2020年 · 第43卷第06期

纤维蛋白溶解系统是止血系统不可或缺的组成成分，对维持人体生理内环境稳态具有重要作用，其亦参与某些疾病的发生和发展。正常生理状态下，纤溶激活与纤溶抑制保持平衡状态，系统内任一成分发生改变，均可打破平衡，造成出血或血栓形成。因此，纤溶系统活性的检测对机体生理和病理状态的判断具有重要意义。目前，多种方法被用于检测纤溶系统的活性，但该系统复杂多样，故尚无标准实验。本文分析了已被应用的纤溶系统检测方法：生物标志物检测，全血综合纤溶实验，血浆综合纤溶实验，血浆优球蛋白实验。各类实验均有优缺点，其中一部分适用于评价纤溶亢进状态，另一部分则适用于评价纤溶减低状态。

新生儿感染性疾病是全球新生儿死亡的主要原因，由于新生儿免疫系统发育不完全，其致病因素较成人更为复杂，临床表现更多样。早期、快速、全面地明确感染病原体，对于临床进行及时有针对性的治疗，减少患儿并发症和降低死亡率有重要的意义。传统的病原体检测方法存在检测通量小、耗时长和筛查目标单一的缺点。随着高通量测序技术的发展，宏基因组测序技术在新生儿感染性疾病病原体检测中的应用日益广泛，不仅能高效准确地获得样本中病原体的遗传信息，还可挖掘病原体与宿主菌群之间的关系。特别是对于疑难感染性疾病的诊断具有重要参考价值。本文主要对宏基因组测序在新生儿感染性疾病病原体检测中的最新研究进展和应用进行阐述。

随着肿瘤精准化治疗时代的到来，越来越多的列线图用于指导临床决策。目前列线图不仅可用于肿瘤发生风险概率的预测，而且还可用于肿瘤的预后评估。列线图中变量的选择、医生诊断水平的差异都会影响其预测的准确性，因此正确认识列线图的局限性，并合理有效的利用其辅助临床决策对疾病的诊断和治疗具有重要的意义。本文对列线图在肿瘤研究领域的进展，分别从列线图的构建及其在肿瘤发生、预后评估及其局限性等方面进行阐述。

血细胞分析（全血细胞计数、白细胞分类及外周血细胞形态学分析）是临床最常用的检验项目，目前检验人员对全血细胞计数和白细胞分类尤其是其异常结果的复检审核的报告尚未规范化。为此，中华医学会检验医学分会血液学与体液学学组组织业内专家共同起草了血细胞分析报告规范化指南供临床实验室参考，以期提高血细胞分析报告的临床指导能力。

目的 探讨血清血管内皮生长因子（VEGF）及同型半胱氨酸（Hcy）水平与2型糖尿病视网膜病变及肾脏病变的关系。 方法 按照横断面设计选取2019年2月至7月在北京同仁医院治疗的2型糖尿病患者211例作为病例组，其中单纯2型糖尿病患者72例（T2DM组）、糖尿病视网膜病变患者45例（DR组）、糖尿病肾病患者49例（DN组）、糖尿病视网膜病变合并肾病患者45例（DR+DN组）；选取健康体检者76名作为对照组。对所有受试对象检测血清VEGF及Hcy水平，对病例组还观察糖尿病病程、体质指数、腰臀比、空腹血糖、糖化血红蛋白（HbA1c）、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、尿微量白蛋白/肌酐（ACR）、尿免疫球蛋白G/肌酐（IGU/CR）、尿转铁蛋白/肌酐（TRU/CR）、尿α1-微量球蛋白/肌酐（α1/CR）、血尿素氮、血肌酐、超敏C反应蛋白（hCRP）及红细胞沉降率（ESR）等指标的差异。 结果 T2DM组、DR组、DN组和DR+DN组VEGF水平分别为90.02（61.24，118.52）、124.38（81.50，170.28）、133.19（78.84，168.49）、124.08（79.82，187.33）ng/ml，明显高于对照组[50.31（21.10，67.74）ng/ml]，差异均有统计学意义（均P<0.05）；且与T2DM组比较，DR组、DN组和DR+DN组VEGF水平明显升高，差异均有统计学意义（均P<0.05）；DN组及DR+DN组Hcy水平分别为（12.58±3.66）、（11.91±2.42）μmol/L，高于对照组（10.44±2.09）μmol/L，差异均有统计学意义（P均<0.05）。不同分期DR患者VEGF、Hcy水平差异均无统计学意义（U=264.00，t=-0.43，均P>0.05）。大量蛋白尿组DN患者Hcy水平高于微量蛋白尿组[分别为（15.00±1.87）、（11.79±3.76）μmol/L，t=-2.82，P=0.01]。VEGF与ACR、TRU/CR、IGU/CR呈正相关（r=0.23、0.19、0.17，均P<0.05），Hcy与血尿素氮、血肌酐、ACR、TRU/CR、IGU/CR以及α1/CR均呈正相关（r=0.35、0.44、0.22、0.19、0.21、0.29，均P<0.05）。 结论 DR及DN患者血清VEGF水平升高，提示VEGF在DR及DN的发生过程中可能有一定作用，但在不同分期DR患者及不同尿白蛋白排泄率DN患者中VEGF水平无明显差异；DN患者血清Hcy水平升高，大量蛋白尿组Hcy水平更高，提示血清Hcy在DN的诊断及病情监测方面具有临床指导意义。

目的 对一个遗传性抗凝血酶（AT）与凝血因子Ⅶ（FⅦ）联合缺陷症家系进行临床特征和基因突变分析，探讨AT基因和F7基因突变与疾病发生的关系。 方法 家系调查。收集2018年11月来温州医科大学附属第一医院就诊的先证者及其家系成员血液和临床资料（共3代16人），检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、抗凝血酶活性（AT：A）、抗凝血酶抗原（AT：Ag）、蛋白C活性（PC：A）、蛋白S活性（PS：A）、FⅦ活性（FⅦ：C）及FⅦ抗原（FⅦ：Ag）等指标以明确诊断。提取先证者及其家系成员外周血基因组DNA，用DNA直接测序法分析AT基因和F7基因全部外显子、侧翼及5′、3′非编码区，寻找基因异常位点，并通过克隆测序及反向测序进行验证。 结果 先证者（Ⅱ6）AT：A和AT：Ag明显下降，分别为46%和135 mg/L（参考范围为250~360 mg/L）；其家庭部分成员（父亲Ⅰ2、小姑Ⅰ4、堂姐Ⅱ1、表姐Ⅱ3、小弟弟Ⅱ8、侄子Ⅲ3）AT：A和AT：Ag均降低至正常人的50%左右；其父亲（Ⅰ2）、小姑（Ⅰ4）、大弟弟（Ⅱ7）、小弟弟（Ⅱ8）、侄子（Ⅲ3）FⅦ：C分别为45%、50%、48%、47%和48%，而FⅦ：Ag正常。基因分析显示先证者（Ⅱ6）及其家庭部分成员（父亲Ⅰ2、小姑Ⅰ4、堂姐Ⅱ1、表姐Ⅱ3、小弟弟Ⅱ7、侄子Ⅲ3）AT基因5′非编码区存在rs3138521多态性；其父亲（Ⅰ2）、小姑（Ⅰ4）、大弟弟（Ⅱ7）、小弟弟（Ⅱ8）、侄子（Ⅲ3）均存在F7基因8号外显子c.1091G>A杂合错义突变，导致p.Arg304Gln。 结论 抗凝血酶与凝血因子Ⅶ分别存在rs3138521多态性和c.1091G>A杂合错义突变，可能是导致该家系成员AT与FⅦ联合缺陷的分子机制。

目的 建立一种基于高效液相色谱法（HPLC）的碘海醇检测方法，以测量小剂量和造影剂量注射条件下血液中碘海醇浓度。 方法 该研究为方法学建立及评价。使用HPLC-UV系统（高效液相色谱仪+紫外检测器）建立方法，对该方法的线性、不精密度、回收率、检出限与定量限、携带污染进行性能评价，并对碘海醇在不同储存条件下的稳定性、血清和血浆碘海醇浓度的差异以及药物对方法的干扰进行初步评价。碘海醇在标本中的稳定性试验采用单样本t检验，血清和血浆碘海醇浓度的比较采用配对样本比较的Wilcoxon符号秩和检验。 结果 碘海醇浓度在5~250 μg/ml（R2=0.999 9）和250~4 000 μg/ml（R2=0.999 8）范围内线性良好；在碘海醇浓度为20~3 000 μg/ml时，批内变异系数为1.63%~3.31%，批间变异系数为2.10%~4.09%，回收率为94.17%~106.13%%；检出限为1 μg/ml，定量限为5 μg/ml；在碘海醇浓度为4 000 μg/ml时，未检测到携带污染；室温下放置48 h，其浓度相对偏差为-5.55%~+5.58%，-80 ℃下反复冻融6次后，其浓度相对偏差为-1.28%~+6.68%；血清与血浆的测量结果未见统计学差异；缬沙坦等药物对此方法无明显干扰。 结论 成功建立了检测范围较宽的碘海醇HPLC检测方法，可稳定、准确的检测小剂量和造影剂量下碘海醇的血液浓度。

目的 对结核性脑膜炎患者的脑脊液进行非靶向代谢组学的研究，分析其脑脊液代谢特征的改变。 方法 病例对照研究。收集2018年7月至2019年7月解放军总医院第一医学中心神经内科和第八医学中心结核病区临床确诊的结核性脑膜炎住院患者的脑脊液标本，同时收集已确诊的其他病原感染的非结核性脑膜炎的脑脊液标本作为对照组。其中，结核性脑膜炎组有20例，男性12例，女性8例，年龄（37.9±16.1）岁；对照组有20例，男性13例，女性7例，年龄（34.7±14.8）岁。采用超高效液相色谱-质谱联用技术（UPLC-MS）对两组患者的脑脊液进行反相色谱正离子、反相色谱负离子和亲水色谱正离子检测，生成代谢指纹图谱，并使用SIMCA软件对其分析，选择正交偏最小二乘辨别分析（OPLS-DA）的多元统计分析方法，采用OPLS-DA模型的变量重要性投影值（阈值>1）并结合t-test的P值（P<0.05）来寻找两组患者脑脊液中的差异性代谢物质。 结果 在两组患者脑脊液中共发现10种差异性代谢物质，它们分别是L-异亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-犬尿氨酸、L-蛋氨酸、L-酪氨酸、二甲基甘氨酸、L-丙氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸和L-赖氨酸，且与对照组比较，在结核性脑膜炎组均表达上调。 结论 结核性脑膜炎患者脑脊液中氨基酸代谢发生改变，可为结核性脑膜炎的辅助鉴别诊断和分子基础研究提供一定的实验依据。

目的 探讨未经激素和免疫抑制剂治疗的大动脉炎患者的临床特征与自身免疫状态及淋巴细胞亚群的状况，旨在为免疫治疗提供指导。 方法 采用横断面调查研究。选择首都医科大学附属北京安贞医院2018年1月至2019年11月在风湿免疫科和血管科就诊的大动脉炎患者29例，女性28例、男性1例，中位数年龄为39岁，患者均符合美国风湿病学会大动脉炎诊断标准，且未经激素和免疫抑制剂治疗，收集这些患者的临床资料，同时进行免疫学指标和外周血淋巴细胞亚群的检测。同期选择21名健康正常人作为对照组，进行免疫学指标和外周血淋巴细胞亚群的检测。采用卡方检验、独立样本t检验和非参数检验等方法进行统计学分析。 结果 未治疗的29例大动脉炎患者中，28例为女性，26例患者处于疾病活动期；全身症状中以乏力（62.07%）和头痛（41.38%）为主要表现，血管症状中以杂音和脉搏减弱（68.97%）为主要表现，Numano分型中以Ⅴ型（79.31%）最多。与健康对照者组相比，初诊大动脉炎患者的总T（CD3）淋巴细胞的绝对值[（1 337.14±312.46）μl vs（1 139.95±340.96）μl，t=2.120，P=0.039]、辅助T（CD4）淋巴细胞的百分比[46.29%±6.55% vs 36.55%±7.42%，t=4.903，P<0.000 1]和绝对值[（815.52±194.11）μl vs（571.44±187.55）μl，t=4.450，P<0.000 1]、CD4/CD8的比值[1.83（1.41~2.30）vs 1.32（1.03~1.39），Z=3.401，P=0.001]都升高，而自然杀伤（NK）细胞（CD56）的百分比[10.71%（6.45%~14.30%）vs 14.57 %（10.87%~18.47%），Z=2.408，P=0.016]降低。与健康对照者组相比，大动脉炎患者的补体C3[1.16（1.02~1.31）g/L vs 1.05（0.93~1.15）g/L，Z=2.383，P=0.021]升高，免疫球蛋白（Ig）G[11.97（8.74~14.43）g/L vs 14.37（13.11~15.47）g/L，Z=3.017，P=0.003]降低。与健康对照者组相比，初诊大动脉炎患者的炎症指标红细胞沉降率（ESR）[19.31（9.50~28.50）mm/h vs 3.71（2.00~5.00）mm/h，Z=5.338，P<0.000 1]、高敏C反应蛋白（hs-CRP）[6.52（0.32~8.62）mg/L vs 0.73（0.35~1.07）mg/L，Z=2.983，P=0.003]和快速C反应蛋白（Q-CRP）[8.73（1.03~7.72）mg/L vs 0.57（0.08~0.98）mg/L，Z=4.263，P<0.000 1]都升高。 结论 未经激素和免疫抑制剂治疗的大动脉炎患者的自身免疫处于激活状态，外周血中的总T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞明显升高，以应对全身大动脉血管的炎症反应。

目的 探讨胰腺癌（PC）血清外泌体人膜联蛋白A11（ANXA11）的检测方法，初步评估ANXA11在PC中的临床应用价值。 方法 选择2016年12月至2019年7月南通大学附属医院确诊为PC、胰腺良性占位、胰腺炎患者的血清标本分别70例、15例、70例，选取同期健康体检者70名作为对照组。利用基于高分辨率、高精度质谱仪的平行反应监测（PRM）方法检测血清外泌体及无外泌体血清中ANXA11蛋白丰度。自建检测人血清外泌体ANXA11的点免疫印迹法（dot immunoblotting）并进行方法学评价；分析所有受试者血清外泌体ANXA11的水平；采用受试者工作特征（ROC）曲线的曲线下面积（AUC）评价ANXA11、糖类抗原19-9（CA19-9）、癌胚抗原（CEA）对PC的诊断效能；分析ANXA11与PC患者临床病理参数、疗效及预后生存期的关系。两组间比较采用Mann-Whitney U检验，四组间比较采用Kruskal-Wallis检验。 结果 自建的点免疫印迹法检测血清外泌体ANXA11具有较高的敏感度和重复性。利用构建的方法检测研究对象发现ANXA11在PC组升高最明显，与其余三组比较，差异有统计学意义（Hc=58.079，P<0.01）。ROC曲线表明，ANXA11（AUC=0.836）对PC的诊断效能高于CEA（AUC=0.656），与CA19-9（AUC=0.870）相当，联合CA19-9可提高诊断PC的敏感度，且保持较高的特异度。PC患者治疗前血清外泌体ANXA11水平与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤生长部位、淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无关（Z值分别为0.052、-0.285、-0.402、0.324、0.888、0.658、1.734，P均>0.05），且PC患者术后第10天血清外泌体ANXA11水平与术前相比，差异无统计学意义（Z=-1.569，P=0.12）。PC患者生存时间与是否存在淋巴结转移、远处转移、TNM分期及治疗方式有关（χ2分别为9.354、6.086、9.389、16.998，P均<0.05），而与ANXA11、CA19-9及CEA等无相关性（χ2分别为1.516、0.011、0.159，P均>0.05）。 结论 本研究成功建立了检测人血清外泌体ANXA11的方法。血清外泌体ANXA11联合CA19-9可提高PC诊断敏感度。

目的 探讨血清基质金属蛋白酶3（MMP-3）与类风湿关节炎（RA）的相关性和临床价值。 方法 采用回顾性研究，收集2019年1月至2020年1月来北京市石景山医院就诊的RA病例123例，其中男25例，女98例，中位数年龄60岁；同期来院健康体检者53名，其中男12名，女41名，中位数年龄55岁。检测所有受试者的空腹外周血的MMP-3、红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（ACCP）水平，记录28关节疾病活动度评分（DAS28）。采用t检验、Spearman相关分析及ROC曲线等统计方法，分析两组结果差异、相关性分析及血清MMP-3对RA的诊断效能。 结果 RA组血清MMP-3水平为（79.71±123.54）ng/ml，明显高于对照组的（26.30±14.83）ng/ml，差异有统计学意义（t=-4.95，P<0.001）。RA组患者血清MMP-3与ESR、hs-CRP、DAS28均具有显著正相关（r值分别为0.521，0.372，0.405，P值均<0.001）。血清MMP-3诊断RA的曲线下面积（area under the curve，AUC）为0.765，取诊断界限值为32.5 ng/ml时，敏感度为64.44%，特异度为75.76%。 结论 RA患者血清MMP-3水平显著升高，与RA疾病活动度高度相关，可能对RA的早期诊断、治疗监测及疾病预警有重要的作用。

分化型甲状腺癌（DTC）患者易发生颈部淋巴结转移，影响患者的生存质量。准确诊断淋巴结转移可以为手术切除和清扫提供指导，改善患者预后。自首次利用细针穿刺洗脱液甲状腺球蛋白（FNA-Tg）诊断DTC患者淋巴结转移以来，已有大量的研究表明FNA-Tg对此具有良好的诊断效能。然而，由于检测的影响因素众多以及缺少统一的检测标准，研究结果差异较大。如何筛选合适的患者、建立统一的标准使FNA-Tg检测的效能最大化，是目前亟待解决的问题。本文将对FNA-Tg的诊断效能及其影响因素进行系统综述和分析，并对FNA-Tg的临床应用和研究方向进行展望。

侧流免疫层析技术是一种基于层析膜和纳米标记物的即时检测技术，因其简单、快速和低成本被广泛应用于生物医学、病原体检测、食品安全等多个领域。传统的侧流免疫层析依赖于肉眼观察，灵敏度较低，只能提供定性或半定量结果。随着不同类型标记物和灵敏检测设备的应用，侧流免疫层析实现了对待测物的定量、多组分检测。本文旨在结合纳米标记物、层析膜、条带检测仪，阐述侧流免疫层析检测系统的最新研究进展，以期为标记物的选择，层析膜和检测仪器的改进提供依据。