目的 探讨蓝光光照对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡及对线粒体膜通透性转运功能的影响.方法 用蓝光光照体外培养的人RPE细胞.实验分为三部分.第一部分:不同光照度,分为3组,第1组光照度(500±100)lx,第2组光照度(2000±500)lx,第3组光照度(3000±500)lx;光照RPE细胞时间6 h,光照结束后24 h终止培养.第二部分:同一光照度、不同光照时间,检测RPE细胞亚型时分为3组,第1组光照时间6 h,第2组光照时间12 h,第3组光照时间24 h,光照度均为(2000±500)lx;检测线粒体膜电位时也分为3组,第1组光照时间3 h,第2组光照时间6 h,第3组光照时间12 h,光照度均为(2000±500)lx.第三部分:同一光照度和光照时间,光照度(2000±500)lx,光照RPE细胞时间6 h;不同细胞培养终止时间分为4组,第1组终止细胞培养时间为光照后6 h,第2组为光照后12 h,第3组为光照后24 h,第4组为光照后36 h.利用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)染色、荧光素标记的Annexin V-FITC和PI双染流式细胞检测、透射电镜等手段观察RPE细胞凋亡情况.罗丹明123荧光染料孵育人RPE细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位,酶联免疫法测定细胞色素C活性,比色测定法测定Caspase-3的活性.结果 第二部分第1组TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆,胞核浓缩,边聚成新月形或帽状,细胞核碎裂成数个,细胞膜出胞.透射电镜观察发现细胞内线粒体肿胀,线粒体内膜嵴消失,粗面内质网扩张,溶酶体增加.第一部分(500±100)lx光照未引起明显的RPE细胞损伤,但线粒体膜电位明显下降;随着光照度增加,RPE细胞出现凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,同时线粒体膜电位逐渐下降.第二部分光照6和12 h,凋亡细胞百分比增加,荧光强度明显下降;光照24 h凋亡继发性坏死细胞、坏死细胞百分比增加.第三部分光照后6和12 h,RPE细胞凋亡百分比逐渐增加;光照后24、36 h凋亡继发性坏死细胞和坏死细胞百分比明显增加,光照后各时间点RPE细胞荧光强度明显下降.以光照度(2000±500)lx照射6和12 h,可见光照后24和36 h两组的细胞色素C浓度明显升高,未检测到Caspase-3活性变化.结论 蓝光照射可导致体外培养的人RPE细胞凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,其损伤程度与光照度和时间相关;蓝光照射导致培养的人RPE细胞损伤过程与线粒体膜电位降低、细胞色素C释放有关;线粒体膜电位可作为检测蓝光致人RPE细胞凋亡的早期指标。
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