2006年 · 第29卷第02期

抗菌药物耐药性的检测包括常规药敏试验和耐药基因的检测.耐药基因的检测多以聚合酶链反应为基础,可以直接检测标本,从而快速、早期为临床选择抗菌药物提供依据.我国在耐药基因检测的基础研究方面取得了很大成绩,但还缺乏分子检测耐药基因的应用研究。

按照循证医学的理念对检验项目临床应用进行评价,包括技术性能、诊断性能、患者结果、经济性能等严格评价,根据不同的诊断目的和不同的疾病,制定检验项目组合的临床应用指南,为临床医生提供最佳临床实验室诊断服务,以保证患者得到最大受益。

全实验室自动化(total laboratory automation,TLA)又称全程自动化(front to end automation) 是将临床实验室中各种独立的自动化仪器以特殊的物流传送设备串联起来,在信息流的主导控制下,构成流水线作业的组合,形成大规模的全实验室常规检验过程的自动化,国内也有称临床实验室自动化检验流水线[1,2].

目的 探寻结肠多发性腺瘤样息肉(APC)基因启动子1A序列中肺癌甲基化位点及其存在模式.方法用甲基化序列特异性引物,对阳性控制样品(CB+)、阴性控制样品(CB-)、13份正常肺组织及19份肺癌组织进行APC基因启动子1A序列甲基化特异性扩增(MSP),其扩增产物直接测序和进行克隆测序分析.结果在19份肺癌组织中,APC基因启动子1A序列的707、714、719和726位点发生高甲基化,甲基化率分别为95%(18/19)、74%(14/19)、74%(14/19)和74%(14/19),与正常肺组织比较,差异均有统计学意义(P＜0.001).而679和687位点甲基化发生率均为11%(2/19),与正常肺组织甲基化发生率(0/13)接近(P＞0.05).结论在APC基因启动子1A序列中存在CpG胞嘧啶二核苷酸特定甲基化模式,其对肺癌早期诊断可能有重要意义。

目的 探讨湖北地区汉族儿童T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-3(Tim-3)启动子区1541位C>T和574位G>T单核苷酸变异及其与变应性哮喘易感性之间的关系.方法分别采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和引物特异PCR-核酸序列测定技术检测湖北143例哮喘患儿和72名健康儿童Tim-3启动子区1541位C>T和574位G>T单核苷酸变异,计算基因型和等位基因频率.结果湖北地区健康儿童Tim-3启动子区1541位C/C、C/T和T/T基因型频率分别是0.961、0.039和0,而哮喘患儿频率分别为0.935、0.065、0,其基因型频率与对照组差异无统计学意义(χ2=0.3825,P=0.5362); 湖北健康儿童中Tim-3启动子区574位G/G、G/T和T/T基因型频率分别为0.992、0.008和0,而哮喘患儿频率分别为0.941、0.059、0,两组基因型频率差异有统计学意义(χ2=4.134, P=0.042).结论湖北汉族儿童Tim-3启动子区存在多态性变异,其中574位G>T多态性可能与湖北汉族儿童变应性哮喘易感性有关。

目的 对比研究五种酵母菌体外药敏试验方法在测定氟康唑对酵母菌的体外活性检测上的可靠性及实用性.方法分别应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) M27-A常量肉汤稀释法、微量肉汤稀释法,NCCLS及ROSCO纸片扩散法、浓度梯度法测定氟康唑对155株临床分离的酵母菌及4株质控菌株的体外活性.采用WHONET-5软件及SPSS软件对结果进行分析,比较各种药敏试验方法与M27-A常量肉汤稀释法的相关性.结果 4种体外药敏试验方法所得结果分别同 M27-A常量肉汤稀释法进行比较,浓度梯度法一致率为83.9%, NCCLS M44-P纸片扩散法一致率83.1%,ROSCO纸片扩散法一致率为78.1%,微量肉汤稀释法一致率为93.5%.结论 5种酵母菌体外药敏试验方法在检测氟康唑对临床常见酵母菌的体外活性检测上存在一定的差异,本次试验结果表明,微量肉汤稀释法与NCCLS M27-A常量肉汤稀释法的一致性最佳,其方法结果准确可靠、重复性好,适用于常规工作。

目的 探讨尿液混合细胞群(mixed cell group, MCG)在肾盂肾炎诊断中的意义.方法以形态学方法观察578例泌尿系疾病患者的尿液沉渣涂片的MCG,并以荧光的着色及细胞染色的方法对细胞的类别进行判定,同时对白细胞管型、白细胞数量及尿沉渣中活菌数量作了对照比较.结果只有肾盂肾炎尿中出现MCG,急性肾盂肾炎阳性率为88.2%,慢性肾盂肾炎阳性率为96.7%.膀胱炎、尿道炎、前列腺炎、各类肾炎等尿沉渣中未见到MCG.结论 MCG是一群细胞聚集黏附成团的细胞群体,对泌尿系感染患者的尿液中MCG的观察,有助于泌尿系感染部位来源的鉴别及肾盂肾炎的诊断,在肾盂肾炎的鉴别诊断方面具有重要的临床意义。

目的 检测恶性骨肿瘤、良性骨肿瘤及转移性骨肿瘤患者血清中的总碱性磷酸酶(TALP)和骨型碱性磷酸酶(BALP)活性,以观察TALP和BALP在骨肿瘤的鉴别诊断中的价值及在监测恶性骨肿瘤治疗中的作用.方法对2004年积水潭医院骨肿瘤科收治的40例恶性骨肿瘤、40例良性骨肿瘤及14例转移性骨肿瘤患者,采用法国临床化学会推荐的速率法测定血清TALP及酶联免疫吸附(ELISA)方法测定BALP水平.结果恶性骨肿瘤组的TALP活性为(325.55±356.36) U/L,BALP活性为(177.19±240.67) U/L,与同龄对照组TALP (120.70±70.59) U/L ,BALP (61.30±44.45) U/L比较有统计学意义(P<0.05).转移性骨肿瘤组的TALP (100.14±35.39) U/L,BALP (32.93±15.68) U/L,与同龄对照组TALP (57.64±11.06) U/L,BALP (19.92±7.53) U/L比较有显著性统计学意义(P<0.01).而良性骨肿瘤组与同龄对照组相比无统计学意义(P>0.05).同时恶性骨肿瘤与其他两组比较也都有统计学意义(P<0.01),并且恶性骨肿瘤组患者化疗前后的结果也有统计学意义(P<0.05).结论血清TALP和BALP是反映骨肿瘤骨代谢的一个灵敏而简便的生化指标,并对骨肿瘤的鉴别诊断及疗效观察具有一定的临床意义.作为骨肿瘤的检测指标,血清BALP比TALP更为特异和敏感。

目的 应用逆向斑点杂交技术检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型及YMDD变异.方法合成有生物素标记的引物,PCR扩增两种DNA片段,与尼龙膜上的探针同时杂交,BCIP/NBT显色.结果检测21例拉米夫啶治疗中的慢性乙型肝炎患者,11例HBV为基因型B,10例为基因型C;YMDD基序有47.6%(10/21)为YMDD,28.6%(6/21)为YVDD,23.8%(5/21)为YIDD.结论在同一张尼龙膜上检测HBV基因型及YMDD变异,经济实惠、准确快捷,且易于开展。

2003年Sabbioni等[1] 报道,在71%的大肠癌患者血浆中有含表皮生长因子和卵泡抑素结构域跨膜蛋白(TPEF)基因甲基化的改变,TPEF基因异常甲基化有望成为大肠癌早期诊断的有价值的分子标志物.本研究用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术分析32份大肠癌组织标本,以建立检测血浆TPEF基因甲基化异常的方法,现报告如下。

研究证实母血中的游离胎儿细胞可用于无创性单基因病产前诊断[1,2].胎儿细胞仍是检测胎儿染色体异常的惟一来源[3],虽然母血中胎儿有核红细胞(FNRBC)数量很少,但其特异性形态在正常人外周血中极罕见,并可携带完整的胎儿基因.因此,建立富集母血中胎儿细胞的方法则是无创性产前诊断的关键.本研究用3种FNRBC特异性抗体和流式细胞术分选胎儿细胞,并通过计算FNRBC准确率和特异性,以评价分选母血中胎儿细胞的最适宜方法。

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病的一种慢性严重的并发症,约40%的糖尿病患者会出现此并发症.尽管所有的DN最终都会发展成终末期肾病(ESRF),但DN的发生、发展却存在明显的个体及种族差异,因此,遗传因素可能与DN有关。

检测循环中树突状细胞的前体细胞(pDC)亚群对评估肿瘤患者的免疫功能状态,了解自身免疫性疾病的发病机理,观察造血干细胞移植后免疫重建等具有重要价值[1-3]。

目的 制备针对临床常见的六种支原体的特异性单克隆抗体,为临床支原体感染检测提供工具.方法用灭活的支原体颗粒免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤技术制备抗支原体单克隆抗体,采用6种支原体蛋白以酶联免疫吸附试验(ELISA)进行交叉筛选,并用免疫印记法(WB)对其特异性进行鉴定.结果获得针对生殖支原体、梨形支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、肺炎支原体、穿透支原体的特异性单克隆抗体各1株,经ELISA检测证实具有较好的反应特异性,其中,单抗Mg 6H1、Mpri ZW1和 Mpe 6G4在WB 中也同时分别与生殖支原体、梨形支原体和穿透支原体呈特异反应.结论获得针对6种人体常见感染支原体的不同单克隆抗体,它们在ELISA检测中具较好的反应特异性,有望应用于支原体感染检测。

目的 探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)白细胞介素(IL)-18的表达变化及其意义.方法制备新生7日龄Wistar大鼠HIBD模型,应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测对照组和HIBD 3 h、8 h、24 h、3 d、6 d、14 d组病变侧脑皮层IL-18 mRNA和蛋白质的表达,同时进行脑组织病理光镜观察.结果 IL-18 mRNA和蛋白质在对照组中低水平表达[mRNA:0.321 8±0.046 6;蛋白质:(6.033±1.019)个/视野],HIBD后24 h至6 d其水平逐渐增加[mRNA:24 h:0.582 3±0.074 0,3 d:0.697 6±0.107 3,6 d:0.911 0±0.064 7;蛋白质:24 h:(19.133±2.094)个/视野,3 d:(28.900±1.589)个/视野,6 d:(52.883±3.203)个/视野],与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),并于6 d达到最高峰,与其余各组相比差异有统计学意义(P < 0.01),HIBD后14 d其表达已明显下降[mRNA:0.579 3±0.084 2;蛋白质:(16.767±2.381)个/视野],但仍未恢复正常水平(与对照组比较P < 0.01).组织学检查发现HIBD后1～6 d神经元变性、坏死、丢失,胶质细胞显著增生.结论 HIBD后IL-18的表达呈现延迟性上调及其相对持久的模式,提示它可能主要参与了新生鼠HIBD迟发阶段的炎症反应。

目的 建立毛细管区带电泳测定血浆中丙戊酸钠的方法.方法血浆标本经HCl酸化,正己烷萃取,再以NaOH溶液反提取丙戊酸钠.采用75 μm(id) ×37 cm石英毛细管柱分离.电泳缓冲液为15 mmol/L pH 5.7水杨酸钠溶液(含0.5 mmol/L CTAB,15%乙醇),分离电压20 kV,电泳时间6 min,温度20℃,阴极压力进样5 s,阳极检测,波长214 nm.结果血药浓度线性范围25～200 μg/ml,r=0.999, 最低检测浓度0.35 μg/ml(S/N=3),萃取回收率87.4%,方法回收率100.1%,日内、日间变异系数(CV)分别小于4%、6%.结论本方法可以简便、快速、灵敏地测定血浆中丙戊酸钠浓度。

产超广谱β内酰胺酶 (ESBLs)是临床肠杆菌科细菌对β内酰胺类抗生素耐药的重要机制.近年来国内外ESBLs在临床分离菌中的检出率快速上升,其种类也不断增多.国内报道以CTX-M和SHV型ESBLs最为常见[1,2].为了较全面了解本院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株ESBLs的基因分型,经本研究应用聚合酶链反应(PCR)及DNA测序方法,对215株产ESBLs临床分离株的TEM、SHV和CTX-M基因进行分析。

人甲状旁腺激素(hPTH)是维持机体钙磷平衡等生命活动的重要激素, hPTH 1-84、1-34、1-37、44-68、54-84是人体中重要的免疫活性片段[1].HPTH 1-84的分子量为9 500,介于完全抗原和半抗原之间.由于抗hPTH 1-84抗体可测定任何具有免疫活性的hPTH片段, 因此具有重要应用价值.本研究用基因工程表达hPTH 1-84制成3种免疫原,分别免疫家兔后制备抗体,并对特异抗hPTH 1-84抗体和载体BSA抗体的效价进行比较.同时,分别用盐析、Q膜、蛋白A和免疫亲和层析纯化方法对抗hPTH 1-84抗体的纯度、活性和回收率进行研究。

近年来许多实验室信息系统(LIS)中融入了条形码技术,但并没有彻底解决原始检验过程中标本和其信息传递的低效问题.标本流动过程中的低效产生于流动环节,而环节问题不是条形码检验信息系统所能解决的,它隶属于检验物流范畴。

全实验室自动化正在受到广泛的关注,姜傥[1]认为应将整个实验室工作分解成一个个可实现的自动化流程.实验室自动化应包括实验室信息处理自动化及标本处理自动化,并使之能够有机地组合成一个系统.信息处理又可分为申请信息处理及检验结果处理.申请信息自动化就是从临床科室产生检验申请信息到申请信息被检验仪器接受整个过程的自动化处理。

近年来,临床实验室检测自动化的发展十分迅速,实验室全自动化系统检验流水线也开始在我国部分大中型医院引进并应用于临床检验,实现了临床实验室检验现代化的新飞跃。

第二届亚洲检验技师学术大会于2005年9月25日在上海光大国际会展中心国际大酒店胜利开幕,Susumu IWATA会长和丛玉隆主任委员分别致词,吕元主任代表东道主致欢迎词,中华医学会副会长上海医学会会长刘俊和上海卫生局副局长刘国华也出席大会并作了热情洋溢的贺词。

目的 建立利用实验室日常检测数据进行定性免疫测定假阳性监测的室内质控方法.方法测定数据为正态分布,采用半Levey-Jennings质控图法,即以实验室日常不少于20次检测的阳数率为基础,计算阳性率的均值((x-))和标准差(s),绘制质控图,以1+2S为失控规则.如为非正态分布,则采用直接概率计算法.结果半Levey-Jennings质控图法和直接概率计算法均适用于定性免疫测定假阳性统计室内质控.结论为临床免疫常规检测提供了具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。

众所周知,真空采血[1]技术发明于20世纪30年代末,真空采血管具有使用方便、简单、全封闭、防污染等优点,为美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)所推荐,替代了传统静脉采血方式.美国BD公司商品出售的SST管含有惰性胶体[2],此物质在离心后成为血细胞和血清之间的隔离层,从而提高了血清的产量,加强了标本分析前的质量控制,这已为医疗同僚所公认.理想情况下,分析仪的探针直接刺入离心后管子的管盖吸取血样,在最大程度上减少检验人员被血液污染的危险性.但是,目前大多数实验室的常规作法是拔盖之后进行生化检测。

前列腺素D2(PGD2)及其受体介导的信号转导途径在变态反应、气道炎症改变、气道高反应性3个方面起着重要作用,因此受到越来越多学者的关注.本文从以上3个方面综述了PGD2及其受体介导的信号转导途径在哮喘发生中的作用。

目的 探讨对亚胺培南耐药的绿脓假单胞菌(IRPA)的耐药特征及流行现状,以利于医院感染的监测控制.方法采用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)方法对56株重症监护病房(ICU)分离的IRPA进行分子生物学分型;采用琼脂稀释法检测8种抗菌药物对IRPA的最低抑菌浓度(MIC). 结果 56株IRPA用ERIC方法分为33型;IRPA对5种抗菌药物的耐药率≥50.0%. 结论 IRPA的多重耐药性值得关注,ICU内IRPA存在散在的克隆流行态势,应注意监控IRPA在医院暴发流行。

目的 探讨云南地区白细胞介素1(IL-1)基因型分布特点及其与幽门螺杆菌(Hp)感染、定植密度间的关系.方法对符合研究标准的患者,进行Hp感染及Hp定植密度的评定;用PCR-RFLP检测外周血的IL-1B-511、IL-1B+3954、IL-1 RN的基因型.结果 IL-1B-511基因型中,C/C 24例(17.3%)、C/T 75例(54.0%)、T/T 40例(28.8%);IL-1B+3954基因型中,C/C 132例(95.0%)、C/T 7例(5.0%)、无T/T;IL-1RN位点L/L与1/2基因型各占111例(79.9%)、27例(19.4%)、2/2基因型1例.IL-1B-511含T基因型是DU患者Hp感染的易感因素,OR为6.1.在≥60岁亚组中,IL-1B-511 含T基因型是Hp定植密度程度的危险因素,OR为8.0.结论东西方非胃肿瘤患者人群IL-1基因型分布存在差异,为研究东西方人群Hp感染相关临床结局类型差异的原因提供线索.IL-1B-511 含T基因型与DU患者Hp感染率高及与易形成重度Hp感染相关。

目的 建立环介导的等温扩增快速检测葡萄球菌耐药基因mecA的方法.方法利用包被有SPA单克隆抗体的磁珠富集样品中的金黄色葡萄球菌,快速提取其DNA, 用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增金黄色葡萄球菌耐药基因mecA,扩增条件为65°C 保温1 h.在反应过程中,荧光探针与mecA基因的扩增产物互补序列结合,产生荧光,通过检测反应管中的荧光值来判定结果.结果该方法的最低检测限为10 CFU/ml,与M-H培养基苯唑西林药敏试验结果相比较,灵敏性99%,特异性90.9%;而与PCR方法比较,灵敏性100%,特异性100%;试验时间缩短为1 h.结论该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,适用于检测临床标本中的MRSA。

目的 证实临床分离的部分肺炎克雷伯菌(Kp)除产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)外,还同时产AmpC酶,并探讨了AmpC酶编码基因存在方式.方法对临床分离的可疑同时产ESBLs和其他高活性广谱β内酰胺酶的8株Kp进行接合试验,并对供体菌和接合子同时采用三维试验、ESBLs试验、AmpC酶诱导试验和β内酰胺类抗生素最低抑菌浓度(MIC)试验测定,并进行AmpC基因携带状态、表达方式和酶活性分析.结果 8株Kp菌通过接合试验共得到10株接合子,其中有6株供体菌均只得到同时表达AmpC和ESBLs的1种接合子;另2株供体菌,各得2株接合子,1株同时表达AmpC和ESBLs,1株仅表达ESBLs;8株供体菌均未得到单独表达AmpC的接合子.表达AmpC接合子的耐药表型与受体菌非常接近,酶的活性也必须用克拉维酸(CA)和邻氯西林(CLO)两种酶抑制剂才能完全抑制,其中有5株可被头孢西丁(FOX)诱导使某些指示药出现截平现象.结论在Kp中,已出现质粒携带的AmpC基因,有可能与编码ESBLs的基因存在于同一质粒上,并具有诱导型和非诱导型两种表达形式。

在临床微生物学诊断、食品监测、药物生产等研究中均对超广谱β内酰胺酶(ESBL)有广泛需求,而目前市售商品酶都是从天然耐药菌提取的低纯度酶,且价格高昂。

绿脓假单胞菌(PA)是医院内最常见的条件致病菌之一,对多种抗菌药物表现耐药[1].研究发现PA细胞膜上的主动外排泵是导致其多重耐药的主要原因之一,主动外排泵由菌体细胞膜的内膜蛋白与外膜蛋白组成,在六种外排泵中外膜蛋白OprM最为常见[2].本试验对临床分离的PA多重耐药菌主动外排表型及OprM基因进行筛选,探讨PA多重耐药和主动外排的分子机制。

目的 比较不同性别患者标本中支原体和衣原体分离率及支原体对抗生素的耐药性.方法采用生物梅里埃公司试剂盒,对1 059份疑为非淋菌性尿道(宫颈)炎患者的泌尿生殖道标本进行了支原体和衣原体检测,同时对支原体检测阳性标本进行了菌落计数和抗生素敏感性检测.结果 1 059份标本中支原体和衣原体分离率为36.3%和5.6%.其中男性标本中支原体和衣原体分离率为14.8%和3.7%,女性标本中支原体和衣原体分离率为52.6%和7.2%.解脲脲原体菌落计数结果,≥104 CFU/ml 女性占73.2%,高于男性的60.3%.人型支原体菌落计数结果,≥104 CFU/ml女性占30.5%,高于男性的25.0%.药敏结果显示支原体对原始霉素保持敏感(耐药率为0.9%),对强力霉素、交沙霉素、四环素的耐药率较低(4.1%、5.0%、13.1%),但对氧氟沙星、红霉素的耐药率较高(37.8%、27.9%).结论非淋菌性尿道(宫颈)炎患者中支原体和衣原体是主要的病原,监测支原体的耐药性对指导临床治疗具有重要意义,原始霉素和强力霉素可作为治疗支原体感染非淋菌性尿道(宫颈)炎的首选药物。

从中华医学会医学伦理学分会第十三次学术年会获悉,随着医学,特别是生命科学的发展及人们观念的改变,由此引发的社会、伦理和法律问题,有些已成为社会讨论的热点.近5年来,涉及伦理进展与伦理讨论的问题主要集中在以下几方面。

人类和多个物种的基因组全序列测定即将完成,生命科学研究逐渐从结构基因组学转向功能基因组学;在了解基因功能的同时,对基因表达产物--蛋白质的研究愈发重要.蛋白质是整个生命活动的基础,目前至少有40% ～60%的基因编码蛋白质功能是未知的[1]。

临床微生物实验室数据的保存、交流的发展趋势是应用电子数据文件,包括细菌药敏试验数据.国家有关部门已经制定了一些相关软件开发和使用的标准[1],但这些标准很少包括药敏试验数据相关的内容.笔者就美国临床实验室标准委员会有关药敏试验数据分析和应用指南(简称M39-A)[2]加以介绍,以利于专业工作者提高对数据分析的认识水平,充分发挥药敏监测数据的实际应用价值。

所谓"即刻性"质控法实质上是将数据处理过程中对异常值(即离群值)的判断及舍弃的方法用于室内质控, 由于它只要测定3～4次后即可提供检测过程有无失控的信息,故称之"即刻性"质控。

答：由序列信息辨认的基因有以下6类： 1．反义（Antisense）：一个未知功能的基因，如果和另一基因在染色体相同座位上编码（具有外显子重叠），它也应该有自己的名字。如果这个新基因调节另一基因，就应该在受它调节的这个基因名字后加后缀AS表示反义。如“胰岛素样生长因子2，反义（insulin-like growth factor 2，antisense，IGF2AS）”。这个基因名字不应当倒写。

由北京万泰生物药业有限公司承担的国家生物类高技术产业化示范工程“艾滋病重组抗原及抗体诊断试剂盒产业化”项目近日竣工并投入生产。