2003年 · 第23卷第01期

目的生存素(survivin)是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员,在多数恶性肿瘤组织中丰富表达.因此,观察生存素反义寡核苷酸转染对肝癌细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响.方法设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸(ASODN).肝癌细胞株hepG2分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600 nmol/L ASODN转染组.作用20 h后收获各组细胞.倒置显微镜观察细胞形态变化,Western blot法检测各组细胞生存素表达情况,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数,MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)对各组细胞的生长抑制率.结果各ASODN转染组细胞生存素表达有不同程度减弱,细胞变圆、折光增强、漂浮、细胞碎片形成等,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600 nmol/L转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P＞0.05);各ASODN转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05),以600 nmol/L转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P＞0.05);等浓度化疗药物5-FU和DDP对各ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组(P<0.05),以600 nmol/L转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P＞0.05).结论不同浓度生存素 ASODN转染能下调生存素蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性.

目的从胃癌患者胃液中发现特异性荧光物质,并以此来获得肿瘤标志物.方法收集10例胃癌患者与10例非胃癌患者的胃液,浓缩后行高效液相分析,并收集高效液相荧光光谱中保留时间为11.5～12.5 min的荧光物质;再经质谱鉴定,所得结果与L-色氨酸的质谱比较,最终确定这种荧光物质的主要组分.结果在高效液相的荧光光谱保留时间为11.5～12.5 min时,胃癌患者胃液中有特异性荧光物质,其含量较其他胃内良性病变患者明显增多.经质谱鉴定后显示,胃癌患者胃液中质荷比为205的物质与L-色氨酸的三级质谱完全一致,证实该物质为L-色氨酸.结论 L-色氨酸是胃癌患者胃液中特异性荧光物质的主要组分.

目的研究肠三叶因子(ITF,为三叶肽家族一员)、转化生长因子α(TGFα)及环氧合酶-2(COX-2)在水浸束缚应激(WRS)大鼠胃黏膜中基因表达变化,探讨其在胃黏膜应激适应性细胞保护中的相互关系及作用.方法采用重复WRS制作模型,动态监测胃黏膜血流量(GMBF),大体及光镜下观察黏膜损伤程度(UI)及组织学变化,RT-PCR检测ITF、TGFα及COX-2基因表达变化,免疫组化染色进一步证实ITF,TGFα表达.结果单次应激造成胃黏膜广泛损伤,重复应激后胃黏膜产生适应性,胃黏膜血流量上升,损伤逐渐减轻,4次应激后,损伤指数降低为单次应激的21.99%,且胃腺区细胞增殖,ITF、TGFα基因表达增强(分别为0.040±0.001比0.372±0.010,P<0.01;0.86±0.01比0.93±0.01,P<0.01),免疫组化染色证实了二者的变化趋势,而COX-2表达逐渐减弱(0.45±0.02比0.22±0.01,P<0.01).结论胃黏膜适应性细胞保护伴有细胞增殖,ITF、TGFα表达水平增强及COX-2表达水平逐渐减弱,表明三者在这一现象中有重要的调节作用.

目的从病理学角度探讨柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗溃疡性结肠炎(UC)的部分机制.方法应用SASP 1 g,每日3次,治疗活动期UC 6周,观察治疗前后的病理特征和组织学分级的变化.结果轻度UC治疗前黏膜固有层血管炎为48.2%,治疗后为17.4%(P<0.001);中度UC治疗前为68.0%,治疗后为26.7%(P<0.001).治疗前,血管壁轻度坏死1例,中度2例;血栓形成中度2例;在6周末,所有标本均未发现有血管壁坏死和血栓形成.治疗前轻度UC腺体异常为30.4%,治疗后为13.0%(P<0.05);治疗前中度UC为42.0%,治疗后为40.0%(P>0.05).轻度UC治疗前嗜酸性粒细胞浸润为98.2%,治疗后为80.4%(P<0.01);中度UC治疗前为100.0%,治疗后为91.1%(P<0.05).对隐窝脓肿的影响,轻度:从21.4%降到4.4%(P<0.05);中度:从48.0%降到13.3%(P<0.001).黏膜组织学分级轻度:治疗前为2.00±0.84,治疗后为0.91±0.46(P<0.001);中度:治疗前为2.49±0.84,治疗后为1.31±0.75(P<0.001).结论 SASP能明显改善UC炎症黏膜的小血管病变与黏膜腺隐窝脓肿,减少中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的浸润,从而减少炎症性反应物产生与前列腺素的合成,促进炎症黏膜的愈合.

目的研究谷胱甘肽转硫酶(GSTs)T1、M1和P1基因多态与反流性食管炎易感性的关系.方法采用病例-对照分子流行病学研究方法,以多重PCR技术检测GST T1和GSTM1基因缺失,以PCR-RFLP技术检测GSTP1基因单核苷酸多态(第104密码子A→G).结果共检测了109例反流性食管炎患者、97例有胃食管反流症状但胃镜检查阴性(NERD)的患者和97例正常对照者.GSTT1和GSTM1基因缺失频率在食管炎组、NERD组和正常组分别为48.6%、42.6%、53.6%和52.0%、53.6%、43.3%,差异无显著性.然而,反流性食管炎组突变型GSTP1(40.4%)基因频率显著高于NERD组(24.7%,P<0.05)和正常对照组(21.6%,P<0.05).携带GSTP1变异基因型者比携带野生型基因型者发生反流性食管炎的风险高2.42倍(95%CI,1.22～4.80).在携带GSTP1变异基因型同时无幽门螺杆菌感染的个体,食管炎的OR值则增加到2.67(95% CI 1.06～6.70).结论 GSTP1基因(104密码子A→G)多态可能是涉及反流性食管炎发生的遗传易感因素.幽门螺杆菌感染可能会降低反流性食管炎的发生,它可能是反流性食管炎的保护因素.

目的三叶因子(trefoil factor)是一组新发现的对胃肠道有保护作用的多肽类物质,通过对三叶因子2 (TFF2) mRNA在胃溃疡与浅表性胃炎患者胃黏膜中表达水平的差异研究,探讨其在胃溃疡发病机制中的作用.方法胃镜下钳取32例胃溃疡内侧缘、溃疡远处和36例浅表性胃炎患者的组织标本,利用原位杂交方法分别对不同组织中TFF2 mRNA进行定位和半定量测定,比较TFF2 mRNA在各组中的表达差异.结果 TFF2 mRNA主要分布于胃小凹基底部的柱状细胞、幽门腺腺泡及导管细胞中.TFF2 mRNA在浅表性胃炎组的表达高于胃溃疡内侧缘组,在胃溃疡内侧缘表达要高于溃疡5 cm外的胃黏膜,但组间表达差异无显著性(P均>0.05),而浅表性胃炎标本TFF2 mRNA阳性程度显著高于溃疡外5 cm组(P<0.05).结论 TFF2 mRNA在胃黏膜中广泛分布,胃溃疡患者胃黏膜中TFF2 mRNA的低表达可能是胃溃疡易患因素之一.

目的内脏高敏感性是肠易激综合征(IBS)的重要病理生理特征之一,该文旨在建立内脏高敏性动物模型,并用两种方法验证该模型的有效性.方法取出生后8～21 d的大鼠,每天给予直肠内醋酸刺激,分别在出生后6、8及10周,对这些成年后的大鼠进行直肠扩张,评估其腹部收缩反射(AWR)阈值;并在出生12周后测定大鼠腹壁肌电活动,验证敏感性有无异常改变.结果与新生期生理盐水刺激组(NS组)和成年醋酸刺激组(AA组)相比,直肠扩张时,新生期醋酸刺激组大鼠(NA组)腹部抬高和背部拱起的容量阈值显著降低(P值均<0.01);0.5、0.8、1.2 ml扩张容量下腹壁肌电活动明显增强(P分别<0.01,<0.05和0.05).结论新生期肠道内的慢性刺激,可以在成年后引起慢性内脏敏感性增高,而肠黏膜未见异常病理改变,符合IBS的基本特征.

目的明确肝星形细胞和永生肝星形细胞株HSC-T6是否存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统.方法采用原位酶灌注法分离培养肝星形细胞,采用放射免疫法检测细胞中肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮水平;采用紫外分光光度法测定血管紧张素转换酶活性,免疫组化法检测血管紧张素Ⅱ1型受体的表达;RT-PCR法检测肾素、血管紧张素原、血管紧张素转换酶、血管紧张素Ⅱ1型受体、醛固酮合成关键酶CYPⅡB2 mRNA的表达.结果肝星形细胞和HSC-T6中可检测到肾素活性、血管紧张素转换酶活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮;免疫组化结果显示二者均表达血管紧张素Ⅱ的1型受体;两种细胞均可检测到上述除血管紧张素原以外的4种基因mRNA表达.结论肝星形细胞和HSC-T6存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统.

目的测定头孢曲松钠等七种抗生素在胆汁中的药代动力学参数,为临床医生治疗胆道感染提供合理选择本组抗生素的理论基础.方法犬为实验动物,行胆总管造瘘术,术后分别给犬静脉注射头孢曲松钠、先锋哌酮钠、头孢他啶、头孢唑啉钠、头孢拉定、头孢呋辛钠、头孢美唑等七种抗生素后,分别留取不同时间点的胆汁标本.用微生物法测定各份标本中抗生素的浓度,用3P87软件进行数据计算,得出各抗生素的药代动力学参数.结果头孢哌酮钠在胆汁中的峰值浓度最高,为2 464.7 μg/ml;头孢曲松钠的半衰期最长,达3 024.2 min.头孢呋辛钠和头孢美唑两者在胆汁中的峰值浓度最低,分别为39.8和21.4 μg/ml.半衰期也短,为69.3和102.1 min.余者介于中等.结论治疗胆道感染时,头孢曲松钠、头孢哌酮钠应为首选药,头孢唑啉钠、头孢拉定、头孢他啶次之,而头孢呋辛钠、头孢美唑不宜用于治疗胆道感染.

目的小肠疾病很难诊断,现有的诊断技术又不尽如人意,而胶囊内镜(M2A)能发现整个小肠内的微小病变,且为非侵入性,患者无需住院.因此,对胶囊内镜在小肠疾病诊断中的价值、依从性和安全性进行评估.方法自2002年5月至9月,我们对经结肠镜、胃镜、X线钡餐造影、小肠钡灌造影、血管造影或核素扫描等检查未发现异常的15例疑患小肠疾病的患者,进行胶囊内镜检查,其中不明原因的消化道出血12例.结果 15例中发现病灶11例(73.3%),包括血管发育不良、Dieulafoy病、毛细血管扩张征、静脉扩张、息肉样病变、黏膜下肿瘤、脂肪瘤、口疮样小溃疡(Aphthous ulcer)、克罗恩病、类癌及出血性胃炎等,其中4例患者同时存在2种病灶.所获取的图像质量良好.胶囊停留于胃内的平均时间为82 min(6～311 min),小肠内平均运行时间为248 min(104～396 min),平均到达盲肠时间为336 min(180～470 min),平均记录时间为449 min(300～510 min),医师对胶囊内镜所传输图像的平均读片时间为82 min(30～120 min),平均获取照片数为57 919张,胶囊平均排出体外时间为33 h(24～48 h).整个操作过程患者耐受性甚佳,无任何痛苦,吞咽胶囊无任何困难,检测过程中无任何并发症发生.结论胶囊内镜是对小肠疾病具有诊断价值的医疗设备,其安全性高、依从性好.