2006年 · 第29卷第05期

我国人群乙型肝炎病毒(HBV)感染率高,HBV感染血清学标志物是临床实验室最主要的检测项目之一.经对乙型肝炎"两对半"、抗HBc IgM和HBV DNA检测及结果解释中存在的一些普遍问题进行阐述,并注意到可能存在的因试剂方法的局限性、病毒变异等所致假阴性和假阳性,以及对检测结果的进一步确认和适当的解释,对HBV感染血清标志物检测的正确使用有重要意义。

一、分类 　　耻垢分枝杆菌(mycobacterium smegmatis)和龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌一样,均为快速生长的分枝杆菌.近年来由龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌引起的感染暴发流行国内也有许多报道[1-3].Wallace等[4]报道了耻垢分枝杆菌引起人类的各种感染.从澳大利亚和美国南方各州分离出22株耻垢分枝杆菌,其中19株是从皮肤、软组织中分离而来,11例患者结合体外敏感试验而治愈,但国内由耻垢分枝杆菌引起人类感染尚无报道。

在临床微生物室加强细菌药敏试验的标准化与规范化是获得药敏试验准确性的指导临床医生早期、快速合理选用抗菌药物治疗,充分发挥临床微生物室在抗感染治疗中的重要作用。

目的 检测外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞表面CD81、CCR5的表达,探讨与丙型肝炎病毒(HCV)单纯感染、人类免疫缺陷病毒(HIV)单纯感染和HCV/HIV合并感染的关系.方法 采用流式细胞术,检测HCV感染组(n=21)、HIV感染组(n=14)、HCV/HIV感染组(n=28)及正常对照组(n=30)人外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞表面CD81和CCR5的表达.结果与正常对照组相比,外周血CD4+T淋巴细胞表面CD81,在HCV感染组表达变化不明显,而在HIV感染组和HCV/HIV合并感染组中低表达;CD8+T淋巴细胞表面CD81,在HCV感染组、HIV感染组和HCV/HIV合并感染组中都呈高表达.外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞表面CCR5,在HIV感染组高表达,而在HCV感染组和HCV/HIV合并感染组中低表达.结论 HCV/HIV合并感染中,影响外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞表面CCR5表达的主要因素是HCV感染;而合并感染对CD4+及CD8+T淋巴细胞表面CD81的表达,其影响作用是不相同的。

目的 建立错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(mPCR-RFLP)检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区A1896、基本核心启动子(BCP)T1762/A1764双变异的方法,与直接测序法比较,评估其应用价值.方法利用错配PCR的原理扩增HBV前C区长194 bp、C启动子区长184 bp的基因片段,扩增产物分别经限制性内切酶Bsu36I、BclI酶切,琼脂糖凝胶电泳,根据酶切图谱多态性,建立检测HBV前C A1896、BCP T1762/A1764双变异的方法,对127份HBsAg、HBV DNA阳性的HBV感染者血清进行分析,酶切同时测序.2份标本用克隆测序以验证酶切鉴定变异株、野株混合感染的准确性.结果 127份血清中125(98.42%)份能用酶切、121(95.21%)份能用测序分析HBV前CA1896、BCP T1762/A1764状况.酶切与测序均成功的119份血清中,16份为前C区A1896变异株,34份为BCP T1762/A1764双变异株,21份为前C区A1896、BCP T1762/A1764联合变异株,48份为前C区G1896、BCP A1762/G1764野株,酶切与测序的结果完全一致.1份酶切鉴定为前C区A1896、G1896混合感染标本的5个克隆子中,1个为前C区A1896变异株,另外4个为前C区G1896野株;另1份酶切鉴定为单纯前C区A1896变异标本的5个克隆子均为前C区A1896变异株,酶切分析结果与克隆测序结果完全相符.结论与测序法相比,本方法较简便、特异性强,能区分野毒株、变异株混合感染,适合较大样本分析,可用于流行病学调查及临床筛查。

目的 建立时间分辨免疫荧光定量分析乙型肝炎病毒PreS1抗原的方法.方法以基因重组的带有PreS1抗原的乙型肝炎表面抗原作标准品,应用双抗体夹心免疫荧光分析方法,用抗PreS1单克隆抗体和抗-HBs分别作为固相抗体和铕标记抗体,若样本中含有PreS1抗原,则形成抗体-抗原-铕标记抗体复合物,加增强液解离铕离子,采用时间分辨荧光测量技术,对乙型肝炎病毒PreS1抗原进行检测.结果自制TRFIA试剂检测PreS1抗原,单侧95%参考范围为0～0.26 ng/ml;自制TRFIA试剂与ELISA试剂对乙型肝炎患者血清标本中PreS1抗原的检测,TRFIA方法灵敏度高于ELISA方法,250份乙型肝炎患者血清标本中有3例标本ELISA方法结果为阴性,而用TRFIA方法可检测到PreS1抗原;对于弱阳性标本用ELISA方法检测不到时,TRFIA方法仍可检出.ELISA方法在一阳性标本1:4 096倍稀释时结果为阴性,而TRFIA方法在1:16 384倍稀释时仍为阳性;高、中、低三个浓度,批内和批间精密度测试变异系数(CV,%)均小于10%,平均回收率为103.3%;TRFIA方法检测PreS1抗原与HBsAg及HBeAg无交叉反应;50份我院正常体检者血清标本进行PreS1抗原的检测,结果均正常,特异性100%.结论 TRFIA方法定量检测PreS1抗原,灵敏度高,特异性强,能够准确及时敏感地反映患者体内乙型肝炎病毒的复制情况。

目的 探索X染色体短串联重复序列(STR)在无创性产前诊断中用于胎儿细胞鉴定、性别判断及遗传病诊断的可行性.方法33名孕妇外周血,以血红蛋白γ链染色结合显微操作分离获取胎儿有核红细胞,经引物延伸预扩增技术扩增细胞基因组后,对2个X-STR位点DXS101、DXS6797及AMXY基因进行扩增.胎儿及其双亲的基因型对比分析.结果各孕妇外周血中均分选出胎儿细胞.联用DXS101、DXS6797及AMXY基因对胎儿细胞鉴定及性别判断的准确率达100%,并成功诊断了一例Turner's综合征胎儿.结论采用多个X-STR位点及AMXY基因扩增作为母血中胎源细胞鉴定系统,不局限于男胎,可准确判断胎儿性别及常见性染色体异常。

目的 建立血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的实验诊断方法,并用于TTP患者的诊断.方法将微管透析前、后的正常人混合血浆、TTP患者血浆进行琼脂糖凝胶水平电泳与WesternBlot,分析TTP患者血浆中vWF多聚体的组成变化;以残余胶原结合力检测血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)的活性水平.结果正常人混合血浆的vWF-cp活性为88.79%,4例TTP患者vWF-cp活性分别为8.90%,4.72%,28.73%,10.35%.正常混合血浆透析后只存在小分子量vWF;TTP患者血浆透析前、后的多聚体分布无变化或变化不明显.结论残余胶原结合力测定结合裂解后的vWF多聚体电泳与Western Blot技术可准确分析vWF-cp活性与vWF多聚体结构组成的变化,为TTP诊断提供新的有用的实验诊断方法。

目的 探讨基因芯片技术在进行北方汉族人群人白细胞抗原B位点(HLA-B)分辨度分型的价值.方法根据中国北方汉族人群HLA-B常见基因位点及临床分型分辨度特征,设计特异性寡核苷酸中分辨度分型探针,制成HLA-B基因分型芯片.采用荧光标记引物和不对称聚合酶链反应(PCR)扩增HLA-B 2、3外显子,产物与芯片探针杂交后经荧光扫描,并用特定软件分析判断阳性探针,以确定样品基因型.结果用中分辨度探针从30份北方汉族人标本中可分出HLA-B 7～83范围的42个B抗原等位基因,与顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型方法对比,多检出3个HLA-B14、73和82新等位基因.结论HLA-B基因芯片具有较高的精确度和特异性,可一张芯片多人份检测,适合用于临床HLA-B抗原分型。

目的 用毛细管区带电泳(CE)技术进行血清蛋白检测结果与琼脂糖凝胶电泳(AGE)技术的检测结果进行比较分析以探讨CE的临床应用.方法使用全自动毛细管电泳仪(法国Sebia公司的4.51版本Capillarys(R)电泳仪)及相应试剂,在7 kV电压、35.5℃、pH 10的缓冲液条件下,在15.5 cm×25.0 μm硅毛细管内进行血清蛋白电泳,用200 nm波长检测各种蛋白质的百分比浓度.结果与AGE的结果比较相关性,进行CE的精密度、线性检测及干扰实验.CE和AGE比较,白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白的相关系数分别为0.929、0.924、0.841、0.789和0.926,P＜0.001相关性好,无统计学意义.蛋白质含量3个水平不同标本的批内、批间结果,白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β1-球蛋白、β2-球蛋白和γ-球蛋白的变异系数(CV)值均小于10.08%精密度好.血清总蛋白浓度在71.10～11.16 g/L范围内各种蛋白线性关系良好,白蛋白最低检出量为6.87 g/L,γ-球蛋白为1.78 g/L.血清总胆红素含量≤144.7 mmol/L、甘油三酯含量≤8.18 mmol/L时对CE结果无干扰,纤维蛋白原和血红蛋白对CE结果有干扰.结论CE技术是一种灵敏度高、精确度好的血清蛋白检测技术,随着设备自动化的实现,分析操作将更简便、快速,适于临床化学实验室使用。

目的 比较不同类型的逆转录荧光实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα融合基因的方法.方法建立荧光染料SYBR Green Ⅰ和Eva GreenRQ-PCR技术,同时检测56例APL融合基因PML-RARα的表达水平,并且与传统巢式PCR方法进行敏感度比较.选择10例初诊患者随机分为两组,分别给予维甲酸(ATRA)加化疗或ATRA加三氧化二砷治疗.每3周抽取骨髓标本,检测治疗后PML-RARα表达的变化.结果两种RQ-PCR的灵敏度均可达到50拷贝,稍低于巢式PCR,但RQ-PCR定量准确,不易污染.分别取103拷贝和107拷贝的PML-RARα质粒以及患者cDNA同时做8次SYBR-Green Ⅰ平行扩增,批内变异系数分别为7.31%、8.26%和5.02%.不同APL患者PML-RARα表达水平有较大差异,初诊患者PML-RARα/GAPDH比值介于0.018～0.799,中位值为0.070;使用这两种染料建立的RQ-PCR方法进行定量检测,荧光染料Eva-Green荧光强度高于SYBR GreenⅠ 4倍.对接受ATRA加化疗或ATRA加三氧化二砷治疗两种不同治疗方案的APL患者动态观察发现,2～4周PML-RARα转录本均迅速减少,2个月后80%PML-RARα转阴,但两种治疗方式无明显差异.结论RQ-PCR可以准确检测微小残留病(MRD)融合基因表达水平;Eva Green和SYBR Green Ⅰ都可以用于RQ-PCR,但是Eva Green更敏感高效;监测融合基因表达可以有效观察不同治疗方法的治疗效果。

目的 探讨GP Ⅰa/Ⅱa在血小板-胶原黏附过程和胶原诱导血小板颗粒释放反应中的功能.方法采用流式细胞术,在有或无抗GP Ⅰa/Ⅱa抗体阻断条件下,(1)用anti-CD42b-PE标识血小板并检测血小板与FITC荧光标记胶原黏附过程中FITC荧光强度的变化;(2)用anti-CD61-PerCP标识血小板并用PE标记的抗CD62P抗体检测胶原诱导血小板颗粒释放反应中CD62P的变化.结果静息加6F1组比静息组下降9.0%,活化加6F1组比活化组降低33.6%.抗GP Ⅰa/Ⅱa抗体能抑制血小板与胶原的黏附,对活化态血小板的抑制作用更明显(P＜0.01);抗GPⅠa/Ⅱa抗体不能抑制胶原诱导的血小板释放反应(P＞0.05).结论GP Ⅰa/Ⅱa在血小板与胶原黏附过程中有重要作用,阻断GPⅠa/Ⅱa能降低血小板对胶原的结合,但阻断GP Ⅰa/Ⅱa难以抑制由胶原诱导的血小板颗粒内容物的释放。

悬浮阵列技术是一项新兴检测技术,本研究用该技术检测消化道肿瘤患者血清中甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类癌抗原242(CA242)和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1),以探讨其在肿瘤诊断中的应用价值。

目的 研究细菌rDNA快速鉴定方法.方法以细菌16S rDNA、16S-23S rDNA基因间隔区(ISR)和常见细菌耐药基因为对象,通过改进标本中细菌DNA提取方法,指纹分析、直接测序与多重聚合酶链反应(PCR)技术,建立快速细菌分子鉴定方法.结果细菌属种不同表现出独特的16S-23S rDNA ISR指纹,在分析软件指导下进行初步细菌鉴定和亲缘关系研究;16S rDNA和16S-23SrDNA ISR序列可确定细菌种与型;序列分析与生化鉴定一致.多重PCR可解决葡萄球菌16S rDNA与mecA基因、产超广谱β内酰胺酶菌16S rDNA与TEM和SHV基因同步检测.结论细菌rDNA分类方法,提高了非培养细菌的鉴定能力。

目的 评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测移植后受者的巨细胞病毒感染情况.方法应用定性PCR检测59例骨髓移植受者和9例肝移植受者的150份外周血标本中的巨细胞病毒DNA,比较外周血白细胞和血浆的检出差异;应用实时荧光定量PCR检测上述150份血浆样本和54份对照血浆中巨细胞病毒DNA载量.结果以实时荧光定量PCR为参照,定性PCR检测白细胞的敏感度和特异度分别为62.5%和95.5%;检测血浆的敏感度和特异度分别为57.5%和99.1%.所检测的150份血浆样本中,定量PCR阳性率为26.7%,阳性者其病毒拷贝数介于5.065×102～3.570×105/ml之间;对照组仅1例阳性,且拷贝数小于103/ml.临床调查显示病毒拷贝数大于5×103的患者具有较高的机会发展为巨细胞病毒病.结论实时荧光定量PCR是一个快速、敏感、特异的,可用于监测移植后患者巨细胞病毒感染的方法,帮助临床及早治疗,缩短治疗时间。

目的 探讨以血管内皮生长因子(VEGF)抗体为导向,白喉毒素突变体(CRM9)作效应部分,构建靶向毒素VEGF抗体-CRM9,为直接杀伤肿瘤细胞寻找新的药物.方法应用异型双功能连接剂甲基丙烯酸甲酯丁二烯苯乙烯三元共聚物(MBS)连接兔抗人VEGF多抗和CRM9,制备成新的构建蛋白,Sephacryl S-300分离纯化后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明二者的结合情况.对构建蛋白抗体活性采用酶联免疫法检测,生物毒性应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测.结果构建蛋白通过分离并电泳后,出现明显增粗的分子量为116 000新条带,位于CRM9和VEGF条带前方.构建的蛋白结合体中抗体活性检测,VEGF抗体与CRM9按1:1制备的蛋白结合体,抗体活性与VEGF抗体对照差异无统计学意义(P＞0.05),按1:5和1:8两种比例制备的蛋白结合体,抗体活性降低与VEGF抗体对照差异有统计学意义(P＜0.01).构建的蛋白结合体中CRM9毒性检测,VEGF与CRM9按1:1比例制备蛋白结合体杀伤效果与空白对照组差异有统计学意义(P＜0.01),与CRM9组差异无统计学意义(P＞0.05),CRM9组杀伤效果与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论MBS能将VEGF抗体与CRM9连接构建成新的蛋白结合体,结合体中CRM9生物毒性和VEGF抗体活性不变.这将为进一步的免疫毒素抗肿瘤的各项研究奠定了基础。

目的 建立高分辨率的膀胱移行上皮癌不同时期的双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况,寻找其差异表达蛋白,为寻找癌变相关蛋白奠定实验基础.方法用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离膀胱移行上皮癌不同分期的组织,凝胶考马斯亮蓝染色,然后利用GS-800Calibrated Densitometer凝胶成像系统获取图像,用PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析,寻找差异表达蛋白.在此基础上应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质.结果获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶的平均蛋白质匹配率达76%,蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间的蛋白质点在等电聚焦IEF方向偏差是(0.98±0.26)mm,SDS-PAGE方向偏差是(1.23±0.22)mm,并且得到了若干与细胞增生、分化、周期调控信号转导或肿瘤发生有关的蛋白质,例如SFN,热休克蛋白-27等.结论为进一步探讨癌变机理及筛选其特异性分子标志物打下方法学基础。

目的 建立一种染色质免疫沉淀技术(ChIP)分析肝细胞基因表达的转录调控方法.方法以肝脏特异性基因磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)为待测基因,以IgG和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)及髓磷脂基础蛋白(MBP)作为内参基因,采用ChIP验证不同代谢状态下cAMP应答元件结合蛋白(CREB)对PEPCK基因启动子区的结合情况.结果在抗CREB抗体免疫沉淀的DNA模板中含有一明显增强的DNA片段,即禁食状态下PEPCK基因启动子区域CREB的结合增加4倍,证明DNA片段中含有与PEPCK基因启动子区结合的CREB序列.结论研究证实,CREB蛋白在体内可结合于PEPCK基因的启动子区域,并参与该基因表达的转录调控。

患者男,53岁.2个月前受凉后出现畏寒发热、乏力,伴头痛,当地诊断感冒,青霉素等治疗,仍发热,乏力加剧,体重下降.1个月前,于当地中医院住院,经查发现人类免疫缺陷病毒(HIV)1/2初筛试验阳性,经广东疾病预防控制中心确诊为HIV-1型抗体阳性,给予抗感染治疗效果不佳.于2003年5月入我院.患者曾患淋病,后治愈.查体:体温37.5℃,脉搏76次/min,呼吸20次/min,血压105/70mm Hg,心率110次/min.神智清醒,慢性消耗病容,全身皮肤巩膜中度黄染,颌下、腋下、腹股沟等多处浅表淋巴结肿大并触痛。

血栓形成的机制异常复杂,为多因素致病性改变,研究显示,高脂血症、糖尿病、高血压、肥胖、吸烟、高同型半胱氨酸血症等是缺血性心脑血管疾病血栓形成的重要独立危险因素.然而目前对高脂血症患者血脂与血栓形成危害因子关系研究的报道尚少.本研究旨在通过对高脂血症患者的血脂、脂蛋白及其血栓形成危害因子的分析,探讨血脂与血栓形成危害因子的关系。

为探讨肝炎、肝硬化和肝癌间的因果关系,研究其演变规律及其表现特征,为3种疾病的早期预警、诊断、治疗及预后提供实验室诊断依据,为此,我们就肝脏酶和代谢物联合检测在慢性肝病诊断中的价值进行了实验室检测和分析。

随着维甲酸和三氧化二砷在急性早幼粒细胞白血病(APL)治疗中的运用,APL得到了更好的治疗,目前通过多药联合治疗,APL的5年存活率已达到70%左右.但APL患者在初发的时候往往存在严重的出凝血机制障碍,这是APL早期死亡的主要原因,如何早期鉴别APL患者并发DIC和原发纤溶亢进,正确指导治疗和节约医疗费用有着重要作用.我们通过测定活化的蛋白C(APC)和抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),同时结合D-二聚体和其他常规凝血指标检测,探讨其应用价值,为临床APL的这两种凝血异常的诊断和治疗提供帮助。

化验单到检验科后,一部分检查要到门诊化验室完成,一部分要到检验中心完成,化验结果出来后,化验单由检验科交至门诊大厅咨询台集中发放.在咨询台一般是靠护士人工翻阅查找患者的化验单,因此查找的效率非常低,又由于化验单到达咨询台的时间比较集中,经常造成患者排长队等候,由于护士来不及仔细查阅,在忙乱中常容易搞错患者的化验单.另外,从实验室发出的化验单,很难做到消毒彻底.增加了医院交叉感染传播疾病的机会[1].这种传统的取化验单方法既不卫生,又不方便.患者的隐私也得不到保护,严重影响了医院看病的正常秩序及患者的身心健康.为解决上述问题,本研究在使用条形码管理的基础上[2],提供一种方便患者使用的化验报告自助查询打印装置。

悬浮阵列技术是一种以荧光编码微球为核心,集流式细胞、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体的多指标并行分析技术平台,可一次同时准确定量检测100种不同的生物分子;具有高通量、高灵敏度,并行检测等特点;常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等研究。

黑色消化球菌(Peptococcus niger)是唯一产生黑色素的专性厌氧性球菌,是消化球菌属中唯一1个菌种.

答：检测血液中的病毒DNA，目前可以应用血浆、血精或白细胞。何为检测的最理想标本，文献观点不尽一致。以检测巨细胞病毒DNA为例，有人认为检测血浆比白细胞更早期、敏感的；有学者认为血浆的敏感性差于白细胞；也有显示用血浆和白细胞没有显著差异。根据我们的实验经验认为，首先血浆比血清所载的病毒量要多一些，选用血浆做定量聚合酶链反应（PCR）具有较好操作性、简便，且不受病人白细胞数量的影响，同时避免了潜在感染的可能（白细胞内检测出病毒DNA不一定为现症感染）。

答：首先需明确检测目的，如检测的病原微生物为RNA病毒（如丙型肝炎病毒、禽流感病毒）须注意使用无RNA酶的、经高压灭菌的一次性制品，血标本应尽快分离血清或血浆，分离后如需长期保存，需在-70℃，如对新鲜组织进行mRNA检测，若不立即提取核酸，也应保存在-70℃；如检测沙眼衣原体DNA，取材时一定要取到上皮细胞（沙眼衣原体只有在活细胞内才能增殖复制），而只取分泌物会降低检出阳性率。根据不同的标本也有不同的要求，如血浆或全血标本最好用EDTA抗凝剂；血标本要避免溶血；尿标本以浓缩晨尿为好；

答：近年来备受关注的RNAi（RNA interference，RNA干扰）是指双链RNA经酶切后形成很多siRNA（小片段干扰RNA），与mRNA中的同源序列互补结合后，mRNA则失去功能，即不能翻译产生蛋白质，从而起到了对基因表达的阻断作用。其遗传物质的传递顺序一般来说为DNA—RNA-蛋白质，RNA操纵着许多细胞功能。与传统的基因敲除技术相比，RNAi技术简便、费用低、试验周期短，成为功能基因组学研究的有效工具。在实验前，先选定靶基因，根据靶基因的DNA序列和siRNA设计原则（如到Dharmacon公司网站的设计中心页面中寻找），合成siRNA，注意种属不要搞错（曾发现此类不该发生的错误）。

倪语星,<中华检验医学杂志>特约编委.医学博士,教授、博士研究生导师.现任上海第二医科大学检验医学系副主任、临床微生物学教研室主任,上海第二医科大学附属瑞金医院临床微生物科主任、医院感染控制办公室主任等职务.

目的 揭示临床常见细菌分离株的耐药性现状,探讨监测中存在的不足.方法药物敏感试验采用琼脂纸片扩散法,药敏试验数据分析采用WHONET5.3软件,依据美国临床实验室标准化委员会制定的药敏试验结果解释标准以及数据分析和阐述的推荐标准进行.结果(1)收集全国8省市自治区52家三级甲等医院首次分离株44 312株的细菌耐药性监测资料.常见菌株没有明显的变化,仍然以大肠埃希菌、绿脓假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主.(2)分离菌株根据菌株的种类和标本来源进行不同菌种(属)的耐药率分析,分析中发现2003年产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌菌株的分离率分别为20.1%(1 248/6 209)、22.7%(804/3 543),MRSA(苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌)的分离率不低于42.3%,苯唑西林耐药的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的分离率高达74.8%.(3)多数革兰阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南、头孢吡肟、阿米卡星和头孢他啶敏感;未发现对糖肽类抗菌药物耐药的葡萄球菌.结论由于常见菌株对临床常用药物的耐药率不断的增高,应当加强病原菌的耐药性监测。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)不仅对甲氧西林耐药,且具有多重耐药性.目前由于某些菌株在甲氧西林耐药表型上出现不均一性,影响了临床常用的表型检测方法如苯唑西林纸片扩散法、MIC法的准确性,且这类菌株正逐渐增加,并由医院感染向社区感染发展[1].mecA基因和青霉素结合蛋白PBP2a的检测是目前公认的MRSA检测鉴定的金标准,但这两项技术要求高、试剂昂贵,不适合普通临床实验室大量开展[2].有报道使用30μg头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,可克服使用苯唑西林鉴定方法的局限性,具有较好的敏感性和特异性[3-5].本研究对该方法用于临床实验室快速筛选MRSA进行研究。

葡萄球菌是引起医院和社区获得性感染的主要病原菌之一,近年来葡萄球菌对大环内酯类抗生素的耐药性在不断上升.其耐药机制为msrA基因编码的泵出机制、核糖体结构变异、核糖体可诱导变异(MLSb)[1],而诱导型的耐药率随地区有差异[2].现对我院分离的133株葡萄球菌测定其对红霉素、克林霉素耐药性,并分析其耐药表型。

为了解新生儿败血症中分离的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)对消毒剂和抗菌药物的耐药基因状况,我们收集了40株新生儿血液感染的MRCNS进行了β内酰胺类耐药相关基因mecA、红霉素耐药相关基因ermA/B/C、消毒剂耐药相关基因qacA/B等基因检测。

目的 建立RHD基因的测序方法并对9例弱D表型作分子鉴定.方法用间接抗人球蛋白试验(IAT)筛选弱表达的D变异体,聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法扩增RHD基因特异的外显子及其侧翼序列,PCR产物直接序列分析测定核苷酸的变异.结果用PCR-SSP方法特异扩增RHD基因,50份随机Rh阴性(ccdee)样本呈阴性结果,51例随机Rh阳性样本呈阳性结果.扩增产物测序结果表明,15份代表性Rh阳性单倍体型的RHD基因序列和标准序列一致.用所建立的方法对9份弱D表型样本进行测序分析,发现5份有845G＞A突变,3份有1 227G＞A突变,1例有1013T＞C突变.结论所建立的RHD基因测序方法可以用于弱D的分子鉴定.9份弱D表型的分子机理得到明确。

丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科(Flaviviridae),其基因组为单股正链RNA,易变异,目前可分为6个基因型及不同亚型,根据2005年新达成的HCV基因型命名规则共识[1],以阿拉伯数字表示HCV基因型,以小写的英文字母表示基因的亚型(如1a、2b、3c等).由于1型和4型对于聚乙二醇干扰素联合利巴韦林标准化治疗较2型和3型更为耐药,因此HCV基因型检测在临床上具有重要意义.2004年中国<丙型肝炎防治指南>[2]指出,HCV RNA基因分型有助于判定治疗的难易程度及制定抗病毒治疗的个体化方案。

纳米又称为毫微米,是一种长度计量单位,1纳米等于十亿分之一米(1 nm=10-9m).纳米技术(Nanotechnology)是在0.1～100.0 nm空间尺度内操纵原子和分子,对材料进行加工制造后,产出具有特定功能的产品,或对某物质进行研究,掌握其原子和分子的运动规律和特性的一门崭新的综合性科学技术.科学家们发现,物质在加工到100 nm以下时,往往会产生许多既不同于微观的原子、分子,也不同于宏观世界的神奇变化,即产生表面效应、量子尺寸效应、宏观量子隧道效应,以及由这些效应引起的与传统材料所不同的奇异或反常的物理、化学特性.纳米技术涉及面十分广泛,已辐射多个学科.纳米技术在生物医学领域也得到了广泛的发展,虽然它还处于发展初期,但纳米医学作为一门新学科的时代已经到来.纳米技术已经对生物医学检测系统产生影响,其中不同形状、不同大小和不同成分的纳米微粒对生物医学检测水平也将产生根本的变化.而纳米微粒和生物分子轭合物的制备方法在不断更新,生物连接制备的纳米粒子也在逐渐商品化,亦将对检验医学同样产生深远影响。

澳大利亚男科学专家Deviretser和Baker共同提出了一种新的逻辑性男性不育症分类法.这方法全面而新颖,即考虑到传统经验,又避免了仅以精液分析参数为依据的分类法过于笼统的缺点,同时包括了最新进展,值得我们借鉴.该分类法已为我国学者采纳与接受.其主要是将男性不育症分睾丸前、睾丸后和睾丸等因素.而精液生精细胞检查可以判断睾丸生殖功能,有利于将精液生精细胞分析结果与临床结合。