2007年 · 第30卷第01期

新春伊始,当告别岁末的曙光,不禁令人掩卷深思.回望身后的足迹,脚步匆匆亦步履稳健,充满喜悦与欣慰但仍倍感艰辛.欣慰和喜悦的是,本刊承载着广大作者的智慧和读者的收获,也记录着编委专家和编辑们的聪明才智与奉献,并一起载入我国检验医学发展的史册。

厌氧菌引起的感染普遍存在,几乎遍及全身各个部位.但是,目前在我国多数临床实验室中尚未开展厌氧菌相关检查.为此,有必要强调实验室开展厌氧菌检查的重要性,并阐述开展厌氧菌检查应注意的问题。

体外药物敏感试验在指导抗真菌药物的选择,并监测疗效方面的作用已引起临床实验室的充分重视.近年来,国际上经过大量工作确定了酵母菌对氟康唑和伊曲康唑等抗真菌药物的折点,并给出其他抗真菌药物的敏感范围,使药敏试验体系不断成熟,在临床发挥了不可忽视的作用.通过阐述药敏试验的临床适用范围、抗真菌药物的耐药现状与机制;回顾抗真菌治疗的疗效与药物的药代动力学特性的研究;进一步阐明体外药敏试验的临床应用前景。

侵袭性真菌感染的发生率近年来有呈明显上升的趋势,然而传统的真菌常规检查技术已经不能满足早期快速诊断的迫切需求,血清学诊断方法检测真菌特异性抗原具有较好的应用前景,分子生物学技术发展迅速,将为更加快速、高通量筛选临床标本提供可能。

人抗动物抗体产生的原因为医源性与非医源性因素.医源性因素包括动物源性蛋白、胸腺肽、靶抗体造影剂、靶抗体药物、被动免疫动物血制品(如破伤风针、胰岛素、凝血因子Ⅷ)等;非医源性因素包括母婴传递、偶然或职业性原因与动物蛋白接触史(如兽医、牧区、食品加工人员、宠物饲养)、选择性IgA缺乏症患者食人牛奶及动物蛋白食品等。

白假丝酵母菌是健康人群皮肤、黏膜表面共生的微生物,是一种条件致病性真菌.在免疫缺陷患者可引起口腔、阴道黏膜感染或严重的系统性感染,危及生命,如艾滋病(AIDS)患者晚期往往会发生口咽念珠菌病(OPC)。

随着物质生活的日益丰富,人类视线已逐渐从解决温饱转移到追求多方面的物质精神享受,出现对多种物质的滥用,其中最为突出的问题之一就是酒精滥用。

2006年7月,笔者从1例晚期肿瘤患者血培养中检出口腔普雷沃菌和颊普雷沃菌两种厌氧菌,报道如下.

患者1:女,46岁.乳腺肿物确诊为"非霍奇金淋巴瘤",为行第九次化疗于2006年3月9日入院.查体:体温最高38.4℃.实验室检查:白细胞(WBC)6.8×109/L.给予COMP化疗方案,无不适.3月26日主诉双下肢小腿疼痛,以左侧为著,无肢体肿胀,无色泽变化,应用止痛药效果不佳且疼痛加剧.查体发现左踝及胫前皮下气肿,左下肢肿胀发硬,皮温高,有捻发音,渐出现血疱且面积逐渐扩大,肿胀平面迅速上移,扩展至膝,呈青紫色(图略),临床怀疑气性坏疽.静点甲硝唑、克林霉素效果不佳。

患者,女,25岁,因"面部眼睑浮肿、多关节肿痛、头痛2个月,面部红斑、脱发1个月"于2006年8月7日入住本院.

一、临床生物化学检验概念 　　临床生物化学检验(下简称"临床生化检验")是检验医学重要组成部分之一,根据《医疗机构临床实验室管理办法》执业注册要求,临床生化检验是临床检验4个主要亚专业之一(其他还有临床检验、临床免疫学检验、临床微生物学检验等).临床生化检验开展的项目是临床实验室中最多、也是临床医师应用的检验信息中最多的一个领域。

中华检验医学杂志第六届编辑委员会成立于2002年11月,4年届期已满.按照中华医学会系列杂志编辑委员会通则的规定,依照有关程序确定产生了中华检验医学杂志第七届编辑委员会.2006年10月29日至11月1日,中华检验医学杂志第七届编委会成立大会在浙江省杭州市隆重举行。

杨正林 《中华检验医学杂志》编审专家.博士研究生、教授、主任技师、硕士生导师.1966年生.1989年毕业于重庆医科大学检验系,获学士学位;1999年毕业于四川大学华西医学中心,获硕士学位;2000-2002年在美国约翰霍普金斯大学和克利夫兰临床医院攻读博士后;2002-2004年任美国犹他大学资深研究员.现为四川省医学科学院四川省人民医院主任技师,分子生物学和遗传研究中心主任、检验科副主任、四川省临床检验中心副主任、重庆医科大学兼职教授、四川大学兼职教授、中华医学会检验分会中青年委员。

目的 通过对深部真菌感染高危患者体内分离的念珠菌进行体外药敏试验,了解氟康唑预防用药对其药物敏感性的影响.方法 采用微量稀释法测定152株分离自血液科、重症监护病房和老年科病房住院患者的痰、尿、便和支气管灌洗液的念珠菌对氟康唑的敏感性.对氟康唑预防用药组和未预防用药组两组念珠菌对氟康唑的敏感性差异进行统计学分析.结果 93.4%(142/152)的念珠菌对氟康唑敏感.氟康唑预防用药组和非预防用药组非白念珠菌分离率分别为41.4%(12/29)和25.3%(21/83),两者相比,差异无统计学意义(χ=2.67,P＞0.05).氟康唑预防用药组和非预防用药组MIC＞8 μg/ml的菌株数分别为7株(24.1%)和3株(3.6%),两者相比,差异有统计学意义(χ2=8.75,P＜0.05).氟康唑预防用药会导致念珠菌MIC值的提高.结论 从深部真菌感染高危患者体内分离的大部分念珠菌菌株对氟康唑敏感.氟康唑预防用药可能会导致对氟康唑不敏感的念珠菌菌株感染的出现。

目的 评估Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏分析仪对临床相关细菌和酵母菌的鉴定能力.方法 选取本院185株临床菌株(革兰阳性菌69株,革兰阴性菌66株,酵母菌50株)和50株本实验室保存的参考菌株(革兰阳性菌和革兰阴性菌各25株)为评估菌株,采用Vitek2 Compact GP卡、GN卡和YST卡进行鉴定,其结果与参考方法API鉴定结果进行对照,所有低分辨及属对种错鉴定菌株均进行重复鉴定.结果在93株革兰阳性菌中有85株(91.40%)得到正确鉴定,其中5株(5.38%)为低分辨鉴定,另有8株(8.60%)为属对种错鉴定,90%的革兰阳性菌的鉴定在7 h以内完成.在91株革兰阴性菌中90株(98.90%)为正确鉴定,其中5株(4.4%)为低分辨鉴定,仅1株(1.1%)为属对种错鉴定,90%以上肠杆菌科菌的鉴定在5 h以内完成,90%以上非发酵糖菌的鉴定则在10 h内完成.在50株酵母菌中46株(92%)为正确鉴定,其中8株(16%)为低分辨鉴定,另有4株(8%)为属对种错鉴定,45株(90%)在18.25 h完成鉴定,5株(10%)在18.50 h完成鉴定.结论 Vitek 2 Compact能够对临床相关细菌和酵母菌进行可信的鉴定,并能大幅缩短常规鉴定时间,是临床微生物实验室病原菌诊断的有力工具。

目的 通过对丝状真菌的药敏试验,探讨两性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑对丝状真菌的体外抗菌活性,从而为临床用药提供依据.方法 采用浓度梯度法测试两性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑对我院微生物科近两年内从临床送检标本中分离、鉴定并保存的62株丝状真菌的MIC值.结果烟曲霉菌、伏立康唑的最低抑菌浓度(MIC)均值为0.29 μg/ml,两性霉素B的MIC均值是1.16 μg/ml,伊曲康唑的MIC均值为5.88 μg/ml;黄曲霉菌、两性霉素B具有较高的MIC均值(6.39μg/m1),伏立康唑的MIC均值较低,为0.22 μg/ml;黑曲霉菌、伊曲康唑具有较高的MIC均值(19.75μg/ml),伏立康唑的MIC均值较低,为0.69 μg/ml.对青霉菌,两性霉素B的MIC值较低,伊曲康唑和伏立康唑对3株青霉菌(占50%)的MIC值大于32 μg/ml;毛霉菌和根霉菌,3种抗真菌药物均呈耐药倾向.结论 3种抗真菌药物对不同丝状真菌的MIC值存在差异,实验室应加强对丝状真菌的鉴定,并积极开展真菌药敏试验以指导临床正确、有效地抗真菌治疗。

目的 了解广东地区医院近年深部真菌感染的动态变化,为临床经验性治疗提供依据.方法 回顾分析了1998-2004年我科真菌室接受的疑诊为深部真菌感染的标本9574份,分离出阳性标本3122份(阳性率32.6%),共13个菌种.药敏试验采用浓度梯度法.结果真菌学变化:白念珠菌近3年所占构成比:白念珠菌在2002-2004年组所占构成比与1998-2001年组相比显著下降(76.3%、66.8%比较,χ=34.33,P＜0.05);光滑念珠菌、近平滑念珠菌构成比显著增加(4.2%、11.1%比较,χ2=51.30,P＜0.05,2.2%、4.0%比较,χ2=8.82,P＜0.05);马内菲青霉菌近年呈现增多趋势.药敏试验:2000-2004年703株真菌菌株药敏试验结果显示,对伊曲康唑、氟康唑、酮康唑、两性霉素的耐药株均无增加趋势,伊曲康唑敏感株显著减少(71.0%、58.2%比较χ2=16.50,P＜0.05),中介株显著增多(7.8%、24.8%比较,χ2=24.8,P＜0.05),其中以白念珠菌、热带念珠菌对伊曲康唑敏感株减少为主.结论 白念珠菌近年所占构成比显著下降;光滑念珠菌、近平滑念珠菌构成比显著增加;出现了新的感染菌株马内菲青霉菌.白念珠菌、热带念珠菌对伊曲康唑敏感株显著减少.此种真菌菌学变迁及药敏试验的变化应引起临床医师重视。

白念珠菌仍是目前深部真菌病的主要病原体,随着氟康唑的广泛使用,白念珠菌对氟康唑的耐药率逐年上升[1].研究表明,白念珠菌耐氟康唑的特性与氟康唑作用靶酶的基因突变相关.本研究报告采用分段PCR产物直接测序方法对耐氟康唑白念珠菌ERG11进行测序研究的结果。

答：增加的内容：（1）莫昔沙星作为脆弱拟杆菌组和β内酰胺酶阳性厌氧菌的选择性抗菌药物；（2）多西环素作为脆弱拟杆菌组、β内酰胺酶阳性厌氧菌、产气荚膜梭菌除外的梭菌属、革兰阳性球菌和无芽胞的革兰阳性杆菌的选择性的抗菌药物；（3）阿莫西林的折点；（4）用琼脂稀释法测定脆弱拟杆菌ATCC25285，多形拟杆菌ATCC29741，迟缓真杆菌ATCCA3055的利奈唑烷MIC质控范围；（5）用肉汤微量稀释法测定脆弱拟杆菌ATCC25285，多形拟杆菌ATCC29741的阿莫西林一克拉维酸和青霉素MIC质控范围；（6）用肉汤微量稀释法测定脆弱拟杆菌ATCC25285，

厌氧菌（anaerobic bacteria）是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢以无氧发酵的方式进行。它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。

根据对O2的耐受程度，可将厌氧菌分为3大类：（1）对氧极端敏感的厌氧菌：代表菌种为月形单胞菌。这类细菌对厌氧条件要求很高，在空气中暴露10min即死亡，临床上很难分离出；（2）中度厌氧菌：代表菌种为脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌等临床分离常见的厌氧菌。它们在空气中暴露60～90min或在脓汁抽出72h后仍然能分离出来；（3）耐氧厌氧菌：代表菌种为溶组织梭菌。这类细菌不能利用氧，在无氧条件下生长好，而在有氧条件下生长不佳。

关于厌氧菌药敏试验常用方法有3种，第一种为琼脂稀释法（wadsworth method），培养基为布氏血琼脂（自制或购买商品均可），每一个接种点的厌氧菌接种量为10^5 CFU，孵育时间为48h，是CLSI推荐的厌氧菌药敏试验参考方法，适合多种抗厌氧菌药物及多种厌氧菌的检测，但技术操作复杂、成本昂贵。第二种是肉汤微量稀释法，培养基为布氏肉汤，每毫升肉汤接种10^6 CFU（或10^5 CFU／孔），孵育时间为48h，其优点为经济、便捷，

厌氧菌的种类很多，可分为无芽胞的和有芽胞的两大类。有芽胞的只有1属，统称为梭状芽胞杆菌，简称为梭菌；其余都是无芽胞的，统称为无芽胞厌氧菌，又可分为革兰阴性厌氧杆菌、革兰阳性厌氧球菌、革兰阴性厌氧球菌、革兰阳性无芽胞厌氧杆菌。1994年总结为41个属、300多个种和亚种，随着分子生物学和气液相色谱等分类与鉴定方法的应用，将厌氧菌按照其遗传特性，

目前，世界上大部分实验室都采用CLSI推荐的《厌氧菌药敏试验方法》（Methods for Anfimicrobial Susceptibility Test of Anaerobic Bacteria）一书作为指南，其内容与需氧菌类似，需氧菌为每年更新一次，厌氧菌几年更新一次。其内容包含推荐针对治疗不同的厌氧菌感染选择不同的抗厌氧菌药物，不同药物对厌氧菌的判断标准以及相应的质控菌株（脆弱拟杆菌ATCC25285，多形拟杆菌ATCC29741，迟缓真杆菌ATCCA3055）的质控范围，

目的 对败血症患者凝血、抗凝血、纤溶、内皮系统的功能变化进行研究,并评估各项指标水平变化与预后的关系.方法 采用Sysmex CA-7000型血液凝固仪测定85例败血症患者的蛋白C活性(PC:A)、抗凝血酶活性(AT:A)、凝血因子FⅤ活性(FⅤ:A)、凝血因子FⅦ活性(FⅦ:A)、凝血因子FⅧ活性(FⅧ:A)、凝血因子FⅨ活性(FⅨ:A)、vW因子(von Willebrand Factor,vWF)、纤维蛋白原(FIB)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、D-二聚体(D-Dimer),凝血酶原时间国际标准化比值(PT INR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT),同时测定50名健康人作为对照组.结果败血症患者组FIB、PAI-1、vWF及D-Dimer分别为(3 720±2 290)mg/L、(2.4±1.0)Au/ml、(167.5±31.2)%及(355±128) μg/L,高于对照组的(2 950±870) mg/L、(0.6±0.5) Au/ml、(94.1±32.5)%及(169±94) μg/L,差异有统计学意义(P＜0.01);FⅤ:A、FⅦ:A、FⅧ:A、FⅨ:A、PT INR、APTT及TT分别为(98±37)%、(95±33)%、(96±43)%、(99±40)%、(1.23±0.35)、(33±12)s及(21±7)s,与对照组的(97±18)%、(99±18)%、(103±22)%、(102±25)%、(1.15±0.32)%、(31±7)%及(19±4)s比较,差异无统计学意义(P＞0.05);AT:A、PC:A、t-PA水平分别为(76±17)%、(65±19)%及(0.22±0.09)U/ml,低于对照组的(107±9)%、(101±14)%及(0.45±0.13)U/ml,差异有统计学意义(P＜0.01).不同预后患者抗生素治疗第3～5天,痊愈患者组AT:A、PC:A、t-PA分别为(94±9)%、(90±11)%及(0.37±0.15)U/ml,高于死亡患者组的(58±23)%、(55±17)%及(0.16±0.09) U/ml,差异有统计学意义(P＜0.01);vWF、D-dimer及PAI-1分别为(117.2±20.5)%、(192±62) μg/L及(0.8±0.3) Au/ml,低于死亡患者组的(198.1±44.6)%、(697±213) μg/L及(2.9±1.2) Au/ml,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 败血症患者的抗凝血、纤溶系统功能发生显著变化,血栓形成风险增加,测定上述指标对了解败血症病程发展趋势具有辅助作用。

目的 建立HPLC法测定尿白蛋白(Alb)的方法并做初步临床应用.方法 采用Agilent 4.6 mm×250 mm、5 μm的C18反相柱,优化流动相并选择合适的检测波长,评价该法的各项性能指标;测定46例糖尿病患者尿Alb.结果标准品和尿液Alb均在13.1 min出峰,在1 820 mg/L范围内标准曲线的直线性非常好,r值达到0.999 7,生物检测限为4.2 mg/L;24.5 mg/L和546.9 mg/L浓度时的批内和批间变异系数(CV)分别为3.36%、4.12%和1.93%、1.97%;回收率为96.3%、98.2%和97.5%.在46例糖尿病患者尿中,HPLC法能检出25例(54.3%)的微量白蛋白尿,比免疫散射比浊法(12例,占26.1%)检出更多.结论 HPLC法比免疫法能检出更多的微量白蛋白尿,在目前尚无方便可靠的方法测定尿总自蛋白前,HPLC法可用于常规尿微量白蛋白的测定,也可用于有关糖尿病肾病等的科研用途。

目的 探讨乳腺癌组织14-3-3 sigma基因甲基化状态和表达情况.方法 用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,分别检测40例乳腺癌患者肿瘤组织和18例乳腺良性病变组织的14-3-3 sigma基因甲基化状态、并用逆转录(RT)-PCR和免疫印迹法(WB)分别从mRNA和蛋白质水平检测14-3-3 sigma基因的表达情况.结果在40例乳腺癌患者肿瘤组织中,MSP法检测出34例14-3-3 sigma基因甲基化,甲基化率达85%;而RT-PCR为12.5%(5/40);WB法显示,80%患者乳腺癌组织存在14-3-3 sigma蛋白表达缺失(32/40);在34例MSP甲基化患者中,有30例RT-PCR和WB同时显示阴性(88%).18例良性疾病患者病变乳腺组织均未检出14-3-3 sigma基因甲基化,而RT-PCR和WB同时也证明14-3-3 sigma基因在乳腺上皮细胞均有表达.提示乳腺癌时14-3-3 sigma基因高度甲基化,且可能与14-3-3 sigma基因表达缺失密切相关.结论 14-3-3 sigma基因甲基化及其表达缺失是乳腺癌的经常性事件,14-3-3 sigma基因甲基化可能与其基因表达缺失有关。

目的 建立一种同时检测人乳头瘤病毒(HPV)5种低危型和18种高危型的反向杂交方法.方法 将23种HPV型别(低危型:HPV6、11、42、43和44型,高危型:HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83和MM4型)特异性探针固定于尼龙膜条上,生物素标记的通用引物介导PCR(GP-PCR)扩增HPV DNA,扩增产物与膜条经反向杂交检测HPV型别,并与HC-Ⅱ法及扩增和测序法平行检测136例临床标本,对检测结果进行对比.结果 3种方法HPV阳性检出率分别为41.9%、42.6%和40.4%;反向杂交法与后二者检测结果之间均具有良好一致性(Kappa值分别为0.8644和0.9089);以扩增和测序法为金标准,反向杂交法检测敏感度、特异度和准确性分别为96.36%、95.06%、95.59%.结论 本法能一次性检测23种HPV具体型别,敏感度、特异度高,操作简便,结果易于判读,适合临床应用。

目的 比较阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)治疗前后有病毒学应答患者和无病毒学应答患者血清蛋白质组学变化差异,探讨预测ADV治疗效果的特异性的标志.方法 利用双向凝胶电泳-质谱技术获得慢性乙型肝炎患者血清蛋白表达图谱,并寻找ADV治疗后差异表达的蛋白质.结果经与治疗前比较,有病毒学应答组触珠蛋白、触珠蛋白2α、α-1-抗胰蛋白酶前体在治疗后上调;因子B、转甲状腺素B链、谷胱甘肽过氧化酶、α-2-巯基蛋白、视黄醇结合蛋白、视黄醇结合蛋白前体、载脂蛋白、载脂蛋白A-I前体在治疗后下调.无病毒学应答组转甲状腺素在治疗后上调;富含亮氨酸α-2-糖蛋白、触珠蛋白、α-2-肌动蛋白、载脂蛋白A-I前体在治疗后下调.两组相比:治疗后载脂蛋白A-I前体呈相同下调趋势;触珠蛋白、转甲状腺素表达呈相反变化趋势.结论 双向电泳-质谱技术可发现ADV治疗过程后有病毒学应答组触珠蛋白、转甲状腺素表达与无病毒学应答组比较呈相反变化趋势,从而为寻找ADV治疗有效的预测指标奠定基础。

目的 调查南宁市农村育龄人群β地中海贫血(地贫)基因携带率,确定四种检测系统诊断β地贫的血红蛋白A2(HbA2)截断值.方法 高效液相色谱法(HPLC)检测育龄青年2 044名,其中430例(地贫筛查中随机选择的75对夫妇以及血细胞分析提示夫妇双方或一方为地贫表型阳性的育龄青年280例)同步进行地贫基因分析和3种碱性电泳法[法国Sebia全自动电泳系统(Sebia)、国产Sang Te全自动电泳系统(Sang Te)和pH8.6醋酸纤维膜电泳法(pH8.6)]的检测,以基因分析结果为金标准通过受试者工作曲线(ROC曲线)确定HPLC和3种碱性电泳法诊断β地贫的HbA2截断值.结果在2 044名育龄青年中检出β地贫163例,携带率为7.97%,随机选择的75对夫妇地贫基因分析确诊的β地贫为13例,携带率为8.67%.诊断β地贫杂合子的HbA2截断值分别为HPLC≥4.35%、Sebia≥3.65%,Sang Te≥4.58%,pH8.6≥2.66%.结论 南宁农村育龄人群β地贫基因携带率高,HbA2检测结果有人种差异,应重新通过ROC曲线确定截断值,β地贫筛查尽量不使用pH8.6醋酸纤维膜电泳法。

目的 研究一个遗传性蛋白C(PC)缺陷症家系的遗传表型和基因特征.方法 PC抗原(PC:Ag)和PS抗原(PS:Ag)检测采用酶联免疫吸附试验,AT抗原(AT:Ag)测定采用免疫比浊法测定;PC活性(PC:A)、PS活性(PS:A)和AT活性(AT:A)采用发色底物法在Sysmexl500全自动血凝仪上进行测定.用聚合酶链反应扩增3代家系10个成员PC基因各个外显子及侧翼序列,用直接测序法检测其基因突变点.结果该家系3代10名成员中,有8名PC抗原水平在1.06～1.92 mg/L(参考值3.00～6.00 mg/L)之间,PC活性在41%～67%(参考值70%～140%)之间,明显低于正常参考范围;而PS:Ag和PS:A、AT:Ag和AT:A均在正常参考值范围内.PC基因测序分析:8名成员存在Ⅸ号外显子第12 918位核苷酸G→T突变,密码子TGG→TGA,使第372位Trp→Stop;并在基因启动子区存在2 405C/T、2 418A/G、2 583A/T的多态性.结论 该家系为Ⅰ型遗传性PC缺陷症,PC基因Ⅸ号外显子存在第12 918位核苷酸G→T突变,该突变是目前尚未报道的一个新的基因突变点;并在基因启动子区存在2 405C/T、2 418A/G、2 583A/T的多态性。

AIDS是由HIV引起的一种免疫缺陷性疾病,目前尚无法治愈,也无有效疫苗可预防[1-3].自1985年我国发现第1例AIDS患者以来,截至2005年底,我国HIV感染者AIDS的报告例数已达106 990例,估计实际感染例数已达84万.随着HIV感染者和AIDS患者数量的不断增加,到医院进行诊断和治疗已势在必行.因此正确运用临床实验室指标进行检测,对判断病情、疾病进展程度以及治疗具有重要意义.但中国HIV感染者和AIDS患者相关血清学检测指标报道少见.本研究对中国HIV感染者和AIDS患者进行了β2微球蛋白、免疫球蛋白、补体、转铁蛋白(TRF)、C反应蛋白(CRP)的检测,以了解各种指标的变化情况及与疾病进展的关系。

研究证实,载脂蛋白E(ApoE)基因参与周围神经系统鞘磷脂和神经元细胞膜的修复、再生长与维持.根据氨基酸序列的不同,ApoE主要有3种同种异构体(F3、E3和E4),并具有不同的生化功能.通常这3种异构体分别由3个等位基因编码形成ApoE基因的6种基因型.本研究对脑胶质瘤患者ApoE基因型分布和等位基因频率进行分析,旨在探讨ApoE基因多态性与脑胶质瘤的相关性,以揭示ApoE在脑胶质瘤发病中的作用。

尿液有形成分(urine formed elements)检查是尿常规检查中的重要组成部分,而尿沉渣检查或尿有形成分检查又采用多样化的检查方法,标准很不统一,参考区间也非常不一致[1],甚至相差悬殊.公认的尿沉渣离心镜检法[2],对尿量、离心条件、盖片、沉渣量、检查视野数量等存在要求高、费时、重复性差,而又不易定量,推广起来还有一定问题.在临床诊断和治疗、预后观察等方面,如果采用定量分析法,定量分析患者尿液中的有形成分变化情况,要比定性分析法更有应用价值,因此国内外都曾经推荐定量法来分析尿液中的有形成分.而我们最近的实验研究表明,离心法由于离心等各种因素的存在,并不是准确定量计数尿液中有形成分的最佳方法[3]。

目的 比较国际主要微生态实验室4种常用的核酸抽提方法获得的粪便DNA的质量.方法 采用针对目的细菌(总细菌、类杆菌-普氏杆菌属组、双歧杆菌、肠杆菌科细菌及肠球菌)16s rDNA的特异性引物及实时定量PCR方法,分析QIAamp(R)粪便DNA试剂盒法(QIA法)、FastDNA(R) Kit试剂盒法(Fast法)、酚-氯仿-玻璃珠击打法(酚-氯仿-玻珠法)及QIAamp(R) DNA粪便试剂盒+玻璃珠击打法(QIA+玻珠法)4种方法抽提获得的10份人粪便DNA的质与量.结果通用引物特异性扩增粪便总DNA,发现4/10份由酚-氯仿-玻珠法获得的粪便DNA中存在PCR抑制剂,过柱纯化后PCR抑制现象消失.实时定量PCR检测粪便总细菌量,以QIA法与QIA+玻珠法获得的量最高(分别为12.16±0.18,12.05±0.48),而Fast法与酚-氯仿-玻珠法获得的粪便细菌量(分别为11.26±0.40,11.21±0.16)与QIA法相比显著低下(均P＜0.05).采用QIA法(11.63±0.23,8.68±0.51)及QIA+玻珠法(11.67±0.56,8.77±0.56)抽提获得的粪便类杆菌-普氏杆菌及肠杆菌科细菌的DNA量显著高于Fast法(10.67±0.47,7.39±0.51)及酚-氯仿-玻珠法(10.65±0.33,7.40±0.18)(均P＜0.05).对于双歧杆菌,酚-氯仿-玻珠法获得的量显著低下.但对肠球菌而言,以Fast法获得的量最高.结论 实时定量PCR检测结果表明,QIA法及QIA+玻珠法获得的粪便DNA质与量总体上优于Fast法及酚-氯仿-玻珠法,但根据不同的目的细菌群对象可以选择不同的方法。

目的 克隆人天冬酰胺合成酶(ASNS)基因,以基因工程技术表达ASNS融合蛋白,免疫动物,制备及鉴定鼠抗人ASNS的单克隆抗体,为深入研究L-天冬酰胺酶治疗中线鼻型自然杀伤细胞(NK)/T细胞淋巴瘤的机制奠定基础.方法 用逆转录(RT)-PCR从人肝癌细胞株HepG2扩增目的片段,构建原核表达质粒pMS-ASNS,在大肠杆菌中表达融合蛋白MS2-ASNS.用纯化融合蛋白免疫雌性BALB/C小鼠,以常规杂交瘤技术制备鼠抗人ASNS单克隆抗体(ASNS McAb).进行抗体亚类测定和免疫印迹法(WB)分析,然后用免疫化学技术检测ASNS在肿瘤中的表达.结果克隆ASNS读码框的部分基因(NCBI和M27396,179～1 420 bp),PCR产物为1 263 bp.融合蛋白MS2-ASNS相对分子质量约为54 700.筛选出2株能持续分泌抗ASNS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚类均为IgG2a.WB结果显示,抗ASNS单抗可与融合蛋白及细胞内ASNS蛋白特异性结合.免疫组织化学及免疫细胞化学证明,所得抗体能检测到肿瘤细胞中ASNS基因表达.结论 成功克隆了ASNS基因,并制备和鉴定了鼠抗人ASNS McAb,为深入研究L-天冬酰胺酶用于治疗中线鼻型NK/T细胞淋巴瘤的机制提供了工具。

研究发现乳腺癌患者死亡与早期肿瘤转移密切相关[1].早期转移系直径＜2 mm的恶性肿瘤转移灶,包括单个肿瘤细胞和组织中的微小转移[2].由于取材限制,目前研究主要集中在前哨淋巴结、血液、骨髓等方面.而外周血循环肿瘤细胞具有原发肿瘤的特征,乳腺癌循环肿瘤细胞检测对乳腺癌的早期诊断,复发转移诊断,以及指导术后治疗等意义重大[3].本研究采用悬浮微阵列技术同时检测乳腺癌细胞多个基因表达水平,以便为乳腺癌早期转移的多基因联合检测的临床应用研究奠定基础。

目的 评价抗核抗体(ANA)的不同检测方法对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断效能.方法 检索1900-2005年Medline、Embase和中国生物医学文献数据库(CBM),收集到ANA对SLE诊断的研究文献13篇,采用RevMan软件分析.结果以HEp-2细胞为底物的间接免疫荧光法(HEp-2-IFA)、以肝组织为底物的间接免疫荧光法(Liver-IFA)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)对SLE及对照组进行ANA检测,3种方法综合比数比(OR)分别为100.55(P＜0.01)、153.49(P＜0.01)和28.84(P＜0.01).HEp-2-IFA法和Liver-IFA法检测SLE患者ANA比较采用RevMan分析,OR值为3.47(P=0.01).HEp-2-IFA法和ELISA法检测SLE患者ANA比较采用RevMan分析,OR值为1.25(P=0.62).结论 3种检测ANA方法对SLE均具有较高的诊断效能,特别是HEp-2-IFA法和ELISA法的检测敏感度明显高于Liver-IFA法;HEp-2-IFA法荧光模型为疾病诊断及新抗体发现提供实用信息,但其设备昂贵,且需要经验丰富的技术人员,而ELISA法则简单、方便、快捷、适合大量标本的自动化仪器检测,不同单位应按实际情况进行方法选择。

为了解我院临床分离的绿脓假单胞菌(Pa)株β内酰胺酶、oprD2、氨基糖苷类修饰酶编码基因存在状况,我们进行了相关耐药基因的检测。

随着各种检测技术的发展,医疗诊断越来越依赖于实验室检测的结果,对于医学实验室而言,如何保证提供可靠的结果显得尤为重要。

为方便支原体病研究我们建立了解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)通用的PCR-变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)检测技术。

目的 应用Westgard方法评价决定图判断常规生化项目在罗氏Modular PPI检测系统上分析性能的可接受性.方法 定量测定各个实验项目的变异系数和不准确度(偏倚),应用Westgard方法评价决定图,将27个常规生化项目的变异系数和偏倚以图像形式表达,再与要求的允许总误差(TEa)作比较,判断检测系统的分析性能可否接受.结果在Modular PPI检测系统上,钙的日间变异系数为0.08 mmol/L,偏倚为0.06 mmol/L,分析性能为临界;肌酐(Cr)、尿素(Ur)、葡萄糖(Glu)、钠(Na+)、氯(Cl-)和磷(P)的日间变异系数分别为3.20%、2.13%、1.52%、0.89 mmol/L、1.10%和1.55%,偏倚分别为4.79%、0.96%、4.63%、0.80 mmol/L、1.74%和4.13%,分析性能为良好;其余20个项目的分析性能均为优秀.结论 Modular PPI生化检测系统常规生化项目均具有较好的精密度和准确度,分析性能可以接受.应用Westgard方法评价决定图判断生化检测系统的分析性能,简便易行,适合临床实验室应用。

目的 研制浓度适宜、便于保存和使用的甘油水溶液标准物质.方法 参照一级标准物质技术规范(JJG 1006-1994)及有关技术文件,制备适当浓度的甘油水溶液,HPLC法进行均匀性和稳定性检验,滴定法测定该溶液的甘油含量.结果 (1)甘油溶液均匀性检验:3次测量结果的x-±s分别为1.297 5±0.014 3、1.302 0±0.008 9、1.313 7±0.007 8,经方差分析,差异无统计学意义(F=11.462,P=0.166),说明甘油溶液分装均匀.(2)4℃保存至少稳定4年,定值为0.103 6 g/g,不确定度为0.000 4 g/g.结论 研制的甘油标准物质符合国家一级标准技术要求.已于2006年5月被国家质量监督检验检疫总局批准为国家一级标准物质(GBW 09149)。

近年来,应用引文分析的方法对某学科进行研究,收到了良好的效果.《中华检验医学杂志》原名《中华医学检验杂志》,创刊于1978年,是由中华医学会主办的中华系列杂志之一,被国内外20个权威检索机构或数据库收录,影响因子居我国医药卫生类期刊前列.我们应用文献计量学的方法,对《中华检验医学杂志》论著的引文进行统计分析,目的在于找出其中一些基本规律,为医学检验工作者及《中华检验医学杂志》编辑出版提供参考。