2023年 · 第46卷第04期

分子检测技术在女性肿瘤早期筛查、指导治疗药物选择、预测预后和疗效监测等方面显示出良好的应用前景与广阔发展。大量研究表明分子检测结果具有影响乳腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌等女性肿瘤诊疗策略的巨大潜力。先前人乳头瘤病毒检测对于宫颈癌筛查、人乳腺癌易感1/2号基因突变易感基因检测预测乳腺癌风险与用药指导奠定了女性肿瘤分子检测临床应用基础，并展现新型分子检测的研究在未来女性肿瘤诊疗中的临床应用前景。

乳腺及女性生殖系统肿瘤严重威胁着女性健康。随着分子诊断研究的不断深入，乳腺及女性生殖系统肿瘤的基因组改变被不断揭示，肿瘤的诊断与治疗模式也逐渐发生改变，分子靶点的检测已成为肿瘤管理的一部分，准确识别肿瘤的分子靶点在疾病的诊断、治疗、监测转移、预测复发和预后中发挥重要作用。本文就分子诊断对于乳腺及女性生殖系统肿瘤的风险评估、分子分型、靶向治疗、毒副作用、预后评价等相关内容做一简要论述。

依据现行宫颈癌筛查策略与世界卫生组织宫颈癌筛查指南，未来会考虑将基因甲基化纳入新的指南。然而，关于DNA甲基化检测在宫颈癌的具体临床应用价值还有待讨论。本文回顾了DNA甲基化在宫颈癌发生过程中的作用，并讨论了甲基化检测在高危型人乳头瘤病毒（hrHPV）阳性女性管理中的潜在临床应用。认为甲基化检测不仅可用于hrHPV阳性女性的初步分流；还可用于轻微细胞学异常女性的二级分流，以确定宫颈上皮内瘤变3级（CIN3）或癌的高风险；同时也可用于即将终止宫颈癌筛查规划者的辅助检测，为CIN的管理提供支持。

我国是胃癌高发国家，由于早期胃癌无明显症状，临床发现的胃癌约90%属于进展期，严重降低了5年生存率。胃镜和活检是公认的诊断胃癌的金标准，但我国人口众多，资源分配有限，难以实现大规模筛查，而早期诊断相关检验技术具有无创、便捷、灵敏度高等特点，能够实现早期胃癌的筛查。通过分析近年来已用于临床早期诊断胃癌的相关检验技术，包括呼气检测、血清学免疫检测和分子检测技术，探讨早期胃癌相关标志物，例如幽门螺杆菌、胃蛋白酶原、胃泌素、肿瘤标志物及DNA甲基化在早期胃癌诊断中的临床应用及特点，并提出了共识性意见，旨在为患者、临床医师及卫生行政管理部门提供规范、临床应用价值高的检验技术指导和筛查策略。

目的 分析长沙地区2020—2022年人乳头瘤病毒（HPV）感染情况、亚型分布特征，以及行阴道镜和宫颈组织病理学检查HPV阳性患者的病理组织活检结局。 方法 回顾性分析2020年1月至2022年10月在湖南中医药大学第一附属医院妇科门诊、健康管理科及皮肤性病科就诊的60 354例患者HPV感染状况，分为<25岁组（3 250例）、25~34岁组（19 406例）、35~44岁组（17 297例）、45~54岁组（13 104例）、55~64岁组（4 793例）、≥65岁组（2 504例）。女性采集宫颈脱落细胞，男性采集病变部位，HPV分型检测采用PCR及流式荧光杂交法，可检测27种HPV基因分型。分析不同就诊科室、不同年龄段患者HPV亚型分布情况；分析224例HPV阳性同时进行了阴道镜和宫颈组织病理学检查的患者其HPV各亚型感染情况与病理组织活检结局的关系。相关性分析采用皮尔逊相关检验，双侧P<0.05具有统计学意义；率的组间比较采用Pearson卡方检验或连续校正卡方检验，双侧P<0.05为差异有统计学意义；多个样本率之间的比较采用卡方分割检验，根据分组数量对检验水准进行校正后再比较，双侧P小于校准后的检验水准为差异有统计学意义。 结果 HPV总体阳性率为16.4%（9 909/60 354）。在所有HPV阳性患者中，HPV单一型占75.5%（7 479/9 909），HPV多重型占24.5%（2 430/9 909）。占比从高到低前6位的HPV型别依次为52型22.8%（2 256/9 909）、58型11.1%（1 097/9 909）、53型10.5%（1 045/9 909）、16型9.0%（890/9 909）、61型7.8%（774/9 909）及6型7.6%（750/9 909）。各年龄段组间总体感染率差异具有统计学意义（χ2=536.90，P<0.001），其中<25岁组HPV感染率最高，为30.1%（978/3 250），均高于25~34岁组15.6%（3 035/19 406）、35~44岁组14.2%（2 464/17 297）、45~54岁组16.1%（2 115/13 104）、55~64岁组19.1%（915/4 793）及≥65岁组16.1%（402/2 504），差异均有统计学意义（P均<0.001）。皮肤性病门诊就诊患者的HPV感染最高的型别是6型16.7%（378/2 266）和11型10.5%（239/2 266）。HPV16在宫颈上皮内瘤变（CIN）3级及宫颈癌患者中阳性率为12/17，高于炎性改变的病例［25.0%（35/140）］和CIN1级的病例［23.0%（11/48）］，统计值分别为χ2=15.02，P<0.001和χ2=12.48，P<0.001，差异均具有统计学意义。 结论 <25岁人群HPV感染率最高；低危型HPV6和11型是引起皮肤性病的主要型别。全部就诊人群中，高危型HPV52型、58型及53型是长沙地区女性最常见的感染型别，但高级别宫颈上皮内瘤变及宫颈癌与HPV16型感染更为密切。

目的 探讨应用宫颈脱落细胞DNA（半胱氨酸双加氧酶1型，CDO1和CUGBP Elav样家族成员4，CELF4）甲基化检测育龄期女性子宫内膜癌的应用价值。 方法 选取2021年11月至2022年10月就诊于中南大学湘雅三医院妇科异常子宫出血的育龄期、有宫腔镜检查手术指征的女性517例进行前瞻性研究，术前收集宫颈脱落细胞进行细胞学、人类乳头瘤病毒（HPV）和DNA甲基化检测。同时收集患者基本临床信息、生物标记物与经阴道超声（TVS）子宫内膜厚度等信息。以宫腔镜下内膜组织病理学诊断为金标准，采用单因素Logistic回归分析子宫内膜癌的高危因素，利用受试者工作特征曲线下面积（AUC）分析DNA甲基化检测对育龄期女性子宫内膜癌的检测效能。 结果 年龄、体重指数（BMI）≥25 kg/m2、内膜厚度≥11 mm、CDO1mΔCt≤8.4、CELF4mΔCt≤8.8、双基因甲基化与年轻女性子宫内膜癌的发生相关，OR值（95%CI）分别为1.16（1.08~1.25）、4.33（1.89~10.31）、9.49（3.88~26.69）、69.62（25.70~224.36）、23.64（9.66~63.99）、87.39（24.83~555.05），均P<0.05。在这些检测方案中，CDO1m/CELF4m甲基化诊断子宫内膜癌的AUC最高为0.90（95%CI 0.83~0.97），其敏感度、特异度分别为91.7%（95%CI 80.6%~100%）和88.8%（95%CI 86.0%~91.6%）。TVS联合DNA甲基化检测可进一步提高敏感度至95.8%（95%CI 87.8%~100%），但特异度为68.0%（95%CI 63.8%~72.1%）。 结论 对于育龄期女性中异常子宫出血或阴道异常排液的女性，宫颈细胞学DNA甲基检测子宫内膜癌的准确性优于其他无创临床方案。DNA甲基化联合TVS可以改善检测的敏感性。

目的 探讨血清胱抑素C（CysC）水平评估2型糖尿病（T2DM）患者肾病预后中的价值。 方法 选取2011年1月至2020年9月在南京医科大学第一附属医院确诊T2DM合并有肾脏疾病、有完整的肾活检病理资料的113例进行回顾性分析，根据肾活检时血清CysC中位数水平分为血CysC水平>1.54 mg/L组（n=57）和血CysC水平≤1.54 mg/L组（n=56），比较患者的临床资料及病理指标。采用Cox回归分析肾脏不良预后的影响因素，Kaplan-Meier生存曲线比较无肾脏终点事件累积生存率，平滑曲线拟合分析及阈值效应分析血清CysC水平与肾脏不良预后的关系，受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）分析血清CysC联合肾小管标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）在总体及根据估算的肾小球滤过率（eGFR）进行不同肾病分期患者中对肾病预后的诊断价值，以及时间依赖的ROC曲线评估血清CysC对T2DM患者3年内的肾病预后的诊断价值。 结果 与血清CysC≤1.54 mg/L的患者比较，血清CysC>1.54 mg/L的T2DM患者肾功能较差、贫血更重且维生素D缺乏更明显，伴病理损伤方面的间质炎症、肾小球硬化比例、血管损伤程度更严重（P均<0.01）。随访时间为36.77（29.34，44.20）个月，Kaplan-Meier生存曲线结果提示血清CysC>1.54 mg/L组无肾脏终点事件累积生存率更低，预后更差（χ2=8.785，P<0.05）。调整后的多因素Cox分析显示血清CysC是肾脏预后的独立危险因素（HR=47.850，95%CI 1.248~49.382，P<0.05）。平滑曲线拟合分析显示，血清CysC水平与肾脏不良预后相对危险度呈线性关系（β=2.25，95%CI 1.06~4.81，P=0.036）。时间依赖的ROC曲线表明，血清CysC预测T2DM患者肾活检明确诊断后3年内的肾脏不良预后AUC值分别为0.714、0.625和0.631。血清CysC联合血清及尿NGAL的AUC值为0.694（敏感度55.56%，特异度77.78%）；在eGFR<60 ml·min-1·1.73 m-2患者（n=51）中，血清CysC联合血尿NGAL的AUC值可达到0.817（敏感度66.67%，特异度85.00%）。 结论 T2DM患者较高水平的血清CysC与更显著的肾功能损害和更重的肾脏病理改变相关，与肾脏不良预后线性正相关，是肾脏不良预后的独立危险因素。此外，血清CysC水平对T2DM患者肾活检明确诊断后1年内的肾脏预后的预测价值更好，联合肾小管标志物血、尿NGAL更有助于判断肾脏预后，尤其是慢性肾病3期以上的患者。

目的 探究致医院感染性腹泻艰难梭菌主要序列型别（ST81、ST8和ST42）之间的毒力特征、芽孢形成能力及耐药机制等方面的差异。 方法 收集2017年9月至2019年9月首都医科大学附属北京友谊医院临床住院腹泻患者送检艰难梭菌培养的稀便标本816份进行艰难梭菌分离和培养。以该院主要序列型别的艰难梭菌ST81（26株）、ST8（15株）和ST42（14株）为实验菌株。应用聚合酶链反应（PCR）和酶联免疫荧光法分别检测艰难梭菌的毒素基因和毒素A/B蛋白的表达；采用平板涂布法检测艰难梭菌的芽孢形成能力；采用琼脂稀释法检测艰难梭菌对11种抗菌药物的耐药性；采用PCR方法扩增耐药基因、测序及氨基酸突变分析艰难梭菌携带的耐药基因和氨基酸的突变位点。计量资料的组间比较采用Kruskal Wallis秩和检验，率的比较采用Fisher精确检验。 结果 ST81型菌株为tcdA-tcdB+/cdtA-cdtB-毒素型别，ST8和ST42型菌株均为tcdA+tcdB+/cdtA-cdtB-毒素型别，ST42、ST8和ST81型别菌株产生毒素A/B蛋白的产量分别为41.9、2.4和0.83，ST42和ST8组毒素A/B蛋白的产量高于ST81组，差异有统计学意义（均P<0.001），ST42菌株毒素A/B蛋白的产量高于ST8组（P=0.045）。ST81、ST8和ST42型菌株的芽孢形成数量分别为494×105 CFU/ml、160×105 CFU/ml和166×105 CFU/ml，ST81型菌株的芽孢形成数量明显高于ST8和ST42型菌株，差异有统计学意义（均P<0.001）。ST81型菌株为多重耐药菌，对头孢曲松、莫西沙星、红霉素和克林霉素等抗菌药物均耐药，耐药率均为100%（26/26），ST8型菌株对莫西沙星的耐药率为9/15，对红霉素和克林霉素的耐药率均为11/15。ST81型别菌株对莫西沙星的耐药率高于ST8型，差异有统计学意义（P=0.001），ST81型别对红霉素和克林霉素的耐药率高于ST8型，差异均有统计学意义（均P=0.005）。ST42型对头孢曲松和莫西沙星的耐药率分别为0和3/14。ST81型菌株对头孢曲松和莫西沙星的耐药率均高于ST42型，差异有统计学意义（均P<0.001）。ST81型菌株携带红霉素和克林霉素的耐药相关基因ermB阳性率［100%（26/26）］高于ST8组（11/15），差异有统计学意义（P=0.005）。喹诺酮类的耐药基因gyrA和gyrB编码的氨基酸突变分析显示，ST81和ST8型别菌株gyrA和gyrB基因编码的氨基酸同时发生突变，但gyrB基因编码的氨基酸突变位点不同。ST81型菌株为82位点苏氨酸突变为异亮氨酸和426位天冬氨酸突变为缬氨酸，ST8型菌株为82位点苏氨酸突变为异亮氨酸和426位天冬氨酸突变为天冬酰胺，ST42型别菌株gyrA基因编码的氨基酸为单突变，82位点苏氨酸突变为异亮氨酸。 结论 ST81型和ST42均为多重耐药菌，ST81型芽孢形成能力较强，ST42型别毒力较强。ST81和大部分ST8型对喹诺酮类药物的耐药性较强，需警惕多重耐药性ST81、较强毒力高耐药性ST42和ST8型菌株在医院的播散流行。

目的 探讨关节液钙卫蛋白诊断假体周围感染（PJI）的价值。 方法 采用前瞻性研究。选择2021年7月至2022年6月解放军总医院第一医学中心髋、膝关节置换术后疑似PJI的82例患者。根据2018年第2次国际共识会议提出的诊断标准分为感染组（PJI组，39例）和未感染组（43例）。采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对各组患者关节液中钙卫蛋白和内部参考标准（IRS）的水平双盲检测，以目标蛋白峰值/IRS峰值作为结果记录。采用Mann-Whitney U检验比较两组间S100A8和S100A9的浓度，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析S100A8和S100A9对PJI的诊断效能。 结果 钙卫蛋白以S100A8单体和S100A9单体的形式被检测到。PJI组关节液S100A8水平明显高于未感染组［1.57（0.48，4.17）比 0.00（0.00，0.05），Z=‒7.221，P<0.001］；PJI组关节液S100A9水平也明显高于未感染组［0.74（0.29，1.70）比0.06（0.00，0.10），Z=‒6.255，P<0.001］。S100A8和S100A9诊断PJI的敏感度为97.4%和87.2%，特异度86.0%和88.4%，ROC曲线下面积为0.964（95%CI 0.929~0.998）和0.902（95%CI 0.924~0.996）。 结论 采用MALDI-TOF MS检测关节液S100A8和S100A9对PJI具有较好的诊断价值。

目的 联合聚合酶链反应与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术，构建检测5种临床常见念珠菌血症病原菌的高通量检测方法。 方法 方法学建立。以白色念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌为目标菌株，以内转录间隔区为靶基因，设计特异的单碱基延伸引物，在同一反应体系内进行单碱基延伸反应，用MALDI-TOF MS检测各目的菌特征峰；使用模拟血流感染样本验证上述构建的检测体系敏感度、特异度；前瞻性收集2021年10月至2022年9月解放军总医院第一医学中心检验科108例疑似或确诊念珠菌血症患者血液样本并检测；将核酸质谱检测结果与金标准血培养方法进行比较。 结果 用所建立的核酸质谱检测体系同时检测5种临床常见念珠菌，各菌种均可产生特异的产物峰且各菌种之间不存在相互干扰。白色念珠菌的最低检测限可达100 CFU/ml，近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌的最低检测限可达10 CFU/ml。对108份血液样本进行检测，核酸质谱的敏感度为94.74%（36/38），特异度为97.14%（68/70），阳性预测值为92.31%（36/39），阴性预测值为98.55%（68/69），配对四格表的χ2检验显示2种方法无显著差异（P>0.05），Kappa一致性检验显示2种方法一致性良好（Kappa=0.9，P<0.05）。 结论 成功构建了适用临床念珠菌检测的核酸质谱检测体系，方法验证结果与临床血培养具有一致性。

目的 探讨CTNNB1基因变异所致的神经发育障碍性疾病患儿的临床表现及基因变异特点。 方法 回顾性分析2020年6月至2022年3月在武汉儿童医院诊断的6例CTNNB1基因异常患儿的临床表现。应用全外显子测序技术（WES）对患儿进行基因变异分析，Sanger测序技术对变异位点进行验证；检索文献及数据库总结CTNNB1基因异常相关疾病的临床特点。 结果 本研究纳入6例患儿，3例男性患儿、3例女性患儿；年龄（17.8±11.1）个月。患儿均以语言或运动落后就诊；临床主要表现为面容异常、小头畸形肌张力亢进或痉挛、语言运动落后、眼睛内斜视以及足外翻等症状。WES检测发现6例患儿均携带CTNNB1基因新发变异，分别为c.1057delA、c.1493_1494insA、c.418_424del、c.1985_1988del、c.1420C>T以及c.1550T>C，患儿父母均未见异常。 结论 CTNNB1基因异常导致的神经发育障碍性疾病临床表现为多系统异常；本研究发现5个未见报道的变异，增加该基因变异谱。

侧流免疫层析技术（LFIA）是一种快速检测技术，是将抗原抗体反应从试管或者实验器皿中移动到试纸条上进行，利用试纸条的层析作用使待测溶液向指定方向移动进而完成整个抗原抗体特异性反应，通过肉眼观察试剂条特定位置的颜色变化即可作出定性判断。因其具有快速、简便、特异性强、经济、无需专业人员的优点，现已广泛应用于医学检测、食品质量监测、环境监测、农业和畜牧业等领域。目前，阻碍LFIA技术发展的一大重要瓶颈就是钩效应的影响。本文旨在归纳总结目前应对钩效应的方法、手段及最新研究进展，以期为研究者在设计试纸条、对适宜纳米颗粒的选择及实现LFIA定量检测提供有力的技术参考。

核磁共振波谱技术（NMRS）是光谱学的一个分支，可用于测定混合物中成分的数目、类型和相对位置。因其高通量、高灵敏度和高稳定性的特点，特别是其“指纹图谱”性、无损性及无偏向性地检测代谢物成分等优点，NMRS已成为代谢组学中最常用的分析检测技术之一。该文立足于临床检验应用研究，简要阐述NMRS的技术原理，从血脂分析、肿瘤检测、精神神经系统疾病预测、传染病诊断、营养与健康管理等生物医学应用领域，详细介绍NMRS应用最新研究成果，探讨临床转化发展前景。

外周血中的循环肿瘤细胞（CTC）含量极少，分离比较困难。微流控芯片以便携性、灵敏度高、高捕获和成本低等特点正成为近年来不断发展的热点领域。微流控装置已被证明可以保持为CTC分离捕获提供最佳性能，包括通量、纯度、回收率和临床相关性。但目前微流控技术仍无法很好地实现高回收率和高纯度的回收CTC。

为探索“新医科”背景下地方高校医学检验人才培养改革路径，分析医学检验技术人才培养现状，贵州医科大学实际，在教学模式、教学平台和实践教学等方面进行探索与改革，构建形成了“区域一体化”育人体系及“三化驱动、四面融通”人才培养模式，提升了人才培养质量并向贵州基层输送了大量医学检验人才。贵州医科大学的改革实践可为地方高校培养应用型医学检验人才提供参考。