2005年 · 第34卷第04期

目的 探讨非霍奇金B细胞淋巴瘤(B-NHL)的病理形态和免疫表型在B-NHL诊断中的价值,评价2001版世界卫生组织(WHO)淋巴瘤分类的可行性.方法依据2001版WHO淋巴瘤分类,应用HE、免疫组织化学(LSAB法)和原位杂交技术对369例B-NHL重新诊断分型.结果 369例B-NHL确定了11个类型,未观察到毛细胞白血病和B-前淋巴细胞白血病, 其中最常见的3个类型依次是:弥漫大B细胞淋巴瘤(189例,51.2%),黏膜相关淋巴组织结外边缘区细胞淋巴瘤(55例,14.9%),滤泡淋巴瘤(39例,10.6%).发生于淋巴结者占42.8%(158例),结外为57.2%(211例).单纯HE形态诊断对比形态结合免疫表型的诊断结果,符合率达80%,免疫组织化学可将B-NHL的诊断正确率提高近20%.结论病理形态是淋巴瘤诊断的基础,免疫表型在诊断和分型中起重要作用,二者与临床特征结合可使绝大多数淋巴瘤得到明确诊断.2001版WHO淋巴瘤分类具有较强的实用性。

目的 探讨颗粒酶B和穿孔素两种免疫活化分子在肝移植急性排斥诊断中的作用,及其与Banff急性排斥反应组织学诊断标准之间的对应关系.方法在常规组织学诊断基础上,将41份肝穿刺标本用颗粒酶B与穿孔素单克隆抗体进行免疫组织化学EnVision二步法标记,IPP图像分析软件计算阳性细胞数/mm2作为免疫活化细胞指数(AI),以组织学诊断作为评判有无急性排斥反应的标准.结果在41份肝穿刺标本中,组织学诊断为急性排斥反应21份,缺乏急性排斥反应组织学改变20份.急性排斥反应组颗粒酶B与穿孔素AI值显著高于无排斥反应组(P<0.001),中重度排斥反应组AI值显著高于轻度及其非确定性排斥反应组(P<0.001).与组织学诊断比较,颗粒酶B的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及诊断一致率分别达到90.0%、95.2%、94.7%、90.9%以及92.7%;穿孔素的各指标也分别达到80.0%以上.结论颗粒酶B与穿孔素是急性排斥反应免疫效应细胞活化标志,在临床肝移植急性排斥反应时表达明显升高,作为组织学诊断急性排斥反应的辅助指标具有相当高的敏感性及特异性,可用于肝移植后肝穿刺标本的鉴别诊断。

目的 检测NY-ESO-1和LAGE-1癌症-睾丸抗原在肝细胞癌中的表达,探讨其作为肝细胞癌免疫治疗靶标的可行性及其与肝癌生物学行为的关系.方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学EnVision二步法检测30例肝细胞癌新鲜标本NY-ESO-1和LAGE-1的表达;另将191例肝癌石蜡组织制成芯片观察NY-ESO-1蛋白在肝癌中的分布和表达.结果NY-ESO-1和LAGE-1基因mRNA在肝癌中的阳性表达率分别是33.3%(10/30)和16.7%(5/30),至少表达1种基因mRNA者为36.7%(11/30);NY-ESO-1蛋白主要分布在肝癌细胞胞质,有效标本中NY-ESO-1表达13.8%(24/174),小肝癌、中晚期肝癌、发生转移肝癌中的阳性表达率逐渐升高,分别为6.8%(3/44)、16.2%(21/130)、23.1%(12/52),不发生转移的肝癌仅为9.8%(12/122),其中转移组与无转移组之间比较差异有统计学意义(P<0.05),全部病例癌组织与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01).NY-ESO-1蛋白的阳性表达与肿瘤大小无关,所有癌旁肝组织均未见NY-ESO-1和LAGE-1的mRNA和蛋白的表达.结论 NY-ESO-1/LAGE-1在肝细胞癌组织中的特异性表达提示其可作为肝细胞癌特异性免疫治疗潜在的靶标;NY-ESO-1在肝癌早期出现,随病情进展表达率逐步增高,转移患者最高,提示NY-ESO-1肽疫苗可能作为晚期肝癌患者治疗手段之一。

目的 探讨p120ctn在非小细胞肺癌组织中的表达及与各临床病理因素和预后的关系.方法应用p120ctn单克隆抗体,采用免疫组织化学SP法检测143例非小细胞肺癌p120ctn表达情况,其中36例同时应用Western blot方法对其蛋白表达和亚型情况进行了观察.结果免疫组织化学:正常支气管黏膜细胞p120ctn表达为细胞膜强阳性,而在非小细胞肺癌中绝大多数表现为膜表达减弱或出现胞质内异位表达,其异常表达率为79.7%(114/143).异常表达与组织学类型无关(P>0.05),但与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),与非小细胞肺癌患者不良预后正相关.胞质的异位表达更容易出现在胞膜表达减弱的病例中,鳞癌中胞质异位表达高于腺癌.Western blot:正常组织中p120ctn总蛋白量明显高于非小细胞肺癌,二者差异有统计学意义(P＝0.003).正常肺组织p120ctn以亚型1(相对分子质量120 000)和亚型3(相对分子质量100 000)表达为主,而肿瘤组织中则以亚型1表达缺失或减弱为主.结论 p120ctn在非小细胞肺癌组织有异常表达,可作为评估预后的辅助指标。

目的 分析涎腺原发性恶性肌上皮瘤临床表现、形态特征和生物学行为.方法对16例涎腺恶性肌上皮瘤组织进行HE染色和免疫组织化学染色,并进行回顾性分析.免疫组织化学采用EnVision法,所用抗体包括肌动蛋白、细胞角蛋白(CK)、上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白、S-100、结蛋白、肌特异性肌动蛋白(MSA)、平滑肌肌动蛋白(SMA)、肌红蛋白,增殖细胞核抗原、白细胞共同抗原和胶质纤维酸性蛋白.结果 16例中男性6例,女性10例,年龄12～65岁,平均44岁.肿瘤主要发生于腮腺和腭部小涎腺.临床上主要表现为快速生长或生长突然加速的局部包块,可有溃疡形成、骨质破坏和神经侵犯.16例中7例为复发病例,2例有颌下或颈部淋巴结转移.大部分肿物侵犯周围涎腺组织或邻近脂肪、肌肉、骨组织,侵入程度不一.肿瘤细胞形态多样化,有透明、梭形、上皮样、浆细胞样型和混合型,有一定细胞异型性,核分裂象较多.肿瘤以透明细胞型为主,占9例.免疫组织化学示瘤细胞CK、EMA、MSA、结蛋白、S-100阳性.结论涎腺恶性肌上皮瘤为比较少见的低度恶性的肿瘤,不易发生淋巴结和远处转移但容易复发,局部软组织和骨组织易受侵犯,生物学行为不一,在组织学的基础上结合免疫组织化学等其他检查可以确诊。

目的 为了研究G3BP(Ras-GAP SH3-binding protein)的功能及作用机制,采用原核表达G3BP蛋白诱导免疫,制备抗G3BP单克隆抗体,并检测G3BP在临床常见肿瘤中的表达情况.方法采用原核表达载体pGEX-5X1,通过IPTG诱导,使用大肠杆菌BL21,高质量表达GST-G3BP融合蛋白.将纯化后的原核表达蛋白注射BALB/c小鼠诱导产生免疫应答,采用经典杂交瘤技术制备单克隆抗体,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色ABC法进行抗体鉴定和肿瘤检测.结果筛选出分泌抗G3BP抗体的单克隆杂交瘤细胞,免疫球蛋白亚类鉴定为IgG1,蛋白免疫印迹及抗原竞争抑制实验表明该抗体是特异性抗G3BP抗体.石蜡切片免疫组织化学法检测临床标本,在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等临床肿瘤活检标本中检出G3BP表达明显增高.在乳腺癌临床组织标本中,G3BP表达水平与c-erbB2表达正相关,与淋巴结转移正相关. 结论成功制备了抗人G3BP单克隆抗体,所得到的特异性G3BP单克隆抗体能够应用于ELISA、Western蛋白免疫印迹以及免疫组织化学染色对不同样本的G3BP表达水平进行检测.G3BP在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中表达明显增高.G3BP有可能作为肿瘤标志物辅助对乳腺癌预后的判断。

目的 对猪内源性逆转录病毒(PERV)体外感染人胚肾细胞系HEK-293的能力进行检测.方法建立体外感染人胚肾细胞系HEK-293的方法,用免疫电镜的方法观察PERV粒子,聚合酶链反应(PCR)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测与PERV共培养24 h后 HEK-293细胞基因组中PERV前病毒基因的整合、表达并对PERV亚型进行鉴定,激光共聚焦显微镜检测PERV-gag蛋白的表达并进行定量分析.结果电镜下可观察到PERV的圆形病毒粒子;与PERV共培养24 h后HEK-293细胞基因组中检测到PERV前病毒DNA,且mRNA也有效表达,PERV亚型为PERV-A,B型;激光共聚焦显微镜观察到PERV-gag蛋白在感染细胞HEK-293的胞质表达,但表达量下降.结论PERV具有体外感染人胚肾细胞系HEK-293的能力,病毒蛋白可以有效表达,因此在猪到人的异种器官移植研究中对PERV可能引起的人兽共患病进行安全性评价是极有必要的。

目的 研究前列腺凋亡反应基因4(par-4)反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞内游离钙离子浓度的上调作用及其抗凋亡意义.方法脂质体介导转染par-4反义寡核苷酸.谷氨酸诱导PC12细胞凋亡.Hoechest 33258/碘化丙啶荧光染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术分析凋亡百分率.Fura-2/AM荧光染色结合激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定钙依赖性蛋白酶Calpain10的mRNA水平.Western印迹测定par-4蛋白表达量.结果与正常对照组(25.6±4.1)相比,谷氨酸诱导PC12细胞中par-4蛋白表达上调(90.0±3.2,P<0.01),par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(52.3±5.0,P<0.01);谷氨酸诱导凋亡组凋亡百分率为53%, par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡(31%,P<0.01);谷氨酸诱导PC12细胞内游离钙离子浓度上调,par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(荧光强度比值分别为167.9±32.4、228.8±36.8,P<0.01);谷氨酸诱导PC12细胞内钙依赖性蛋白酶Calpain10 mRNA水平上调(46.3±3.7),par-4反义寡核苷酸抑制其上调(34.8±2.1,P<0.01).结论 par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞内游离钙离子浓度上调和抑制Calpain10基因转录有关。

目的 探讨wortmannin抗眼内新生血管形成的可能.方法采用免疫荧光、流式细胞分析和Boyden小室迁移实验观察高糖视网膜Müller细胞条件培养基(HGMCM)诱导的内皮细胞增殖和迁移的影响.结果 50nmol/L wortmannin可明显抑制HGMCM诱导的内皮细胞的增殖和迁移,使内皮细胞S期细胞百分率明显下降[(37.82±0.57)%至(21.91±0.23)%,P<0.01],G0/G1期细胞百分率显著升高[(54.57±1.19)%至(65.59±0.41)%,P<0.01],G2/M期细胞增多(P<0.05).结论 wortmannin对HGMCM诱导的内皮细胞的增殖和迁移均有抑制作用,提示wortmannin具有抗视网膜新生血管形成的作用。

一、材料和方法 　　1.材料和试剂:(1)材料:SD大鼠1～2月龄,体重50～100 g,雌雄各半,由东南大学医学院实验动物中心提供.Mini MACS免疫磁珠细胞分选仪、磁性分离柱LS 购自Miltenyi Biotec公司.(2)试剂:Ⅳ型胶原酶、内皮细胞生长因子、胰蛋白酶及转铁蛋白均购自Sigma公司,DMEM培养基购自Gibco公司,异硫氰酸荧光素标记的抗CD34-FITC、抗波形蛋白及抗角蛋白均购自Santa Cruz公司,抗FITC免疫磁珠购自Miltenyi Biotec公司。

一、材料和方法 　　1.材料:收集复旦大学附属肿瘤医院病理科1990-2004年4月间的常规病例4例和会诊病例6例.患者的临床表现、肿瘤的大体形态和随访结果来自于病理申请单或病历记录.另选取10例胃肠道型神经鞘瘤作对照性研究。

淋巴母细胞淋巴瘤(lymphoblastic lymphoma,LBL)是一类少见的,来源于不成熟前体淋巴细胞的高侵袭性肿瘤,约占所有非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin Lymphomas,NHL)的2%～8.5%[1,2],被列入Rappaport 分类的分化不良淋巴细胞淋巴瘤,Lukes 和Collins 分类的曲形核T细胞淋巴瘤,Sternberg肉瘤.随着对淋巴瘤以及急性白血病的进一步认识,发现LBL和急性淋巴母细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是一组临床和实验室特征共同界定的同一肿瘤实体[3],这些特征包括细胞形态学、免疫表型、基因型、细胞遗传学以及临床表现和预后,因此2001年版WHO分类[4],以REAL分型为参考将LBL和ALL均列入前体B/T细胞中,命名为前体B/T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤或前体B/T细胞急性淋巴母细胞白血病.当骨髓中肿瘤性淋巴母细胞数超过25%为白血病;而少于25%为淋巴瘤.LBL/ALL根据细胞起源不同主要分为T、B细胞,LBL 表达T细胞表型的占大多数,约为80%以上,不到20%表达B细胞或其他罕见表型.本文从临床特点、病理形态学、免疫表型、基因型和分子遗传学等方面分别对T、B-LBL/ALL的研究进展作一综述。

近年来,前列腺病理学发展显著 [1-12],在前列腺癌分级[1, 10-14]、前列腺上皮内肿瘤(prostate intraepithelial neoplasia)[6-9,12]、穿刺活检中"有限的腺癌"(limited adenocarcinoma)的诊断 [9]、容易被误诊为前列腺癌的良性病变(carcinoma mimickers)[6-9]、容易被误诊为非肿瘤性病变而漏诊的前列腺癌 [9]、前列腺癌的各种亚型或变异型(variants)的组织形态等方面[8,9,11,12],积累了大量经验。

免疫组织化学三重染色技术是一种可以在同一张组织切片上显示3种抗原的技术方法.该法既可用于常规病理诊断,亦可进行科研课题的研究,因此具有很强的实用价值。

患者男婴,出生3 h,因发现全身黑斑入院.患婴系第一胎,孕40周,经剖宫产娩出.体重3200 g,Apgar评分8分.体检:体温36.6℃,脉搏 95次/min,呼吸 34 次/min.呼吸音粗,未闻及湿啰音.心律齐,未闻及病理性杂音.腹平软,脐部柔软,无渗出.血气分析:pH 7.157,PCO2 8.73,PO2 5.68,O2SAT 61.1%,ST.HCO3 18.1,BB 40.7.入院后给予吸氧等对症治疗,但患儿仍出现心律减慢,呼吸偏慢浅,终因抢救无效死亡。

患者男,42岁.左侧附睾头部肿物4年,无性欲丧失及男性乳腺发育等内分泌紊乱的症状.近2年逐渐增大.于2004年4月1日入院.B超示肿物为实性,精索、左侧睾丸、右侧睾丸、右侧附睾均未见异常.临床诊断:左附睾头部纤维瘤?结核?行外科手术切除.术中可见肿物位于左侧附睾头部,边界清楚,睾丸未见异常。

患者女,29岁.发现左乳肿块5月于2002年12月12日入院.体检:左乳内下象限扪及3 cm×3×2 cm质硬活动肿块,表面光滑.B超示左乳有3 cm×2 cm×2 cm界限清楚的弱回声区.临床诊断:左乳腺肿瘤性质待查.行肿瘤切除术。

患者男,50岁.因低热、黑便伴右上腹疼痛1个月于2003年11月20日入院.患者既往无肝炎及结核病史.CT检查:右半结肠肿瘤伴肝内多灶性转移.实验室检查:HBsAg:阴性;谷丙转氨酶:26U;甲胎蛋白(AFP):7 ug/L;癌胚抗原(CEA):106ug/L.临床诊断:右半结肠癌伴肝转移.行右半结肠根治切除术.术中探查肝表面见多个灰白色结节,最大者直径5 cm。

患儿男,1岁.因左侧鼻塞流黄鼻涕3个月,左眼球突出1周于2003年5月9日收入院.患儿家长于3个月前发现患儿左侧鼻塞伴流黄鼻涕,睡眠时出现打鼾张口呼吸,并逐渐加重,1周前出现眼球突出.专科检查:鼻部外形无明显畸形,鼻中隔向右偏曲,左侧鼻腔内可见肿物生长,表面有脓性分泌物.左眼睑肿胀,左眼球向前外侧突出,眼球运动正常.CT示左侧鼻腔、上颌窦和筛窦有密度增强影。

患者女,37岁.因左颞部复发性肿瘤月余,于2003年3月31日就诊.1年半前发现局部肿块,缓慢生长,临床于11个月前行第1次手术切除,术中见肿瘤位于肌间筋膜内,略呈梭形,长径1.5 cm,边界清,局部皮肤无色素痣.病理会诊意见为恶性黑色素瘤.遂入住上级医院行扩大切除术,病理报告未见残存肿瘤.术后进行了干扰素治疗和放疗.查体:浅表淋巴结不肿大,系统查体无异常发现.左颞部手术瘢痕旁深部触及肿块,直径约1cm,境界清,不活动.临床诊断恶性肿瘤术后复发,手术切除送检。

患者男,23岁.5年前发现左下颌骨小肿物,伴疼痛、咀嚼痛,未予处理.肿物渐增大.患者局部无红肿热痛症状,体重无降低.体检:双侧面部基本对称,无面瘫,颞下颌关节区无压痛,开口度及开口型均无异常.口内第一磨牙区颊舌侧可见一2cm×2cm大小的肿物,颊舌向膨胀,质硬,界限清楚,移动度差,按压痛.表面黏膜颜色正常,未触及骨质破坏.颌颈部未及肿大淋巴结.曲面断层片示:左第一磨牙牙根周围2cm×2cm大小不均匀斑片状高密度影,累及牙根,肿物周围可见一清晰的环状透亮带.患者入院后行肿物及受累牙齿完整切除术加周围软组织刮除术.术后病人恢复良好,无口唇感觉异常等并发症。

编者按当下越来越多的医院与患者签订了"手术中快速冷冻病理检查知情同意书",如此既能保护患者,又可以规避病理科的风险和减少错诊率.在此刊登南通医学院附属第二医院杨其昌医师的来稿.从遵循国家相关的法律法规和医学伦理学的角度,本着对医患双方负责的原则,知情同意书应包括哪些内容,如何书写,值得认真研究,就此提出问题,希望引起大家的重视,并展开讨论。

北京市实验动物管理办公室曾多次编印了<实验动物政策法规汇编>,指导实验动物的管理和使用.纵观2003年版,作为科研、教学和研发工作人员,应熟知以下信息。

王念黎(Wong Nim Lai)，澳门镜湖医院病理科主任，1938年出生于澳门，自幼在国内受教育，1962年毕业于中山医学院，毕业后随即考入中山医学院病理解剖学教研组为梁伯强教授的研究生。1972年调回中山医学院工作，1978年到澳门镜湖医院工作，协助建立澳门第一间病理实验室。在1986年前是澳门唯一的病理医生，负责全澳两间医院及其他一切的病理检查工作。2004年获澳门特区政府颁发“专业功绩勋章”。

我国著作权法公布以来，已得到越来越广泛的重视，我们在科技期刊工作也要不折不扣地执行著作权法。在此将本刊对作者署名和志谢的有关要求重申如下。

北京市淋巴瘤病理读片小组始于1992年，地点在北京医科大学人民医院，参加读片的专家有朱昌仁、严庆汉、廖松林、李竞贤、纪小龙等教授，读片活动坚持数年后于90年代后期暂停。由于近年来淋巴瘤研究的快速发展，2001年WHO颁布了淋巴瘤新分类，对学习和交流淋巴瘤的要求越来越高。为了满足逐渐增长的需求，并为北京的淋巴瘤爱好者提供一个相互交流和学习的平台，2003年由北京军区总医院皋岚湘医生和北京友谊医院病理科周小鸽医生提出了恢复北京市淋巴瘤病理读片小组活动的想法，