2007年 · 第87卷第08期

近年国内外的临床工作者都发现,大部分白血病存在某种染色体易位,易位可以产生新的融合基因,编码融合蛋白.利用这些标志可以诊断不同类型的白血病。

白血病是获得性造血干细胞突变所致的克隆性疾病.染色体分析可以揭示作为恶性克隆标记的遗传学改变,因而受到重视,近年来,随着观察的深入和技术的进步,白血病的染色体研究又取得了重要进展.显带核型分析已成为白血病诊断的常规手段之一.分子一细胞遗传学新技术-荧光原位杂交(FISH)正作为前者的重要补充而得到广泛应用.现将白血病染色体研究的新发现和检测技术的新进展介绍如下。

2003年春,严重急性呼吸综合征(SARS)流行的初期,大量临床一线的医务人员因抢救SARS患者而被感染.2003年3月24日前,医务人员病例占全部病例的27.43%。

近年来,国际外科文献检索资料中,Fast-track surgery一词频繁出现,也有不少以此为题的文章,涉及到各个区域的手术,效果甚佳,明显的加快了病人的康复,缩短了手术后住院日。

我国属感染性疾病高发国家,发病人数多,病原微生物种类复杂多样,难培养和不能培养的微生物是感染的重要病原.重视前沿技术在临床微生物检验中的应用,提高疑难病原确诊率,将成为减少病原微生物漏诊的有力保证。

目的 比较维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异蛋白表达谱,分析、筛选维甲酸耐药相关蛋白.方法 双向凝胶电泳分离维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的全蛋白,经PDQuest v7.1分析软件筛选出差异表达的蛋白质点,质谱分析获得差异蛋白质的肽质量指纹图谱,以此通过Mascot软件查询SWISS-PROT蛋白数据库,进行差异蛋白质的鉴定,获得候选维甲酸耐药相关蛋白.采用蛋白质印迹试验及半定量RT-PCR在蛋白水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证.结果 获得了分辨率高、重复性好的APL细胞的双向电泳图谱,维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的pH4-7双向凝胶电泳图谱显示平均蛋白点分别为890±45和912±56.在二者间分析到57个差异蛋白点,23个蛋白点在RA耐药细胞株MR2中上调,34个蛋白点下调.25个差异蛋白点经质谱鉴定,17个获得成功鉴定,对应于13个不同分子,其中一个是未知功能的新蛋白FLJ00279,其余分属于癌蛋白(DJ-1),转录相关蛋白(MYC启动子结合蛋白1),分子伴侣[热应激蛋白(HSP)HSP70、HSP60及蛋白质二硫键异构酶],代谢类蛋白(抑制素、磷酸丙糖异构酶1及钙网蛋白)和信号转导(Rho GDP dissociation inhibitor beta)以及细胞骨架蛋白(ACTG1蛋白、β-5-微管蛋白抑制素及角蛋白10).癌蛋白DJ-1、calreticulin、HSP60及ACTG1在RA耐药细胞株MR2中为高表达,其余为低表达.蛋白印迹试验结果与双向电泳结果一致且展现了DJ-1和calreticulin在多个异构体上有差异表达.但半定量RT-PCR显示HSP70和HSP60的蛋白质表达差异与其mRNA水平变化无相关一致性.两种实验结果提示翻译后蛋白的修饰或剪切介导了蛋白的表达差异.结论 应用双向凝胶电泳连接质谱的蛋白质组学方法筛选到新蛋白FLJ00279以及功能已知的DJ-1、calreticulin、HSP70、HSP60、抑制素及MYC启动子结合蛋白1等维甲酸耐药相关蛋白,虽然它们与维甲酸耐药的直接关系还需进一步证实,但为从多因素角度上认识维甲酸耐药机制提供了新的线索。

目的 建立一种同时定量检测多种白血病染色体易位形成的融合基因的荧光实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,了解阵列式PCR的应用可行性.方法 组合使用82条引物,设立66个PCR平行管,同时定量检测37种白血病常见融合基因形成的125种剪切体和4种白血病常见的原癌基因活化.实时定量PCR采用Eva Green荧光染料法,用ABL基因做内参,用比较Ct法进行相对定量.用此方案对31例白血病患者标本进行检测,其中6例慢性粒细胞白血病(CML)患者做治疗前后或治疗过程中不同时间的对比检测,28人次与多重巢式PCR方案的检测结果进行对照.结果 我们建立的PCR阵列方案有较大的线性检测范围(102～108拷贝/μl),有较高的检测灵敏度(232拷贝/μl)和精确性;在31例患者标本的检测中,共检测到14种融合基因类型和所有4种原癌基因活化;检测到一例同时有5种融合基因阳性和两种原癌基因活化的患者;和多重巢式PCR检测结果的对比显示本方案灵敏度略低于巢式PCR,但差异没有统计学意义(P=0.009);6例CML患者标本的检测显示治疗后患者标本中BCR/ABL融合基因及WTl和EVIl原癌基因表达量均呈现不同程度的降低,与临床治疗情况符合;基因定量分析的结果表明本方案能够对常见白血病融合基因和癌基因活化情况进行定量分析,在白血病的诊断及疗效监测中有应用价值.结论 PCR阵列法同时定量检测多种白血病融合基因适于白血病初诊患者融合基因的筛查及微小残留病(MRD)的检测,对于检测同时有多种融合基因存在的病例及治疗过程中融合基因的变异情况更为有用。

目的 分离家族性急性髓系白血病患者骨髓中差异表达的基因,在基因水平上探讨急性白血病发生发展的分子机制.方法 应用Super SMART和抑制性消减杂交(SSH)技术,构建家族性急性髓系白血病cDNA消减文库;应用差异筛选技术进行差异表达片段的筛选与鉴定;测序结果进行BLAST同源性比对分析.结果 成功构建了家族性急性髓系白血病cDNA消减文库;克隆、筛选并鉴定了17条基因片段,与已知基因同源,11条为未知基因片段.结论 SSH技术是筛选差异表达基因的有效方法;获得多个与细胞增殖和分化相关的已知基因;获得11条新基因EST片段,并被GenBank收录。

目的 应用蛋白质组技术探讨首次持续完全缓解(CCR1)时间相差显著的急性髓系白血病(AML-M2a)患者诱导治疗前及其复发患者的白血病细胞蛋白质差异表达与预后的关系.方法 将提取的17例AML-M2a患者首次诱导缓解前的骨髓单个核细胞按正规化疗后CDR1时间分组,大于12个月为A组(11例),小于6个月者为B组(6例),B组患者有3例在复发时的骨髓单个核细胞为C组.运用双向电泳技术对A、B、C3组白血病细胞蛋白质进行分离,对部分差异蛋白利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质量光谱法(matrix-assisted laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果 A组与B组比较,质谱鉴定了6个差异蛋白质,分别为微管蛋白特定分子伴侣B、髓过氧化物酶、转胶蛋白2CH结构域、谷胱苷肽S-转移酶、锌酯蛋白、3-磷酸甘油醛脱氢酶;C组为3例自身对照比较,质谱鉴定了3个差异蛋白质,分别为NAD(P)H、HES1、假定蛋白.结论 AML-M2a患者诱导缓解治疗前的白血病细胞差异蛋白质表达水平与其预后有关,白血病复发时骨髓细胞蛋白质有变化。

目的 探讨乳腺外周性乳头状瘤及其癌变细胞和导管内癌的克隆性,寻找较为特异性有效的早期诊断辅助性方法.方法 收集外周型乳头状瘤26例、外周型乳头状瘤伴不典型增生25例、导管内癌27例、癌变至导管内癌的16例作为研究对象,并用20例正常乳腺组织作对照,采用基于女性X染色体AR基因多态性的克隆性分析技术检测,根据带型不同判断各种样本的克隆性.结果 26例外周型乳头状瘤中24例(92.3%)和20例正常乳腺组织显示为多克隆性增生;27例导管内癌均显示单克隆性增生;在25例外周型乳头状瘤伴不典型增生样本中10例(40%)显示AR位点长度多态性丢失,属于单克隆性增生;16例癌变至导管内癌标本中癌灶与伴不典型增生部分均显示单克隆性增生.结论 正常乳腺组织和外周型乳头状瘤具有多克隆性,而伴不典型增生的外周型乳头状瘤部分病例为单克隆性增生.外周型乳头状瘤伴不典型增生属于乳腺癌前病变.克隆性分析可有助于筛选高危病例及鉴别诊断。

目的 探讨进行性系统性硬化症(PSS)硬化皮肤组织中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原基因以及细胞内信号转导分子SMAD mRNA的表达情况,分析它们在发病机制中的作用.方法 用荧光实时定量聚合酶链反应法分别检测11例PSS患者硬化皮损及11例正常对照皮肤组织中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原基因以及不同类型SMAD(SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD7)mRNA的表达水平.结果 Ⅰ型前胶原基因α1、Ⅲ型前胶原基因α1、SMAD4及SMAD7的mRNA在硬化皮损中的表达明显高于在正常皮肤组织的表达,差异有统计学意义(均P＜0.05).SMAD4 mRNA的表达与Ⅰ型、Ⅲ型前胶原基因α1mRNA的表达成正相关(r值分别为0.728和0.678,均P＜0.05).SMAD3 mRNA的表达与Ⅰ型前胶原基因α1 mRNA的表达成正相关(r=0.859,P＜0.01).结论 PSS硬化皮肤组织中存在有SMAD4mRNA的高表达,可能是导致Ⅰ型、Ⅲ型胶原在硬化组织中过度堆积的原因之一。

目的 评价低体重新生儿危重急腹症外科治疗的效果.方法 回顾分析2000年1月至2006年1月南京医科大学附属南京儿童医院新生儿外科治疗的228例体重低于2500 g的新生儿危重急腹症的临床资料,比较胎龄、出生体重及诊治改进与预后的关系.结果 患儿入院年龄1 h～7 d,平均(4.1±0.7)d;早产儿141例,足月小样儿87例;出生体重≤2000 g者26例,2000～2500 g者202例;2000年1月至2003年1月(前3年组)83例,2003年1月至2006年1月(后3年组)145例.治愈202例,死亡26例(11.4%).早产儿组,≤2000 g组,前3年组死亡率[14.89%(21/141)、53.84%(14/26)、18.07%(15/83)]远高于足月小样儿组,2000～2500 g组和后3年组(χ2=4.455、P＜0.05,χ2=52.324、P＜0.01,χ2=5.745、P＜0.05).生存患儿随访4～48个月,体重身高达到正常标准.结论 早产、出生体重低与新生儿急腹症死亡关系密切;随着新生儿外科手术、产前诊断和围手术期处理水平的提高,低体重新生儿危重急腹症治疗的成功率正在提高。

目的 探讨自体心包同时扩大肺动脉瓣环与瓣膜的跨环补片技术在右心室流出道(RVOT)重建术中的应用价值.方法 采用心包片扩大原有的瓣叶、瓣环或重建新的瓣叶2种技术,对32例先天性心脏病病人行RVOT重建手术.包括法洛四联症24例,右心室双出口法四型5例,重度肺动脉狭窄3例.结果 本组手术死亡1例,术后其他并发症6例治愈.31例随访4～40个月,心功能Ⅰ～Ⅱ级,肺动脉瓣功能良好;无或微量肺动脉瓣返流17例、轻度12例、中度2例.无需再次手术病人.结论 自体心包同时扩大肺动脉瓣环与瓣膜技术重建RVOT的近、中期效果良好,远期效果有待于观察。

目的 初步探讨64排螺旋CT在健康人群中进行冠心病筛查的意义和方法.方法 对286例40岁以上有至少一项冠心病危险因素的健康人进行64排螺旋CT心脏冠状动脉检查.使用东芝Aquilion 64排螺旋CT机扫描,应用TCOT算法得到容积数据,对数据进行最大密度投影(MIP)、容积重建(VR)、多平面重建(MPR)、曲面重建(CURVE)和三维(3D)后处理,观察其对冠状动脉病变的显示,部分阳性患者与导管对照.结果 286例中发现239支血管不同程度狭窄,其中狭窄程度小于50%的138支血管,50%～75%的82支血管,大于75%的19支血管.进行导管检查的28例,并有12例做了支架手术.结论 64排螺旋CT心脏冠状动脉检查,是一种早期发现冠心病的快速、有效、安全、可靠、微创的检查和诊断方法.尤其对那些貌似健康无症状的冠心病患者,64排螺旋CT可以替代冠状动脉造影,将成为筛查冠心病的首选方法。

目的 比较3D-螺旋CT血管造影(3D-CTA)和3D-数字减影血管造影(3D-DSA)在颅内动脉瘤诊断中的应用价值.方法 对天津市环湖医院2004年1月至2005年3月就诊的自发性蛛网膜下腔出血(SAH)患者86例,行3D-CTA、3D-DSA检查.研究并比较CTA和DSA影像特点.结果 86例患者,阴性12例,余74例患者共检出94个动脉瘤.3D-DSA与3D-CTA准确性比较,差异无统计学意义.结论 动脉瘤应用血管内栓塞治疗时,在3D影像指导下可提高动脉瘤的致密填塞率.但是在3D影像的测量值要大于2D影像的测量值。

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)在肾脏间质纤维化发病机制中的意义,探讨雷帕霉素对其的调节作用.方法 建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹动态观察梗阻侧肾脏及假手术组结缔组织生长因子mRNA和蛋白的表达,-并于第7、14天观察雷帕霉素对CTGF和纤维连接蛋白(FN)表达的作用.结果 模型组及雷帕霉素组梗阻侧肾脏CTGF均明显增加(均P＜0.01),雷帕霉素组比模型组的CTGF mRNA在第7天表达减少(P＜0.05),CTGF蛋白在第7天(P＜0.05)、14天(P＜0.01)表达下调并且纤维连接蛋白的表达在第7天也下调(P＜0.05).结论 输尿管梗阻后肾脏CTGF mRNA和蛋白表达明显增加,在UUO早期雷帕霉素对CTGF、FN有一定的抑制作用,从而改善肾间质纤维化。

目的 评价不同剂量三氧化二砷(As2O3)控释洗脱支架防治犬冠状动脉支架术后再狭窄的安全性及疗效.方法 用聚甲基丙烯酸丁酯/纳米二氧化硅-聚乳酸/乙醇酸作为支架涂层,将裸支架、涂层支架、大、中、小剂量As2O3(3.2、2.4、1.6 μg/mm2)洗脱支架随机置入犬冠脉回旋支或前降支(每组6只).术后4周处死,观察支架血管段组织学变化.结果 各组内皮完整,未见明显组织反应.大、中剂量组平均新生内膜厚度[(0.14±0.05)mm比(0.15±0.04)mm,P＞0.05],显著小于小剂量组、涂层组、裸支架组[(0.27±0.03)mm、(0.39±0.06)mm、(0.33±0.02)mm,P＜0.01];新生内膜面积[(1.09±0.11)mm2比(1.33±0.10)mm2,P＞0.05],显著小于小剂量组、涂层组、裸支架组[(1.93±0.29)mm2、(2.44±0.15)mm2、(2.40±0.32)mm2,P＜0.01];管腔面积狭窄率[(19.54±3.59)%比(22.18±3.3)%,P＞0.05],显著小于小剂量组、涂层组、裸支架组[(36.22±5.17)%、(50.39±3.03)%、(46.88±5.85)%,P＜0.01];管腔面积[(5.14±0.55)mm2比(4.97±0.38)mm2,P＞0.05],显著大于小剂量组、涂层组、裸支架组[(3.75±0.39)mm2、(2.62±0.22)mm2、(3.10±0.66)mm2,P＜0.01].小剂量组与涂层组、裸支架组各指标比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 As2O3控释洗脱支架安全可行,呈剂量依赖性抑制犬冠脉支架术后内膜增生。

目的 构建含幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(CagA)基因片段的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-CagA.方法 从幽门螺杆菌细胞株中扩增出CagA基因片段,经回收、纯化,连接到质粒pGEM-T上,测序、酶切后与质粒pEGFP-C3连接,脂质体法将pEGFP-C3-CagA转染入胃癌细胞株BGC823,用荧光显微镜观察转染的细胞.结果 通过测序、酶切证明CagA插入质粒正确,构建出载体pEGFP-C3-CagA,转染后经荧光显微镜观察到胃癌细胞株BGC823中有绿色荧光.结论 成功构建表达CagA的真核绿色荧光载体。

修复与再生是生物界中普遍存在的现象.当生物体某一组织或器官发生损伤或丢失时,机体在一定条件下能够形成一个新的组织或器官,二者在结构和功能上几乎完全一样,这个过程称为再生。

帕金森病是当前导致老年人致残的常见疾病之一,可导致生活质量的明显下降.针对帕金森病的化学病理以及多巴胺的合成和代谢,目前已经开发了针对各个环节的治疗药物:多巴替代治疗药物(左旋多巴)、多巴胺激动剂(金刚烷胺)、儿茶酚-O-甲基转移酶抑制剂等,但这些药物的疗效最长仅能持续数年。

呼吸机相关肺炎(VAP)在接受机械通气的危重患者中的发生率约为20%.与不发生VAP的患者比较,发生VAP的患者病死率高,住ICU的时间长,消耗更多的医疗资源。

随着生活水平的提高,肥胖成为一个社会问题,在过去的一段时期内,医学界常推荐低蛋白、低脂、高碳水化合物饮食以控制体重,而当前低碳水化合物饮食仍较普遍,并拥有一定的支持意见,根据最近的研究成果,美国也制定了一项关于饮食及生活方式的建议,但这类饮食长期的安全性仍不明确,即是否低碳水化合物饮食可能与冠心病相关。

由中华医学会主办的第十四次全国儿科学术交流大会于2006年11月26至30日在广西壮族自治区南宁市召开.本次大会的主题是"关注儿童健康,创建和谐环境"。

患者男,27岁,因右输尿管结石碎石术后排尿困难1个月入院.患者1个月前于我院行"输尿管镜下右输尿管上段结石钬激光碎石术",术中见尿道黏膜明显损伤并形成狭窄,右输尿管口周围可见片状陈旧性损伤(术前有逆行插管造影检查),考虑合并尿道狭窄.患者术后出现尿线变细、尿频等排尿困难症状。