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Stimulatory activity of anti-peptide antibodies against the second extracellular loop of human M2 muscarinic receptorsWANG Wenze, GUO Guangwei, TANG Jin, LI Jiacheng, ZHAO Rongrui, Hjalmarson Ake, Michael Fu L.X.
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.101
目标研究抗人M细胞外第二环的抗肽抗体的活性2毒蕈碱受体对cAMP产生和内向钙电流的影响Ca）在豚鼠心室肌细胞中。还与毒蕈碱受体激动剂进行了比较。
方法用放射免疫法测定cAMP含量Ca在豚鼠中，通过全细胞膜片钳技术记录单个心室细胞。
结果毒蕈碱受体激动剂卡巴胆碱(Carb 10 μ mol/L)和抗肽抗体(Abs 100 nmol/L)均可降低基础cAMP水平（分别降低46.9%±4.2%和60.2%±4.6%）和基础ICaCarb(10 μ mol/L）和Abs(100 nmol/L）也能抑制异丙肾上腺素诱导的(ISO 0.8 μ mol/L）cAMP产生的增加（Carb分别从108.2±7.0增加到88.4±7.2 pmol/mg·protein/min，Abs分别从88.6±5.1 pmol/mg·protein/min）和I的增加Ca毒蕈碱受体拮抗剂阿托品（Atr）能够阻止Carb和Abs的这些作用。
结论针对位于人M细胞外第二环的表位的抗肽抗体2毒蕈碱受体与毒蕈碱受体激动剂相似，可降低基础ICaβ-受体激动剂刺激I的增加Ca通过减少基础受体和β受体激动剂刺激cAMP产生的增加，因此可以对其靶受体产生影响。这些结果进一步表明，自身免疫可能参与了人心肌病和人M的第二细胞外环的发病机制2毒蕈碱受体可能是主要的免疫优势区。中国医学杂志2000;113(10):867-871
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Role of protein tyrosine kinase in IL-1β induced activation of mitogen-activated protein kinase in fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritisLU Houshan, SUN Tiezheng, YAO Libo, ZHANG Yujun
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.102
目标研究IL-1 β刺激下类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）的活化，并阐明蛋白酪氨酸激酶（PTK）在MAPKs活化中的作用。
方法使用RA FLS的原代培养物。应用Western印迹检查在不同剂量和不同时期用IL-1 β刺激的RA FLS中蛋白质酪氨酸磷酸化状态和MAPKs活化的瞬时变化。特异性PTK抑制剂染料木黄酮用于评估IL-1 β对MAPK活化的抑制作用。
结果IL-1 β瞬时增加蛋白酪氨酸磷酸化，激活MAPKs级联（主要是ERK2, JNK2和P38）在RA FLS中。不同剂量IL-1 β(1IU/ml、10IU/ml、100IU/ml)对MAPKs的激活无明显差异，但ERK的激活峰值2, JNK2和P38分别在IL-1 β刺激后5分钟、15分钟和1分钟发生。ERK的激活2染料木黄酮对JNK和P有抑制作用38相对较弱。
结论在RA FLS中IL-1 β的信号转导过程中，酪氨酸磷酸化短暂增加，MAPKs级联在几分钟内被激活，并且三个亚家族成员之间的激活存在异质性。PTK参与ERK的激活，但对JNK和P的激活作用较弱38.中国医学杂志2000;113(l0)：872-876
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The relationship between Thl/Th2-type cells and disease activity in patients with systemic lupus erythematosusCHEN Shunle, HU Dawei, SHI Xuegeng, SHEN Nan, GU Yueying, BAO Chunde
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.103
目标探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者Th1/Th2型细胞因子失衡及其与疾病活动性的关系。
结果系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)>10的患者CD4显著减少+或CD8+产生IFN-γ的T细胞高于SLEDAI=0、SLEDAI1-10或健康对照（P<0.01,P<0.01或P<0.05）。SLEDAI>10的患者IFN-γ/IL-4阳性CD4比值也降低+或CD8+T细胞，与SLEDAI=0、SLEDAI 1-10或健康对照相比（P<0.05).Th1或Tc1细胞减少，IFN-γ：IL-4阳性CD4比值降低+T细胞与疾病活动性显著相关（P<0.05).
结论SLE的特征在于Th1/Th2和Tc1/Tc2细胞因子的失衡。Th1或Tc1细胞和Th1/Th2比率的降低与疾病活动性有关。中国医学杂志2000;113(10):877-880
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Biological function of a novel gene overexpressed in human hepatocellular carcinomaLIU Junjian, ZHOU Rouli, ZHANG Ning, RUI Jing'an, JIN Cheng
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.104
目标克隆一个差异表达cDNA片段LC27的全长，并初步研究其生物学功能。
方法用Northern blot分析LC27在肝癌、匹配的非肿瘤肝组织、胎儿肝和正常成人肝组织中的表达模式，并用BEL-7402肝癌细胞株ESTs剪接和5’cDNA末端快速扩增（5’RACE）克隆LC27全长cDNA。反义寡脱氧核苷酸方法用于研究该基因在BEL-7402细胞增殖中的生物学作用。
结果克隆了一个2186bp的新cDNA，该cDNA具有编码283个氨基酸的开放阅读框。对推导的氨基酸序列的分析表明，它与人高尔基体4-跨膜转运蛋白MTP具有38%（88/229）的同一性。该基因和编码的蛋白分别被命名为肝细胞癌过表达跨膜蛋白（hotp）和hotp。在正常成人肝和胎儿肝组织中几乎检测不到Hotp mRNA。然而，它在肝细胞癌和一些匹配的非肿瘤肝组织以及BEL-7402细胞中显著上调。BEL-7402细胞的增殖被浓度为50 μ g/ml的针对hotp mRNA的反义寡脱氧核苷酸抑制。
结论HOTP可能是一种完整的膜转运蛋白。该基因在肝细胞癌中的过表达可能在肝癌发生和疾病进展中起重要作用。中国医学杂志2000;113(10)：881-885
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Change of apoptotic status in the human colorectal adenoma-carcinoma sequences and its correlation with carcinogenesis and prognosisLi Li, YAN Lünan, WANG Zhong, LIU Zhanpei, WEI Yuquan, HUANG Guangqi
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.105
目标评估结直肠癌发生过程中的凋亡状态及其预后价值。
方法用流式细胞仪（FCM）检测168例腺癌新鲜标本和原代培养细胞在2、12、24和48h（正常粘膜9例，腺瘤4例，腺癌9例）的凋亡频率。用TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）观察25例腺瘤和77例腺癌的原位凋亡指数（AI），ABC法免疫染色Ki-s5标记指数（KI），bcl-2、bax、waf1和p53。
结果与粘膜细胞相比，体外培养的肿瘤细胞在24-48小时内与培养相关的凋亡明显减少。晚期非整倍体型肿瘤发生自发性原位凋亡较多。通过TUNEL和FCM方法测定，细胞凋亡与增殖活性之间存在正相关。高分化或bcl-2/bax表达的早期病变显著更有可能具有低AI。p53积累和waf1抑制主要与KI有关，而bax和waf1过表达导致相对较高的AI/KI比值。发现bcl-2和KI是独立的危险因素。
结论数据表明，对诱导性凋亡的敏感性降低可能有助于肿瘤发生的初始阶段，并且体内自发性凋亡可能作为肿瘤进展的标志物。bcl-2和KI在预测结直肠癌预后方面可能有价值。中国医学杂志2000;113(10):886-888
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Molecular and immunohistochemical study of the inactivation of the pl6 gene in primary hepatocellular carcinomaHUANG Jianzhao, SHEN Wenlü, LI Bo, LUO Yigang, LIAO Shaoxi, ZHANG Wen, CHENG Niang
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.106
目标探讨p16基因是否参与原发性肝细胞癌（HCC）的发生。
方法检查25个HCC肿瘤样品和相应的非肿瘤肝组织样品的p16基因改变。使用比较性多重聚合酶链反应(PCR)分析进行p16基因中外显子1和外显子2的缺失鉴定。通过单链构象多态性（SSCP）分析研究p16基因外显子2的点突变，并使用基于PCR的甲基化分析筛选p16基因的甲基化状态。使用免疫组织化学分析研究了35例石蜡包埋的HCC标本和相应的非肿瘤肝组织，包括上述用于筛选p16基因改变的25例病例的p16蛋白表达。
结果在25例中，HCC样本中发现2例纯合子缺失和1例半合子缺失。在其余22个没有p16基因缺失的肿瘤样品中未鉴定出点突变。在24%（6/25）的肿瘤样品中检测到高甲基化。然而，相应的非肿瘤肝组织样本在p16基因座总是未甲基化的。35例肿瘤标本中有16例（45.7%）出现p16蛋白表达缺失，所有非肿瘤肝组织标本均显示p16阳性染色。对于检查p16基因改变的25个病例，在所有具有p16基因改变的肿瘤中以及在没有p16基因改变的3个肿瘤中观察到p16蛋白表达的损失。
结论p16基因的失活可能在原发性肝细胞癌的发生中起重要作用。中国医学杂志2000;113(10)：889-893
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Isolation of genes related to blood glucose-control in rat skeletal muscleZHU Guozhi, ZUO Jin, FANG Fude
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.107
方法通过差异显示（DD）法、狭缝印迹杂交和Northern印迹杂交获得葡萄糖刺激和非葡萄糖刺激SD大鼠骨骼肌之间的差异基因表达。
结果分离了几个在葡萄糖刺激和非葡萄糖刺激的SD大鼠骨骼肌中差异表达的新基因。通过从分离的181个基因标签中的槽分析验证了74个。对其中33个进行了克隆和测序，并进行了同源性分析和GenBank登录号申请。21通过Northern印迹分析证实了代表新基因的表达序列标签(EST)。共有9个新基因显示出显著的差异表达模式。
结论使用差异显示技术的改进和修改，一种节省劳动力和成本的途径被用于鉴定与血糖控制相关的新基因。我们在全身水平而不是培养细胞水平研究差异表达基因，以确保实验结果更接近正常生理状态。该技术可广泛应用于其他相关研究。中国医学杂志2000;113(l0)：894-898
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Impact of RT-PCR monitoring on the long-term survival in acute promyelocytic leukemiaHU Jiong, YU Ting, ZHAO Weili, GU Bowei, SHEN Zhixiang, LI Xiusong, SUN Guanlin, CHEN Saijuan, WANG Zhenyi
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.108
目标通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析评估分子缓解动力学对急性早幼粒细胞白血病（APL）患者长期生存的影响。
方法本研究纳入了70例新诊断的缓解期APL患者。在巩固期间，通过RT-PCR测定PML-RAR α定期监测微小残留病(MRD)。
结果全组的5年无复发生存率（RFS）和总生存率（OS）估计为46.8%±8.4%和69.9%±9.4%。52例（74.3%）患者至少获得一次阴性RT-PCR结果。38例患者可进行RT-PCR系列监测，24例（63.2%）患者的PCR结果持续阴性。RT-PCR结果持续阴性与RFS显著相关。
结论缓解中RT-PCR阴性与良好的RFS和OS相关。持续阴性RT-PCR结果与长期无复发生存期相关，可被认为是潜在的治愈性。作为一个重要的预后因素，应在缓解后期间定期进行RT-PCR检测MRD。中国医学杂志2000;113(10)：899-902
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The effects of glucose, insulin and oxidized low density lipoprotein on apoptosis in vascular endothelial cellsCHAI Weidong, CHEN Jiawei, WANG Hua, SHEN Jie, MA Iijuan, MA Xianghua
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.109
目标研究高浓度葡萄糖、胰岛素和氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对培养的牛主动脉内皮细胞（ECs）凋亡的影响。
方法采用吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）染色和DNA琼脂糖凝胶电泳定性测定EC凋亡。细胞DNA片段化ELISA通过定量5-溴-2’-脱氧尿苷标记的DNA的片段化来测量细胞凋亡。
结果高浓度葡萄糖（20 mmol/L、40 mmol/L）、胰岛素（3000 μ U/ml）和ox-LDL（50 μ g/ml、100 μ g/ml）诱导ECs凋亡呈浓度和时间依赖性。它们对EC凋亡有协同作用。高浓度葡萄糖、胰岛素和ox-LDL的联合作用大于其中任何两种；两个的效果大于单独一个。低浓度胰岛素(30 μ U/ml)可降低高浓度葡萄糖(40 mmol/L)诱导的内皮细胞凋亡，而ox-LDL(100 μ g/ml)无类似作用。
结论高环境葡萄糖、胰岛素和ox-LDL可诱导培养的ECs过度凋亡，低环境胰岛素可阻止EC凋亡。高血糖、高胰岛素和高脂血症单独或协同作用诱导的EC过度凋亡可能是导致内皮完整性丧失、血管内皮功能障碍和质膜通透性增加的原因之一，这些都参与了糖尿病大血管并发症的发生。中国医学杂志2000;113(l0)：903-906
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Effect of IFN-γ, IL-4 on proliferation and synthesis of hyaluronic acid and collagen in cultured human retroorbital fibroblasts in vitroWANG Li, TENG Weiping, SHAN Zhongyan
Chinese Medical JournalVol.113,No.102000
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2000.10.110
目标为了探讨甲状腺相关眼病（TAO）的细胞免疫机制，为细胞因子或抗细胞因子药物治疗TAO提供依据，我们确定了Th1和Th2细胞的代表性细胞因子干扰素（IFN）-γ和白细胞介素（IL）-4是否可能对TAO的发生和进展有一定的影响。
方法用液体闪烁法和放射免疫法检测眶后成纤维细胞（RF）的增殖、透明质酸（HA）和IV型胶原的合成。
结果IFN-γ刺激RF增殖和HA合成，对IV型胶原合成有明显抑制作用。IL-4刺激RF细胞增殖和IV型胶原合成，对HA合成有抑制作用。当IFN-γ(100U/ml)和IL-4(1 μ g/L)与RF一起孵育时，它们拮抗了各自对HA和IV型胶原增殖和合成的刺激或抑制作用。促甲状腺素（TSH）以剂量依赖性方式刺激RF增殖和IV型胶原合成，而仅在高剂量（100 U/L和200 U/L）时，刺激RF合成HA。
结论IFN-γ是Th1细胞的代表性细胞因子，负责TAO的炎症过程；而Th2细胞的代表性细胞因子IL-4对修复过程有一定影响。IL-4可拮抗IFN-γ对RF的炎症作用。TSH可能对TAO的发病有加重作用。中国医学杂志2000;113(10):907-910
