2005年 · 第28卷第07期

人类的衣原体感染范围涉及很广,如沙眼、生殖道感染、支气管炎及肺炎、鹦鹉热等.所有这些感染的正确诊断主要依靠实验室的检测。

当前,支原体学(Mycoplasmology)这门古老而新兴的边缘学科,今天再度受到人们的关注.百余年前,人们即发现和分离到支原体,并认为人类和动植物的某些疾病与感染支原体相关联,然而终因认识水平所限,研究不可能深入。

DNA甲基化是研究最为深入的表观遗传学机制.该机制的异化可导致基因表达的异常及基因组稳定性的降低,继而促进肿瘤发生和发展.启动子CpG岛的高甲基化已被认为是与遗传性缺陷同等重要的、造成抑癌基因在肿瘤中失活的分子生物学机制。

自从1946年瑞典物理化学家Tiselius教授研制的第一台商品化移界电泳系统问世以来,在近半个多世纪的时间里,电泳技术发展极其迅速。

乙型肝炎病毒感染是一个全球性的健康问题,根据美国疾病控制中心的报告[1],全球有将近20亿的感染人群.其中3.5亿人为慢性持续感染。

目的 研究血清蛋白质组和尿代谢物组协同分析乳腺癌诊断方法.方法用双向电泳、高效液相色谱和液质联用技术对7份正常人与14份乳腺癌患者血清蛋白质组和尿代谢物组进行分析,从中寻找差异蛋白和代谢组模式差异.结果与正常人相比,乳腺癌患者血清中谷胱甘肽S-转移酶M5呈高表达状态,尿中乳清酸核苷、1-甲酰化腺苷、S-腺苷-L-蛋氨酸及N2-甲酰化鸟苷等4种核苷代谢物组成模式异常.结论乳腺癌患者体液内化学物质与正常人相比具有特异性模式差异.经肿瘤蛋白质组与代谢物组协同研究,有望建立肿瘤早期诊断新方法,进行肿瘤发病机理研究。

目的 用反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者血清9种甘氨结合胆汁酸和游离胆汁酸的浓度,建立ICP疾病的胆汁酸谱,以增加对ICP诊断的灵敏度和特异性.方法用柱前衍生RP-HPLC法测定11例ICP患者,11例乙肝患者,11名正常孕妇血清9种胆汁酸浓度.结果 ICP患者血清胆汁酸以甘氨胆酸(GCA)和甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)增高为主,约为正常孕妇的20倍,GCA∶ GCDCA约为3.5∶ 1;ICP患者血清游离胆汁酸的浓度与正常孕妇相似;ICP与乙型肝炎伴转氨酶轻中度增高的胆汁酸谱也不同.因而ICP患者的胆汁酸谱具有一定的特异性,可以对ICP进行诊断及与乙肝进行鉴别诊断.结论本研究在国内首次报道了ICP患者的特征胆汁酸谱,将有助于ICP的诊断和鉴别诊断。

目的 探讨丙二酰二醛修饰的低密度脂蛋白(MDA-LDL)与冠心病及其他血脂之间的关系.方法选择冠心病患者组68例,正常对照组74名.采用酶联免疫吸附分析(ELISA)的方法检测人血清中MDA-LDL,同时对受检者的血脂水平进行检测,结果进行统计学分析.结果冠心病患者血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平为(115.62±53.4)U/L,明显高于正常对照组(86.7±27.6)U/L(P< 0.05); MDA-LDL与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的比值在冠心病患者组为(43.25±2.64) mmol/U,明显高于正常对照组(33.74±1.58)mmol/U (P<0.01).血清总胆固醇(TG)、LDL-C与MDA-LDL水平呈显著正相关,相关系数r= 0.486,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与MDA-LDL水平呈负相关, 相关系数r= 0.402.结论 MDA-LDL与冠心病有着非常密切的关系,参与冠心病的发生发展过程。

先兆子痫是产科常见的严重并发症,严重危及母婴安全.随着先兆子痫免疫学改变发现的逐渐增多,对其免疫功能相关基因的研究将有助于病因的最终阐明。

目的 探讨整合子介导耐药在多重耐药绿脓假单胞菌中所起的作用.方法采用纸片扩散法进行药物敏感试验,筛选多重耐药绿脓假单胞菌;应用三维试验法区别β内酰胺酶型别;采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药菌中的整合子基因,并应用DNA测序研究整合子内携带的耐药基因.结果多重耐药绿脓假单胞菌中整合子检出率为42.4%,所检出整合子共有3种长度即750、1 000、2 500 bp,它们分别携带了aadB、aadA2、aadB、aac6-II和PSE-1基因.结论整合子参与是形成绿脓假单胞菌多重耐药的重要因素。

目的 研究SynaptotagminⅡ(简称Syt2)在RBL-2H3(简称RBL)胞吐中的作用.方法利用钙离子载体和抗原分别刺激Syt2+和Syt2-(分别为Syt2过表达和表达减弱的RBL),诱导其活化而分泌,检测分泌的β-氨基已糖苷酶、组织蛋白酶D和5-羟色胺,分析Syt2对于细胞分泌的影响.结果与对照相比,Syt2+分泌的β-氨基已糖苷酶无明显区别,而Syt2-分泌的β-氨基已糖苷酶增加达3.5倍,结果说明Syt2的过表达对β-氨基已糖苷酶分泌无影响,而Syt2表达减弱却促进β-氨基已糖苷酶的分泌.与对照相比,Syt2+分泌的组织蛋白酶D减少近一半,而Syt2-分泌的组织蛋白酶D增加近1倍,说明Syt2的表达量与组织蛋白酶D分泌量成负相关关系.与对照相比,Syt2+分泌的5-羟色胺无明显差别,而Syt2- 分泌的5-羟色胺有少量增加,说明Syt2的表达量对于5-羟色胺分泌有轻微影响.结论Syt2主要对于RBL溶酶体胞吐起负调控作用。

目的 探讨从蛋白及细胞水平检测人神经元特异性烯醇化酶(NSE)在非神经内分泌性肿瘤细胞系中的表达及其意义.方法用NSE特异引物和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹、免疫细胞化学(ICC)染色技术检测NSE在肿瘤细胞中的表达.结果从转录蛋白及细胞水平都能从黑色素瘤细胞株WM451和WM 983A、前列腺癌高转移细胞株PC-3M和低转移细胞株PC-3、乳腺癌细胞株MCF-7、结直肠癌细胞株HT-29和SL180、胃癌细胞株MGC-803中检测到NSE的表达,阳性率为100%.结论 NSE除在神经内分泌细胞表达外,在肿瘤细胞亦有更为广泛的表达谱,其作为神经内分泌来源肿瘤标志物的作用值得深入研究。

目的 探讨仔鼠出生前后小鼠胎儿细胞在母鼠体内存在的情况,为应用循环于母血中的胎儿细胞进行基因诊断提供科学依据.方法将非转基因的正常母鼠和以HS2、HS3元件、β-珠蛋白基因启动子指导的红系特异表达绿色荧光蛋白(GFP)基因的转基因公鼠交配,仔鼠出生前后采集母鼠的外周血用流式细胞仪检测其中表达GFP细胞的比例,并用PCR对母鼠和仔鼠的鼠尾DNA及母鼠的外周血进行检测.结果在仔鼠出生前母体外周血中未检出表达GFP的细胞,而分娩后1～3周此类细胞含量达到峰值,4～5周后将逐步消失.PCR检测证实母鼠体内没有外源GFP基因的DNA片断,但分娩后其外周血中则存在GFP 基因阳性片断,这与荧光激活细胞分选仪(FACS)的检测结果一致.结论转基因细胞是一种良好的标记物,可以用来观察胎儿细胞在母体中存在的规律,为使用母体外周血进行基因诊断提供了依据。

目的 探讨膀胱肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化状态及其意义.方法收集30对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)检测hMLH1基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 30对膀胱癌组织、癌周正常组织中hMLH1基因的甲基化阳性率分别为10/30、1/30,二者差异有统计学意义(P<0.01);hMLH1基因甲基化阳性率在Ta～ T1期、T2～ T3期膀胱癌中分别为7/19、3/11,二者差异无统计学意义(P>0.05);在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌中分别为7/18、2/9、1/3,三者差异无统计学意义(P>0.05).结论错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,但与膀胱癌的临床病理特点无显著相关性,提示hMLH1的异常甲基化可能参与了膀胱肿瘤的发生。

CD59是一种发现于体内几乎所有细胞的膜抗原,可与C8及C9结合阻止膜攻击性复合体(MAC)形成,抑制补体造成的细胞破坏。

糖尿病肾病是糖尿病最常见的慢性并发症之一.糖尿病肾病早期无明显症状和体征,尿蛋白常规检查也多为阴性,这给早期诊断造成困难。

长期以来,有为数不少的肝病患者因病因不明或治疗效果不佳(包括少量病毒感染阳性患者)导致病情加重,给病人造成巨大痛苦。

金黄色葡萄球菌是社区感染和医院感染的主要病原菌之一.其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)具耐多药特征已是临床抗感染化疗的难题之一。

妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是指妊娠期出现搔痒及黄疸为特点的并发症.其发病原因未完全阐明.血管内皮生长因子(VEGF)是一种强烈的血管内皮细胞促分裂因子。

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设计合成多聚合酶链反应(PCR)通用引物,结合限制性片段长度多态性(RFTL)分析,建立了腺病毒性角结膜炎的检测方法,初步应用于急性角结膜患者眼拭子标本的检测。

肠腔上皮不断与摄入性抗原及肠道内菌群接触,作为体内重要的免疫防御系统的肠上皮内淋巴细胞(intestine intraepithelial lymphocytes,iIELs)含有大量T淋巴细胞,包括TCRαβ和TCRγδT细胞,CD4+和CD8+T细胞。

为了解近年来我院住院病人血培养中病原菌的种类,我们对我院2000-2003年住院患者血培养标本的病原菌分类进行了分析。

流式细胞仪的应用,使淋巴细亚群分析结果的准确性、稳定性得到极大地提高,为淋巴细亚群分析的临床应用起了良好地推进作用;同时也提高了临床检测水平。

我国是乙型肝炎高发区,每年约有1%的乙型肝炎患者发生重型肝炎,而常规内科治疗病死率极高,严重影响了国民的身体健康及经济发展。

近年来,艾滋病临床治疗失败中的耐药性问题,已经引起了越来越多的关注.在此背景下,耐药性检测逐步成为优化艾滋病联合化疗方案的有力工具。

核酸扩增是基因诊断技术中最常用的方法之一,目前核酸扩增的方法很多,如聚合酶链反应(PCR)、依赖核酸序列扩增(nucleic acid sequence-based amplification, NASBA)、自主序列复制(self-sustained sequence replication ,3SR)以及链置换技术(strand displacement amplification, SDA)。

基因诊断技术目前已广泛应用于临床疾病的体外诊断及治疗疗效的评价,其应用范围涉及到从传染性疾病到人类遗传性疾病的诊断与治疗。

2004年9月,从1例高热患儿的血液及脑脊液标本中同时分离出依鲁慕沙门菌(Salmonella irumu).患儿,女,2个月.足月顺产,出生体健,母乳喂养,患儿及母亲均无传染病及疫区接触史。

目的 研究人类免疫缺陷病毒(HIV)/丙型肝炎病毒(HCV)共感染对两种病毒感染实验室诊断的影响.方法对300例经免疫印迹试验(WB)确认的HIV感染者,以酶免疫测定HCV抗体,测定CD4/CD8计数;其中197例测定病毒载量,逆转录聚合酶链反应检测HCV核酸,阳性样品限制性片段长度分析丙肝分型,比较共感染和非共感染组在各检测诊断指标的差别.结果 HCV诊断:HCV抗体阴性组中19.5%为核酸阳性.多元回归分析,HCV核酸阳性,1b+2a混合感染,1b 基因型的感染3个因素对HCV EIA检测的S/CO值的升高有独立的显著影响. HIV 诊断:300例,共感染组和非共感染组HIV ELISA A<3的样本比例分别为4/265,5/41,有P<0.01的差异有统计学意义; A>3的样品中CD4分组后按比例取77份比较WB条带,共感染组P55条带出现率显著高于非共感染组(16/30,12/47,P<0.01).结论 HIV免疫抑制可造成很高的HCV抗体假阴性率,该人群推荐HCV核酸定性检测.共感染对HIV ELISA检测的影响表现为强阳性比例的显著提高;对HIV WB各主要诊断条带未见影响,共感染组p55条带比例显著高可能提示病毒间免疫和分子水平相互作用.对HCV EIA-3的S/CO值有独立影响的因素包括HCV核酸阳性,1b+2a混合感染,1b 基因型。

目的 建立沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白基因(omp1)上游引物5′末端地高辛标记裂解酶片段长度多态性(CFLP)分型方法,并对Ct临床分离株进行分型.方法取临产孕妇宫颈刮片及其新生儿鼻咽拭子组成母婴配对标本300对605份,用套式聚合酶链反应扩增Ct omp1第四可变区;用建立的CFLP方法对其进行基因分型.结果孕妇宫颈Ct检出率11%(33/300),母婴传播率24.2%(8/33); 8对Ct阳性母婴配对标本CFLP图谱呈四类,经测序证实分别为E、F、H、D型(各3、2、2、1对),各占37.5%、25%、25%和 12.5%,且每对母子CFLP图谱完全一致;同一标本不同批次和相同基因型不同标本的CFLP图谱一致.结论上游引物5′末端地高辛标记Ct omp1 CFLP分型方法灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、费用相对低廉,无放射污染,是一种极具潜力的Ct基因分型方法。

目的 表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定.方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167～434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性.结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167～aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct 感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1:1 280以上.结论表达的重组外膜蛋白2aa167～aa434具有良好的免疫性。

目的 浙江新分离的汉坦病毒ZJ4、ZJ7毒株,与20年前浙江分离的汉坦病毒Z10疫苗株的M片段核苷酸序列进行比较,揭示它们之间的差异.方法提取汉坦病毒RNA,利用逆转录-聚合酶链反应扩增病毒部分M基因片段,克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析.结果汉坦病毒浙江新分离株ZJ4、ZJ7均为 HTN型病毒,ZJ4、ZJ7株与Z10株部分M片段核苷酸的同源性分别为88.3%和92.3%.结论新分离株ZJ4、ZJ7株与疫苗株Z10株分离时间跨度有20多年,其相互间变异不大,证实了HTN型汉坦病毒基因的稳定性。

目的 为建立人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染检测方法,表达HCMV早期复制的标志物pp65蛋白,以制备相应的抗体.方法将pp65全基因和其亲水性强、有抗原代表性的片段(pp65 hp)分别克隆到表达载体pET22b(+)中诱导表达,并以免疫印迹考察重组蛋白的抗原性.结果重组rpp65全蛋白表达量低于全菌体蛋白的5%,而rp65 hp蛋白获得高效表达,约为全菌体蛋白的40%,并与HCMV IgG抗体特异性结合.结论亲水性pp65 hp片段有较好的抗原性,可以制备相应的抗体,来检测HCMV活动性感染。

目的 探讨人类免疫缺陷病毒/艾滋病(HIV/AIDS)患者中和抗体保守表位氨基酸变异特征,为开展中和抗体免疫治疗和疫苗设计奠定理论基础.方法 RT-PCR及nest-PCR扩增HIV/AIDS患者HIV-1 外膜env C2～C3区基因,双脱氧终止法进行核酸序列测定,翻译为氨基酸序列,并与HIV-1 Sequence Database参考毒株中和抗体表位数据比对辨别其保守表位氨基酸突变情况.结果 HIV-1外膜蛋白gp120 C2～C3区,HIV感染者和AIDS患者CD4结合位点(CD4BS)、CD4诱导(CD4i)、2G12三种类型中和抗体保守表位氨基酸均存在突变,两组病例表位突变率差异无统计学意义(均P＞0.05); CD4BS保守表位突变有370E/Q (12.1%),370E/K (4.5%),266A/S (1.5%), 368D/E (1.5%); CD4i保守表位突变有370E/Q (12.1%),370E/K (4.5%), 381E/D (7.6%),381E/V(1.5%);2G12保守表位突变有295N/V(19.7%),295N/T (6.1%),295N/D、295N/K、295N/E (各1.5%),297 T/I (9.1%),297T/S、297T/N(各1.5%).结论我国HIV/AIDS患者HIV-1 外膜蛋白gp120 C2～C3区中和抗体CD4BS、CD4i、2G12保守表位氨基酸均存在突变,但尚处于低突变水平;不同类型中和抗体保守表位各氨基酸位点的变异程度有差异。

答:1949年,Metropolis 和von Meumann首次发明这种统计学技术方法,用于预测某种后果发生的几率或可能性.此方法广泛用于社会、经济、工业、商业、医学等各个领域。

答:抗生素是指微生物在生命过程中产生的代谢产物,它是一类天然有机化合物,具有选择性地抑制或杀灭病原微生物的功能。

答:Time>MIC(或T>MIC):是指药物浓度高于MIC的时间.它是决定β内酰胺类药物、大环内酯类(阿奇霉素除外)、克林霉素等抗菌药物疗效的重要参数。

答:PK-PD系指药代动力学(pharmacokenetics,PK)及药效学(pharmacodynamic,PD)。

由中国人民解放军医学检验学会主办,南京军区医学检验分会承办的全军第十届检验医学学术会议2005年6月5?日在井冈山召开。

中华检验医学分会蛋白质组学与肿瘤标志物专业委员会联席工作会议于2005年5月28日在济南召开。

2005年4月29日出版的<中国新闻出版报>又一次公布了新闻出版总署、全国"扫黄""打非"工作小组办公室宣布取缔的非法期刊名单,在被取缔的60种期刊中有医学期刊16种,加上2004年7月13日和11月19日公布的非法报刊名单中的11种医学期刊,非法医学期刊达27种。

为维护中华检验医学杂志的声誉和广大读者的利益,根据中华医学会杂志社的统一要求,中华检验医学杂志编辑委员会就一稿两投和一稿两用问题的处理声明如下。

<中华检验医学杂志>2005年第2期178页刊登了"细菌感染患者246例血培养阳性结果分析"一文,提出几点意见供大家商榷: