2006年 · 第29卷第11期

慢性肾病(CKD)是世界范围内的公共健康问题,其发病率呈迅速增长趋势.实验室检查是早期发现CKD的重要手段.早期诊断,以便及时采取有效的措施在延缓肾病向肾功能衰竭的进展中具有重要意义.我们在充分认识CKD的基础上,应正确开展其检测工作指导临床应用。

阐述近年来肿瘤生物学最新进展和对肿瘤发生发展规律的认识,并探讨利用基因组学、蛋白质组学技术对肿瘤早期预警的可能性,以便为肿瘤生物标志研究和应用提供新的研究思路。

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)在人类的感染非常普遍,它是一种可引起人类皮肤和黏膜组织良性及恶性肿瘤的病毒.迄今为止,已发现的HPV有100多个型别,各型别与体内特定感染部位和病变有关,其中40多个型别与人类生殖道疾病有关。

临床实验室工作者处理的是具有潜在感染性的患者标本,这使他们处于实验室获得性感染(LAI)的危险中.LAI指由实验室工作导致的感染,它可以发生在实验室工作者,也可以发生在暴露于实验室环境的其他人。

目的 研制钐(Sm)标记检测总前列腺特异性抗原(tPSA)及铕(Eu)标记检测游离前列腺特异性抗原(fPSA)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)试剂盒.方法 以抗PSA单克隆抗体101#包被96孔微孔板,用Sm3+标记抗tPSA单克隆抗体102#、Eu3+标记抗fPSA单克隆抗体201#,采用双抗体夹心法建立t/fPSA双标记TRFIA.标准曲线由TRFIA检测仪自带的Log-Log_B函数处理. 结果 tPSA批内和批间变异系数(CV)分别为2.38%和3.91%,最低检测下限0.02 μg/L,可测范围为0.02～250 μg/L,回收率为101.3%;fPSA批内和批间CV分别为3.16%和3.34%,最低检测下限0.05 μg/L,可测范围为0.05～250 μg/L,回收率为103.2%.t/fPSA TRFIA试剂盒测定健康组、前列腺良性疾病组和前列腺癌组(Pca)的tPSA平均值为1.4 μg/L、4.3 μg/L、14.2 μg/L,fPSA平均值为0.3 μg/L、1.5 μg/L、6.2 μg/L.tPSA3.6 μg/L、f/tPSA＜0.21为Pca与良性疾病的鉴别阈值.自制试剂盒与PE公司进口试剂盒同时测定血清样本,二者tPSA与fPSA的相关系数分别为0.99和0.97.结论 自制t/fPSA TRFIA试剂盒的各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。

目的 探讨酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测结核分枝杆菌特异抗原T淋巴细胞的频率,在快速诊断结核病中的临床应用价值.方法 利用ELISPOT检测对结核菌特异抗原刺激反应,分泌γ干扰素的效应T淋巴细胞数量方法,测定30名健康体检者, 24例丙肝患者,65例非结核呼吸道疾病患者和112例结核病患者外周血单个核细胞中结核菌抗原特异的T淋巴细胞的频率.结果 112例结核病患者中, 107例结核病患者结核抗原特异ELISPOT阳性,提示方法敏感度为95.5%,30名健康对照中,2名健康体检者阳性, 其他健康体检者阴性, 24例丙肝患者和65例非结核呼吸道疾病患者均为阴性,方法的特异度为93.3%.结论 ELISPOT是较灵敏和特异的快速检测结核菌感染的方法,可用于结核病的快速诊断。

目的 对中国造血干细胞捐献者资料库(简称中华骨髓库)中人类白细胞抗原(HLA)分型数据质控抽检中发现的错误分型情况进行归纳总结,探讨其产生的原因及解决策略,以提高造血干细胞捐献者HLA分型的准确性.方法 采用聚合酶链反应(PCR)-序列特异性引物(sequence specific primers,SSP)、PCR-序列特异性寡核苷酸探针(sequence specific oligonucleotide probes,SSOP)及基因测序(sequence based typing,SBT)分型方法,对中华骨髓库按比例随机抽取的7 313份已完成HLA-A、B、DRB1基因分型的标本进行复检,使用与所抽检标本原始分型试剂不同的试剂盲检,对结果不符者,采用第3种试剂及其原始分型试剂复检;对于难以确定的结果,采用SBT方法确认.采用直接计数法进行HLA差错统计.结果 质控抽检6期共7 313份标本,发现HLA分型结果错误标本数183份,平均错误率为2.50%.HLA基因分型错误率逐年降低,6期错误率分别为8.18% 、3.84%、2.85%、1.70%、1.10%、0.84%.HLA-A位点错误率为0.49%,其中漏检现象占A位点错误的61.11%;HLA-B位点错误率为0.85%,其中以同一宽特异性组之间的亚型判断错误者居多,占B位点错误的41.94%;HLA-DRB1位点错误率为0.66%;另外,可能由于标本搞错导致的HLA-A、B、DRB1 3个位点分型全错有41例,错误率为0.56%.结论 错误产生的原因有实验人员的技术操作水平及工作责任心上的原因,也有分型方法及试剂本身的原因.采用DNA分型技术,使用特异性、重复性好的合格试剂及加强质控监督,有助于提高HLA分型的准确性,并将有助于提高骨髓库造血干细胞捐献者HLA分型的质量。

目的 探讨全自动血液分析仪的异常报警信息与血细胞显微镜复检的方法及内容,为临床提供可靠诊断依据.方法 通过对4 758份标本结果的数据统计,根据仪器给出的Flag警示信息、散点图的图像、未成熟粒细胞百分比(IG%)及患者外周血涂片情况综合分析,确定复查的标本.结果 仪器检测的4 758份标本有722份标本有异常信息提示.对有异常提示的标本进行显微镜复检显示,随着仪器Flag警示图从100到300,镜检的阳性率逐渐增高;随着IG%从0.5到3.0,镜检阳性率逐渐增大,当IG%大于3.0时,镜检阳性率可达95.5%.结论 对于有异常的标本,仪器很难提供完全准确的分析结果,实验室必须根据血液分析仪的Flag警示信息、散点图图像和IG%,通过缩小目标进行显微镜分析,给临床提供更有价值的信息。

他克莫司是广泛应用于器官移植术后抗免疫排斥反应的一种重要免疫抑制剂[1],但是其血药浓度显著的个体差异和狭窄的治疗范围是他克莫司在临床应用中的重要影响因素[2]。

颗粒溶素(granulysin,GNLY)是脂结合蛋白-皂素样蛋白(saposin-like protein , SAPLIP)家族成员之一,具有广谱细胞毒活性,在抗感染和抗肿瘤免疫中发挥重要作用[1-3].因此,对GNLY血清表达水平准确定量具有重要意义.本中心建立GNLY血清水平酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并检测30名正常人及30例传染性单核细胞增多症(IM)患者血清GNLY水平,以进行不同疾病期比较分析,并探讨GNLY在感染性疾病诊断和临床实时监测中的应用价值。

系统性红斑狼疮(SLE)病因学的近年研究表明,干扰素(IFN)家族及其免疫调控通路可能在SLE发病中起重要作用,而细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在介导免疫性炎症反应中具有重要意义[1].本研究通过对SLE患者和正常人外周血中干扰素诱导蛋白4(IFIT4)和ICAM-1水平的研究,以探讨其与SLE疾病发病机制和病情活动度的相关性。

当前乙型肝炎病毒(HBV)的全球感染形势依然严峻,流行病学评估目前世界上有4亿多慢性感染者[1],高流行区域如我国人群感染率>15%,基因型分布以B、C型为主.HBV的病毒载量与感染状态密切相关,寻求快速、简便、灵敏、特异的定量手段是对HBV早期诊断、病程监控及流行病学调查的需求.本研究在Notomi T的环介导等温扩增(LAMP)技术基础上[2],建立起HBV DNA等温扩增的定量检测体系。

肝豆状核变性又称Wilson's病(Wilson's disease,WD),是一种铜代谢障碍的常染色体隐性遗传病,该基因定位于13q14.3,它含有21个外显子及20个内含子,其基因表达产物为参与铜转运的三磷酸腺苷酶(ATP)7B,故该基因又称为ATP7B基因,ATP7B酶分为三个区,第一区为金属离子结合区,第二区为磷酸化区,第三区为跨膜区.基因突变方式多种,但以点突变为主.因基因突变导致ATP7B酶发生改变,从而不能有效地运输铜而形成铜蓝蛋白,因此使铜在组织器官存积,发生脑、肝、肾等多脏器受损.经国内外学者长期研究表明[1,2],在众多的点突变中,中国人肝豆状核变性以2273位点G→T突变为高发突变热点[3],上海二医大对60例WD患者进行了Arg778Leu突变的检测,突变频率达45.6%,因此我们对12例肝豆状核变性患者采用荧光定量PCR方法检测Arg778Leu基因突变,结果这12例江西籍肝豆状核变性患者中有10例存在该突变,他们均为杂合子.而5例正常体检者均正常.说明Arg778Leu突变为肝豆状核变性的高发突变位点,可作为肝豆状核变性众多突变中的首选。

自身免疫性肝炎(AIH)是一种病因不明,以炎症性坏死为主要病理改变的慢性肝脏疾病.原发性胆汁性肝硬化(PBC)是以肝脏细小胆管非感染性慢性炎症、坏死及慢性胆汁淤积为特点的自身免疫性肝脏疾病.而细胞因子(CK)能调节多种细胞产生生理效应,异常情况下可导致病理反应.由于目前对AIH和PBC免疫方面的发病机理不清楚,因此本研究检测其细胞因子,以探讨其免疫病理机制。

目的 探讨游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对大鼠系膜细胞(MC)细胞外基质(ECM)的基因表达及分泌的影响.方法 以体外培养的大鼠系膜细胞(HBZY-1细胞)为基础,采用半定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子(TGF-β1)mRNA的表达;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测细胞外基质Col Ⅳ、FN的分泌.结果 25、100、400 μmol/L油酸刺激组中Col Ⅳ、FN、TGF-β1 mRNA的表达分别为0.94±0.17、1.16±0.15、1.28±0.19和0.82±0.11、0.97±0.07、1.09±0.08及1.15±0.07、1.24±0.06、1.36±0.05,各处理组与对照组 (0.73±0.16、0.53±0.09、 0.96±0.11) 相比较差异有统计学意义(P＜0.01);25、100、400 μmol/L油酸刺激组中Col Ⅳ、FN的分泌分别为(59.6±6.4)、(63.1±6.7)、(72.4±8.6) ng/ml和(106.1±6.4)、(121.0±7.1)、(137.5±9.7) ng/ml,各处理组与对照组[(52.3±7.2)、(93.2±8.7)] ng/ml相比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 游离脂肪酸具有增加细胞外基质基因表达和分泌的作用,可能参与肾小球硬化(GS)的进展机制。

目的 探讨测定血浆壳三糖苷酶活性的荧光分光光度法,同时评估方法的可靠性.方法 采用荧光分光光度法测定了44例10～14岁的健康儿童血浆壳三糖苷酶的活性,同时对实验条件、方法的检出限和精密度等多方面进行了分析.结果 本法的最佳激发波长和发射波长分别为358 nm和458 nm.最低检出限为3.24 nmol·h-1·ml-1.回归方程为Y=38.124X+111.6,r=0.997、P＜0.01.该方法得出的样品日内和日间CV值分别6.43%和12.70%.44例10～14岁男性和女性儿童该酶活性的数值分别为(11.69±1.71) nmol·h-1·ml-1和(11.07±1.28) nmol·h-1·ml-1.结论 血浆壳三糖苷酶的活性是临床溶酶体疾病的筛查的一个重要生物学指标,初步应用结果表明,荧光分光光度法是分析该酶活性的一种简单、快速、灵敏、可靠的方法。

中华医学会检验分会第四届全国临床检验学术会议(暨全国"血液学、体液学、输血学"学术大会),于2006年5月12日至14日在武汉科技会展中心隆重召开.来自全国各医学院校、医院、血液中心、研究院所的代表528人参加本次盛会。

《临床实验室安全准则》（WS／T251-2005）标准参照美国NCCLS同类标准GP17-A、并结合我国情况做适当修改后提出，适用于临床实验室，部分内容适用于同位素实验室。标准旨在规范临床实验室的安全管理，内容着重在实验室和工作人员安全的一般要求，防火、用电、化学危险物品、微生物的安全要求，以保证实验室的安全运作，将事故控制在最低限度。为各级临床实验室的安全管理提供依据。本标准由中华人民共和国卫生部提出，标准起草单位为卫生部临床检验中心，由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。《临床实验室安全准则》包括：

《临床实验室质量保证的要求》WS／T250-2005等效采用了《美国临床实验室改进修正案88》（Clinical Laboratory Improvement Amendments 88, CLIA＇88）中“J亚章-中度或高度复杂检验患者检验管理”和“P亚章-中度或高度复杂检验质量保证”中的内容，于2005年12月113起实施，是改善我国临床实验室管理，提高检验水平，开展实验室认可，实现与国际接轨的技术指导性文件。标准规定了对临床实验室质量保证的要求，适用于从事医疗活动的临床实验室。标准明确规定：临床实验室必须建立并遵守质量保证（QA）的政策和程序，用所建立的QA政策和程序来监测和评价整个检验过程（分析前、分析中、分析后）的质量。实验室的QA规划必须能评价其政策和程序的有效性，识别并纠正问题，保证报告检验结果的准确和及时，保证工作人员合适和有能力。

卫生部2005年6月16日发布3个检验医学参考系统有关行业标准，WS／T253-2005“体外诊断医学器具-生物源样本中量的测量-参考物质的描述”、WS／T254-2005“体外诊断医学器具-生物源样本中量的测量-参考测量程序的表述”和WS／T255-2005“临床检验医学-参考测量实验室要求”。上述行业标准于2005年12月1日实施。

现代医疗卫生服务机构中，临床实验室检验结果对诊治疾病有着极为重要的意义。检验结果的正确性可直接影响临床医生对疾病的诊断，对健康状况的判断，也影响对疾病疗效的评价，不正确的检验结果不但会给患者带来痛苦，严重时，还将成为医疗事故的原因。为保证临床实验室检验结果的正确性，提高和确保检验结果的质量，卫生部全国临床检验标准委员会经过多年努力工作，现已完成多项临床检验国家及卫生行业标准的制、修订工作（见表1）。旨在从样本采集、标识、运输、处理、检验、到结果报告和解释，全面规范临床实验室的检验过程，同时，依据国际通用标准，对临床实验室的质量管理和安全管理提出标准化要求。科学化的管理和规范化的操作，对提高我国临床实验室检验结果准确性和可比性，起到极大的推动作用。

《临床实验室废物处理原则》（WS／T249-2005）依据美国临床实验事标准化委员会（National Committee of Clinical Laboratory Standard,NCCLs）GP5-A中的有关条款进行编写，对临床实验室产生的废物提出了分类的处理原则，对临床实验室中产生的一些重要有害废物提供了处理技术和丢弃方法，以保证临床实验室检测工作的安全性，减小对工作人员及环境的生物学污染。可作为中华人民共和国国务院令第380号公布的《医疗废物管理条例》和中华人民共和国卫生部第36号发布的《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的技术支持性文件。适用于临床实验室，在施时，临床实验室还应参考相应的技术操作规范。

《体外诊断用品标识》（WS／T252-2005）《体外诊断用品标识》（WS／T252-2005）是依据美国临床实验室标准化委员会（National Committee of Clinical Laboratory Standards,NCCLS） GP17-A , GP14-A和美国临床实验室改进修正案＇88（CLIA＇88）中的有关条款进行编写的，旨在规范临床体外诊断用品的标识，更有效地保证临床实验室的工作质量和工作效率。本标准由中华人民共和国卫生部提出，本标准由卫生部临床检验中心负责起草，由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。标准规定了对体外诊断用品标识的要求，适用于以诊断疾病为目的、在体外进行实验或检验时所使用的试剂、校准品、质控物及相关材料的标识。

大量的流行病学和临床研究表明,脂蛋白(a)[Lp(a)]是动脉粥样硬化性心脑血管疾病(CVD)的危险因素[1].自McLean等[2]发现载脂蛋白(a)[apo(a)] 与纤溶酶原结构高度同源以来,Lp(a) 与动脉粥样硬化和血栓形成的关系又成为新一轮研究热点[3,4].市场上也出现了众多的用于Lp(a)浓度测定的免疫方法和校准物(定标血清).但是由于很多方法没有考虑到样品中Lp(a)分子大小多态性及结构的复杂性,以致测定结果受抗体的免疫特性和校准物中Lp(a)颗粒大小的影响很大.不同实验室和不同方法之间的测定结果缺乏可比性 [5], 妨碍了Lp(a) 前瞻性研究和危险水平的划分.近年来,由国际临床化学联合会(IFCC)组织、美国西北脂类研究室牵头的Lp(a)测定标准化研究已取得了突破性的进展[6].尽管国内很多医院都开展了Lp(a) 测定项目,但标准化工作尚未起步.以下简单综述Lp(a)的结构、测定方法及标准化中的一些问题。

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是重要的性传播疾病的病原体之一,它不仅会导致阴道、尿道感染;上行的生殖道感染还可能累及子宫内膜、输卵管和邻近的盆腔结构,也能导致盆腔炎、输卵管损伤直至不孕[1,2] .此外,此种病原体还与人乳头瘤病毒(HPV)[3,4]和人类免疫缺陷病毒(HIV)[5]的感染有关.由于相当一部分感染者为无症状携带者,因此需要建立高度敏感的实验室诊断方法控制该疾病的传播.作为CT检测"金标准"的细胞培养方法操作复杂、技术要求高[6],且所用时间较长无法进行快速检测,某种程度上限制了其在临床诊断实验室的应用.聚合酶链反应(PCR)技术具有耗时少、扩增效率高、特异性强的特点,显示出了其在CT感染临床诊断中的优越性.但是由于受核酸突变、扩增抑制物的影响,以及核酸提取效率等方面的差异尚存在检测效率降低甚至漏检的问题,而且由于其仍能检测出已经死亡的病原体,所以尚不能作为临床治疗效果的评价方法。

人类血小板抗原(HPA)是一组复杂的不均一的膜蛋白系统,由于感染或免疫因素引起的血小板抗体与临床输血和疾病诊断关系密切.近年来,随着检验医学的发展和检测技术的不断更新,对血小板抗体的本质和靶抗原的研究日益深入,HPA的生化特性及其遗传学多态性逐渐被揭示,血小板血型的研究从血清学方法发展到分子免疫学方法,为血小板抗体的检测及其膜糖蛋白分析提供了新的检验技术,对研究手段的完善以及疾病的诊断具有重要的临床意义.如何提高血小板抗体检测技术将成为输血与检验医学今后的研究重点.我们就上述方面的技术进展作一综述。

长期以来,检验医学工作者主要关注的是诊断试验的性能,即分析特征,包括试验的准确度、敏感度、特异度等,也积极研究非分析因素对试验结果的影响,如个体内与个体间的生物学变异,标本处理对结果的影响等.为更加科学、合理的评价试验性能,美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐整套评价方案.但是这些对诊断试验的评价仍不全面,尤其是对试验临床应用与经济成本之间关系的探讨则不多.我们应用循证医学的理论进行临床经济分析,重点是解决成本与效益间的关系,有利于在成本-效果、成本-效益、成本-效用中找到平衡.为各层次的决策者提供合理选择卫生技术的科学信息和决策依据,对卫生技术的开发、应用、推广与淘汰实行政策干预,从而合理配置卫生资源,把人力、物力和财力使用效率最高,从而达到理想的医疗卫生技术的经济效果。

临床实验室的测定数据是为患者疾病的诊断、治疗或临床实验研究服务的,为保证临床诊疗或实验研究的有效性,就要求临床实验室证明其测定数据能达到所确定的质量标准.质量保证就是涵盖实验室内所进行的所有活动,以保证其工作满足所确定的质量标准。

王治国《中华检验医学杂志》编辑委员会特邀编委。1964年生，湖北籍。医学硕士，研究员，硕士生导师。现任卫生部临床检验中心室间质评室主任。

为加强与读者的沟通，更好地了解和满足读者的要求，中华检验医学杂志从2005年起实行会员制度。经过2年的摸索，积累了一些经验，2007年本刊将执行新的会员管理条例：

中华医学会检验分会、中华检验医学杂志编辑委员会主办的《继续教育园地》栏目，使广大检验医学工作者既能进行知识更新，又能取得继续教育学分，自1999年开展以来，深受检验界同行的喜爱，参加人数逐年增多。为了更好地办好继续教育栏目，有针对性的开展继续教育，加强检验与临床的沟通和结合，也为了更好地在基层和初中级检验人员中普及检验基本知识和技能，2007年本刊对继续教育栏目内容进行了调整，选择了2个专题，即自身免疫性疾病及临床生物化学。我们将邀请全国有经验的检验与临床专家有系统地对这2个专题撰写讲座，在普及基础知识的同时，也会介绍新知识和新技术。