2007年 · 第30卷第12期

随着国民经济水平的提高,社会的进步,人们健康理念的转变,国家医疗体制的改革,临床医疗及急救医学发展的需要,促进了POCT技术的发展.本文概述了POCT的概念,发展的基础,应用范围,存在的问题,以及质量管理和展望,旨在促进POCT的合理使用、逐步的普及不断发展。

目的 探讨联合检测粪便中肿瘤分子标志物和粪便隐血试验对结直肠癌早期诊断的敏感度和特异度.方法 检测68例不同结直肠癌患者的粪便标本的粪便隐血和APC、K-ras及p533种肿瘤相关分子标记物的突变.同时检测43名健康体检者的粪便标本.结果 35例癌症患者粪便隐血试验呈现阳性[51%;95%可信区间(95%CI)为37%～64%].45例标本肿瘤分子标志物发生改变(66%;95%CI为51%～77%).两种方式检测的一致性较弱(Kappa值为0.023),其联合应用的敏感度为94%(95%CI为83%～97%);特异度为90%(95%CI为76%～95%).结论 粪便隐血试验和分子诊断联合应用的敏感度高于任何一种单独的非创伤性诊断方式,有利于对结直肠癌患者的早期诊断。

目的 构建一种快速、系统检测与糖尿病相关的45个mtDNA位点的膜芯片.方法 针对mtDNA的45个突变位点,采用Primer Premier 5.0和NCBI BLAST软件设计野生型和突变型探针;将带有8T长臂的90条探针,通过紫外交联固定于经5×SSC Buffer处理的尼龙膜;不对称PCR方法制备单链靶序列,纯化后经Biotin标记,AP-avidin作用于NBT/BCIP显色,目视化观察结果.采用该膜芯片检测24份已知mtDNA序列的糖尿病标本,每份标本平行检测3次,评价检测结果.结果 9对引物可在同一条件下特异性扩增45个基因位点的目的片段;野生型和突变型探针的退火温度分别为(59.01±1.42)℃、(59.34±1.29)℃,能够在相同的温度下完成杂交反应;膜芯片样点清晰、规整度好,分布均匀,无漏点和连点,阳性对照和阴性对照结果理想,阴性对照的信号强度与背景持同;除16189位点外,检测结果与DNA测序方法有很好的一致性(x2=113.132,Kappa值=0.888,P=0.000).结论 成功构建可一次性检测目前国内外报道与糖尿病相关的44个mtDNA突变位点的膜芯片,适用于糖尿病患者和高危人群的检测。

目的 探讨核心家庭中干扰素调节因子6(IRF6)基因和转化生长因子α(TGFA)基因的部分单核苷酸多态性(SNP)位点突变与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)的关系.方法 运用基因芯片技术检测华东地区83例患者及其父亲和(或)母亲的IRF6基因、TGFA基因的部分SNP位点,随机选各位点部分产物测序,以验证基因芯片测定结果,比较患者组与父母组的基因型和等位基因频率,并对核心家庭的数据进行单倍型相对风险分析(HRR),对含杂合子父母的核心家庭进行传递不平衡检验(TDT).结果 各位点随机测序的产物基因型与相应芯片检出的基因型完全相同,患者与其父母各位点基因型和等位基因分布差异无统计学意义(P＞0.05).IRF6的1个位点V274I可能与(NSCL/P)相关(HRR:x2=4.5816,P＜0.05,TDT:X2=4.787,P＜0.05),另一个位点rs2235375 2种检验均为阴性,TGFA 2个位点HRR结果有统计学意义,而TDT结果无统计学意义.结论 IRF6可能是中国华东人群(NSCL/P)的易感基因之一,TGFA与此病关系需待进一步研究证实。

目的 多中心研究我国2005年苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)分子流行病学特征.方法 收集2005年1-12月14个城市17家教学医院连续分离的非重复MRSA 395株,通过多重PCR对MRSA进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)分型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析.根据药敏结果、PFGE、SCCmec型别和分布地区选出53株进行多位点序列分型(MLST).采用PCR检测毒素基因.结果 395株MRSA中,SCCmec Ⅲ型243株、占61.5%,不能分型菌株96株、占24.3%,Ⅱ型56株、占14.2%;沈阳SCCmec Ⅱ型占60.7%(17/28),远高于其他地区(0～42.9%).PFGE共有24种分型,42种亚型,其中A型占50.1%,为12个城市13家医院所共有,R型占23.5%,存在于8个城市9家医院.MLST共有6种分型,其中序列分型(ST)239占75.5%,ST5占17.0%.395株MRSA中,pvl基因检出率为2.5%.结论 我国MRSA主要获得Ⅱ型、Ⅲ型SCCmec基因,SCCmec的分布有地区差异.一些地区发生MRSA的暴发,并且地区间发生流行克隆的传播.有些流行克隆可能来源于某些世界流行克隆株的传播。

目的 利用本研究室已建立的人类医学病毒属水平基因芯片筛查技术及主要虫媒病毒基因芯片检测技术,对2006年7月从山西临沂地区猪脑组织中分离到的未知病毒进行筛查与鉴定,确定其病原体.方法 从猪脑组织中分离到病原体,接种金黄地鼠肾细胞(BHK21细胞),能产生细胞病变(cytopathic effect,CPE).收集病毒感染的细胞上清,提取RNA,经逆转录及随机引物PCR扩增后,与医学病毒属水平基因芯片进行杂交,初步确定其所在的病毒属之后,再与主要虫媒病毒基因检测芯片进行杂交,进一步将病毒鉴定到种.通过与其他鉴定结果相比较,确定其检测特异性.结果 与医学病毒属水平基因芯片杂交结果显示,该病原体属于黄病毒属病毒.结合流行病学调查分析,该病毒可能是一种虫媒病毒,因此进一步与主要虫媒病毒基因芯片杂交,基本可以判断该病原体为乙型脑炎病毒,与本室PCR及基因序列测定结果一致.结论 本研究室所建立的基因芯片筛查与鉴定技术可初步应用于对未知病毒的鉴定,为未知病毒性病原体的确定提供了一种新的技术方法。

目的 建立SYBR Green Ⅰ染料实时定量PCR检测生存素(Survivin)基因定量的方法.方法 根据PCR产物荧光强度、循环阈值(Ct值)、标准曲线斜率、相关系数和熔解曲线优化反应体系中各组分的量及反应条件,对引物二聚体消除策略和Ct值获取方式进行评价.并用该方法检测43份胃癌组织Survivin基因扩增情况.结果 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR体系扩增Survivin的最佳组成和条件是:Taq酶2.5 U/100μ1、MgCl2 2 mmol/L、引物浓度0.2 μmol/L和退火温度58℃;在PCR循环延伸结束后设置1个低于特异产物退火温度值2℃的荧光读取温度,能有效消除引物二聚体对定量检测的影响;以二次倒数最大值方式确定Ct值,能避免主观因素所致误差.研究建立的SYBR Green Ⅰ染料实时定量PCR检测Survivin基因含量方法的灵敏度为10拷贝/μl,线性范围101～104拷贝/μl(r=0.999 7),批内变异系数(CV)1.13%～1.91%,批间CV 3.31%～4.50%;胃癌组织中Survivin基因扩增率为13.9%(6/43).结论 优化后的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于Survivin基因含量分析。

目的 研制一种扩增特异细胞毒性T淋巴细胞频数的方法.方法 用不同浓度的巨细胞病毒(CMV)特异的表位肽pp65刺激人外周血单个核细胞(PBMCs)使CMV特异CTLs在PBMCs中的百分比增高.用四聚体-PE和CD8-FITC双标记PBMCs中的CMV特异CTLs,然后用流式细胞仪分析.结果 这个方法能有效扩增CMV特异CTLs,使在外周血中占淋巴细胞百分比不到1%的CMV特异CTLs迅速增加到接近20%,占CD+8 T淋巴细胞的40%以上,并能从单份血样中获得大量特异CTLs用于流式分析.结论 肽刺激培养法简便、易操作,能有效扩增CMV特异CTLs,使不同人的数据更容易对比和连续的评价.该方法也为过继性免疫疗法治疗巨细胞病毒疾病打下了基础。

POCT血糖仪具有体积小、携带方便、容易使用和结果快速等优点,已被临床广泛用于糖尿病患者的血糖控制监测及疗效观察,但由于POCT血糖仪分散存在于各病区及缺乏质量保证体系,导致测定结果的准确性和精确性难以保证.本研究根据卫生部临床检验中心关于实验室内质量控制、校准和内部比对要求[1],定期对全院各病区POCT血糖仪与实验室生化分析仪的血糖测定结果进行比对和分析,旨在探讨提高POCT血糖检测结果可靠性的质量管理手段。

HBV是一种严重危害人类健康的致病因子,能够在肝细胞内持续复制,反复感染.HBV的感染除引起急慢性乙型肝炎和肝硬化,还与肝癌的发生有密切关系[1].我国是乙型肝炎的高发区,肝癌发生率占很大的比例,因此探讨肝癌的发生和发展已成为当今研究的热点.HBV病毒变异可导致机体逃逸对HBV免疫应答,使病毒在体内长期存在,造成肝细胞持续破坏和突变,成为肝癌发生的启动因子,同时它的诱发和各种因素有关,其中机体免疫功能的异常也是因素之一.本研究从病毒基因变异[HBV前C和位于X基因的末端核心基因启动子(BCP:nt1744～1849)]、细胞免疫功能异常等两个方面探讨与肝癌的发生与发展的关系。

甘露糖结合凝集素(mannan binding lectin,MBL)是一种由肝脏产生的可溶性的C型凝集素.能够识别、结合多种微生物或异体抗原表面糖蛋白糖链末端的甘露糖残基和(或)N-乙酰葡萄糖胺,进一步通过胶原样区域调理吞噬作用清除致病原,同时还可以通过凝集素补体途径活化补体,在机体免疫防御和免疫监视中具有重要作用。

目的 制备Ⅱ型胶原C端肽中EKGPDP多肽片段(谷氨酸-赖氨酸-甘氨酸-脯氨酸-天冬氨酸-脯氨酸)的单克隆抗体(McAb),并进行抗体的纯化、鉴定及初步临床验证.方法 采用戊二醛法制备EKGPDP-钥孔嘁血蓝素(key hole limpet hemocyanin,KLH)抗原载体复合物.腹腔及静脉攻击法免疫BALB/c小鼠8只.按常规方法将小鼠骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞融合.筛选阳性克隆株,以有限稀释法克隆3次.对杂交瘤细胞株的染色体、亲和力、类型和稳定性进行鉴定,取其中亲和力较高的6株制备腹腔积液,用盐析及蛋白G琼脂糖凝胶珠层析法纯化抗体.对McAb的纯度、特异性、交叉反应性及免疫活性进行鉴定.用免疫组化法对骨性关节炎膝关节软骨和椎间盘软骨样品进行分析.结果 本研究获得13株能高效分泌特异性McAb的杂交瘤细胞株;经5个月传代35代和反复冻存复苏6次,培养上清稳定性良好.6株McAb腹腔积液效价分别为2.8×104(EKG7)、5.1×105(EKG14)、5.1×105(EKG16)、5.1×105(EKG18)、5.1×105(EKG25)、3.2×104(EKG28).电泳结果证明,盐析法纯化腹腔积液得到的单克隆抗体回收量、活性、存放1周后活性分别为8.07 mg、3.35(A450)、3.10(A450),蛋白G亲和层析法得到的单克隆抗体回收量、活性、存放1周后活性分别为0.32mg、1.83(A450)、0.66(A450),盐析法优于蛋白G亲和层析法(t=25.26,P＜0.01).抗体的最佳应用浓度为(50～150)μg/L.临床初步鉴定发现,6株EKGPDP单克隆抗体在骨性关节炎及突出椎间盘软骨标本中出现了不同程度的阳性结果.结论 本研究成功获得抗Ⅱ型胶原C端肽片段McAb,为Ⅱ型胶原降解产物的测定提供了研究工具。

目的 通过对正常成年人心肌细胞Mrna表达差异性的分析,探讨心肌细胞能量代谢相关基因的变化,为今后全方面的研究和比较心肌的能量代谢的基因特点及变化趋势提供对比参数、为实现较早的对心肌细胞功能状态进行评价.方法 将人心肌细胞相关的3 368个Cdna制备成基因芯片,应用PCR、测序、荧光探针标记、双重杂交等方法,研究正常成人心肌细胞RNA与正常成人多组织参考RNA比较的基因差异表达.结果 对成人已知心肌细胞3 268个基因进行功能分组分析,得到高于成人多组织RNA对照1.5倍的基因576个,低于成人多组织RNA对照1.5倍的基因有1199个.与细胞能量代谢相关的基因有194个,其中有17个高表达,4个低表达;与细胞骨架和动力相关的基因有65个,其中有18个高表达,1个低表达.结论 正常成人心肌细胞中存在许多相对于成人多组织RNA的特异标识基因,可为研究心血管疾病不同阶段不同病理状态提供客观参考体系。

遗传物质在菌种内以及菌种间的水平传播,是细菌获得新耐药性的重要手段.耐药性快速广泛地传播以及在不同菌种间出现非常相似的耐药方式,说明了上述机制的重要性.细菌可以通过基因突变的方式获得耐药性,然而整合子通过捕获多种耐药性基因盒在临床菌株产生多重耐药性上具有重要意义[1].Hall和Collis[2]将整合子定义为由一系列遗传元件构成的能够识别和捕获移动性基因盒的位点特异性重组系统.一个整合子包括编码整合酶(intI)的基因及其临近的重组识别位点(attI)。

金属蛋白酶-2(MMP-2,明胶酶A)与金属蛋白酶-9(MMP-9,明胶酶B)在多种生理过程中起作用,病理状态下如肿瘤、心血管疾病和呼吸系统疾病,则这些酶的表达和活性增加[1-2].明胶酶谱法多用于检测血浆、细胞培养上清及组织中的金属蛋白酶-2和9的活性[3],我们先前的实验发现不同来源的明胶直接影响明胶酶谱法结果,不同方式处理样本对酶的活性检测有影响,本研究就明胶的来源(自猪、牛皮肤提取)是否影响金属蛋白酶活性的检测,以及不同样本量、样本储存温度、反复冻融等因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶活性的影响进行探讨。

为了方便患者和疾病预防控制的需要,很多医院在急诊科(急诊中心)、发热门诊或肠道科都设有相对独立的检验分部.这些检验分部的特点是:急诊检验设备较完备,在地理位置上离检验科较远,工作人员相对流动,日常管理由检验科统一进行.为了便于管理和快速确定交接环节[1],交接班登记显得特别重要.传统的手工交接班采用字面书写登记的形式进行。

患者男,24岁.因"间断性腰背痛伴多关节肿痛3年余,加重半月",于2007年7月25日入住本院. 　　患者于2004年1月无明显诱因出现右踝关节肿痛,伴腰部疼痛、僵硬,下蹲困难,晨僵3～4 h,反复发作虹膜炎,无其他关节的肿胀疼痛;无发热、皮疹、皮下出血;无尿频、尿急、尿痛;无恶心、呕吐、腹痛、腹泻。

传统的临床化学分析沿用的是比色分析的原理,即使是广泛应用的全自动生化分析仪也没有改变这一分析原理,即首先使待检物在水溶液中显色,然后比色测定并计算出待检物的浓度.这类方法需要准确配制多种测定试剂,因此易导致测定结果有较大的实验室间变异及批间变异.近年来,干式多层复合薄膜化学(Dry,thin,multilayer film,简称:干化学)分析在临床化学中的应用越来越多.所谓干化学分析是与传统溶液分析相对而言的,即将所需分析试剂全部固化在多层复合膜上,分析时只需将少量待检样品(约10 μl)加在膜上即可进行定性或定量分析。

固有免疫(innate immunity)也称天然免疫,是机体与生俱来的对"外来入侵物质"发生即时反应的一种免疫应答,属于免疫系统的第一道防线."外来入侵物质"包括免疫系统识别的内源性物质.固有免疫研究已经历120多年,但长期以来,多数研究只停留在现象探讨,如皮肤或黏膜的屏障作用、体液的杀菌作用、单核巨噬细胞及粒细胞的吞噬作用、自然杀伤(NK)细胞的杀伤作用、炎性因子的炎症作用等。

患者男,24岁.主因恶心、呕吐,少尿半年,进行性加重,遂就诊于我院肾内科.经查血Cr 1519.6 μmol/L,尿素氮48 mmol/L,Hb 74 g/L,诊断为慢性肾功能衰竭,尿毒症.给予每周3次透析治疗.此次入院前1天再次出现恶心、呕吐,伴头痛头晕,于2007年7月17日收入我院肾内科.患者持续发热,体温持续在38.4～39.3℃.实验室检查:WBC为(11.3～12.5)×109/L。

睾丸酮丛毛单胞菌(comanmonas testosteroni)是以雄酮为惟一碳源的细菌,是丛毛单胞菌属(comanmonas)的一个种,为条件致病菌,可引起呼吸道等部位的感染.国外已有从血液、脓液、尿液和呼吸道分泌物等临床标本分离出该菌的报道,我们从1例肺癌患者胸腔积液中分离出睾丸酮丛毛单胞菌,现报告如下。

由中华医学会中华检验医学杂志编辑委员会与中华医学会检验分会共同主办的首届中国POCT高峰论坛学术会议,于2007年3月23-25日在上海佘山大众国际会议中心召开.来自全国各地的特邀代表、检验仪器及试剂生产厂商代表共200余人出席了大会.开幕式由中华医学会上海检验学会主任委员潘柏申教授主持,中华医学会检验分会主任委员、中华检验医学杂志总编辑丛玉隆教授致开幕辞,中华医学会杂志社袁桂清副社长出席会议并致辞.中华医学会检验分会副主任委员、中华检验医学杂志副总编辑申子瑜、尚红及中华检验医学杂志编辑部史红主任以及部分检验分会委员、中华检验医学杂志编委出席了会议。

目的 运用σ指标全面评价临床实验室检验前、中、后各阶段性能,以期发现问题,指导质量改进.方法 根据检验项目的不准确度、不精密度及总允许误差计算σ值,评价检验中阶段性能,并以此设计质量控制方案.对分析性能低于6σ的项目,计算质量目标指数(quality goal index,QGI)查找导致性能不佳的主要原因,指导质量改进.统计标本合格情况、血清钾紧急值通知情况、患者抱怨情况、标本周转时间(turn around time,TAT)等,计算上述4个指标的σ值,利用标本合格情况σ值评价检验前阶段性能,血清钾紧急值通知情况σ值评价检验后阶段性能,患者抱怨情况和TATσ值评价检验全程性能.结果 在27个检验项目中,8个项目分析性能大于6σ,所有项目的平均σ值(即检验中阶段性能)为4.44.在未达6σ的19个检验项目中,12个项目需优先改进精密度.标本合格情况、紧急值通知情况、患者抱怨情况、急诊及常规TAT的σ值分别是4.9、2.9、5.6、2.8、2.9.结论 σ指标为临床实验室检验各阶段的性能评价提供客观的衡量标准,体现实验室目前所处的性能水平及今后的改进方向。

为提高我室临床细菌学检验水平,我们于2004年申报参加了美国病理家学会(CAP)组织的临床细菌学检验能力比对试验活动(Proficiency Test Survey D-C)[1].截至2006年9月共收到20份质评标本,按照我室不同标本的细菌检验标准操作程序进行分离培养、菌种鉴定和部分细菌的体外药敏实验,现将3年的能力比对试验结果进行总结,重点分析我们鉴定错误的原因,并介绍CAP D-C回报总结的教育特点。

目的 探讨全自动五分类血液分析仪(SYSMEX XS1000i)的各项参数指标在临床应用方面的价值.方法 比对209份乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝标本的XS1000i与LH750全自动五分类血液分析仪的检测结果,并比对509份标本的仪器分类与手工复片结果,分别计算XS1000i批内精密度和日间精密度的变异系数(CV)、携带污染率等指标,比较两仪器主要参数的相关性.结果 XS1000i精密度的CV均在厂家允许范围内,WBC、RBC、Hb、HCT、PLT的携带污染率分别为0.19%、0.93%、0、-0.88%、-0.76%.除嗜碱粒细胞外,XS1000i与LH750的各项参数均显示良好的相关性,WBC、RBC、HGB、PLT的相关系数分别为0.994 5、0.996 8、0.997 0、0.974 6,P均＜0.001.幼稚细胞报警诊断灵敏度为100%,特异度为69.7%,异型淋巴细胞报警诊断的灵敏度为100%,特异度为66.7%.3份白血病化疗期间白细胞数值极低的标本,外周血极少量幼稚细胞的检测与流式细胞术的骨髓微小残留病(minimal residual disease,MRD)的监测均显示阳性.结论 XS1000i的警示系统可为临床复片工作提供有价值的信息.尤其在白血病化疗的监测方面,若与流式细胞仪结果相结合,具有一定的优势。

邹雄 《中华检验医学杂志》第六、七届编辑委员会委员.教授、博士生导师,主任医师.1945年生.1968年毕业于上海第一医学院,1982年毕业于山东医科大学心内科,获硕士学位.1986-1988年在澳大利亚Brisbane市Princess Alexandra医院病理化学科作访问学者,2000年9月-2001年4月在美国Hartford医院作高级访问学者。

POCT(point of care testing)是检验医学的新领域,它的发展得益于高新技术的进步,也适应了高效快节奏的工作模式,满足了医生和患者在时间上的需求.针对目前POCT在国内尚无规范中文译名的状况,提出了"POCT(即时检验)"新概念理由,并对POCT发展中几个关注的热点问题,如质量控制、培训管理、成本费用、传统检验与POCT的关系等问题作了分析.POCT对传统医疗模式带来的新机遇表现在多领域的广泛应用,广大的社区医疗和农村合作医疗,老龄化社会的老年保健都非常需要个性化仪器的快速POCT检验。

检验科对每一检测项目的临床允许误差与所进行的精密度和准确度验证实验观察的检测系统的总误差进行比较,运用Westgard方法决定图初步判定检测系统的方法学性能.此外,检验科需对精密度和准确度以外的分析性能验证实验的结果的可接受性进行判定,从而对检测系统的所有方法学性能验证实验结果进行综合评估,最终判断整个检测系统的可接受性。

<正> 中国科学技术信息研究所(ISTIC)受国家科学技术部的委托,从1987年开始对中国科技人员在国内外发表论文数量和被引用情况进行统计分析,并利用统计数据建立了中国科技论文与引文数据库(CSTPCD),每年10月发布《中国科技期刊引证报告》(CJCR)。利用 CJCR 所提供的统计数据,可以清楚地了解期刊引用和被引用情况,以及引用效率、引用网络、期刊自引等的统计分析。同时,利用 CJCR 中的期刊评价指标,还可以方便地定量评价期刊的相互影响和作用。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）检测在诊断蚕豆病、溶血性疾病及婚前健康检查、产前检查、优生优育方面有重要临床意义。目前的G-6-PD检测主要为手工初筛法，操作不便、重复性与准确性欠佳，漏检率高。由广州市科方医疗器械有限公司生产的G-6-PD定量检测试剂盒是酶速率法液体双试剂，克服了上述缺点，可用于全自动生化分析仪上机定量检测。且具操作简便、试剂稳定、结果准确，杂合子检出率高的特点，适合临床检验及优生优育科研工作使用。

编辑同志: 　　近日,笔者拜读了贵刊2007年第9期"质量控制"栏目中彭明婷等[1]的文章,受益匪浅.这篇文章对如何实现检验结果的互认、检验结果互认的前提等问题进行了详细的讨论,为解决这些问题提供了思路和具体的办法,具有很强的实用性,对指导各级各类检验人员的实际工作帮助很大。