2016年 · 第39卷第11期

活细胞成像技术可以实时或在一定时间内观察细胞内部结构和生理过程，能够提供比固定细胞成像技术更加真实可靠的信息。现有的活细胞成像技术多基于荧光成像技术，通过增加荧光基团亮度、减少细胞毒性来获得高信噪比的图像，这些方法对细胞活性会造成一定的影响。现代物理技术的改进使得活细胞非标记成像检测成为可能，本文就活细胞的非标记物理成像技术进行深入探讨，以期为活细胞的非标记检测提供新的方法参考。(中华检验医学杂志，2016, 39：801－803)

抗核抗体(ANA)是多种自身免疫病(AID)特别是ANA相关的风湿性疾病(AARD)诊断的重要血清标志物。以HEp－2细胞为基质的间接免疫荧光(IIF)法是ANA检测的重要方法，被美国风湿病学会(ACR)、欧洲自身免疫标准化促进会(EASI)等专业学会推荐为ANA检测的参考方法。2014年8月28日在巴西圣保罗举行的ANA荧光模型国际共识第一次会议上，来自15个国家的66位专家研讨形成ANA HEp－2细胞间接免疫荧光染色模型命名标准化国际共识。2015年9月22日在德国德累斯顿召开的ANA荧光模型国际共识第二次会议上形成了ANA结果报告方式国际共识。认真解读和推广ANA HEp－2细胞间接免疫荧光模型及其结果报告标准化国际共识有助于提高我国ANA检测质量和充分发挥ANA在AID临床诊疗中的价值。(中华检验医学杂志，2016, 39：804－810)

内源性干扰抗体是临床免疫检测中一类重要的干扰物质，它可桥接捕获抗体与标记抗体导致检测结果假性增高，也可直接结合抗体的可变区或高变区，借助空间位阻阻遏抗原与抗体的特异性反应并诱发检测结果假性下降，故掌握内源性干扰抗体的种类及其干扰临床免疫检测的机制，并建立适当的识别与确认干扰的策略，有利于降低临床免疫检测错误结果和医疗风险的发生。(中华检验医学杂志，2016, 39：811-813)

血清特异性IgE(sIgE)的测定在变应原体外诊断中占有重要地位。近些年新的变应原体外诊断技术不断涌现，但每种方法都有其自身的优点与不足。本文就目前我国常用的sIgE检测方法进行介绍并对各方法间对比研究的结果进行综述，以期为临床工作者解读检测结果提供些许参考。(中华检验医学杂志，2016, 39: 814-816)

IgG4相关性疾病(IgG4－RD)是一种新的系统性、慢性自身免疫性疾病。临床表现为IgG4阳性浆细胞及淋巴细胞浸润多种器官和组织，并伴有血清IgG4水平升高。此外，一些其他疾病也会出现血清IgG4升高或组织中IgG4阳性浆细胞浸润，因此需要进行鉴别诊断。本文论述了血清IgG4对IgG4－RD诊断及鉴别诊断的价值。(中华检验医学杂志，2016, 39：817－819)

目的 对采用酶联免疫捕获法的符克™系统用于检测常见吸入物过敏原特异性IgE抗体(sIgE)进行性能评价。 方法　 参考CLSI EP方案，对符克™系统进行性能评价。用符克™系统检测户尘螨、粉尘螨、猫毛屑、狗毛屑、链格孢、艾蒿花粉6种常见吸入物过敏原sIgE，评估其精密度、灵敏度、线性范围等，并与ImmunoCAP®系统进行比对，比对样本来源于2016年5月25日至6月30日门诊患者血清792份，对定量结果进行线性回归分析，对定性结果进行Kappa一致性分析。 结果 符克™系统检测户尘螨、粉尘螨、猫毛屑、狗毛屑、链格孢、艾蒿花粉sIgE的批内CV%为3.60%～6.53%，总CV%为3.57%～7.46%，均小于试剂盒标示不精密度。定量测定下限均小于0.35 KU/L，低于厂商标示灵敏度。户尘螨sIgE的线性范围0.37～94.30 KU/L(R2＝0.999，P<0.001)，链格孢sIgE的线性范围0.35～89.80 KU/L(R2＝0.998，P<0.001)，线性相关均良好。符克™系统与ImmunoCAP®系统比较，定量结果有明显的直线相关性，户尘螨、粉尘螨、猫毛屑、狗毛屑、链格孢、艾蒿花粉的R2分别为0.356、0.473、0.847、0.478、0.254和0.355，P值均<0.001；定性结果的阴性符合率、阳性符合率、总体符合率分别为99.2%(944/952)，82.1%(528/643)，92.3%(1 472/1 595)，有高度一致性(Kappa＝0.835，P<0.001)；分级一致率91.5%(1 459/1 595)。 结论　 符克™系统是国产自动化全定量过敏原sIgE检测系统，具有较高的精密度和灵敏度，与ImmunoCAP®系统比较相关性良好，可满足临床检测要求，具有实用价值，为临床应用提供了新的选择。(中华检验医学杂志，2016, 39：824-828)

目的　 探讨儿童红斑狼疮患者糖尿病相关自身抗体检测与1型糖尿病发病及胰腺损伤的相关性。 方法　 前瞻性研究。对2007年3月至2015年3月在首都儿科研究所附属儿童医院风湿免疫科就诊的74例儿童系统性红斑狼疮(SLE)和5例新生儿狼疮综合征(NLE)患儿，正常对照30名，采用酶联免疫吸附试验方法分析胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(IAA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、己糖激酶法检测空腹血糖、随机血糖，离子交换高效液相色谱法检测糖化血红蛋白，并详细监测症状、体征、自身抗体结果。对部分患儿进行糖耐量试验、在病情恢复期复查上述3种抗体。应用χ2检验评价SLE患儿疾病活动性和ICA、IAA、GADA这3种抗体的相关性。 结果　 74例儿童SLE患者中，血糖水平降低的有2例，其空腹血糖均低于3.9 mmol/L。血糖水平升高的有7例，其中1例临床诊断为1型糖尿病，6例均表现为一过性随机血糖高于11.1 mmol/L，此6例中5例糖化血红蛋白大于6.5%。对这6例患者行糖耐量试验均未发现异常，否定糖尿病诊断。74例SLE中，ICA阳性1例，IAA阳性24例，GADA阳性21例。其中，36例有1种抗体阳性，9例IAA和GADA同时阳性。5例NLE中，2例IAA和GADA同时阳性，1例IAA阳性，其余2例抗体均为阴性。SLE组的ICA、IAA、GADA阳性率分别为1.35%(1/74)、32.43%(24/74)、28.38%(21/74)，NLE组的ICA、IAA、GADA阳性率分别为0/5、3/5、2/5；正常组的ICA、IAA、GADA阳性率分别为0、0、3.33%(1/30)，ICA：χ2＝12.649，P<0.001；GADA：χ2＝8.028，P＝0.005。8例抗体阳性SLE患儿在病情缓解期复查，6例IAA阳性患者中4例转阴。5例GADA阳性患者中4例转阴。30名正常对照中，仅1名GADA阳性。 结论　 儿童SLE患者糖尿病相关抗体阳性率较高，NLE患者也可以检测到糖尿病相关抗体。提示儿童SLE需注意监测是否有血糖水平的异常变化及是否有1型糖尿病发生的可能。(中华检验医学杂志，2016, 39：829-832)

目的 对慢性乙型肝炎(以下简称"乙肝" )患者在采用干扰素治疗过程中血清自身抗体进行检测和分析，探讨自身抗体在干扰素治疗慢性乙肝患者中的临床意义。 方法　 选取2010年至2015年解放军第三○二医院收治的116例慢性乙肝患者，男性81例，女性35例，平均年龄16(1～52)岁，按照是否采用干扰素治疗分为两组：干扰素治疗组94例，男性65例，女性29例，平均年龄11(1～45)岁；未采用干扰素治疗组22例，男性16例，女性6例，平均年龄36(23～52)岁。同时将干扰素治疗组根据是否检测到自身抗体分为两个亚组：自身抗体阳性组46例，男性33例，女性13例，平均年龄10(1～43)岁；自身抗体阴性组48例，男性32例，女性16例，平均年龄12(2～45)岁。采用间接免疫荧光法和免疫印迹法进行自身抗体的相关检测，对干扰素使用情况与自身抗体产生之间的关系以及自身抗体产生对乙肝治疗的影响进行分析。定量资料采用t检验或t'检验，多组比较采用秩和检验；分类资料用卡方检验。 结果　 干扰素治疗组3年内自身抗体检出46例，阳性率为48.9%，而非干扰素治疗组仅检出5例，阳性率为22.7%，两组间差异有统计学意义(χ2＝4.971，P＝0.026，P<0.05)；干扰素治疗过程中随治疗时间延长，自身抗体检出的阳性率增加速度逐渐减缓(从33.0%到48.9%)；干扰素治疗期间，无论是否产生自身抗体，其HBeAg阴转率(χ2＝1.625，P＝0.202，P>0.05)、HBV DNA阴转率(χ2＝0.111，P＝0.739，P>0.05)、ALT(t＝1.255, P＝0.213, P>0.05)、AST (t＝0.094, P＝0.925, P>0.05)、ALP(t＝1.201，P＝0.235, P>0.05)差异均无统计学意义；干扰素治疗组中自身抗体阳性组、阴性组肝脏组织炎症分级>2(G>2)者分别为13.0%和2.1%，差异有统计学意义(χ2＝4.094，P＝0.043, P<0.05)。 结论　 接受干扰素治疗的慢性乙肝患者易出现自身抗体，自身抗体的产生与肝损伤程度有一定的关系，但未发现其对抗病毒治疗预后产生显著影响。(中华检验医学杂志，2016, 39: 833－836)

目的 研究甲状腺结节组织、血浆中miRNA表达谱的差异变化，分析甲状腺结节组织、血浆中miRNA表达的相关性，探讨血浆miRNA作为甲状腺结节标志物的潜在价值。 方法　 病例对照研究。选择2015年5至7月在北京中医药大学东直门医院进行甲状腺结节手术女性患者5例；同期来院体检的女性，B超诊断为甲状腺结节的患者16例，无甲状腺结节的正常健康女性15名。采用miRNA芯片技术，对正常甲状腺组织(n＝5)及甲状腺结节组织(n＝5)中miRNA的表达谱进行比较，筛选甲状腺结节组织中差异性表达的miRNA。利用qRT－PCR的方法，在甲状腺结节患者(n＝16)及无结节的健康人(n＝15)的血浆中验证差异表达的miRNA。两组均数比较采用t检验；相关分析采用Pearson相关分析法。 结果　 与正常甲状腺组织相比，在甲状腺结节组织中有57个miRNAs发生了差异性表达(t＝3.637, 3.821, 4.907, 3.383,－5.516, 4.332,－4.993, 3.980, 5.208,－2.981, 2.840, 4.945, 4.945,－2.927,－3.561,－4.665, 3.161, 3.363, 4.846, 3.834, 2.826,－3.868, 3.816, 2.802, 5.511, 3.772,－4.424, 3.420, 3.199, 4.320, 4.053, 4.997,－3.292, 5.304,－3.281,－3.262,－4.128,－2.963, 4.228, 2.949, 4.436, 2.796, 3.199,－4.636, 4.091, 3.633, 3.481,－5.344, 4.753,－3.766,－5.340, 4.888,－4.631, 5.511, 2.921,－3.042,－4.935, P<0.05)，34个miRNA表达上调，23个miRNA表达下调。其中表达上调>1.5倍的有：miR－30d，miR－141，miR－196a，miR－181b，miR－126－5p，miR－494，miR－29b，miR－155，miR－106a*，miR－181a，miR－20a，miR－10a和miR－106a－5p；表达下调<0.6倍的miRNA有2个：miR－199a－5p和miR－31。甲状腺结节患者血浆中具有同样差异表达的miRNA有miR－181b，miR－494及miR－106a*。经Pearson相关性分析，miR－181b, miR－494及miR－106a*在组织及血浆中的表达有相关性，r值分别为0.713、0.878和0.751，且差异有统计学意义(P<0.05)。 结论　 甲状腺结节组织与正常甲状腺组织的miRNA的表达谱具有明显差异；miR－181b、miR－494及miR－106a*在甲状腺结节患者血浆中miRNA变化与甲状腺结节组织miRNA变化具有高度一致性，提示这3个miRNA可能具有作为甲状腺结节早期诊断标志物的潜在价值。(中华检验医学杂志，2016, 39：837－842)

目的 探讨分子诊断技术在新生儿葡萄糖－6－磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症诊断中的应用，鉴定G6PD基因新的突变位点。 方法　 收集重庆医科大学附属儿童医院新生儿疾病筛查中心2013年12月至2014年6月新生儿G6PD缺乏症筛查阳性的患儿231例，采用PCR和Sanger测序法对新生儿G6PD缺乏症筛查阳性的患儿进行G6PD基因突变检测，以期明确本地区的突变热点；通过对筛查阳性标本G6PD活性比值法检测结果与分子诊断结果的比较，分析酶学表型与基因型的关系，结合突变的功能预测，鉴定G6PD基因新的突变。 结果　 本研究联合比值法和分子诊断在筛查阳性的患者中共确诊G6PD患儿125例，其中比值法确诊102例，阳性率81.6%，分子诊断确诊123例，突变检出率98.4%。比值法可疑阳性的16例患儿中，分子诊断检出突变11例。113例比值法阴性的标本中检测出突变12例，突变检出率10.6%。基因测序发现2个新突变位点，c.29C>A和c.361C>T，其中c.29C>A的检出率高达7.3% (9/123)，可能成为中国人群G6PD基因一个新的突变热点。 结论　 新生儿G6PD缺乏症活性比值法检测容易漏诊女性杂合子；G6PD基因存在新的突变，且突变热点存在地域差异；基于DNA测序分析的分子诊断是进行新生儿G6PD缺乏症确诊最有价值的方法。(中华检验医学杂志，2016, 39：843－847)

目的 了解我国耐利奈唑胺葡萄球菌的耐药形势，探讨耐利胺唑胺菌株的耐药形成机制，为临床合理使用抗生素提供理论依据。 方法　 收集2009至2012年全国9家医院分离的所有非重复的利奈唑胺耐药葡萄球菌共43株。通过微量肉汤稀释法测其MIC值，PCR方法检测是否携带cfr基因以及是否发生23S rRNA基因Ⅴ区突变，Southern blot验证cfr基因是否在质粒上，质粒全基因组测序分析cfr基因周围环境。 结果　 43株利奈唑胺耐药葡萄球菌大部分为多重耐药菌株，大部分菌株携带cfr基因和发生23S rRNA G2576T突变，cfr基因位于质粒上且其周围基因环境存在IS256或IS21-558插入序列、Tn558转座子可移动基因元件。 结论　 获得cfr基因或23S rRNA G2576T突变是导致葡萄球菌对利奈唑胺耐药的主要机制，cfr基因位于质粒上，并且其周围存在可移动基因元件，可导致cfr基因在不同菌株或菌种间传播。(中华检验医学杂志，2016, 39：848-851)

目的 探讨肺结核患者外周血特异性T细胞IFN－γ(TB－IGRA)和人类白细胞分化抗原G(HLA－G)的表达情况及其诊断肺结核的价值。 方法　 采用回顾性研究设计方法，病例均来自2015年1月至12月绍兴市立医院呼吸科就诊的肺部疾病患者，根据临床和病理诊断分为肺结核组(34例)、肺癌组(25例)及非结核性肺炎组(25例)，以及35名健康体检者入选为表观健康组，ELISA法检测结核特异性T细胞IFN－γ和sHLA－G的表达，流式细胞分析法检测mHLA－G的表达，Kruskal－Wallis检验比较组间差异，各项指标诊断肺结核的价值用ROC曲线分析。 结果　 肺结核患者TB－IGRA、sHLA－G和mHLA－G表达量的中位数分别为182.5 ng/L、99.44 U/ml和13.63%，高于肺癌(117.0 ng/L、82.3 U/ml和9.12%)、肺炎(80.84 ng/L、34.2 U/ml和10.92%)和健康组(30.5 ng/L、31.28 U/ml和8.18%)(P值<0.05)。TB－IGRA、sHLA－G和mHLA－G诊断肺结核的ROC曲线下面积分别为0.842(95%CI：0.761～0.922)、0.746(95% CI：0.652～0.840)和0.706(95% CI：0.605～0.806)。当TB－IGRA、sHLA－G和mHLA－G的诊断界值分别为35 ng/L、60 U/ml和10%时，敏感性分别为88.24%、70.59%和67.65%，特异性分别为60%、72.94%和70.59%。3项指标联合检测的敏感性和特异性为88.24%和81.18%。 结论　 肺结核患者结核特异性T细胞IFN－γ和HLA－G表达量均增加，虽然外周血中TB－IGRA检测具有较高的诊断价值，但与HLA－G联合检测显著提高诊断特异性，对肺结核的诊断具有一定临床应用价值。(中华检验医学杂志，2016, 39：852－856)

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)在潜伏性结核菌感染中差异性表达。 方法 选择2015年1至6月在珠海市慢性病防治中心诊断的潜伏性结核菌感染患者血浆33例(病例组)，纳入标准为年龄范围18～40岁，确诊的涂阳肺结核病例密切接触者；胸部影像学检查正常；皮肤结核菌素试验强阳性；6个月后随访未患活动性肺结核。对照组选自同一机构体检科健康人群血浆33名，纳入标准为年龄范围18～40岁，排除肺结核或其他肺部疾病，皮肤结核菌素试验阴性。病例组和对照组各3例用于lncRNA芯片实验，30例用于RT-PCR验证实验。Trizol法抽提总RNA后，利用lncRNA芯片技术进行高通量检测，建立潜伏性结核菌感染者的lncRNA基因表达谱。筛选6个差异表达明显的lncRNA，利用实时定量PCR技术，在30例扩大化样本中进行验证，获得高灵敏度、高特异性的生物标志物。利用基因功能分析、基因通路分析初步分析差异基因的表达功能。数据的正态性检验采用Kolmogorov-Smirov(K-S)，正态分布资料两个样本均数比较采用t检验，多个样本均数比较采用单因素方差分析，两样本率的比较用χ2检验。 结果　 潜伏性结核感染的特异性差异表达lncRNA共1 485个，占所检测lncRNA总数的4.9%，其中上调819个，下调666个。ENST00000566054(t＝10.92，P<0.001)、TCONS_00016510(t＝2.98，P＝0.004)在潜伏性结核菌感染者血浆中表达水平显著上调，NR_034120表达水平显著下调(t＝－16.63，P<0.001)。基因功能分析中，上调表达的mRNA中，有382个基因富集于生物学进程、60个基因富集于细胞组件、43个基因富集于分子功能；下调表达的mRNA中，有276个基因富集于生物学进程、55个基因富集于细胞组件、55个基因富集于分子功能；基因通路分析上调的mRNA主要富集于7条生物学途径，下调的mRNA主要富集于7条生物学途径。 结论　 lncRNA在潜伏性结核菌感染血浆中异常表达，提示lncRNAs参与潜伏性结核菌感染的分子调节过程。(中华检验医学杂志，2016, 39：857-863)

幽门螺旋杆菌(HP)被世界卫生组织归类为Ⅰ级致癌因子，当前全世界一半以上的人口被HP感染，随着研究的不断深入，HP相关的实验室检测方法和诊断路径在不断完善，本文将重点对当前的HP实验室检测方法、各种检测方法的应用条件和优缺点以及当前HP的实验室诊断路径进行综述，以供不同实验室选择使用。(中华检验医学杂志，2016, 39：864-867)

血细胞分析是临床较常用的检测指标，其结果的准确性直接影响对患者的诊断和治疗，解决血细胞临床检验结果的可溯源、量值一致问题的核心工作是建立血细胞参考测量实验室，以保证医学实验室血细胞检验分析数据结果的准确性和可比性。依据CNAS－CL01《检测和校准实验室能力认可准则》和CNAS－CL25《检测和校准实验室能力认可准则在校准领域的应用说明》等文件，北京市医疗器械检验所建立了参考测量实验室。(中华检验医学杂志，2016, 39：868－870)

检验医师的培养随着社会的发展，重要性逐渐凸显，为了更全面地培养适合我国国情的检验医师，增强检验医学系本科学生检验和临床相结合的思维培训是非常重要的。本文重点介绍了对检验医学生加强临床沟通、确立监测频率、提供检验合理解释等的教学内容和方法。(中华检验医学杂志，2016, 39：871－872)