2014年 · 第37卷第09期

恶性肿瘤严重威胁人类健康，提高恶性肿瘤的早期诊断水平，可有效降低其病死率、改善预后。肿瘤标志物的合理应用评价及高效诊断肿瘤的标志物筛选研究仍然是目前面临的重点和难点。各种技术平台特别是新一代测序技术及相关转化医学的发展与应用，肿瘤标志物研究在蛋白质、DNA和RNA水平等均取得了迅速进展。相信随着对肿瘤发生发展基础研究的不断深入，以及临床确证技术的进步，通过前瞻性多中心研究进行科学合理地评价，制定适用于我国人群不同肿瘤的肿瘤标志物诊断策略必将成为可能。（中华检验医学杂志，2014,37：641-644）

肿瘤是严重威胁人类健康的高发病率和高死亡率疾病,肿瘤体外诊断试剂的普及运用提高了肿瘤的诊疗水平。为了充分发挥肿瘤体外诊断试剂在临床使用中的价值，本文将结合《体外诊断试剂质量管理体系考核实施规定（试行）》、《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》、《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》等法律法规的要求及国内外肿瘤诊断试剂研究进展，浅谈肿瘤体外诊断试剂临床验证的试验设计。（中华检验医学杂志，2014,37：645-648）

骨髓增殖性肿瘤(MPN)是骨髓中一种或多种髓系细胞增殖和外周血中成熟及不成熟细胞增加的克隆性造血干／祖细胞疾病。近年来，多个分子标志物，如JAK2(JAK2 V617F和JAK2外显子12)、MPL515和TET2突变等相继被发现，这些标志物的发现对于理解MPN的分子发病机制具有重要意义，也有助于对这类疾病的患者进行诊断和治疗。但是，有30%～45%的携有野生型JAK2/MPL的原发性血小板增多症（ET）或原发性骨髓纤维化(PMF)患者仍然存在诊断困难，新近报道的钙网蛋白基因（CALR）突变将能部分填补这一空白，有望成为诊断骨髓增殖性肿瘤又一种新的分子标志物。（中华检验医学杂志，2014,37：649-652）

microRNA（miRNA）是一类内源性短链非编码RNA，参与基因转录后水平调控，在细胞发育、增殖、分化和肿瘤发生等生物学行为中发挥重要作用。近年来发现，miRNA在胃癌中存在异常表达，与胃癌发生、发展、转移等恶性行为密切相关，可作为一种生物标志物和治疗靶点应用于胃癌的诊断和治疗。（中华检验医学杂志，2014,37：653-656）

细胞色素P450是广泛存在于生物体内的一组非共价结合含铁血红素的代谢酶，与多种肿瘤的发生发展存在着密切关系，使之成为目前的医学基础和应用研究的热点。本文总结了与肿瘤发生发展及治疗密切相关的细胞色素P450的研究进展，介绍了该家族分子和蛋白在肿瘤临床实验诊断及个体化医疗中的应用，并展望了未来相关的研究和应用方向。（中华检验医学杂志，2014,37：657-660）

高尔基体蛋白73（GP73)是定位于高尔基体的一种新型跨膜糖蛋白，正常情况下，其主要表达于人胆管上皮细胞中。近年来的研究发现，GP73在肝癌、前列腺癌、肺癌、肾癌等多种肿瘤组织中呈高表达状态，有望作为一种潜在的新型肿瘤标志物应用于临床肿瘤诊断。（中华检验医学杂志，2014,37：661-664）

长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA）是一类长度大于200nt、不能编码蛋白质的RNA，参与了基因调控的各个层面。近来的研究发现，多种lncRNA在肝癌组织中表达异常，可能在肝癌发生、发展中起着重要的调控作用。（中华检验医学杂志，2014,37：665-668）

检出限是方法学性能评价的主要指标之一。针对临床实验室、仪器和试剂生产厂商及检验医学期刊中不能正确理解和区别灵敏度和检出限的现象，对它们进行详细的分析比较，并给出正确使用的方法。（中华检验医学杂志，2014,37：669-672）

前列腺癌是男性人群中最常见的恶性肿瘤之一，雄激素受体可通过与基因组中雄激素反应元件结合并与共调解因子相互作用调控下游靶基因的表达从而参与前列腺癌的发生发展以及前列腺癌由雄激素依赖到非依赖的转变过程。染色质免疫共沉淀技术与PCR、基因芯片、高通量测序技术的结合使得对雄激素受体调控的靶基因研究有了最新进展，为雄激素去势治疗产生耐药的分子机制的研究提供新的思路。（中华检验医学杂志，2014,37：673-677）

目的建立一种血清循环B细胞特异性莫洛尼白血病毒插入位点1（Bmi-1）信使核糖核酸（mRNA）直接逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR-D）检测方法，并运用该方法对结直肠癌血清循环Bmi-1 mRNA水平进行分析，探讨其在结直肠癌诊断中的价值。方法方法学建立。提取结直肠癌HT29细胞株RNA，建立Bmi-1、泛素C （UBC）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH） mRNAs检测标准曲线，计算扩增效率。利用RT-qPCR-D方法对血清、准备液混合液中Bmi-1 mRNA进行直接检测，通过熔解曲线评价试验的特异性，以及血清样本稀释观察方法的检测下限。并且，用该方法检测2008年1月至2009年1月山东大学齐鲁医院158例结直肠癌患者，其中Ⅰ期26例、Ⅱ期53例、Ⅲ期47例和Ⅳ期32例，以及53例结直肠镜检查正常者血清循环Bmi-1 mRNA水平，采用Kruskal-Wallis H、Mann-Whitney U检验比较各组Bmi-1 mRNA表达水平，受试者工作特征曲线（ROC）分析其对结直肠癌的检测效能。结果Bmi-1、UBC、GAPDH log值与定量循环（Cq）值间呈良好线性关系（R2=0.990、0.990、0.99，P均<0.001），扩增效率（E）分别为0.875、0.917、0.935。建立的RT-qPCR-D方法，检测Bmi-1、UBC、GAPDH mRNAs的熔解曲线峰值单一；检测下限可达1.25 μl。运用该方法检测血清循环Bmi-1 mRNA水平，在结直肠癌Ⅰ期患者中为0.138（0.078～0.228），Ⅱ期患者中为0.163（0.067～0.287）、Ⅲ期患者中为0.217（0.072～0.267）、Ⅳ期患者中为0.273（0.139～0.419）以及对照者中为0.021（0.008～0.029），各组间比较差异有统计学意义（H=89.5，P<0.001）。结直肠癌各期组循环Bmi-1 mRNA水平明显高于对照组（U=58.0、287、246、72.5，P均<0.001）；循环Bmi-1 mRNA在Ⅳ期患者中的水平明显高于其他各期患者（U=247、590、540，P=0.008、0.020、0.035），而在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者间比较，差异无统计学意义（U=633、514、1170，P均>0.05）。血清循环Bmi-1 mRNA水平检测结直肠癌的ROC曲线下面积（AUC）为0.921（95%CI=0.876~0.953），明显优于癌胚抗原（CEA）（0.745，95%CI=0.680～0.802，Z=4.697，P<0.001）。其检测结直肠癌的最佳临界值为0.034时，敏感度为89.2%（141/158），特异度为90.6%（48/53）。而血清CEA诊断结直肠癌的敏感度和特异度只有41.8%（66/158）和73.6%（39/53）。血清循环Bmi-1 mRNA和CEA两项指标进行联合检测，发现其检测结直肠癌的AUC为0.933（95%CI=0.890~0.963），与循环Bmi-1 mRNA AUC比较，差异无统计学意义（Z=4.697，P>0.05）。结论本实验建立的血清循环Bmi-1 mRNA检测方法具有较高的特异度和敏感度，利用该方法发现血清循环Bmi-1 mRNA水平在结直肠癌患者中明显升高，并且对结直肠癌的检测效能优于传统肿瘤标志物CEA，其可能成为一项潜在的检测指标，为结直肠癌的早期发现提供帮助。（中华检验医学杂志，2014,37：678-682）

目的探讨高尔基体糖蛋白73（GP73）在腹腔积液中的含量情况，并研究腹腔积液中GP73和甲胎蛋白（AFP）检测在腹腔积液鉴别诊断中的价值。方法2012年11月至2013年11月从新疆医科大学附属肿瘤医院检验科收集96份恶性和35份良性腹腔积液样本及对应患者同一时段的血清样本，ELISA检测血清和腹腔积液中的GP73含量，电化学发光法检测腹腔积液中的AFP含量，采用受试者工作特征曲线法（ROC曲线）评价GP73和AFP诊断腹腔积液性质的应用价值。结果在良性组， 腹腔积液中GP73的含量（16.06±9.53） ng/ml和血清中GP73的含量（13.69±8.87） ng/ml差异有统计学意义（t=5.026,P<0.001），同时具有较好的线性相关性（r=0.966,P<0.001）。在恶性组，腹腔积液中的GP73含量（28.37±12.02） ng/ml和血清中GP73含量（23.31±9.46） ng/ml差异有统计学意义（t=10.641,P<0.001），也具有较好的线性相关性（r=0.933,P<0.001）。恶性腹腔积液组GP73含量与良性腹腔积液组GP73含量差异有统计学意义（t=5.375,P<0.001）。GP73、AFP、GP73*AFP（AFP与GP73乘积）诊断恶性腹腔积液的临界值分别是17.1 ng/ml、13.1 ng/ml和321；曲线下面积分别是0.795、0.753和0.902，其中GP73*AFP的曲线下面积最大；三者对应的敏感度分别是89.6%（86/96）、88.5%（85/96）和86.4%（83/96）；特异度分别是60.0%（21/35）、54.2%（19/35）和85.7%（30/35）。结论腹腔积液标本中含有具有临床检测意义的GP73浓度；相比GP73或者AFP，GP73*AFP是对良恶性腹腔积液鉴别诊断的较好指标。（中华检验医学杂志，2014,37：683-686）

目的探讨流式细胞术检测浆细胞骨髓瘤的非典型免疫表型特征及其临床意义。 方法采用病例对照性研究，收集中山大学孙逸仙纪念医院和暨南大学附属第一医院2011年1月至2013年12月住院或门诊非典型免疫表型特征浆细胞骨髓瘤患者48例。此48例非典型免疫表型特征浆细胞骨髓瘤患者为研究对象，42例免疫表型、骨髓形态学及血清免疫固定电泳结果均正常的病例作为对照组，运用流式细胞仪检测其特异性CD抗原标志，并根据非典型免疫表型特征浆细胞骨髓瘤患者流式检测结果，按照CD38、CD138、CD19、CD56的表达情况将其分为CD38+/CD138+/CD19+/CD56+、CD38+/CD138+/CD19+/CD56-、CD38+/CD138+/CD19-/CD56- 3组，进一步比较这3组胞浆内免疫球蛋白轻链（cKappa、cLambda）表达情况，并结合骨髓形态学及血清免疫固定电泳结果进行分析比较。样本率的比较采用χ2检验。 结果48例具非典型免疫表型特征浆细胞骨髓瘤患者中，抗原表达率分别为：CD45 29.17%、CD38 100%、CD138 100%、CD19 95.83%、CD56 43.75%、cKappa 43.75%和cLambda 56.25%。3组患者的克隆性免疫球蛋白表达率分别为43.75%、52.08%和4.17%；骨髓形态学及血清免疫固定电泳阳性率分别为57.14%、80%、100%及71.43%、88%、100%。流式细胞术、骨髓形态学及血清免疫固定电泳3种检测方法阳性检出率分别为100%、70.83%及81.25%。而对照组抗原表达率分别为：CD45 47.62%、CD38 100%、CD138 100%、CD19 100%、CD56 0%、cKappa 100%和cLambda 100%，骨髓形态学检查未见异常浆细胞，血清免疫固定电泳均未发现异常单克隆条带。结论多参数流式细胞术相对于骨髓形态学及血清免疫固定电泳的检测方法，更有助于检出非典型免疫表型的浆细胞骨髓瘤，更好地区分良恶性浆细胞，辅助临床对浆细胞骨髓瘤患者的诊断，为其治疗及预后监测提供依据。（中华检验医学杂志，2014,37：687-690）

目的探讨mir-16、mir-21、mir-29a、mir-92a及mir-143在结直肠癌(CRC)患者血清中的表达特征，评价血清中上述miRNAs表达水平对CRC的诊断价值。方法采用病例对照研究方法，对2011年12月至2012年12月在广东医学院附属深圳南山医院住院的50例CRC患者及27例健康对照者进行研究，应用实时荧光定量PCR技术检测血清中mir-16、mir-21、mir-29a、mir-92a及mir-143的表达水平，并比较8例CRC根治术患者手术前1天和术后7天血清中miRNAs表达的变化情况；应用受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线分析血清miRNAs的表达对CRC诊断的灵敏度和特异性。结果CRC患者血清中mir-16、mir-21、mir-92a的表达水平分别为（75.55±37.73）、（35.96±23.81）、（24.79±8.97）fmol/ml，明显高于健康对照组的（32.73±18.94）、（24.36±13.27）、（16.36±5.58）fmol/ml，差异均有统计学意义(tmir-16=2.77, tmir-21=2.34, tmir-92a=3.85，P<0.05)；而mir-29a、mir-143在CRC患者及健康对照血清中的表达，差异无统计学意义(tmir-29a=-0.17, tmir-143=1.59，P>0.05)；miR-16、miR-21、miR-92a在低分化和中分化CRC患者血清中表达水平，差异无统计学意义（tmir-16=1.72, tmir-21=1.49, tmir-92a=1.48，P>0.05），在CRC患者肿瘤切除后7天血清miR-16和miR-92a表达水平分别（36.02±19.95）、（14.82±7.78）fmol/ml，明显低于术前的（62.18±34.17）、（24.06±12.99）fmol/ml，差异均有统计学意义(tmir-16=3.59, tmir-92a=2.60，P<0.05)。mir-16、mir-21、mir-92a联合检测的ROC曲线下面积(area under curve，AUC) 为0.877，对CRC诊断的敏感度和特异性分别达到88%和85%，均优于单一miRNA及传统肿瘤标志物CEA对CRC的诊断效能。结论mir-16、mir-21、mir-92a联合检测对CRC的诊断具有良好的灵敏度和特异度，有望作为新的肿瘤标志物应用于结直肠癌的无创诊断和病情监测。（中华检验医学杂志，2014,37：691-695）

目的综合评价血浆D-二聚体水平与卵巢癌及其病理分期的相关性。方法通过检索美国公共医学全文数据库（PubMed）、荷兰医学文摘（Embase）、中国知网（CNKI）及万方数据库（WanFang Data），收集国内外公开发表关于D-二聚体与卵巢癌及其病理分期相关性的横断面研究，检索时限均为从建库至2013年12月31日，同时追溯文献的参考文献。由2位研究者根据纳入及排除标准独立筛选文献、提取资料并评价质量后，采用RevMan5.2软件进行Meta分析；采用SAS 9.1软件进行方差分析。结果初检共纳入139篇文献，逐层筛选最后纳入13篇，包括卵巢癌组679例，良性对照组685例，健康对照组477例。Meta分析显示：血浆D-二聚体水平比较，（1）卵巢癌组高于良性对照组（Z=8.61，P<0.000 01）和健康对照组（Z=6.76，P<0.000 01）；（2）良性对照组高于健康对照组 (Z=3.15，P=0.002)；（3）卵巢癌FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期高于FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期（Z=3.38，P=0.000 9）；（4）复发转移组和治疗缓解组比较差异无统计学意义（Z=1.19，P=0.23）。方差分析显示：（1）卵巢癌组、良性对照组和健康对照组的组内D-二聚体水平均不尽相同，差异均有统计学意义（F值=159.71，118.497，56.586 4，P值均=0）；（2）合并后的卵巢癌组、良性对照组及健康对照组两两比较，二聚体水平从高到低依次为卵巢癌组、良性对照组及健康对照组，差异均有统计学意义（F值=75.715 9，71.738 7，3.111 9，P值均<0.01）。结论卵巢癌患者，尤其是FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期患者，血浆D-二聚体水平升高。复发转移者与治疗缓解者间血浆D-二聚体水平变化不明显。（中华检验医学杂志，2014,37：696-700）

目的研究糖化血红蛋白在不同年龄、不同性别的糖尿病及糖尿病前期患者中的风险值。方法回顾性研究。收集浙江省台州医院2012年检测HbA1c的健康体检者10 840例，使用决策树CHAID法进行初步分层，根据初步分层结果将年龄进一步划分为5层，最终分20～30岁、31～40岁、41～50岁、51～60岁及>60岁五层(F=434.342,P=0.000)。再采用单因素方差分析和线性回归分别确定各年龄组间差异性及HbA1c值的95%预测区间（PI）;以HbA1c值的95%PI上限值为糖尿病风险值(DRVs)，分别用HbA1c的参考区间上限值及DRVs从1 889例HbA1c值在6.0%～6.5%的人群中筛查DM患者，对比两者的筛查灵敏度来验证DRVs对于DM患者的筛查价值；再用HbA1c的DRVs对5年前(2008年)HbA1c值在6.0%～6.5%的人群进行糖尿病筛查并跟踪其复查记录来验证其对于PreD患者的筛查价值。结果（1）决策树根节点按照年龄初步分为9层（F=231.462，P=0.000)，计算各层95%置信区间后对上限值相同的进行合理合并。（2）采用线性回归得到的年龄5层式HbA1c的95%PI如下：20～30岁:男性4.6%～5.9%，女性4.6%～5.9%；31～40岁：男性4.8%～6.0%，女性4.7%～6.0%；41～50岁：男性4.9%～6.2%，女性4.8%～6.1%；51～60岁：男性5.0%～6.3%，女性4.9%～6.2%；> 60岁：男性5.1%～6.4%，女性5.0%～6.3%；传统的HbA1c参考区间为：4.8%～6.3%。（3）得到的DRVs与传统HbA1c参考区间上限值在HbA1c值6.0%～6.5%人群筛查出糖尿病患者的灵敏度分别为：48.1%,34.5%。（4）回顾2008年HbA1c值在6.0%～6.5%而未被诊断为DM的人群采用传统HbA1c参考区间上限值进行糖尿病筛查为阴性结果而采用本文得出的DRVs筛查为阳性结果的有49人，至今真正发展为DM的有13人，占26.5%。结论分层设定不同年龄和不同性别人群之间的HbA1c的DRVs，作为传统参考区间的补充，对于DM患者的诊治及PreD患者的筛查和干预具有重要意义。（中华检验医学杂志，2014,37：701-704）

目的观察NaF·EDTA-K2抗凝对血脂分析的影响，探讨将妊娠妇女空腹NaF·EDTA-K2抗凝血浆用于血脂分析的可行性。方法病例对照研究。收集2012年8至10月，广州市妇女儿童医疗中心珠江新城院区产科门诊及内分泌门诊的150例妊娠期妇女（年龄28.4±4.1岁，孕23～27周）的空腹NaF·EDTA-K2抗凝血浆和血清，采用配对t检验比较分析两组样本总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、载脂蛋白A1（apoA1）及载脂蛋白B（apoB）的结果差异，采用直线回归分析两组样本血脂项目检测结果的相关性及血浆估计值标准误。结果NaF·EDTA-K2抗凝血浆组各项目均值均略低于血清组，除TG外的5个项目结果存在统计学差异（LDL、apoA1、apoB P<0.05；CHO、HDL P<0.01）；经直线回归分析，两组标本各项目检测结果的相关系数分别为：CHO 0.968，TG 0.995，HDL 0.979，LDL 0.991，apoA1 0.692，apoB 0.846；血浆估计值的标准误分别为：CHO 0.281，TG 0.094，HDL 0.077，LDL 0.112，apoA1 0.230，apoB 0.111；相应修正系数为：CHO 1.08，HDL 1.08，LDL 1.08，ApoA1 1.14，ApoB 1.07。结论NaF·EDTA-K2抗凝空腹血浆用于妊娠妇女血脂分析可造成微小负偏差，但检测结果与血清实测值有较好的相关性，经修正后可用于血脂水平预测。（中华检验医学杂志，2014,37： 705-708）

目的对我国医院检验科常规化学检验项目的参考区间进行调查，并与现行的卫生行业标准进行比较。方法采用基于Web方式的室间质量评价软件系统，向所有参加2012年卫生部临床检验中心常规化学室间质量评价计划的实验室下发参考区间调查表，包括：参考区间来源、上下限、分组与规则，所用方法、仪器、试剂和校准物等信息。使用Microsoft Excel 2007和SPSS 13.0等统计软件对数据进行统计分析。结果共有385家实验室上报了结果，只有较少的实验室对参考区间进行了分组，部分实验室的分组规则与行业标准有一定的差异，与行业标准分组相同的实验室所给出的参考区间与行业标准相比也多存在极显著统计学差异（P＜0.01）。结论卫生行业标准所给出的常规生化项目参考区间与实际工作中检验科所应用的参考区间差异较大，这可能与实验室服务人群和诸多实验室内因素有关，如果在实际工作中使用行业标准所给出的参考区间，应在使用前进行参考区间的评估和验证。（中华检验医学杂志，2014,37：709-711）

患者 男，27岁，1周前无明显诱因出现上腹部持续性钝痛，伴有恶心呕吐，就诊于当地诊所。检测血糖30 mmol/L，尿酮体(+++)，血气分析pH 6.8，考虑糖尿病酮症酸中毒，给予降糖补液治疗，具体不详,腹痛有所好转。5 d前患者出现发热，最高达38.4 ℃，伴鼻塞、头痛。2 d前因胸闷，鼻面部肿胀，左眼视物不见,且再次腹痛加剧伴呼吸急促,于2013年6月6日来河北医科大学第二医院就诊，收入急诊科。

华法林是一种用于预防血栓栓塞性疾病的抗凝药。服用华法林期间对于用量的监测非常重要，凝血酶原时间是外源性凝血途径的筛选性实验，也是口服华法林抗凝治疗监测的首选实验室指标。临床上习惯使用标准化的凝血酶原时间，即国际标准化比值来调整华法林剂量。多种草药与食物可以增强华法林的抗凝效果，而有些草药与食物可以降低华法林的抗凝效果。抗凝过度或者抗凝不足均可引起严重的临床症状。（中华检验医学杂志，2014,37：715-718）

血流感染是临床医生高度关注的严重疾病。由于其治疗涉及大量抗生素的应用，而细菌耐药性的问题又日趋严峻，因此，血流感染的快速诊断和预后评估需要更有效而可靠的方法。血培养、细菌鉴定和药敏试验是败血症诊治中不可替代的检测方法。血流感染时机体会对细菌内毒素产生免疫反应。自身免疫反应刺激巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子、白介素-1和白介素-6。这3种炎症反应因子会引起系统性的炎症反应而引起多个相关的生物标记物发生变化。因此，对某些生物标记物的检测成为早期诊断和评估治疗的重要手段。