2004年 · 第27卷第09期

蛋白指纹图谱技术(surfaced enhanced laser desorption／ionization，SELDI)是随着蛋白质组学的发展而出现的新兴实验室诊断技术，也是2002年诺贝尔化学奖的主要应用技术，适用于各种疾病特异性蛋白指纹图谱的识别和判断；具有快速、简便、准确和超敏感的特点。它的诞生，将对传统临床实验室诊断技术带来新的挑战，是实验室诊断技术的革命。为总结和推动这一新兴诊断技术的发展和临床应用，由中华医

由中华医学会、中华医学会检验分会主办的第二届世界华人临床生化和检验医学大会暨第六届全国检验医学学术会议于2004年6月24∽27日在南京召开。中华医学会副秘书长赵书贵研究员，中华医学会检验分会主任委员丛玉隆教授，中华医学会检验分会副主任委员、卫生部临床检验中心主任申子瑜研究员出席会议。会议共收到论文3000多篇，来自全国和世界各地的华人学者以及国外学者2200多

日本奥林巴斯内窥镜和生物显微镜等产品进入中国市场已有40多年历史。日本奥林巴斯株式会社为加强亚洲地区，特别是中国市场的销售与服务，最近在北京成立了奥林巴斯(北京)销售服务有限公司，以利实现奥林巴斯产品的直销，降低成本，并通过对仪器的维修检验等市场技术支持服务，进一步加强与用户的直接接触，达到优质高效的服务，进一步提高用户对奥林巴斯产品的满意度。

结核病是严重威胁人类健康的全球性疾病。近年来，耐药结核分枝杆菌的分离率不断向上，给结核病的控制带来新的难题。

中华医学会杂志社出版发行部常年办理本刊的零售／批发业务。读者可以直接订阅。直接订阅全年可享受优惠价。2005年本刊为月刊，每册单价14元，年价。168元，年优惠价151．20元。优惠订阅截止日期2004年11月30日。订阅电话010-65249989-1333／1332，65251918。

经历了传染性非典型肺炎(又称严重急性呼吸综合征, SARS)的疫情之后,人们再次感受了微生物的威力和感染性疾病的凶险.SARS改变了医院的很多工作模式或制度,如建立发热门诊、让发热的初诊患者戴口罩、医护人员穿戴防护衣和护目镜等[1].的确,许多SARS疫情与医院感染密切相关.通过采用严格的医院感染控制措施,最终使疫情得以控制。

细菌鞭毛纤细,直径只有10～30 nm,远低于光学显微镜的分辨率,只有采用特殊的染色方法才能在普通光学显微镜下观察其形态.由于细菌鞭毛染色在细菌鉴定中起着很重要的作用,故以下将对其方法及其应用进展作一论述。

床旁分析(point-of-care testing, POCT)是指在患者身旁所进行的实时医学检验.POCT是一类极具潜力的检测技术,可提高效率、降低成本,具有缩短检验周期(TAT)、需样量少、操作简单、使用方便等优点.同时,其结果和传统或参考方法所得结果具有可比性,并在临床可接受范围内。

王鸿利教授是我国著名的实验诊断学和血液学专家,是我国检验医学教育的奠基人之一,也是上海第二医科大学检验医学专业的创始人之一.现任上海第二医科大学附属瑞金医院终身教授、主任医师、博士研究生导师。

李若瑜 <中华检验医学杂志>编辑委员会委员,四川省籍, 1960年生. 现任北京大学第一医院皮肤性病科教授、主任医师、博士研究生导师;享受国务院政府津贴.李若瑜教授1982年毕业于北京医科大学医疗系,1986年获北京医科大学皮肤病学医学硕士学位.曾多次赴日本千叶大学进修.在北京大学第一医院皮肤性病科历任住院医师、主治医师、副主任医师、副教授。

目的 探讨并建立微流控芯片的电泳分离方法,用于快速分离尿蛋白.方法利用照相平板湿蚀刻法在5 cm×5 cm×0.1 cm石英玻片上,刻制管道宽度为70 μm、深度约40 μm的十字形电泳泳道,以500 V为进样电压、2 000～2 500 V为分离电压、pH 10.5的75 mmol/L 硼酸缓冲液为电泳液分离尿蛋白. 结果在2～3 min完成电泳,纯牛白蛋白、人运铁蛋白、人IgG均可得到单一分离峰,其混合样品亦可得到较好分离.在38例尿蛋白阳性患者中,用该法检测发现溢出性蛋白尿3例、选择性蛋白尿9例、非选择性蛋白尿26例,8例健康对照未检出蛋白峰.结论本法具有快速、简便、检测成本低的特点,依据电荷和分子量的不同,可将蛋白尿初步分为溢出性蛋白尿、选择性蛋白尿、非选择性蛋白尿,有利于临床的诊断和预后判断,有较好的应用前景。

目的 研究分析我国南方汉族人脊髓小脑性共济失调(SCA)不同基因亚型的分布状况.方法对临床诊断为SCA的36个家系43例患者和散发38例患者,采用聚合酶链反应(PCR)对SCA病的三核苷酸重复(TNR)片段进行扩增,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像分析软件计算其长度,推算所有正常和异常扩增等位基因内TNR重复次数.结果我国南方汉族人群的SCA患者中SCA3是最常见的类型,占42.0%,而SCA2、SCA1、SCA7、SCA6和SCA12型分别为7.4%、4.9%、3.7%、2.5%和1.2%,未检出SCA8、SCA10、SCA17、DRPLA和FRDA亚型.结论在家族性和散发性SCA患者中,SCA3为最常见类型,PCR检测可确立大部分患者的基因亚型。

目的 探索甲状腺功能紊乱者最适实验室诊断指标.方法采用化学发光免疫技术(CLIA)测定不同人群中三碘甲状腺原氨酸(TT3)、甲状腺素(TT4)、促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)浓度,比较受试者工作特征曲线(ROC)下面积及频数分布散点图分离效果.结果甲减诊断 ROC值TSH: 0.94±0.02, FT3:0.70±0.07,FT4:0.92±0.04,FT4/TSH比值:0.95±0.02;甲亢诊断ROC值分别为0.86±0.05, 0.82±0.03, 0.83±0.06, 0.90±0.05.从频数分布散点图显示,FT4/TSH的分离效率甲减93%,甲亢85%.结论 CLIA法测定FT4/TSH比值显示出最佳的性能与分离效果,可提高甲状腺功能的诊断效率,FT4/TSH比值应被推荐为甲状腺功能评价的首选指标。

目的 探讨肿瘤坏死因子-a(TNF-a)诱导Graves病甲状腺细胞凋亡与相关蛋白表达在Graves病(GD)发病关系中的意义.方法采用免疫组织化学S-P方法检测50例Graves病患者TNF-a,并检测对照组对Fas表达的影响.采用原代细胞培养方法进行细胞培养,细胞培养液中的sFas含量采用ELISA法检测.Fas/sFas mRNA检测采用半定量RT-PCR法. 结果含有TNF-a GD组细胞凋亡率为92.6%,显著高于对照组的凋亡率(36.0%) (P<0.01).其含有TNF-a GD组甲状腺细胞sFas、Fas/sFas mRNA含量与对照组比较差异有显著意义(P<0.01). 结论 TNF-a诱导Graves病甲状腺细胞凋亡及凋亡相关蛋白sFas、Fas/sFas mRNA有一定水平的表达,这些改变可能是TNF-a破坏甲状腺细胞的重要机制之一。

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测细胞角蛋白19(CK19)基因表达在乳腺癌诊疗中的应用价值.方法采用FQ-PCR法,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内对照,测定15名健康女性体检者、25例良性乳腺疾病和76例乳腺癌患者外周血中CK19的表达量.结果 CK19和CK19/GAPDH在正常对照组和良性乳腺疾病组间的差异无显著意义(P>0.05),而乳腺癌组则显著高于前两组(P<0.05),GAPDH在三组间的差异均无显著意义(P>0.05).乳腺癌组的CK19和CK19/GAPDH阳性率为53.9%(41/76),而另两组均为阴性.27例乳腺癌患者术前,化疗后1、28和56 d CK19和CK19/GAPDH均呈下降趋势,但化疗后1和28 d与术前比较,差异无显著意义(P>0.05),化疗后56 d则显著低于术前(P<0.05).结论 FQ-PCR技术是较灵敏和特异的快速定量检测CK19方法,可用于乳腺癌的诊断和疗效监测。

目的 对红细胞(Red blood cell, RBC)与白细胞(White blood cell, WBC) 计数参考方法的结果进行比对,以保证结果的可靠性.方法按照国际血液学标准化委员会的要求,建立红细胞与白细胞计数的参考方法.使用Eightcheck-3WP和Cellcheck-400 为比对物质,同时在卫生部临床检验中心和日本参考实验室进行检测并将结果进行比对.结果红细胞计数结果的差别可控制于2%以下,白细胞计数结果的差别可控制于3.5%以下.结论红细胞与白细胞计数参考方法检测结果的可比性良好,该比对模式的建立保证了参考方法检测结果的准确性和可靠性。

由于抗生素的广泛应用、滥用造成细菌耐药性日趋严重,已有许多关于多重耐药菌株感染,导致患者病情加重甚至造成重症患者死亡的报道.临床在重症患者的治疗中,及时获得病原菌的药敏结果,对于争取抢救时间具有十分重要的意义.为了解近年来当地细菌的耐药性情况及其发展倾向,本研究通过对我院2001年2月～2003年7月分离的1 566株革兰阴性杆菌的耐药性以及抗菌药物使用情况进行了回顾性分析。

2002年11月16日我国广东省佛山市发现第一例传染性非典型肺炎(严重急性呼吸综合征,SARS)患者,其传播途径主要通过近距离空气飞沫和密切接触传播,传染性极强 [1,2].本研究采用军事医学科学院微生物流行病研究所从一例北京SARS患者的肺组织中分离的新型冠状病毒感染Vero E6细胞制成抗原片,对2月份收集的广州地区52例SARS患者血清进行了间接免疫荧光检测(IFA)及分析,以期为SARS的实验室诊断提供参考。

传染性非典型肺炎又称严重急性呼吸综合征(SARS),是一种新发现的传染病[1-3], 由SARS 冠状病毒(CoV)引起.目前尚存在感染者体内是否产生IgG、IgM抗体,能持续多久?是否为保护性抗体等一系列亟待解决的问题.本研究利用欧蒙(德国)试验免疫制品有限公司提供的间接免疫荧光法,检测抗SARS-CoV 的IgG、 IgM抗体试剂盒,测定SARS患者血清(浆)中IgG、 IgM抗体。

2002年末至2003年春夏,一种突如其来的疾病-传染性非典型肺炎(严重急性呼吸综合征,SARS)曾一度在我国和世界上30多个国家和地区肆虐.本研究对34例SARS临床诊断病例和曾经密切接触患者的医护人员血清检测了抗-SARS病毒(抗-SARS-CoV)抗体,对IgM和IgG抗体产生规律做了初步探讨。

目的 采用分子生物学技术鉴定凝固酶阴性葡萄球菌(CNS).方法用16S～23SrDNA内转录间隔区序列PCR(ITS-PCR)技术,对6株质控菌和171株已通过AutoScan-4微生物分析仪鉴定过的CNS临床分离株进行分型鉴定.结果质控菌株及经API Staph系统确证的11种CNS得到各自不同的ITS-PCR电泳类型,建立了该技术在本实验室的CNS初级数据库,包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、华纳葡萄球菌、头部葡萄球菌、孔氏葡萄球菌解脲亚种、松鼠葡萄球菌、耳葡萄球菌和模仿葡萄球菌.只有松鼠葡萄球菌表现了多态性.该ITS-PCR数据库对所研究的临床株的识别率为93.57%(160/171),准确率达93.75%(150/160).API Staph系统证明,ITS-PCR法鉴定结果较为准确,AutoScan-4微生物分析仪检测CNS至少有9.36%(16/171)是不确切的.结论 ITS-PCR证明是一项有价值,对CNS可选用的简便、快速、可靠,廉价的分子生物学鉴定技术。

目的 用一种新的荧光染色技术(FLICA/PI)检测放射诱导T淋巴细胞白血病细胞(MOLT-4)的细胞凋亡过程中胱氡肽酶 3(Caspase 3)原位激活及探讨其活性变化特点,并与亚G1峰和膜联蛋白 V/碘化丙啶(Annexin V/PI)检测细胞凋亡方法的灵敏度进行比较性评价.方法以放射诱导的MOLT-4细胞凋亡为模型,用荧光标记的Caspase 3抑制剂(FLICA)标记原位激活的Caspase 3,然后,用流式细胞仪定量检测并分析其活性变化;同时,用亚G1峰法和Annexin V/PI检测细胞凋亡.结果 FLICA/PI检测到的Caspase 3激活,在照射后2 h开始升高(5.84%),而Annexin V/PI在4 h时检测到的凋亡率为5.35%,FLICA/PI比Annexin V/PI可提前2 h检测到细胞凋亡,Caspase 3活性的出现早于细胞膜反转.FLICA阳性率在照射后4 h暴发性增高至12.39%,显示有时间效应.两种检测方法均比亚G1峰法敏感, 但Annexin V/PI检测的凋亡率低于FLICA/PI法.结论 X-射线能诱导MOLT-4细胞凋亡,并有明显的时间效应关系;Caspase 3激活有阈值效应,是照射后细胞发生凋亡过程中早于形态学变化的检测指标.用Caspase 3活性检测细胞凋亡更直接,更敏感。

目的 研究硝酸甘油(GTN)对肿瘤细胞生长繁殖的影响及机制.方法以人宫颈癌细胞系(Hela细胞)为研究对象,用四甲基偶氮唑(MTT)法检测Hela细胞的活性;流式细胞仪检测bcl-2蛋白,细胞周期,细胞凋亡指数;比色法检测亚硝酸盐、还原型谷胱甘肽(GSH).结果 GTN代谢产生一氧化氮(NO)及亚硝酸盐,MTT试验显示Hela细胞活性明显降低;经0.175 mmol/L GTN处理后,Hela内GSH由(43.97±2.80) nmol/106降至(36.46±2.32) nmol/106细胞,细胞培养体系GSH由(71.68 ± 3.02) μmmol/L降至(58.38±0.81) μmol/L;bcl-2蛋白表达下降,细胞凋亡指数由1.47±0.03提高到2.72±0.089,使Hela细胞G2～M期所占比例由3.47±1.09增加至12.71±1.45,S期所占比例由45.955±4.66降至34.867±3.92.结论 GTN可抑制肿瘤细胞的生长繁殖,其机制与GTN代谢消耗GSH和产生NO有关。

目的 了解中国产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型分布.方法收集北京、浙江、新疆及郑州等共400株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,采用接合试验,聚合酶链反应,克隆测序等方法明确ESBLs基因型. 结果 400株细菌中356株细菌ESBLs的基因型明确.其中328株细菌产1种ESBLs,主要为CTX-M型,包括CTX-M-14型ESBLs占52.25%,CTX-M-3型占14.25%,CTX-M-24型占7.25%,CTX-M-22型占2%,CTX-M-28和CTX-M-9型分别占0.75%,CTX-M-13、CTX-M-27和CTX-M-29型各占0.25%;其次为SHV型,其中SHV-12占2.5%(10/400),SHV-5占1.00%,SHV-2占0.5%.28株细菌同时携带2种或3种ESBLs,占7.00%(28/400),其中以同时产CTX-M-14和CTX-M-3最常见.结论中国产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型以CTX-M-14型为主;其次为CTX-M-3型,部分菌株同时产两种及两种以上ESBLs。

临床检验是将患者的血液、体液、分泌物等标本,通过目视观察、物理、化学分析、仪器等手段进行检测.近年来,随着基础医学、临床医学的发展,检验医学发展迅速,临床检验科实现了自动化、智能化、试剂多样化、检验方法标准化及床边检验快速化,这种现代化在给临床实验室诊断带来准确、高效的同时,也给临床检验科带来了亟待解决的问题。

乳腺癌的发生、发展和治疗具有很强的个体特异性.寡核苷酸芯片是一种高通量基因检测技术[1].目前,该项技术已被用于炎症[2]和细胞分化[3]相关基因等研究领域.本研究制备了288条人类肿瘤相关基因的寡核苷酸芯片,并对乳腺癌组织和正常乳腺黏膜组织所表达的基因进行筛选,同时进行差异表达基因生物信息学分析研究,以揭示这些差异基因与乳腺癌发生、分化、浸润及淋巴结转移之间的内在联系。

目的 建立献血者血液混合核酸检测方法, 调查北京现有检测体系下血液的残余风险度,评估核酸检测(NAT)的必要性和可行性.方法用世界卫生组织标准品对国产丙型肝炎病毒(HCV)和人免疫缺陷病毒(HIV)荧光-聚合酶链反应核酸扩增检测试剂进行灵敏度、重复性和精密度试验;对2002年2～10月34 373份常规血清学检测(ALT、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗体)合格的献血者血样进行HCV RNA和HIV-1 RNA核酸扩增分析.采取24人份混合血样测定,超离心浓缩病毒,Roche核酸提取柱提取病毒核酸.结果扩增系统能100%检出50 IU/ml HCV及50 IU/ml HIV-1标准品核酸(n=16);常规血清学检测合格的献血者血液中,没有检出HCV或HIV NAT阳性.结论该核酸检测体系适用于献血者血液病毒筛查; 北京市血液的病毒安全性已有相当高的保障.为更准确地评估NAT检测项目的可行性和必要性,检测标本量尚待增加。

常见质控规则是基于检出预期随机正态分布的变化.当数据总体显示的均值和标准差与质控图上指定值一样时,我们可见到结果预期的比例在均值加减1个标准差(s)、2 s和3 s范围内. 当数据总体由于准确度或精密度的因素而改变,这些比例也将随着改变,并产生失控标记信号。

细菌感染的有效治疗要求快速和准确的诊断.但是,目前对临床病原菌的检测,还是应用常规血培养的方法,一般需要4～7 d时间[1],延误了临床治疗.使用基因芯片可以大大缩短诊断时间,基因芯片是在PCR扩增基础上,利用多种探针对败血症的致病菌种类进行检测。

解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)是泌尿生殖道感染的常见病原体[1,2].我们通过对不孕、阴道炎、尿道炎患者以及正常对照者的泌尿生殖道分泌物进行支原体检测,研究分析了支原体感染浓度对不孕的影响及相关性。

聚合酶链反应(PCR)具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点.但也常因标本受PCR扩增产物污染而产生假阳性结果.因此,控制外源性DNA污染已成为各实验室非常关注的问题.近年来,人们采用了许多方法消毒处理不同的污染环境和污染物[1-5],但结果报导不一.为选择一种消除实验室DNA污染的最佳方法,我们选用六种传统的消毒法进行对比研究.现将结果报告如下。

胸腹水的常规肿瘤细胞病理检察,由于受经验、技术条件等因素的影响,敏感性较低,难以鉴别恶性胸腹水的性质。

患者,男,32岁,已婚.2月前出现畏寒发热、体温39.5℃,不伴头晕、头痛.起初多下午发热,起病几天后,全天发热,伴有间歇性腹痛.入院时体检:全身皮肤黏膜无黄染,背部可见散在淡红色丘疹,直径约0.1 cm,高出皮肤,压之褪色。

2002年5月,我们从一例脑脓肿患者的脓液标本中分离出SR菌落变异的嗜沫嗜血杆菌. 　　患者,男,40岁,2002年4月30日入院,该患者在入院前一周无明显诱因出现右侧肢体活动不灵,于入院前两天开始出现头痛,伴头晕、恶心、呕吐,无复视,无耳聋。

为了进一步推动全国检验医学微生物学科关于感染控制和病原监测工作的开展,以及提高和普及微生物实验室规范化操作水平.由中华医学会中华检验医学杂志编辑委员会主办、江苏省连云港市第一人民医院承办、连云港市医学会协办的全国检验医学感染控制和病原监测学术研讨会,于2004年6月8～11日在连云港市胜利召开.本次会议收到论文300余篇,出席会议的代表190余名.开幕式由王金良教授主持,张正教授致开幕词.连云港市卫生局党委书记、局长张怀锋等,出席开幕式并讲话;温州医学院院长吕建新教授作为出席会议的院长代表,中华检验医学杂志编辑部主任袁桂清代表中华医学会杂志社,在开幕式上发表了热情洋溢的讲话。

由卫生部临床检验中心组织的"2004年全国临床检验室间质量评价总结大会"于2004年5月23～27日在云南省昆明市隆重召开.来自全国各临床检验中心、各医院检验科和临床实验室、防疫站以及检验检疫部门的代表1300余人参加本次盛会.本次临床检验室间质量评价总结大会,是首次将卫生部临床检验中心常规化学、干化学、血气、脂类、心肌标志物、内分泌、肿瘤标志物、特殊蛋白、治疗药物监测、糖化血红蛋白测定、流式细胞分析术、血细胞计数、凝血试验、尿液化学、显微镜形态学、红细胞沉降率、临床免疫(传染类)、PCR(病毒)、PCR(结核)、优生优育、自身抗体、产前筛查、临床微生物学等23项室间质评计划集中在一起召开的全国性室间质量评价总结大会.会议由卫生部临床检验中心副主任陈文祥研究员主持,卫生部临床检验中心主任申子瑜研究员作了<卫生部临床检验中心现状与未来>的报告。

美国临床实验室标准化委员会(NCCLS),下属机构中有一抗生素敏感性测定分会,它由来自临床、政府、药厂的3方面专家组成.由他们制成的药敏测定指南年年都依实际情况加以更新和补充,以反映抗生素及临床微生物的发展和适应临床需要.以下系介绍2004年NCCLS出版的药敏试验指南M100-S14手册[1] (简称M100)中更新要点,也会涉及2003年版的纸片法M2-A8(简称M2) [2]、2003年的稀释法M7-A6(简称M7) [3]两个文件。

万古霉素于1958年开始用于临床治疗革兰阳性菌感染,在使用的20年没有耐药菌产生的报道.近年来,由于对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)的出现和广泛播散,万古霉素使用量大幅度增加,耐药菌也随之出现[1].1997年日本报道[2]分离出对万古霉素中介的金黄色葡萄球菌(VISA),引起了医学界的重视,接着在其他国家也相继有VISA感染的报道[3].2002年,美国发现2例对万古霉素高度耐药的金黄色葡萄球菌感染[4,5],更引起医学界极大的关注与恐慌[1].鉴于MRSA和对万古霉素耐药的肠球菌(VRE)易发生医院感染的教训,各国政府对VISA/对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌(VRSA)的出现高度重视.2003年美国疾病预防控制中心(CDC)颁布了"VISA/VRSA检测和控制"指南[6].笔者就万古霉素敏感性减低的金黄色葡萄球菌的有关研究进展作一综述。

1950年Waldenstren首次描述了在年轻妇女中发现的一种慢性肝炎.这种疾病曾因发现病人血清中存在抗核抗体(ANA)而被称为"狼疮性肝炎",并在较长的一段时间内称为"自身免疫性慢性活动性肝炎".1992年命名为"自身免疫性肝炎"(AIH).此病在北欧人种中发病率为1.9/10万,患病率为16.9/10万.我国未见全面统计报导。