化血红素(Hemin)组(给予血红素氧合酶-1的诱导剂)与锌原卟啉(ZnPP)组(给予血红素氧合酶-1的抑制剂).检测各组肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,观察肺组织湿干重比(W/D)以及电镜下肺组织超微结构变化.结果 Hemin组肺湿/干重比(5.92±0.66)低于I/R组(7.55±0.66)(P＜0.01),SOD活性(9.2±0.5)高于I/R组(2.8±0.4)(P＜0.01),TNF-α含量(60.37±8.25)低于I/R组(452.26±22.59)(P＜0.01),电镜下肺组织超微结构损伤改变明显减轻;而给予ZnPP(ZnPP组)后使上述改变发生逆转.结论 血红素氧合酶-1的诱导可有效保护肺缺血再灌注损伤。

目的 观察RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长的抑制.方法 将包含RASSF1A基因的质粒转染RASSF1A表达缺失的EC9706细胞,建立稳定转染细胞系,通过MTT法检测细胞活性和增殖能力、流式细胞仪检测其对细胞周期的影响、裸鼠移植瘤实验检测转染细胞的体内成瘤特性.结果 稳定表达RASSF1A的EC9706细胞较对照组细胞的RASSF1A蛋白表达增加;细胞生长速度减慢(P＜0.01);细胞周期中G1期比例增加,S期比例减少(G1期:RASSF1A组细胞:68.53%±3.34%;空质粒组:54.25%±4.61%;未转染组:53.41%±5.60%.S期:RASSF1A组细胞:(23.19±5.04)%;空质粒组:(31.81±2.05)%;未转染组:32.09%±1.99%)(P＜0.01);同时裸鼠致瘤能力也被抑制(P＜0.05).结论 RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制食管癌细胞在体内外的生长,提示该基因在食管癌的发生发展中发挥重要作用。

病历摘要 　　患者女,33岁,因干咳、声嘶和呼吸困难4个月,加重近1个月于2006年3月31日入耳鼻喉科.患者于2005年12月受凉后出现持续性干咳,无发热、咯痰、呼吸困难,应用抗生素治疗后无好转。

肺动脉高压(pulmonary artery hypertension,PAH)是不同病因导致的、以肺动脉压力和肺血管阻力升高为特点的一组病理生理综合征。

随着侵入性操作使用的增加,导管相关血液感染在重症监护病房(ICU)的发生率较高,不但治疗费用昂贵,并可能导致患者死亡。

短肠综合征(short bowel syndrome,SBS)早期主要表现为腹泻、脱水、电解质及酸碱平衡紊乱,过早进食会加重以上表现。