2005年 · 第85卷第27期

干细胞移植技术治疗疾病可追溯到上世纪50年代利用骨髓细胞治疗白血病,后来随着外周血细胞分离纯化技术逐渐成熟和细胞表面抗原标志物的发现不断增多,人们开始注意到早期骨髓移植治疗白血病的本质细胞是骨髓造血干细胞,即骨髓细胞移植实际上是骨髓造血干细胞的移植。

在当今的生命科学研究领域,人胚胎干细胞及克隆技术等研究的进展和突破给医疗、卫生健康等方面带来了革命性的影响,同时相关研究成果所引发的生命伦理问题备受关注.如何更好地协调与解决干细胞研究过程中面临的伦理学争论,成为摆在人们面前一个很现实和迫切需要解决的问题。

大多数成年脊椎动物的再生能力有限,仅在某些组织和器官有较强的修复和再生能力,其中成体干细胞(adult stem cells, ASCs)起着关键性的作用.

视觉是保障人类生存质量最重要的指标之一.全球有数以亿计的视障患者处于黑暗中,近年来的干细胞研究为这些患者带来了曙光.然而,干细胞领域还有许多尚待揭示的奥秘,干细胞分化的内在分子调控机制尚不明了,这又向科学工作者提出了挑战。

干细胞的研究方兴未艾.由于胚胎干细胞涉及伦理问题,所以成体干细胞研究倍受关注,其中间充质干细胞是目前研究最为广泛而深入的一类成体干细胞.已证实骨髓、皮肤真皮、脂肪、肌肉、骨膜等多种组织中存在间充质干细胞.大量实验研究和部分临床试用结果均显示,间充质干细胞移植对造血恢复、创面愈合、骨和软骨组织置换、心肌和骨骼肌修复、血管修复以及一些神经系统疾病的治疗,前景良好[1,2].我们自己的研究还发现间充质干细胞移植可同时实现促进造血恢复和创伤愈合的双重作用[3]。

目的 探索以异体软骨微粒脱细胞基质为支架构建组织工程化软骨.方法多步骤酶法将绵羊关节软骨制成微粒脱细胞基质,行大体、光镜(苏木素-伊红、胶原、甲苯胺蓝染色)、扫描电镜观察,同时测定微粒的胶原、氨基葡聚糖、DNA含量.异体绵羊关节软骨细胞分离、体外扩增,并与软骨微粒脱细胞基质混合体外培养0～35 d,倒置显微镜及扫描、透射电镜观察,同时测定羟脯氨酸,氨基葡聚糖,DNA含量及细胞黏附率.结果软骨微粒脱细胞基质只含有基质成分,直径0.100～0.154 mm,胶原,氨基葡聚糖及DNA含量分别为204.4±3.1 μg/mg, 18.3±2.0 μg/mg和0.042±0.013 μg/mg.异体软骨细胞紧紧围绕于异体软骨微粒脱细胞基质四周,二者形成的复合物中胶原、氨基葡聚糖及DNA含量于第7 d与0 d相比具有统计学意义(P＜0.05),分别与14 d(胶原、DNA)和21 d(氨基葡聚糖)达高峰,随后维持在高水平.细胞黏附率为92%.结论软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质有良好的生物相容性,为组织工程方法再造软骨提供又一支架材料。

目的 研究血糖及皮肤组织糖含量对浅二度烫伤创面愈合的影响.方法 96只清洁级SD大鼠随机分成正常组和以STZ诱导的速发型糖尿病组,并造成10%体表总面积(TBSA)的浅二度烫伤模型,分别测定伤前、伤后第1天、3天、5天、7天、10天和14天的血糖、皮肤或创面组织糖含量;大体和组织学动态观察创面愈合过程;伤前和伤后3 d、7 d和14 d检测表皮细胞增殖周期.结果糖尿病大鼠血糖浓度明显高于正常组(27.28 mmol/L±0.80mmol/L vs 4.65 mmol/L±0.14 mmol/L,P<0.01);皮肤组织创面中局部的糖含量与血糖变化有显著的相关性(r=0.881,P<0.05),糖尿病组大鼠浅二度烫伤创面局部糖含量明显高于正常烫伤组(14.2 mmol/L±3.0 mmol/g vs 4.5 mmol/L±0.5 mmol/g,P<0.01).糖尿病烫伤创面愈合明显延迟,新生上皮明显减少,表皮细胞进入S期和G2/M期百分比增殖较正常大鼠显著减少.结论糖尿病大鼠局部创面组织糖含量增加与血糖变化密切相关,而创面局部糖含量的增加与创面愈合延迟存在着不可分割的联系.高糖环境可抑制浅二度烫伤创面表皮细胞增殖。

目的 研究Src癌基因同源的酪氨酸蛋白磷酸酶2(Shp-2)在慢性粒细胞白血病(CML)细胞中的表达,及其在p210bcr/abl诱导的白血病细胞恶性增殖和凋亡抵抗中的作用.方法收集25例p210bcr/abl阳性CML患者白血病细胞样本,8例非肿瘤病人骨髓和10例正常人外周血细胞样本作阴性对照,K562和KU812白血病细胞系作为p210bcr/abl阳性对照,KG-1白血病细胞作为Shp-2阳性对照.用Western印迹技术定量分析与比较Shp-2在白血病细胞和正常骨髓造血细胞中的表达情况,通过特异性抑制剂分别下调Shp-2和白血病融合基因p210bcr/abl后,观察Shp-2 表达对p210 bcr/abl阳性白血病细胞增殖与凋亡的作用.细胞增殖与凋亡检测应用流式细胞仪.结果(1)磷酸化Shp-2蛋白在92%患者CML白血病细胞样本中呈高表达状态,而在8例非肿瘤患者骨髓和10例正常人外周血细胞中低表达或不表达.磷酸化Shp-2/β-肌动蛋白比值分别为0.91±0.62、0.16±0.09和0.03±0.05(P均<0.01).(2)下调Shp-2蛋白表达后,白血病细胞凋亡率从4.89%上升到38.69%(P<0.01),而S期细胞从33.6%下降到10.8%(P<0.01).(3)特异性抑制p210bcr/abl融合基因表达蛋白后,白血病细胞中磷酸化Shp-2蛋白明显下降,同时出现明显细胞凋亡与生长抑制现象.结论(1)磷酸化Shp-2蛋白在慢性粒细胞白血病细胞患者中呈过度表达状态,并且与白血病细胞恶性增殖与凋亡抵抗密切相关.(2)bcr/abl融合基因阳性患者的白血病细胞中Shp-2的过度表达可能由p210bcr/abl蛋白激活引起。

目的 探讨高脂饮食诱导的肥胖大鼠在具有外周胰岛素抵抗(IR)的情况下,胰岛胰岛素、胰高血糖素的分泌和合成功能,高糖刺激下胰高血糖素和胰岛素的分泌以及胰岛内胰岛素信号转导分子的改变.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为高脂饲料喂养的肥胖组和普通饲料喂养的对照组,每组各15只,共喂养20周.采用胰腺组织匀浆,检测胰岛素和胰高血糖素的含量;胰岛细胞表面灌注检测高糖状态胰岛素和胰高血糖素的动态分泌变化;免疫组织化学染色及图像分析检测胰岛素受体(IRc)及胰岛素受体底物1、2(IRS-1、IRS-2)在两组大鼠胰岛的表达.结果 (1)肥胖组胰岛素敏感指数(ISI)明显低于对照组,肥胖组血胰高血糖素水平和胰岛内的胰高血糖素水平均显著高于对照组(362 pg/ml±58 pg/ml vs 291 pg/ml±35 pg/ml,P<0.05;442 pg/ml±56 pg/ml vs 287 pg/ml±48 pg/ml, 均P<0.05).(2)肥胖组葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)受损,16.7 mmol/L葡萄糖可显著抑制对照组胰岛α细胞胰高血糖素的分泌,而在肥胖组这种抑制作用消失.(3)胰岛存在IRc、IRS-1和IRS-2的表达.肥胖组胰岛IRc、IRS-2的表达较对照组胰岛分别低28%和22%(均P<0.01).结论高脂饮食诱导的肥胖大鼠胰岛细胞的胰岛素信号转导通路受损,即在有外周IR的同时也具有胰岛内的IR,这可能是肥胖状态下胰岛细胞功能障碍的内在机制之一。

目的 经胆道镜奥狄括约肌测压,观察麻醉镇痛药物、生长抑素类似物、硝酸酯类药物对奥狄括约肌运动功能的影响,并观察M-胆碱能受体阻断剂及硝酸酯类药物对吗啡的拮抗作用.方法将因患胆结石行胆道手术后留有T型管患者157例,随机分为麻醉镇痛药物组、生长抑素组、硝酸酯类药物组、硝酸酯类药物与吗啡联合用药组及M-胆硷能受体阻断剂与吗啡联合用药组,测量用药前后的十二指肠压、奥狄括约肌基础压、收缩波幅、收缩频率、收缩间期及胆总管压.结果肌注吗啡及强痛定后奥狄括约肌基础压力(SOBP)和收缩幅度(SOCA)升高,收缩频率增快,吗啡组胆总管压力(CBDP)升高;肌注度冷丁后各指标无明显变化;肌注曲吗多后SOBP和收缩幅度明显降低.按250 μg/h的速度输入施他宁后收缩幅度升高,速度调为500 μg/h后,SOBP及收缩幅度较剂量加倍前明显降低.静脉注射善宁后,仅CBDP明显升高.舌下含服消心痛或硝酸甘油后,SOBP和收缩幅度显著降低.使用戊四硝酯20 min后,SOBP降低.使用吗啡10 min后舌下含服硝酸甘油或消心痛,上述指标下降至正常.使用戊四硝酯后,SOBP显著降低,收缩频率略有减慢.使用吗啡10 min后肌注山莨菪碱及阿托品,SOBP和收缩幅度降低,使用解痉灵后SOBP和收缩幅度降低,收缩频率减慢.结论吗啡及强痛定对奥狄括约肌起激动作用;曲吗多对奥狄括约肌具抑制作用;度冷丁及善宁对奥狄括约肌无明显作用;施他宁小剂量时兴奋奥狄括约肌;硝酸酯类药物对奥狄括约肌具抑制作用;硝酸酯类药物及M-胆硷能受体阻断剂可拮抗吗啡的激动作用。

目的 检测环氧合酶2(COX-2)和半胱氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)蛋白在甲基胆蒽诱导的大鼠肺鳞癌形成过程中的差异表达并探讨其意义.方法采用左肺叶支气管灌注含甲基胆蒽10 mg 和二乙基亚硝胺0. 01 ml的碘油溶液诱发Wistar大鼠的肺鳞癌,应用免疫组织化学SP法检测肺鳞癌发生过程中各阶段组织COX-2、caspase-3的蛋白表达并计算免疫组织化学评分(IHS).结果实验组多个阶段病变共存的动物标本有80.0%(64/80),其中获取支气管膜上皮增生14份,鳞状化生25份,不典型增生35份,原位癌12份,侵袭癌54份,转移癌15份.正常支气管黏膜上皮偶有COX-2弱阳性表达,不典型增生、原位癌及转移癌阶段COX-2的IHS逐步增高,差异有高度显著性(均P<0.01).10例对照组大鼠支气管粘膜上皮细胞中8例(80.0%)有caspase-3的阳性表达,不典型增生、浸润癌和转移癌阶段caspase-3的HIS逐步降低,差异有显著性(P<0.01、P<0.01、P<0.05).在对照组和实验组共165例大鼠肺组织病变中,COX-2与caspase-3呈显著负相关(χ2= 106.664, spearman相关系数为-0.678,P<0.01).结论 COX-2蛋白上升和caspase-3蛋白减少与肺癌的形成密切相关,二者相互作用,共同促进肺癌的发生和侵袭转移。

目的 通过免疫组织化学染色的方法了解Thy-1在肺癌组织中的表达状况,分析其对于非小细胞肺癌患者预后的影响,并了解Thy-1与p53表达之间的相关性,为Thy-1在肺癌中表达机理的进一步研究提供思路.方法以组织芯片的形式,采用免疫组化信号催化放大法,对175例包括不同病理类型的肺组织标本中Thy-1的表达情况进行检测,并对其中的91例非小细胞肺癌进行Thy-1和p53的联合检测.分析这两种蛋白表达之间的相关性,结合临床病理资料及随访结果分析Thy-1与患者生存预后的关系.结果 Thy-1抗体特异性地在不同病理类型肺癌细胞的胞核中有强阳性染色,89例(56.7%)为Thy-1细胞核染色阳性.91例非小细胞肺癌患者预后的单因素和多因素分析显示,TNM分期、淋巴结转移和Thy-1在细胞核中高表达是影响患者预后的独立因素.分层研究提示,无淋巴结转移组中,Thy-1细胞核阴性患者的生存时间明显长于阳性患者(分别为46.42个月和38.56个月,P=0.0207).Thy-1和p53两者表达之间存在显著的相关性(P<0.001).结论 Thy-1在肺癌细胞核内特异性高表达是非小细胞肺癌患者预后的影响因素之一.Thy-1在细胞核内的异常高表达可以作为肺癌病理诊断的标记物。

目的 评价左氧氟沙星的治疗方案.方法给12名健康志愿者单剂静脉滴注200、300和500 mg左氧氟沙星后测定其血、尿药物浓度,计算药代动力学(PK)参数.体外药效学(PD)研究系测定左氧氟沙星对近期823株临床分离菌的药敏参数[最低抑菌浓度(MIC)],并与其他相关抗菌药进行比较.根据上述研究结果计算左氧氟沙星血药峰浓度(Cmax)/MIC和血药浓度-时间曲线下面积(AUC)/MIC的PK/PD参数,据此推荐左氧氟沙星用于不同病原菌感染的治疗方案.结果临床PK研究结果显示单剂静脉滴注左氧氟沙星200、300和500 mg后,Cmax分别为3.4 mg/L±0.8 mg/L、4.8 mg/L±1.4 mg/L 和7.6 mg/L±1.1 mg/L,AUC0-∞分别为14.4 mg·h/L±2.5 mg·h/L、21.9 mg·h/L±4.5 mg·h/L和38.3 mg·h/L±4.9 mg·h/L,消除半衰期(T1/2β)分别为6.2 h±0.4 h、6.4 h±0.9 h和6.5 h±0.6 h,给药后24 h内自尿中累积排出给药量的69%±5%、69%±6%和65%±4%.体外PD研究结果显示左氧氟沙星对溶血性链球菌、卡他莫拉菌具有高度抗菌活性,对肺炎链球菌(包括青霉素不敏感株)、流感嗜血杆菌、甲氧西林敏感金葡菌、肺炎克雷伯菌、嗜麦芽窄食单胞菌具有良好抗菌作用,对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌亦具有较好抗菌作用,甲氧西林耐药金葡菌(MRSA)、肠球菌则对左氧氟沙星大多呈现耐药,而大肠埃希菌则半数以上对其呈现耐药.PK/PD参数计算结果显示以1次/d给药方案为宜.左氧氟沙星每日200 mg 治疗卡他莫拉菌感染预期可获良好效果,每日300 mg治疗溶血性链球菌感染预期有效.治疗肺炎链球菌、流感嗜血杆菌所致呼吸道感染则需每日500 mg预期可达良好疗效,而治疗对该药呈现敏感的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌所致呼吸道、尿路感染则至少每日500 mg,而对MRSA、肠球菌感染,PK/PD参数预示疗效不佳.结论以PK/PD原理制定的左氧氟沙星给药方案用于临床可望获得良好的疗效。

目的 研究人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells, hMSCs)在体外与损伤的人汗腺细胞(human sweat gland cells, hSGCs)共培养时的转化情况.方法体外分别分离培养和扩增hMSCs和hSGCs,用二步免疫细胞化学法检测hMSCs和hSGCs抗原表达情况.用5 μmol/L的5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)对培养的hMSCs进行连续培养标记.待原代培养的hSGCs达70%融合后,给予47℃高温处理40 min造成热损伤体外模型,37℃冷却1-2 h,然后加入(1-2)×105 BrdU标记的hMSCs共同培养,2周后,以抗癌胚抗原(CEA)和抗BrdU单克隆抗体作为一抗,采用免疫细胞化学双染法检测共培养的细胞.结果 hMSCs 和hSGCs均呈克隆样生长, hMSCs表达CD44和CD105,不表达CD34和CEA;hSGCs表达CK7、CK8、CK19、CEA.用BrdU 标记hMSCs 阳性率可达90%,hSGCs经高温损伤后,大多数细胞的细胞间连接消失.共培养2周后,部分细胞同时表达CEA和BrdU,并有多核现象.细胞染色示双染细胞可达1%～5%,多核细胞且核染色不同的细胞约为0.01%～0.05%,多核细胞与其他双染细胞相比,细胞明显的宽大扁平.结论在损伤的微环境下,hMSCs可以向hSGCs转化,其机制可能是细胞分化、细胞融合甚至是核融合。

目的 研究脂肪干细胞(adipose derived stem cells, ADSCs) 表面免疫分子的表达以及体外调节淋巴细胞反应的功能,以期为组织工程提供同种异体种子细胞来源.方法从临床脂肪抽吸术丢弃脂肪组织中分离获取脂肪干细胞(共3例),体外培养至第2代,流式细胞仪检测免疫分子HLAI、HLAII的表达.1×105个/孔ADSC 细胞刺激异体淋巴细胞,观察细胞增殖情况.以植物血凝素(PHA,2 μg/ml)刺激淋巴细胞后,分别以(1×102、1×103、1×104、1×105)细胞/孔数量的异体脂肪干细胞加入反应体系中,观察淋巴细胞增殖情况;另一组在刺激同时加入白介素-2(IL-2,0.5 ng/ml),检测脂肪干细胞抑制作用的逆转.分别以1×102～5细胞/孔数量的"第三者"脂肪干细胞或经IFN-γ作用后脂肪干细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况.结果脂肪干细胞表达HLA I类分子,但未检测到HLAII类分子阳性表达.人IFN-γ刺激48 h后,HLA I表达未见明显增高,HLAII类分子表达明显增高.异体或经IFN-γ作用的脂肪干细胞均未能刺激淋巴细胞体外增殖.脂肪干细胞可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖,IL-2可逆转脂肪干细胞的抑制作用.脂肪干细胞可明显抑制双相混合淋巴细胞反应,抑制作用呈脂肪干细胞细胞数量依赖性;经IFN-γ作用后抑制作用未见明显减弱.结论 ADSC可在体外抑制淋巴细胞增殖反应,具有一定的调节淋巴细胞反应的能力,有可能成为组织工程或细胞治疗中同种异体细胞来源。

目的 从学术角度指出误用和滥用统计学问题产生的症结,并创造性地提出能够从根本上解决前述问题的"统计学的三型理论",即问题的"表现型"、"原型"和"标准型".方法从理论与实践两个方面阐明前述提及的"三型理论"是合理应用统计学的要领,而且,通过实例说明"三型"之间是互相有联系的.用"三型理论"去解释和分析生物医学科研中的实验设计和统计分析问题,可以帮助人们透过事物的现象看清其本质.结果通过研究发现:有些问题的"三型"之间是彼此相同的,有些问题的原型就是标准型,然而,还有些问题的"三型"是彼此不同的.特别是在某些多因素实验研究中,研究者犯了"对照不全"的错误,导致与其"原型"对应的"标准型"根本不存在,这是一个需要引入"拆分"的思想和方法方可解决的问题.结论一旦弄清了每个具体问题的"三型",合理进行实验设计与正确选择统计分析方法处理特定的实验资料就是水到渠成的事了."统计学的三型理论",可以帮助人们在运用统计学的过程中不犯统计学错误或至少会大大降低误用统计学的机会,可在很大程度上提高生物医学科研的质量、水平和速度;可以提高统计学教材的质量和教学效果,为生物医学统计学的学科发展指明了前进的方向。

近年来, 对胚胎干细胞的研究不断深入,对成体干细胞(adult stem cells)生物学特性的认识随之进一步加深.成体干细胞是一群存在于已分化(或特化)的组织中尚未分化(或特化)的细胞, 它们除了具有较强的自我更新和增殖、分化潜能外, 还具有较大的可塑性.成体干细胞可塑性现象的发现, 使得人们对于今后应用细胞再生治疗烧伤、创伤或其他疾病导致的组织缺损充满了希望。

美国心律学会(原北美起搏与电生理学会,自2005年更名)2005学术年会于2005年5月4至7日在美国的新奥尔良市召开.本次大会除对心脏起搏与电生理临床各方面的进展进行了充分的交流和介绍外,与临床心脏疾病相关的基础研究方面亦有许多报告,现将4个分论坛的专题报告介绍如下。

2005年6月27～28日,以"面向21世纪的医疗市场、道德与传统文化资源"为主题的国际生命伦理学学术研讨会在山东大学医学院召开.会议由山东大学医学院、香港城市大学亚洲管治研究中心和国际哲学与医学研究学会(美国)、医学与哲学杂志(美国)联合主办.来自美国、中国香港和大陆的二十余名专家、学者齐聚山大,共同探讨生命伦理学与医疗保健领域的热点问题。

例1 男性40岁, 1年前尿痛,排尿终末时明显,下腹部有阵发性疼痛.近5 d尿痛加重伴肉眼血尿.膀胱镜检查示:膀胱顶部见肿物约1.5 cm×1.5 cm,窄基底。

腹腔镜手术治疗具有许多短期优势,如术后疼痛轻、伤口并发症少、术后恢复快、住院时间短等.发表于2005年5月14日Lancet的一项研究报道(Lancet,2005,365:1718-1726)称:腹腔镜辅助切除术与开腹手术相比,治疗结肠癌的短期疗效相同,并可能产生相似的长期疗效。

作为新型的胰岛素增敏剂,吡格列酮和罗格列酮已广泛应用于临床,两者对血脂的影响颇受关注,先前的研究或为回顾性分析,或未设严格的对照,所得结论均缺乏说服力.美国迈阿密大学医学院Goldberg等经过多中心、前瞻性、随机、双盲和平行对照研究发现,吡格列酮对血脂的影响明显优于罗格列酮.这一结果发表在2005年7月的Diabetes Care杂志上(Diabetes Care, 2005, 28:1547-1554)。

肠易激综合征(IBS) 是以腹痛/ 腹部不适伴排便习惯改变为特征的功能性肠病.该病发病率高,我国北京和广州两地报道分别为0.82%和5.67%[1].其发病机制尚不完全清楚.研究表明5-羟色胺(5-HT)、遗传因素可能与IBS的发病有关[2].人类5-羟色胺转运蛋白(SERT)基因存在多个多态性位点,国外研究显示启动子区的5-HTTLPR和第2内含子区的可变数目串联重复(VNTR)多态性与IBS有关[3-5].国内相关的报道较少,为此我们对IBS患者和健康人的SERT基因多态性进行对照研究。

患者男,55岁.因皮肤、眼白发黄于2005年2月入浙江大学附属邵逸夫医院.查体:一般情况尚可,皮肤巩膜明显黄染,腹平软,无压痛,肝脾肋下未及.入院前曾到当地医院就诊,ERCP提示:肝内外胆管扩张,未见结石.CA19-9:1617 U/ml,总胆红素142 mg/L,直接胆红素98 mg/L;入住我院后再行ERCP检查并行鼻胆管引流,ERCP活检阴性,经2周鼻胆管引流后黄疸消退;超声内镜提示:胰头部低回声占位.经充分术前准备于2005年3月9日在全麻下行完全腹腔镜下胰十二指肠切除术。