2014年 · 第37卷第10期

侵袭性真菌病的非培养实验室检测方法主要包括真菌抗原检测、真菌抗体血清学检测以及分子生物学检测。真菌抗原检测包括(1,3)-β-D-葡聚糖检测、半乳甘露聚糖检测、隐球菌荚膜多糖抗原检测以及念珠菌甘露聚糖抗原检测等。不同的抗原用于诊断不同的真菌感染。抗真菌抗体的血清学检测主要包括荚膜组织胞浆菌、粗球孢子菌/副球孢子菌以及皮炎芽生菌的相应血清抗体的检测。分子生物学检测则包括非扩增的核酸检测技术、核酸扩增检测技术、直接测序以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术。尽管分子生物学检测的方法尚未标准化，但其是未来侵袭性真菌病非培养检测的重要发展方向。（中华检验医学杂志，2014,37：721-724）

生物被膜的形成使细菌获得了以多细胞生存的生命形式。与浮游菌相比，生物被膜状态下细菌的耐药性显著增强。细菌生物被膜形成是许多亚急性和慢性感染病理过程的一个关键步骤，在临床上可以形成细菌生物被膜病和生物材料相关感染，已成为临床医疗工作的重点和难点。了解细菌生物被膜的耐药机制是提供解决方案的关键。（中华检验医学杂志，2014,37：725-727）

由于病毒引起的临床重症感染性疾病出现地越来越频繁，严重威胁着人类的健康及生命。临床上可引起感染性疾病的病毒种类繁多, 且同种病毒可以引起多种疾病，一种疾病又可由多种病毒感染引起，导致病原与疾病的相关性十分复杂。目前在临床上对大多数病毒感染的有效检测手段基本处于空白，随着分子诊断技术的快速发展，临床病毒感染疾病快速、多重诊断将成为可能。本文就临床病毒感染检测现状、展望及诊断流程改进做一分析和建议。（中华检验医学杂志，2014,37：728-731）

临床微生物分析前检验的重要性目前已得到广泛认同，随着临床微生物检验日益标准化和自动化，方便、快捷、高性能的标本采集与转运系统对于临床微生物检验的正确性有重要意义。本文旨在对临床微生物标本采集与转运系统的种类、意义与未来发展展望进行介绍，望能引起医务工作者对分析前检验的重视，提高临床微生物检验质量。（中华检验医学杂志，2014,37：732-735）

大肠癌是威胁人类的第三大恶性肿瘤。除了遗传因素外，肠道菌群在大肠癌发生中也起着重要作用，并逐渐成为研究热点。高通量测序技术的发展解析了在大肠癌发生中肠道菌群结构变化的规律并找到潜在致病菌。本文总结了特定肠道细菌在大肠癌发展中可能的作用及其机制，解析了肠道菌群介导大肠癌的两种发病模型，并探讨了肠道菌群的高通量测序技术用于大肠癌疾病监测的可能性。（中华检验医学杂志，2014,37：736-738）

病毒样颗粒(VLPs)是由一种或多种病毒结构蛋白组装成的颗粒，具有与病毒颗粒相似的外部结构和抗原性，但不含病毒基因。可采用酵母、哺乳动物细胞、植物细胞、昆虫细胞和细菌系统表达VLPs抗原。VLPs作为疫苗，可有效诱导机体产生免疫反应。可以作为其他佐剂、多肽疫苗的整合平台设计嵌合体疫苗。本文就病毒样颗粒国内外研究进展及其在传染病防控中的应用前景进行综述。（中华检验医学杂志，2014,37：739-742）

目的了解上海地区急性细菌感染性腹泻患儿中弯曲菌感染流行病学特点。方法流行病学调查。收集2011年1月1日至2012年12月31日复旦大学附属儿科医院门诊及住院临床诊断为急性细菌感染性腹泻患儿6 641例的粪便标本6 641份，在微需氧环境下对患儿粪便标本进行弯曲菌分离培养,采用多重PCR及基质辅助激光解析/吸附电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF）对弯曲菌进行鉴定。采用纸片扩散法进行药敏试验，药物敏感性试验判断标准采用欧洲抗生素药物敏感试验委员会（EUCAST）标准。采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分型。采用SPSS 16.0软件进行统计分析。结果共分离到305株弯曲菌，感染率为4.6%（305／6 641），其中空肠弯曲菌感染率3.6%（240株）；结肠弯曲菌感染率1.0%（65株）。1岁以上儿童感染率为6.2%（209／3 385），明显高于1岁以内儿童2.9%（96／3 256），χ2=35.98，P<0.001。冬春季感染率为6.8%（138/2 040），明显高于其他月份3.6%（167/4 601），χ2=28.59，P<0.001。弯曲菌对环丙沙星的耐药率为91.5%（279/305），对红霉素的耐药率为11.8%（36/305）。检测到A～I 9种空肠弯曲菌PFGE分型。相似度分别为A型65.1%～100.0%，B型67.6%～100.0%,C型61.7%～100.0%，D型59.0%～100.0%，F型2株71.4%，H型2株80.0%，Ⅰ型54.4%～90.9%, E型和G型仅1株。结论弯曲菌是上海地区急性细菌性感染儿童主要致病菌之一，1岁以上儿童为易感人群，冬春季高发，以多克隆散发感染为特点。该致病菌对环丙沙星已高度耐药，对红霉素仍较敏感。（中华检验医学杂志，2014,37：743-747）

目的了解上海市儿童医院临床分离侵袭性肺炎链球菌的耐药状况、对β内酰胺类抗菌药物的耐药机制，为抗菌药物的合理应用提供参考依据。方法本研究为针对抗菌药物耐药机制的基础性研究。收集上海市儿童医院2005年1月至2011年12月临床分离的侵袭性肺炎链球菌62株，采用E-test法测定分离株对9种抗菌药物的MIC。PCR扩增肺炎链球菌的青霉素结合蛋白编码基因pbp2x、pbp2b、pbp1a，分析突变与β内酰胺类抗菌药物耐药水平的相关性。PCR扩增肺炎链球菌的murM基因，分析其突变与β内酰胺类抗菌药物耐药水平的相关性。结果在62株侵袭性肺炎链球菌中，青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）的检出率为43.6%（27/62）。pbp2b基因保守序列附近的基因突变率，青霉素中介肺炎链球菌（PISP）（100%, 25/25）与青霉素敏感肺炎链球菌（PSSP）（3/10）、PSSP（3/10）与PRSP（100%, 27/27）之间的差异有统计学意义（χ2分别为21.875和23.310，P均＜0.01）。pbp2x基因保守序列附近及内部的基因突变率，PISP（84%, 21/25）与PSSP（0）、PSSP（0）与PRSP（85.2%, 23/27）之间的差异有统计学意义（χ2分别为21.000和22.513，P均＜0.01）。pbp1a 基因保守序列附近及插入序列的基因突变率，PISP（68%, 17/25）与PSSP（0）、PRSP（100%, 27/27）与PSSP（0）、PRSP（100%,27/27）与PISP（68%, 17/25）之间的差异均有统计学意义（χ2分别为13.22、37.000、10.211，P均＜0.01）。murM基因的碱基突变率，青霉素MIC≥8 mg/L或头孢曲松MIC≥2 mg/L组（95.8%, 23/24）和青霉素MIC＜8 mg/L或头孢曲松MIC＜2 mg/L组（0）差异有统计学意义（χ2=56.2，P=0.002 6）。结论上海市儿童医院分离的侵袭性肺炎链球菌耐药现象严重。pbps基因和murM基因突变在β内酰胺类抗菌药物耐药中均发挥作用，且与抗菌药物耐药水平有一定的相关性。（中华检验医学杂志，2014,37：748-752）

目的研究南昌大学第一附属医院产新德里金属β内酰胺酶（NDM）肺炎克雷伯菌的分子表型、流行病学和耐药基因环境特征。 方法回顾性研究。收集2011年1月至2012年12月我院住院患者临床分离的非重复碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌110株，使用生物梅里埃公司生产GN13的检测菌株的MIC值，改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶确认，同时对试验菌株的blaNDM-1基因及ISAba125-NDM连锁PCR检测，并将扩增产物纯化、克隆后进行基因测序。多位点序列分析（MLST）技术分析耐药菌株间的亲缘性。对阳性株进行质粒接合和消除试验，并对接合子及质粒消除后菌株进行PCR扩增及碳青霉烯类抗生素MIC值的检测。采用Fisher确切概率法对耐药率进行比较。结果110株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中检出NDM基因阳性率为13%（14/110），经测序确认为blaNDM-1基因。14株产NDM-1型金属β内酰胺酶菌株厄他培南、亚胺培南及美罗培南的耐药率均为14/14，环丙沙星耐药率为10/14，左氧氟沙星耐药率为9/14，阿米卡星耐药率为5/14，氨曲南耐药率11/14。ISAba125-NDM连锁检测阳性率为14/14。14株blaNDM-1基因阳性菌质粒接合试验均为成功，接合子对亚胺培南、美罗培南及厄他培南的MIC值增高4～64倍，PCR扩增接合子大肠埃希菌J53 blaNDM-1基因及ISAba125-NDM连锁均为阳性。而质粒分析发现blaNDM-1基因及ISAba125-NDM连锁位于一大小约65 000 bp质粒上。 结论本地区新德里金属β内酰胺酶肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素及氨曲南的耐药率相对较低，blaNDM-1基因主要位于质粒上可通过接合方式传播，易于在菌株间流行，应当引起临床高度重视；插入序列ISAba125可能参与了blaNDM-1基因的介导。（中华检验医学杂志，2014,37：753-757）

目的初步建立贵州省泌尿生殖道分泌物常规检验室间质量评价（EQA）体系，以提高其整体检测水平。方法2009至2011年，每年在贵州全省范围内抽取50家以上不同等级医院的临床检验实验室作为参评单位。每年开展两次EQA，每次选取瑞氏和（或）革兰染色良好的泌尿生殖道分泌物涂片5张（相当于5个批号质评品）直接和（或）彩图发给参评实验室进行检测，并对各个实验室的回报结果进行分析评价，以符合率≥80%判为合格。结果2009至2011年EQA参评单位从55家上升至96家，总平均回报率＞80%。3年6次EQA结果平均符合率＜80%的有球菌4次（73.7%、77.8%、61.1%、77.1%），杆菌2次（75.6%、79.3%），球杆菌2次（64.3%、52.1%），滴虫（79.7%）、上皮细胞（76.1%）、中性粒细胞（75.7%）及清洁度（71.3%）各1次。6次30个质评品中有6个批号（占20.0％）的平均符合率＜80% ；30 个质评品11个EQA项目分别有1～15个批号的平均符合率＜80%即不合格。总平均符合率以可疑淋球菌为最高（94.2%），以球菌及球杆菌为最低即未达到合格（各占77.0%、75.2%）。结论在一定范围内开展EQA活动并取得良好效果，参评单位明显增加，总的参评成绩呈上升趋势，在一定程度和范围内增强了检验人员的质量意识；初步建立了贵州省泌尿生殖道分泌物常规检验的EQA体系，为临床实验室和上级机构提供了室内质量控制和EQA的一个参考模式。（中华检验医学杂志，2014,37：758-762）

目的探讨多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵表型和外排泵基因表达情况在耐药方面的作用。方法应用K-B法检测河北医科大学第一医院96株多重耐药鲍曼不动杆菌对15种抗菌药物的耐药情况，应用微量肉汤稀释法通过加入羰基氰氯苯腙(CCCP)泵抑制剂检测多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵表型，并用PCR扩增进行外排泵蛋白基因的检测和测序。结果96株多重耐药鲍曼不动杆菌对喹诺酮类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类抗菌药物的耐药率为70.8%～94.8%。其中有34株外排泵表型阳性；外排泵表型阳性的34株鲍曼不动杆菌检测到adeB、adeR、adeS、adeJ、adeE、adeM基因分别有33株、32株、33株、33株、0株、33株，检出阳性率分别为97.06%、94.12%、97.06%、97.06%、0、97.06%；对adeB、adeR、adeS基因进行测序，经比对，所测序列与GenBank中序列同源性为100%。结论主动外排泵基因是鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素之一。（中华检验医学杂志，2014,37：763-766）

目的构建人丙氨酸转氨酶（ALT）高效重组表达体系，为ALT相关参考物质的原料制备奠定基础。方法利用生物信息学方法优化编码人ALT核苷酸序列中的密码子，合成人ALT新的基因，并将其克隆至pRSF-Duet表达载体中。重组表达质粒pRSF-Duet-ALT转化大肠埃希菌BL21，以2 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白的表达，并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件，以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化，以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE)及蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定蛋白的性质，并对重组蛋白的活性、不同储存条件下在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的ALT核苷酸密码子在大肠埃希菌中的使用频率均在10%以上；经表达优化，在IPTG 终浓度为2 mmol/L、25 ℃、150 rpm振摇8 h诱导条件下，可增加可溶性蛋白的产率；纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷丙转氨酶，活性可达80 000 U/L。重组ALT在2~8 ℃、25 ℃均可稳定2~8 d，相对偏差均在5%以内。结论通过密码子优化，成功构建了重组ALT的高效表达系统，本重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。（中华检验医学杂志，2014,37：767-771）

目的通过Meta分析系统评价在儿童患者中半乳甘露聚糖（GM）检测侵袭性曲霉菌病（IA）的诊断价值。方法检索PubMed数据库(PubMed)、荷兰医学文摘(EMBASE)、美国全科医学文献数据库(Medline)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方医学网(Wanfangdata)，检索时间为2001年1月至2012年11月，获得关于GM试验诊断儿童IA临床价值的文献，对其进行质量、异质性、合并效应量、受试者工作特征曲线绘制以及亚组评价等分析, 并使用Stata12.0软件对敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、曲线下面积(AUC)进行统计学分析。结果纳入文献13篇，包括16组数据。结果显示，GM试验诊断侵袭性曲霉菌感染的合并敏感度为0.71（0.60～0.79）,合并特异度为0.94（0.89～0.96）；不同的临界值0.5、0.8、1.0、1.5，合并敏感度分别为0.71（0.5～0.84）、0.77（0.64～0.87）、0.72（0.58～0.84）、0.59（0.39～-0.76），合并特异度分别为0.94（0.89～0.97）、0.89（0.82～0.93）、0.89（0.81～0.94）、0.91（0.88～0.94）。结论现有的文献表明，GM诊断儿童IA具有较高的敏感度和特异度，当临界值为0.8时，在儿童患者中GM试验可以更有效地检测出侵袭性曲霉菌病。（中华检验医学杂志，2014,37：772-775）

目的探讨在ISO15189以及美国病理学家协会（CAP）实验室认可体系下，建立使用一代测序（Sanger测序法）进行乙型肝炎病毒（HBV）耐药基因检测的项目性能验证标准。方法方法学建立。2012年8至12月收集复旦大学附属华山医院肝炎门诊及住院患者中临床表现HBV耐药患者25例。从测定下限、精密度、正确性、分析特异性、可报告范围/参考范围等方面进行性能评估。测序质量的验证基于整体测序图谱的荧光信号值、性噪比、测序峰图、QV值等评估参数进行。结果 可检测出正常背景下10%~20%的突变；有较好的精密度；正确性100%；未发现有明显干扰及交叉污染。结论测序方法的性能验证要结合实际应用。特别是测序分析的质量评估需要针对不同的检测目的以及检测对象建立相关标准并适当进行调整以符合临床需要。本试验方法检测乙型肝炎耐药基因可应用于临床检测。（中华检验医学杂志，2014,37：776-779）

目的对化学发光法检测梅毒螺旋体(TP）特异性抗体在临床筛查试验中的特异性进行评价。方法对北京同仁医院检验科梅毒螺旋体特异性抗体的检测结果进行回顾性分析。采用雅培化学发光法梅毒特异性抗体检测试剂对2011年8月至2012年7月期间65 774份术前检查患者血清标本进行检测，初筛阳性标本附加甲苯胺红不加热血清试验（TRUST），并采用梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）进行复检。对化学发光法与TPPA试验检测结果不一致的标本采用免疫印迹法（WB）进行确证，经SPSS 17.0软件对结果进行统计分析。结果65 774份术前检查患者血清标本中，共筛检出940份抗-TP抗体阳性标本，经TPPA试验复检后，843份为阳性，97份为阴性；TRUST试验检测结果为阳性330份，阴性610份。97份TPPA试验检测结果为阴性的血清标本中，经WB试验确证，18份为阳性，7份为不确定，72份为阴性。结论化学发光法梅毒特异性抗体检测试剂的特异性为99.89%，TPPA试验可作为常规临床实验室中梅毒特异性抗体筛查试验的一种有效的补充试验。必要时，可选用免疫印迹法进行确证。（中华检验医学杂志，2014,37：780-783）

肺部感染是临床常见疾病，病原种类多，院内感染的耐药性强。目前国内肺部感染的病原学诊断普遍采用咳痰或抽吸痰标本。而痰液易受上呼吸道正常定植微生物群污染，单纯痰培养结果没有确诊价值。支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）直接取材于病变部位，获得病原菌的机会多，并能大幅减少口咽部定植微生物群对标本的污染，提高病原菌的分离率，为临床诊断、治疗提供了更加可靠的依据。为了解北京大学第三医院BALF标本中病原菌和耐药情况，本研究进行回顾性分析，报道如下。

恶性黑色素瘤是一种高度恶性的黑色素细胞肿瘤。临床上约60%是由黑痣恶变而来，以足底和肛周周围多见，以转移早、预后差为主要特点。其病理类型大多为有色素型，无色素型极为少见。转移性黑色素瘤常累及淋巴结，偶见先侵犯附近皮肤，最终转移至内脏器官。黑色素瘤广泛转移至骨髓比较少见。本研究报道1例不明原发病灶的恶性黑色素瘤骨髓转移病例。

JAK2 V617F基因突变导致JAK2信号通路持续激活，造血干/祖细胞获得持续增殖和存活的优势，骨髓中一系或多系造血细胞持续增生，产生相应的临床症状［1］。该突变主要见于骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms, MPNs），在不同的亚型中阳性率分别为：真性红细胞增多症（polycythemia vera,PV）中约95%、原发性血小板增多症（essential thrombocythemia, ET）和原发性骨髓纤维化（primary myelofibrosis, PMF）中约50%［2］。在世界卫生组织WHO 2008版血液系统肿瘤分类标准中，JAK2 V617F突变已被列为MPNs的主要诊断指标［3］。

不动杆菌属是一类广泛分布于自然环境中的细菌，由于能在无生命物体表面长期存活，因此常从医院环境中分离得到，并能在住院患者和医护人员的皮肤表面形成定植。作为重要的条件致病菌，不动杆菌导致的感染常发生在重症监护病房中免疫力低下的患者身上，世界各地不断有不动杆菌在住院患者中暴发流行的报道［1］。不动杆菌是机械通气相关性肺炎和导管相关性菌血症的主要致病菌，同时也能导致尿路感染、伤口感染、心内膜炎、脑膜炎、骨髓炎、关节炎和眼部感染等。导致人体感染的不动杆菌中，报道最多的是鲍曼不动杆菌，该菌属于醋酸钙不动杆菌/鲍曼不动杆菌复合群，在实验室能很方便地根据表型对其做出鉴定，但不动杆菌属中的其他细菌则很难根据表型做出准确鉴定，此时需要采用分子生物学方法来确证，常用方法包括16S rRNA、gyrB或rpoB基因序列测定。乌尔新不动杆菌（Acinetobacter ursingii）是2001年Nemec等［2］报道的一种新的不动杆菌，该菌引起的人感染病例较少见。荆州市中心医院最近发现了2例乌尔新不动杆菌引起的儿童菌血症，现将细菌形态、表型鉴定，分子鉴定和药敏结果报道如下。

本文以广州弗朗西斯菌（Francisella guangzhouensis）为实例，阐述如何利用生物信息资源进行细菌新种的鉴定、如何进行新种的命名和命名的拉丁化、如何进行新种的合格化、以及《国际细菌命名法》中与新种命名和鉴定相关的一些内容，从而为临床微生物学工作者发现和命名新的病原菌提供指导。（中华检验医学杂志，2014,37：796-798）

艰难梭菌（Clostridium difficile, CD）又称难辨梭状芽孢杆菌，广泛分布于自然环境、人类和动物的粪便中，是医院内肠道感染的重要致病菌之一。艰难梭菌感染（Clostridium difficile infection, CDI)患者的临床表现可为自限性腹泻，重者可出现伪膜性肠炎，甚至中毒性巨结肠。临床大量不合理使用广谱抗生素、免疫抑制剂、质子泵抑制剂或化疗药物后，破坏人体正常的肠道微生态平衡，致CD过度生长并释放肠毒素、细胞毒素和二元毒素，引起CD相关性腹泻（Clostridium difficile associated diarrhea, CDAD)。