2006年 · 第86卷第20期

近年来,不育症的发病率有逐渐增加的趋势.随着辅助生殖技术(ART)的广泛应用和不断完善,不育症的临床治疗取得重大突破,但这也在一定程度上阻碍了生殖生理、生殖内分泌和不育症基础领域的研究[1].一些研究方法过于简单或缺乏统一标准,这使得许多重要的基础研究结果不能得出恰当的结论,或难以给出科学、合理的解释。

目的 观察心内直视手术中采用低温洗涤红细胞保护液肺动脉灌注对肺损伤的影响.方法选择风湿性二尖瓣病变伴中重度肺动脉高压(PH)的患者30例,分为肺动脉灌注组和对照组(各15例).灌注组在升主动脉阻断后,经主肺动脉间断灌注低温洗涤红细胞保护液,测定并记录两组患者围术期的肺血管阻力(PVR)、静脉血与动脉血白细胞计数比值(V/A)、肺循环血浆丙二醛(MDA)含量及氧合指数(OI)、机械辅助通气时间.结果(1)PVR:转流结束即刻、术后12、24 h灌注组(46.4 kPa·s·L-1±8.1 kPa·s·L-1、48.5 kPa·s·L-1±7.0 kPa·s·L-1、36.1 kPa·s·L-1±6.3 kPa·s·L-1)明显低于对照组(65.7 kPa·s·L-1±5.3 kPa·s·L-1、79.8 kPa·s·L-1±8.7kPa·s·L-1、47.9 kPa·s·L-1±7.1 kPa·s·L-1,均P＜0.05).(2)MDA含量:转流结束即刻、术后12、24h灌注组(分别为14.3 mmol/L±0.8 mmol/L、16.1 mmol/L±0.7 mmol/L、13.3 mmol/L±0.5mmol/L)明显低于对照组(18.9 mmol/L±0.9 mmol/L、21.6 mmol/L±0.4 mmol/L、22.5 mmol/L±0.7 mmol/L,均P＜0.05).(3)V/A比值:转流结束即刻、术后12 h灌注组(1.16±0.05、1.20±0.05)明显低于对照组(1.53±0.07、1.68±0.25,均P＜0.01).(4)OI:转流结束即刻、术后12、24h灌注组(370±33、388+41、414±40)明显高于对照组(217±30、210±36、222±33,均P＜0.05).(5)机械辅助通气时间:灌注组(13 h±4 h)显著低于对照组(27 h±6 h,P＜0.01).结论洗涤红细胞保护液肺动脉灌注可以减轻体外循环术后肺损伤。

目的 研究塞来昔布(Celecoxib)对K562细胞增殖、早期凋亡的影响及Rb蛋白质(PRb)、P27Kip蛋白质表达变化,观察Celecoxib和伊马替尼联用对K562细胞增殖抑制和凋亡诱导是否具有协同效应.方法将K562细胞用不同浓度的Celecoxib(0、10、20、40、80及160μmol/L)作用36 h,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定细胞活力;磷脂结合蛋白Ⅴ分析检测K562细胞早期凋亡;Western印迹检测不同浓度Celecoxib对K562细胞PRb和P27Kip蛋白质表达的影响;用40 μmol/L Celecoxib、0.2μmol/L伊马替尼分别或联合作用K562细胞,观察药物对细胞活力和凋亡诱导是否具有协同作用.结果Celecoxib能明显抑制细胞活力,并呈药物剂量依赖性:随着Celecoxib浓度增高,K562细胞凋亡百分率相应增高,在160μmol/L浓度,凋亡率达25.92%,蛋白质印迹结果显示,Celecoxib可使K562细胞PRb蛋白质表达呈浓度依赖性下调;P27Kip蛋白质呈浓度依赖性上调.Celecoxib与伊马替尼联用,抑制K562细胞活力为对照组的27.68%.结论Celecoxib能以浓度依赖性方式抑制K562细胞增殖,诱导细胞凋亡;其抗增殖效应可能与PRb表达下调及P27Kip表达上调有关.Celecoxib与伊马替尼联用,在抗白血病细胞增殖作用上具有显著的协同效应。

目的 探讨电视纵隔镜在纵隔疑难病灶诊断中的应用价值.方法回顾性分析我院行电视纵隔镜检查的115例患者,其中颈部纵隔镜手术102例,胸骨旁纵隔镜手术13例,手术在全麻或局麻下完成.单纯纵隔病灶诊断不明的患者91例,高度怀疑肺癌或明确为非小细胞肺癌伴有纵隔淋巴结肿大的患者25例.结果纵隔病灶活检确诊为结节病者37例,结核14例,淋巴瘤15例,原因不明的纵隔转移癌18例,无于酪性坏死又无典型"结节细胞"的肉芽肿6例,疾病确诊率为93.3%(84/90);肺癌诊断分期25例,准确率为100%(25/25).电视纵隔镜总的诊断正确率为94.8%(109/115),CT为56.5%(65/115).本组患者平均手术时间26 min,无手术并发症及病死率.结论对于纵隔疑难病灶的诊断或肺癌分期,电视纵隔镜检查准确率高且安全可行。

目的 观察消化道肿瘤患者围手术期使用肠内免疫营养(瑞能及谷胺酰胺)对患者的营养、免疫和急性炎性反应的影响.方法选择80例60岁以上营养不良行根治手术的消化道肿瘤老年患者,随机分为两组:免疫营养组37例(瑞能及谷胺酰胺)(实验组)和标准营养组43例(能全素)(对照组).两组使用等热量肠内营养,125.4 kJ·kg-1·d-1.营养素经口服或经鼻肠管使用,术前营养支持5 d.术中均置鼻肠管或穿刺空肠造口(NCJ),术后第2天开始经空肠输注肠内营养,连续7 d.术前第5、1天,术后第1、9天抽取静脉血,检测血清白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TFN)、T细胞分化亚群3(CD3)、CD4、CD8、CD4/CD8、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、C反应蛋白(CRP)各指标.结果实验组在术后第9天血清TFN为2.18g/L±0.29g/L、PA:0.23g/L±0.09g/L、CD4:33.8%±5.4%、CD4/CD8为1.17±0.12、IgG:13.2g/L±1.8g/L均比对照组术后第9天的相应指标显著增高(P＜0.05),CRP则显著下降,由对照组的41.3mg/L±19.0 mg/L,降为31.2 mg/L±16.3 mg/L(P＜0.05).结论老年消化道肿瘤患者围手术期免疫肠内营养支持较标准肠内营养支持能更好地改善患者营养状态、免疫功能、下调急性炎症反应。

目的 应用胰岛素慢速脉冲分泌模式检测、分析技术探讨正常糖耐量(NGT)、超重及糖耐量异常(IGT)个体胰岛素慢速脉冲分泌模式的特点.方法10例NGT个体、6例超重个体及3例IGT个体分别在混合餐情况下,每15 min取血一次,连续进行24h,测定各时点的血糖、胰岛素、C肽值,结合时间序列的有关分析方法进行分析.结果(1)在混合餐情况下,胰岛素慢速脉冲每餐后出现2～4个,夜间出现3～4个左右,全天可出现12～15个,首个脉冲发生时间往往出现在餐后30～60 min,最大脉冲往往出现在餐后45～90 min,此分布特点在正常对照组、超重组、IGT组间差异无统计学意义;(2)在等比例进餐情况下,3组的24 h胰岛素分泌率(ISR)平均脉冲幅度分别为357 pmol/min±11pmol/min、820 pmol/min±37 pmol/min、666 pmoL/min±53 pmol/min;(3)对照组的ISR脉冲平均周期为75 min,超重组为75～90 min,IGT组周期节律性不明显;(4)3组的互相关函数分别为0.72±0.11、0.80±0.11、0.51±0.11.结论利用时间序列的分析方法可以发现胰岛素慢速脉冲分泌模式的特点。

目的 观察地塞米松(Dex)对人卵巢癌细胞HO-8910增殖的影响,探讨小G蛋白RhoB信号通路在其中的作用.方法四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和软琼脂实验检测细胞的增殖;RT-PCR法检测RhoB mRNA的表达;Western印迹检测RhoB及其上下游信号分子磷酸化Akt(p-Akt)、p21cip1/waf1和p27蛋白质的表达;报告基因技术检测p21cip1/waf1基因的转录.结果Dex可以明显抑制HO-8910细胞锚依赖性和非依赖性方式的增殖,100 nM Dex处理细胞6 d,抑制率为31%.100nM Dex处理细胞可以明显上调RhoB mRNA和蛋白质的表达(为对照的2.5倍);同时伴有p-Akt蛋白质表达的降低(24 h时约为对照的50%)、p27蛋白质表达的增加(36 h时比对照增加了3.3倍)以及p21cip1/waf1转录和蛋白质表达增多(24h时约为对照的1.7倍).RhoB过表达可以降低细胞的生长速度,并能增强Dex的增殖抑制作用(100 nM Dex处理6 d,抑制率为44%);而RhoB表达阻断后可逆转Dex的这一效应(抑制率约为13%).结论Dex抑制HO-8910细胞增殖的机制可能与抑制PI3K/p-Akt信号,从而上调RhoB蛋白质,使RhoB下游信号分子p21cip1/waf1和p27蛋白质表达增加有关。

目的 探讨核因子κB"诱饵"寡核苷酸(NF-κB Decoy ODN)对葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎的影响,为寻找一种治疗溃疡性结肠炎(UC)的新药提供实验依据.方法36只BALB/C小鼠按编号抽签随机分为:正常对照组;DSS+NF-κB"诱饵"ODN组;DSS+错配物ODN组;DSS+生理盐水组,每组9只.方法(1)测定各组小鼠血清中尿素氮、肌酐、随机血糖、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶浓度.(2)取小鼠结肠组织进行大体及组织形态学观察.(3)免疫组织化学染色观察NF-κB p65在结肠黏膜细胞内的表达.(4)酶联免疫吸附法(ELISA)测定结肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.(5)共聚焦显微镜观测NF-κB"诱饵"ODN在小鼠结肠黏膜内的分布.结果(1)5%DSS处理的3组小鼠的DAI评分和组织学评分及肠黏膜组织内TNF-α表达均明显高于正常对照组(均P＜0.05);而NF-κB"诱饵"ODN组的上述指标均明显低于错义NF-κB"诱饵"ODN组和生理盐水组(均P＜0.01).(2)5%DSS处理的3组小鼠其肠黏膜组织NF-κB p65的表达以胞核为主,而且这3组间NF-κB p65胞核表达差异无统计学意义.相反,正常对照组小鼠NF-κB p65以胞质表达为主.(3)NF-κB诱饵ODN可有效进入小鼠结肠黏膜层和黏膜下层组织.(4)各实验组小鼠肝、肾功能及血糖比较差异无统计学意义.结论NF-κB"诱饵"ODN对小鼠DSS结肠炎有较好的保护作用。

目的 探讨Y染色体非重组区HindⅢ酶切位点多态性与中国汉族人群原发性高血压的关系.方法入选男性研究对象857例,其中原发性高血压患者402例、正常对照人群455名.所有研究对象用常规方法提取白细胞DNA,采用多聚酶链反应结合限制性内切酶(HindⅢ)方法检测Y染色体非重组区HindⅢ酶切位点多态性.结果对照组和原发性高血压组Y染色体HindⅢ酶切位点多态性比较各基因型差异有统计学意义(P=0.02),高血压患者HindⅢ(+)者基因型为58.5%(235/402),正常人群为66.4%(302/455);高血压患者HindⅢ(+)者基因型少于正常人群,HindⅢ(-)者基因型增多.HindⅢ(+)者基因型收缩压(133.8 mm Hg±25.2 mm Hg),舒张压(83.5 mmHg±13.3 mm Hg)和平均动脉压(100.2 mm Hg±16.5 mm Hg)均明显低于HindⅢ(-)者基因型(分别为138.0 mm Hg±27.0 mm Hg、85.9 mm Hg±14.4 mm Hg、103.3 mm Hg±17.6 mm Hg,均P＜0.05).结论Y染色体HindⅢ酶切位点多态性与原发性高血压有关,可能是中国汉族人群原发性高血压的一个遗传标志。

目的 探讨北京大学社区队列人群基线(1992年)血脂水平及10年(1992年至2002年)血脂的变化与颈动脉粥样硬化的关系.方法1992年在北京大学社区建立了年龄为35～64岁共1985人的心血管病危险因素研究队列,取得了基线调查数据;在2002年对该人群再次进行了心血管病危险因素调查,并进行了颈动脉超声检查.本研究对两次调查资料完整的1331人基线血脂水平及10年血脂的变化与颈动脉粥样硬化的关系进行分析.结果(1)北京大学社区45～74岁研究人群中颈动脉内中膜(IMT)的增厚率为47.8%,颈动脉斑块的发生率为29.9%.(2)在基线总胆固醇(TC)＜3.64mmol/L时,10年后颈动脉斑块的发生率为19.7%,TC≥6.2 4 mmol/L时,颈动脉斑块的患病危险是低TC水平(＜3.64mmol/L)组的3.1倍(46.8%).随着基线TC水平的增加,10年后颈动脉斑块、颈动脉IMT增厚的发生率均呈上升趋势(P＜0.001).(3)1992年和2002年查体TC均正常者中有颈动脉斑块者319人(32.0%);1992年和2002年查体TC均异常者中有颈动脉斑块29人(50.0%).结论在调查者中45～74岁人群中颈动脉粥样硬化普遍存在.随着基线总胆固醇水平的上升,无论是颈动脉斑块发生率、还是IMT增厚率均增加。

目的 探讨睾丸扭转2 h复位后第3天睾丸生精上皮细胞核转录因子(NF-κB)表达的改变及其凋亡的关系.方法用24只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型.分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组,每组8只.Ⅰ组动物睾丸扭转复位后用柳氮磺胺吡啶灌胃;Ⅱ组动物睾丸扭转复位后用等量的生理盐水灌胃;Ⅲ组动物假手术后用等量的生理盐水灌胃.分别用Western蛋白印迹和免疫组织化学原位检测睾丸生精上皮细胞中NF-κB的表达情况;TUNEL法检测生精上皮细胞凋亡情况.结果Ⅱ组动物睾丸扭转复位后第3天扭转侧睾丸生精上皮细胞胞质NF-κB蛋白质(9.4±2.68)表达与Ⅰ、Ⅲ组扭转侧睾丸生精上皮细胞胞质NF-κB表达(分别为:12±2.2;11.1±3)相比下降水平差异无统计学意义,胞核NF-κB表达升高水平差异有统计学意义(3组分别为8.4±3.1;21.1±3.6;6.0±2.3).免疫组织化学原位检测Ⅰ和Ⅲ组扭转侧睾丸生精上皮细胞中NF-κB的表达以胞质为主,Ⅱ组扭转侧睾丸生精上皮细胞中NF-κB的表达以细胞核为主,而且NF-κB阳性细胞比例较其他两组阳性率显著上升(三组分别为15.6%±2.6%,66.1%±3.8%,10.8%±2.7%).Ⅰ组(7.7%±2.0%)和Ⅲ组(5.9%±1.7%)扭转侧睾丸生精上皮细胞凋亡指数差异不明显;Ⅱ组扭转侧睾丸生精上皮细胞凋亡水平(37.2%±3.3%)跟以上两组相比升高有显著性差异.结论睾丸扭转2 h复位后第3 d,睾丸生精上皮细胞NF-κB蛋白已被激活,从胞质转移至核内,启动生精上皮细胞凋亡过程.NF-κB蛋白质的激活是导致睾丸扭转复位后生精上皮细胞特别是精原细胞和各级精母细胞凋亡增加的重要环节。

目的 探讨男性不育患者Y染色体微缺失检测的临床意义.方法应用两个多重聚合酶链反应技术对南京医科大学第一附属医院2003年7月-2005年3月收治的143例严重少精子和无精子的不育患者(严重少精子症80例、无精子症63例)进行Y染色体微缺失检测.结果在143例患者中,我们发现21例(21/143,14.7%)微缺失,其中特发性不育患者12例(严重少精子症3例、无精子症9例),非特发性不育患者9例(严重少精子症3例、无精子症6例).21例微缺失患者中,1例位于AZFa区,2例位于AZFb+AZFc区,2例位于AZFb区,16例位于AZFc区.21例微缺失患者中,4例睾丸病理显示为成熟阻滞,6例为严重精子发生低下,11例为唯支持细胞综合征.在特发性和非特发性患者中AZF微缺失发生的位置和范围差异无统计学意义.结论建议对特发性不育和非特发性不育患者,特别是那些寻求卵胞内精子注射治疗的患者,都应进行Y染色体微缺失的检测。

目的 探讨大鼠精原细胞的分离纯化方法及纯化后的细胞特性.方法应用复合酶消化法制备10 d龄SD大鼠的睾丸单细胞悬液,采用差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法纯化精原细胞.分别以c-kit和α6-整合素作为细胞标记,观察睾丸组织中的精原细胞与纯化后细胞的免疫化学特征.通过流式细胞仪分别检测纯化后细胞表达c-kit和α6-整合素的阳性率.结果在睾丸组织中精原细胞特异表达c-kit和α6-整合素.纯化后的单细胞中有c-kit和α6-整合素的阳性表达.流式细胞仪检测:以c-kit作为细胞标记,未纯化组的阳性表达率为1.59%±0.04%,纯化组为68.33%±2.45%,两组差异非常显著(P＜0.01);以α6-整合素作为细胞标记,未纯化组的阳性表达率为2.38%±0.60%,纯化组为72.04%±3.65%,两组差异非常显著(P＜0.01).台盼蓝排斥试验表明纯化后细胞的活性率＞95%.结论C-kit、α6-整合素可作为特定时期精原细胞的表面标志.采用复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法纯化精原细胞,能获得纯度和活性较高的精原细胞。

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种病因不明的直肠和结肠非特异性炎性疾病,目前以内科治疗为主,但仍有10%～50%患者需要外科手术治疗,全结直肠切除回肠贮袋肛管吻合术(ileal pouch anal anastomosis,IPAA)是彻底切除病变组织、肠道重建的理想术式,但手术操作复杂,存在着许多争论的问题,为了探讨IPAA对UC的治疗价值,我们采用IPAA术治疗了31例溃疡性结肠炎患者,收到了良好的效果,现报道如下。

既往,人们一贯认为RNA作为一种相对惰性的生物大分子,除了执行DNA建造蛋白的指令外并无其他作用.最近一系列研究表明,小分子RNA(microRNA,miRNA)实际上操纵着许多细胞功能,可通过互补序列的结合反作用于mRNA,从而关闭或调节相关基因的表达,甚至可通过指导基因的开关来调控细胞的发育时钟,在干细胞和肿瘤等前沿研究领域显示出巨大潜能[1].本文拟结合液相芯片检测分析系统,探讨其在miRNA研究中的应用前景。

H5N1型禽流感病毒可引起人下呼吸道感染和严重的肺炎,但到目前为止,尚不清楚其在人和实验动物的下呼吸道病毒黏附的细胞类型.尽管黏附不是病毒复制所需要的惟一因素,但这些信息对更好地理解H5N1禽流感发病机制和筛选合适的动物模型很重要.荷兰伊拉兹马斯医学中心的Debby van Rie1等对此进行了研究,并于2006年3月23日在<科学>杂志的网站上发表了他们的最新研究成果(http://www.sciencemag.org)。

抗生素耐药的肺炎球菌感染会引起治疗失败,并增加医疗费用.世界范围内,绝大多数抗生素耐药的肺炎球菌感染由5种血清型引起,这5种血清型均包括在7价肺炎球菌同源疫苗中(6B,9V,14,19F和23F).正是由于血清型和耐药菌之间存在联系,才使得同源疫苗可以用于减少耐药菌株所致疾病的发病率.2000年美国批准使用肺炎球菌同源疫苗,推荐用于2岁以下和2～4岁的患有某种慢性病或有高危因素的婴幼儿.为了评价疫苗对耐药菌株所致的侵入型疾病的作用,Moe H.Kyaw等进行了研究。

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种衰老相关的中枢神经系统变性疾病,主要病变在大脑的黑质和纹状体.病理生理改变为脑黑质多巴胺能神经元变性.在衰老过程中细胞DNA或RNA氧化损害的蓄积是诱发突变和细胞死亡的主要原因.氧化DNA损害如8-氧化鸟嘌呤(8-oxyoguanine,8-oxoG)在各种神经变性病如帕金森病、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化患者细胞核和线粒体基因组中显著增加。

主髂动脉闭塞症是常见的血管闭塞性疾病,且近几年在我国的发病率呈上升趋势.复旦大学附属华山医院于1998年至2003年共收治主髂动脉闭塞症23例,其中17例行腹主双股动脉人造血管旁路移植术,现报道如下。

干扰素(IFN)-α是具有多种生物学作用的细胞因子,在机体抗病毒感染、肿瘤抑制、调节免疫反应等方面发挥重要作用[1],并用于临床多种肿瘤以及病毒性肝炎的治疗,但其确切作用机制并不完全明了.目前认为,IFN-α可以激活与其相关的信号转导通路,通过活化多种目的基因的表达而发挥作用。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,而且近年来发病率有升高趋势.以往国内外的研究资料表明乳腺癌的发生与基因的改变有关,其中比较明确的是肿瘤抑制基因p53基因的突变可能与乳腺上皮细胞的恶变有关[1].最近,p53基因家族中的新成员-p51和p73的基因已经被发现,他们分别位于染色体3q28[2]和1p36.3部位[3].p73基因和p51基因具有类似于p53基因的生物学功能[1,4,5]。

前列腺癌(PCa)在欧美国家[1]已成为第一位危害男性健康的肿瘤疾病.近年来我国前列腺癌的发病率也呈明显上升趋势[2].目前临床上亟待解决的问题是早期前列腺癌的准确诊断和及时治疗[3,4].近年来有研究证实,人腺体激肽释放酶(hK2)有可能为诊断前列腺癌新的方法.我们运用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术研究了前列腺增生(BPH)与PCa组织标本的hK2表达,探讨hK2在前列腺癌诊断中的特异性及临床意义。