2022年 · 第45卷第11期

近年来，随着测序技术、生物信息学分析的迅猛发展，高通量测序（NGS）技术在精准医学中的应用不断深化，主要体现在遗传性疾病诊断、肿瘤基因检测及伴随诊断、感染性疾病检测等方面。相对于传统的临床检验技术，NGS检测步骤繁琐、流程复杂，对结果分析解读要求高。本文介绍了NGS在遗传病诊断、肿瘤检测及感染性疾病检测方面的临床应用，分析了目前临床应用中存在的问题，对实验室的质量管理提出了一些建议。

自从液相色谱串联质谱仪器问世以来，质谱技术在临床实验室中备受欢迎。由于绝大多数的临床质谱方法是未经美国食品药品监督管理局批准的实验室自建方法，为了确保检测结果的可靠性，对临床质谱方法进行质量管理，显得至关重要。美国临床和实验室标准化协会C62-A指南是一个基于对临床质谱方法的高标准质量管理指导文件。本文以美国一个认证的临床质谱实验室为案例，阐述了其临床质谱方法设计开发、验证以及日常运营的质量管理要求。临床质谱方法质量管理的一致性和标准化不仅是实验室间质谱检测结果互认的必要保证，也是难点和挑战。

现行的抗磷脂综合征（APS）的检测方案不能满足临床上对诊断和治疗的需求。炎症在抗磷脂综合征发生、发展的过程中发挥着重要的作用，多种炎症相关的细胞、分子系统和细胞因子共同作用使机体呈现出一种促炎的状态。理解APS致病过程中的炎症机制，有利于实现APS患者的个体化治疗，提高疗效。本文对APS炎症机制研究及相关靶点在诊疗上的应用进行综述，旨在为更加深入全面理解APS致病机制，合理选择治疗策略提供借鉴和参考。

目的 对5个厂家40种临床生化试剂进行性能评价，评价其临床应用价值。 方法 在Beckman AU5400全自动生化分析仪上对四川迈克、宁波美康、复兴长征3家国产厂家和罗氏、日本日立两个进口厂家的40种临床常用生化项目试剂进行性能验证。分析样本分别选取2021年12月至2022年6月在南京鼓楼医院进行临床检测的患者血清。参照中国国家卫生行业标准、中国国家医药行业标准、美国临床实验室标准化协会（CLSI）对体外诊断试剂性能评价标准、中国国家食品药品监督管理局关于体外诊断试剂管理相关规定中推荐的方法对40种试剂的精密度、线性范围、开瓶稳定性、不同批次校准品互换性及正确度进行评估和验证。线性回归采用简单线性回归分析。 结果 40种试剂的精密度良好，除一种国产试剂低水平批内变异系数超出说明书声明范围外，其余试剂的批内、批间变异系数均小于各自说明书中声明的数值。国产试剂及进口试剂的线性范围均达到了各厂家声明的线性范围。40种试剂开瓶30 d与相应新试剂测量值之间差异均无统计学意义（P>0.05）。国产试剂与进口试剂经不同批次校准品互换后检测结果均在各厂家声明的范围内。国产试剂与进口试剂正确度评价良好。 结论 3个国产厂家的27个生化检测数据的各项性能指标基本与进口试剂一致，可满足临床生化实验室的要求，但部分检测试剂的开瓶稳定性及抗干扰性仍需进一步改进。

目的 通过探索一套适用于急诊实验室自动化流水线系统（TLA）的建设及优化体系，提升实验室自动化流水线项目实施的成功率及医疗资源的有效利用。 方法 首先通过对设备升级前，即2019年12月16—22日急诊组的工作流程和工作数据进行分析，明确当前短板并确定流水线配置（前后处理单元及分析仪器数量）；而后确定方案设计的基本原则并基于此原则进行方案设计，并对不同方案进行数据模拟，通过对不同方案的样本周转时间（TAT）进行对比分析确定最终方案；在方案实施后，对项目实施前后的TAT进行比对分析，评估方案实施效果。 结果 通过在原场地进行系统升级实现了流水线系统自动化程度和单机检测速度的提升。凝血样本实现了在线检测及存储；在线离心机由1套增加至2套，在线冰箱存储量由9 000份样本增加至15 000份样本；单机检测速度提升约1倍，生化由2 500个测试/h增加至5 400个测试/h，免疫由668个测试/h增加至1 320个测试/h。在工作量增长9%的情况下，生化免疫急诊样本P95 TAT由96 min缩短至64 min（样本签收至结果审核），下降幅度达33%；且与数据模拟结果保持了高度一致（数据模拟得出的P95 TAT为67 min）。 结论 在方案设计阶段有效运用数据分析及数据模拟进行方案的设计和评估，可有效降低项目实施失败的风险，确保医疗资源的有效利用。

目的 通过蛋白重组技术低成本、快速制备高浓度人视黄醇结合蛋白4（hRBP4）参考物质，解决临床hRBP4高值参考物质难以获取的需求。 方法 在美国国立生物技术信息中心NCB查找hRBP4的互补DNA序列，经大肠埃希菌密码子优化后人工合成，然后将DNA片段克隆至原核表达质粒pET-28a（+）中，以构建重组hRBP4表达载体。将重组质粒转化至E. coli BL21感受肽中，优化诱导表达条件（如温度、转速和异丙基硫代半乳糖苷IPTG浓度等）、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化，获取纯化后的hRBP4重组蛋白。 结果 DNAMAN软件对比显示编码hRBP4蛋白的碱基序列完全正确，成功构建重组hRBP4原核表达质粒；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示亲和纯化产物中可清晰可见约相对分子质量26 000电泳条带；临床尿液和血清hRBP4常规检测系统均可检测到纯化的hRBP4蛋白，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系。 结论 成功构建重组hRBP4高水平表达系统，重组hRBP4蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望在室间质量评价质控品和有证参考物质研制中发挥重要作用。

目的 通过回顾分析2016—2021年微生物实验室标本可接受性相关检验前质量指标的室间质评结果，了解微生物实验室标本可接受性，为建立初步质量规范提供参考。 方法 国家卫生健康委临床检验中心联合31个省（自治区、直辖市）和新疆生产建设兵团临床检验中心同步开展质量指标室间质量评价计划，并通过已开发的室间质量评价系统在线回报结果，收集2016—2021年实验室的基本信息和相关质量指标数据，对全国总体、连续回报实验室（分级和分省）进行统计分析，并采用西格玛度量评价实验室质量水平。 结果 全国实验室13项质量指标所有年份的M均为0（2018年第一次微生物标本污染率除外）；其中10项质量指标（标本采集量错误率、标本丢失率、标本标识错误率、标本检验前储存不适当率、标本运输途中损坏率、标本运输温度不适当率、标本运输时间过长率、标本采集时机不正确率、实验室人员导致的标本重新采集率、非实验室人员导致的标本重新采集率）所有年份的四分位数均为0，均达到6σ水平。连续回报实验室3项质量指标三级医院各年M（Q3）结果显示，标本容器错误率最低，其次是标本类型错误率，微生物标本污染率最高，对应的M（Q3）结果最高值分别为0.047%（0.191%），0.059%（0.252%），0.251%（0.6%）；按照省份分别对标本类型错误率和标本容器错误率2016年第1次和2021年第1次三级医院M进行排列，标本类型错误率中辽宁、河北、江西、天津、北京、贵州、甘肃、青海和宁夏2021年第1次三级医院较2016年第1次明显降低，标本容器错误率中辽宁、四川、浙江、湖北、山西、天津、重庆、贵州、宁夏和湖南2021年第1次三级医院较2016年第1次明显降低。 结论 全国临床微生物实验室标本可接受性结果整体尚可，实验室应探索并建立适合自身的质量指标体系，加强重点质量指标的长期监测，提升服务质量。

目的 建立一种可单管同时检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法。 方法 收集2020年2月至2022年2月广州白云机场海关入境人员新型冠状病毒核酸阳性样本30份和336份排查样本，以及2020年发生新型冠状病毒肺炎疫情前3年期间同样来自广州白云机场海关入境人员的其他呼吸道病原体阳性样本64份和呼吸疾病国家重点实验室提供的呼吸道病原体阳性毒株7份。选取新型冠状病毒 ORF和N基因，以及甲、乙型流感病毒M基因的核苷酸保守区域，设计和筛选出多重巢式荧光PCR引物和探针组合，同时引入人源基因内标的巢式扩增引物和探针，建立一套多重巢式荧光RT-PCR检测方法，应用制备的假病毒阳性质控品和样本盘，评估方法的敏感度、特异度，并进行临床样本应用性验证。 结果 所建立的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法可特异性检出新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒，新型冠状病毒的最低检出限约为125拷贝/ml，甲、乙型流感病毒的最低检出限约为250拷贝/ml；检测101份各类呼吸道病原体阳性样本，显示新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的检测敏感度分别为96.67%、92.86%和96.15%，三者的特异度均为100%，超过300份临床样本的应用性检测中，未见假阳性检出。 结论 建立了一套新型冠状病毒、甲、乙型流感病毒和人源基因内标的一步法多重巢式荧光RT-PCR方法，该方法具有良好的灵敏度和特异性，可用于新型冠状病毒和甲、乙型流感病毒的大批量样本快速筛查。

目的 对都江堰地区HIV抗体确证试验即免疫印迹法（WB）条带阴性和不确定的样本，进行HIV病毒核酸检测并追踪，对比分析追踪前后WB和核酸结果，以期减少WB的假阴性和不确定条带产生的假阳性。 方法 对都江堰地区2021年1至10月收到的286份初筛“HIV感染待确定”的样本，通过WB检测HIV抗体，再对WB结果阴性和不确定的样本进行病毒载量检测，结合流行病学史和病毒载量结果对患者进行了追踪，对追踪前和追踪后的结果进行比对。 结果 286份初筛样本经过确证试验，WB阳性213份（74.48%）、WB阴性37份（12.94%）、WB不确定36份（12.58%）；37份WB阴性样本追踪到10份；36份WB不确定样本追踪到18份。WB阴性和不确定的样本追踪前检测到病毒核酸的17份，追踪后WB均转阳；追踪前未检测到核酸的追踪后排除HIV感染。 结论 此次追踪到的研究对象中，WB阴性存在2例假阴性，WB不确定存在3例条带假阳性，WB阴性和不确定的样本应立即进行病毒核酸检测并追踪。

目的 探讨免疫标记物CC-趋化因子受体7（CCR7）抗原在慢性淋巴细胞白血病（CLL）诊断和鉴别诊断中的价值。 方法 收集南京医科大学第一附属医院2015年1月至2018年12月间收治的B型慢性淋巴细胞增殖性疾病（B-CLPD）患者643例，包括327例CLL、58例套细胞淋巴瘤（MCL）、34例滤泡淋巴瘤（FL）、36例边缘区淋巴瘤（MZL）、10例毛细胞白血病或其变异型（HCL/HCL-v）、40例华氏巨球蛋白血症（WM），以及48例CD5+B型慢性淋巴细胞增殖性疾病未分类（B-CLPD-U）和90例CD5-B-CLPD-U。同时收集本院健康管理中心2018年20名正常对照样本。利用流式细胞术检测B-CLPD患者免疫表型及CCR7表达，采用荧光原位杂交技术（FISH）分析了共济失调毛细血管扩张突变基因（ATM）缺失、13q14缺失、P53缺失和12三体，并利用Sanger测序分析了剪接因子3b亚基1（SF3B1）、NOTCH1、肿瘤蛋白53（TP53）和免疫球蛋白重链可变区（IGHV）的基因突变情况。计量资料的比较采用Mann-Whitney检验，率的比较采用χ2检验。CCR7的诊断价值和最佳阳性界值利用受试者工作特征（ROC）曲线计算。 结果 CCR7在典型CLL和非典型CLL中阳性表达率分别为90.8%（257/283）和84.1%（37/44），阳性率差异无统计学意义（χ2=1.228，P=0.268）。CCR7在CLL中阳性表达率为89.9%（294/327），平均荧光强度（MFI）为278（246，307），而CCR7在MCL、CD5+B-CLPD、CD5-B-CLPD、FL、WM、HCL/HCL-v和MZL中的阳性表达率分别为10.3%（6/58）、6.3%（3/48）、8.9%（8/90）、0、0、0和13.9%（5/36），MFI分别为114（106，128）、112（106，117）、110（104，121）、108（105，119）、111（105，124）、112（108，115）和109（105，120），与CLL相比，其他类型B-CLPD中CCR7阳性表达率较低，差异具有统计学意义（χ2=181.3、177.8、232、164.7、180.8、62.6、129，P<0.01）。另外CCR7阳性用于鉴别CLL与其他类型B-CLPD的敏感度、特异度和准确度分别为89.9%、93.0%和92.3%。CCR7+CLL患者CD49d阳性表达率为13.9%，低于CCR7-CLL患者（42.1%）（χ2=7.6，P=0.01）；而13q14缺失发生率为50.3%，高于CCR7-CLL患者（20%）（χ2=6.56，P=0.01）。 结论 CCR7在CLL与其他类型B-CLPD鉴别诊断中具有重要的临床价值。

目的 分析甲状腺癌的可变剪切（AS）事件，探讨AS事件与甲状腺癌预后的相关性，并建立AS事件与剪接因子（SF）的调控网络。 方法 分别从癌症基因图谱（TCGA）和TCGA SpliceSeq数据库下载507例甲状腺癌患者临床资料和AS事件数据，合并得到AS事件生存数据的矩阵，评估7种AS事件的发生情况。采用单因素Cox回归分析筛选与预后相关的AS事件，最小绝对值收敛和选择算子（LASSO）回归分析筛选变量避免模型过度拟合，多因素Cox回归分析构建预后模型。Kaplan-Meier 曲线和受试者工作特征（ROC）曲线对预后模型的价值和效能进行评价。利用Pearson试验分析AS事件与SF的相关性，并对SF基因进行GO富集和KEGG通路分析。 结果 本研究共纳入507例甲状腺癌患者，研究发现10 447个基因发生了45 150次可变剪切事件。其中ES为主要类型（38.84%），ME发生次数最少（0.51%）。单因素Cox回归筛选出1 842个与预后相关的AS事件，多因素Cox分析建立了基于USHBP1-48249-AA、CACNB1-40626-AT和BEX5-89679-AP的预后风险模型。以风险分数0.807为最佳临界值，能够很好地区分高风险和低风险组（P<0.001，AUC=0.929）。构建的SF-AS调控网络中发现多个关键SF基因能够调控AS事件的表达，包括CDK12、RBM25、DDX39B、SRRM2和DDX46等。 结论 基于3-AS事件的模型对于评估患者预后具有较高的价值，构建的SF-AS调控网络为探讨甲状腺癌发生发展机制提供了新的思路。

目的 建立基于血清标志物联合检测的肝细胞癌（HCC）患病风险预测模型C-GALAD Ⅱ，并对其预测价值进行分析。 方法 回顾性分析了8家医院及体检机构2018年4月至2020年10月收集的229例肝癌患者、2 317例慢性肝病患者和982名健康人的临床资料，包括年龄、性别和血清检测信息等。队列按照6∶4分层随机抽样划分为训练集和测试集，在训练集上通过Logistic逐步向后回归建立预测模型，并在测试集上对模型效果进行验证。另收集了首都医科大学附属北京佑安医院的2021年3—7月临床数据，包括84例肝癌患者和204例慢性肝病用于模型的外部独立验证。采用受试者工作特征（ROC）的曲线下面积（AUC）、敏感度和特异度评估模型的效能。 结果 通过Logistic逐步向后回归，年龄、性别、甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白异质体比率（AFP-L3%）、异常凝血酶原、血小板和总胆红素作为肝癌患病风险的预测指标进入模型，在测试集上验证模型所得ROC曲线下面积（AUC）为0.954，敏感度为88.04%，特异度为94.85%，在外部独立验证集的AUC为0.943，敏感度为89.29%，特异度为90.2%，性能优于其他已发表模型。 结论 C-GALAD Ⅱ模型能够准确预测个体罹患肝癌的风险，为肝癌的血清学诊断提供参考依据。

目的 探讨案例导向学习（CBL）与问题导向学习（PBL）双轨教学模式在检验医学科住院医师规范化培训教学查房中的应用价值。 方法 以2017年9月至2021年6月在温州医科大学附属第二医院检验医学科住院医师规范化培训的2017级和2018级学员作为研究对象，其中2017级学员为传统讲座教学组（传统教学组，7人），2018级学员为CBL-PBL双轨教学模式组（CBL-PBL组，12人）。2组进行为期22个月的检验专科培训，并进行入科理论考核1次，期中理论考核2次，年度业务水平测试、结业理论考核、结业实践技能考核和问卷调查各1次。问卷调查在学员结业考核结束后匿名填写，调查指标包括提高解决临床问题、理论知识和上机操作等能力，减少课前准备时间，教学方法满意程度以及常规应用到临床的认可度，结果分为很认同、认同、一般、不认同、非常不认同5项，分别计为5、4、3、2和1分。采用克朗巴哈系数进行问卷的可靠性分析。 结果 CBL-PBL组的期中理论考核、年度业务水平测试和临床结果判读成绩明显高于传统教学组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。CBL-PBL组住院医师规范化培训后成绩的提升高于传统教学组（P<0.05）。问卷可靠性分析的克朗巴哈系数为0.938。CBL-PBL组在提高解决临床问题、上机操作、分析解决问题、创新应变能力，提高学习兴趣、自主学习能力、教学方法满意程度和常规应用到临床的认可度得分明显高于传统教学组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。 结论 将CBL-PBL双轨教学模式引入到检验医学科住院医师规范化培训教学查房中，可有效提高住院医师规范化培训的结果和表现，有助于培养更高素质的医学检验人才。

患者男，3岁8个月，面容异常，眼距过宽、鼻梁扁平，叫之反应差，语言运动发育落后，双手持握不协调，手指弯曲不能伸直。患者先天性近视，眼球震颤；牙齿易脱落。生殖系统异常表现为小阴茎及睾丸偏小。实验室生化检测肝肾功能未见明显异常，血清免疫球蛋白水平未见异常。脊柱X线片提示脊柱侧弯。头颅MRI提示小脑发育不良。高通量检测及Sanger测序验证发现患者COG5基因存在复合杂合变异，分别为遗传自母亲的c.1039C>T变异以及遗传自父亲的c.928+3A>G剪接位点变异；结合患者临床表型，患儿诊断为COG5基因异常所致的先天性糖基化病（COG5-CDG）。明确诊断以后，患者进行语言及运动相关的康复训练治疗，但治疗效果不明显。本研究报道了COG5-CDG并发现了2个COG5基因新变异，扩展了该基因的突变谱。

卡他莫拉菌是一种存在于人类呼吸道黏膜的革兰阴性双球菌，可定植在健康人体鼻咽部。该菌可沿着咽鼓管进入中耳引起中耳炎，或下行进入肺部引起慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）或肺炎等。目前，关于卡他莫拉菌致病机制的相关研究较少，所以国内外对卡他莫拉菌致病性的认识不够全面。本文将从卡他莫拉菌与中耳炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重的关系以及重要毒力因子的作用机制等方面进行阐述，希望能够提高大家对卡他莫拉菌的认识，同时为临床诊断相关疾病提供参考。

精神分裂症是一种严重的精神疾病，临床诊疗过程依赖量表评估、正确的心理疏导、相关的药物治疗等措施，缺乏量化的实验室检测指标以评估疾病进程。该文在荟萃大量文献、临床相关共识、指南和专家建议的基础上，提出了基于循证的精神分裂症潜在实验室诊断相关生物标志物，如遗传学标志物、神经递质、神经发育相关蛋白、肠道菌群等，讨论了这些生物标志物在该领域未来的应用拓展方向，以期为精神分裂症早期精准诊断、治疗、预后康复评估提供客观依据。