2025年 · 第48卷第08期

血友病A和血友病B是遗传性凝血功能障碍导致的出血性疾病，传统治疗主要依赖于凝血因子Ⅷ（FⅧ）或凝血因子Ⅸ（Factor Ⅸ，FⅨ）制剂进行替代疗法。然而，传统疗法虽在一定程度上缓解了患者的出血症状，但也存在一些局限性，如需频繁输注、存在感染风险以及部分患者可产生抑制物等。近年来，随着创新型非因子药物的出现，血友病的治疗策略正发生显著的变化。但这些新型药物不仅会干扰传统的出凝血检测项目，且无法通过传统凝血检测来全面评估其疗效和安全性。因此，迫切需要开发和优化新的实验室检测方法，以确保能够准确评估患者对非因子治疗的响应和药物本身的止血能力。虽然已有研究探讨了非因子药物的凝血因子等效性，但这种等效性并不能完全反映患者用药后的实际止血效果，因此不适合作为预后指标。与评估凝血因子等效性相比，整体凝血检测方法如凝血酶生成试验（TGA）能更准确地评估其疗效和安全性，TGA能够综合考虑凝血过程中的多个因素，提供更全面的凝血功能评估，而且结合患者症状进行综合分析，能够进一步增强TGA提示预后的能力，为临床决策提供更可靠的依据。

肝素类药物是防治血栓栓塞性疾病常用的抗凝药物，该类药物的正确使用及合理监测对于保证治疗的安全性和有效性尤为重要。本专家共识参考国内外相关文献，充分考虑肝素类药物应用的现状和进展，组织抗栓领域相关的检验和临床专家，对肝素类药物的适应证、剂量、监测等方面进行了充分讨论，特别是明确了抗Ⅹa活性等实验室指标的临床应用方法，并形成专家推荐意见，以期推进肝素类药物的安全、有效使用，及实验室监测的标准化。

目的 探索多指标联合监测重症监护病房（ICU）患者低分子肝素（LMWH）的应用价值。 方法 回顾性病例对照研究。纳入2022年1月31至2023年11月30日在四川大学华西医院ICU接受LMWH治疗并监测抗Ⅹa活性的381例患者，其中男性264例，女性117例，年龄58（48，71）岁。收集临床资料和相关实验室检查结果，包括抗Ⅹa活性、抗凝血酶（AT）活性、凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）、纤溶酶-抗纤溶酶复合物（PIC）、常规凝血功能指标如活化部分凝血活酶时间（APTT）、以及常规肝肾功能损伤指标如丙氨酸转氨酶（ALT）和肌酐（CREA）等。根据患者血栓事件的发生发展情况将患者分为3组（血栓控制、血栓进展和出血组）。使用单因素及多因素Logistic回归分析影响抗Ⅹa活性的独立危险因素。 结果 共纳入381例患者，其中213例（55.9%）患者的血栓得到有效控制，81例（21.3%）患者血栓进展，87例（22.8%）患者发生出血事件。血栓控制组仅35例（16.4%）、血栓进展组仅16例（19.7%）、出血组仅16例（18.4%）患者的抗Ⅹa活性结果全部位于目标范围内（0.2~0.4 IU/ml）。3组患者间抗Ⅹa活性比较，差异无统计学意义（H=1.678，P=0.432）。单因素及多因素Logistic回归分析显示AT活性低是抗Ⅹa活性达标率低的独立危险因素（ATnadir，OR=1.031，95%CI 1.016~1.046，P<0.05）。与血栓进展组和出血组比较，血栓控制组用药期间TAT小于临界值的占比更高（H=8.519，P=0.014），TAT/PIC比值≤临界值的占比也更高（H=15.56，P<0.001）。与血栓控制或血栓进展组比较，发生出血事件患者的AT活性更低（H=14.968，P=0.001），APTT更长（H=6.815，P=0.033），ALT更高（H=13.774，P=0.001），CREA更高（H=14.068，P=0.001）。 结论 ICU患者的LMWH治疗需要进行实验室监测，抗Ⅹa活性虽能反映LMWH的抗凝效果，但不同结局患者之间抗Ⅹa活性无差异，因此抗Ⅹa活性用于评估LMWH治疗的ICU患者的血栓/出血风险的价值有限。TAT和TAT/PIC比值降低可提示血栓进展风险低，常规凝血指标以及常规肝肾功指标异常则更常见于发生出血事件的患者。

目的 比较一期凝固法与发色底物法对一种长效重组FⅧ制剂检测结果的准确性，探索不同方法间标准化换算体系。 方法 观察性研究。分别采用一期凝固法（选用西门子Actin FSL试剂、沃芬SynthASil试剂、思塔高STA PTT-A试剂）和Hyphen Biomed发色底物法试剂，对FⅧ活性（FVIII activity，FⅧ：C）理论值为1 000、800、600、500、400、300 IU/L的稀释血浆进行测定。通过SNK法比较不同方法测得的FⅧ：C，计算回收率评估各方法检测准确性；采用凝血酶生成试验（TGA）验证样品活性；通过线性回归分析评估各检测体系活性相关性。 结果 采用Actin FSL试剂时，FⅧ：C平均回收率约为41.9%~51.4%，使用SynthASil试剂平均回收率为21.7%~24.1%，采用STA PTT-A试剂平均回收率仅为1.25%~4.0%，均未达到允许范围标准。不同于一期凝固法，采用发色底物法试剂平均回收率稳定在80.8%~87.2%。TGA检测结果证实样品活性与发色底物法活性相符。回归分析表明不同检测体系的FⅧ：C可通过系数比例进行标准化换算与比较。 结论 部分市售一期凝固法检测体系在长效重组FⅧ的临床检测中有局限性，采用发色底物法检测更为准确。一期凝固法检测结果可通过标准化换算系数实现FⅧ：C的跨方法学校正，从而进一步提升血友病治疗效果监测的准确性。

目的 验证并优化活化部分凝血活酶时间（APTT）延长混合试验结果判断方法及临界值，提升其在单纯因子缺乏、狼疮抗凝物阳性、FⅧ抑制物阳性不同病因鉴别中的临床应用价值。 方法 回顾性横断面研究收集2022年1月1日至2023年12月31日在吉林大学第一医院检验科检出的不明原因APTT单独延长进行混合纠正试验的患者130例，其中男性84例，女性46例。分别采用罗斯纳指数（RI）法、百分比纠正（“Chang”）法、正常参考区间（NRI）法、差值法、孵育后延长时间及百分比法进行结果计算（包括混合即刻和混合孵育2 h）。按照临床诊断分为单纯因子缺乏组（51例）、狼疮抗凝物阳性（LA）组（56例）、FⅧ抑制物阳性组（23例）。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析APTT延长混合纠正试验的不同判断方法在不同病因者的临界值，通过曲线下面积（AUC）、敏感度、特异度等指标对临界值加以优化，并与实验室现有判读方式比较。 结果 对于单纯因子缺乏，即刻RI指数<7.5%、孵育RI指数<13.9%时的AUC分别为0.87、0.90，敏感度分别为87.8%、83.8%，特异度分别为72.0%、80.0%，二者联合诊断的敏感度、特异度分别为87.3%、94.0%，判定准确度从现有规则的84.6%（110/130）提升至93.1%（121/130）；对于LA阳性者，即刻RI指数>10.3%联合孵育后延长时间百分比<9.1%的敏感度、特异度分别为88.5%、99.8%，判定准确度从现有规则的80.0%（104/130）提升至86.2%（112/130）；对FⅧ抑制物阳性者，孵育RI指数>17.0%联合孵育后延长时间百分比>9.1%的敏感度、特异度分别为99.8%、100.0%。判定准确度从现有规则的89.2%（116/130）上升至94.6%（123/130）。 结论 验证并优化了APTT延长混合纠正试验鉴别单纯因子缺乏、FⅧ抑制物及LA阳性的判断方法及临界值，能够有效提高判定敏感度和特异度。

目的 探讨血细胞分析血小板参数对MYH9基因相关疾病（MYH9-related disorders，MYH9-RD）的筛查价值。 方法 横断面研究，以2016年5月1日至2024年8月31日期间深圳市儿童医院诊治的MYH9-RD患者38例为研究对象，男24例、女14例；年龄11.5（3.8，35）岁；按基因变异位置分为“头部”8例和“尾部”30例；按临床表现分为“单纯血液学”16例和“伴发血液学外表现”22例。以同期免疫性血小板减少症（ITP）39例，急性淋巴细胞白血病（ALL）38例，健康人40名为对照。采用血细胞分析仪器检测血小板相关参数，并采用手工法计数血小板数量和显微镜人工观察血小板大小。采用Kruskal-Wallis检验比较MYH9-RD与ITP、ALL、健康对照组之间血小板参数的差异，采用受试者工作特征（ROC）曲线评估血小板参数对MYH9-RD的诊断效能。 结果 MYH9-RD血小板平均体积（MPV）为13.4（11.2，14.7）fl、未成熟血小板比率（IPF）为52.7%（43.5%，58.0%）、大血小板比率（PLCR）为57.6%（45.0%，62.9%）、镜检大血小板比率（PLCR-M）为30.0%（25.0%，30.0%），均高于ITP、ALL与健康对照组（均P<0.05）。MYH9基因“头部”变异患者血小板计数［24.5（15.0，47.5）×109/L］低于“尾部”［69.0（49.5，86.3）×109/L］，差异有统计学意义（Z=-3.493，P<0.001）；而IPF高于“尾部”（t=2.024，P=0.044）；“伴发血液系统外表现”患者血小板计数低于“单纯血液学”（t=-2.015，P=0.043）。IPF诊断MYH9-RD的最佳截断值为26.7%，敏感度为100%，特异度为98.7%，曲线下面积为0.999（95%CI 0.995~1.000），高于MPV、PLCR和PLCR-M等参数。 结论 lPF优于MPV等其他血小板参数，对区分MYH9-RD和ITP、ALL等具有较高的诊断效能，可作为MYH9-RD早期筛查的简便有效指标。

目的 对3个新的PROS1基因杂合移码突变导致的遗传性蛋白S（PS）缺陷症家系进行表型和基因突变分析，探讨其分子发病机制。 方法 病例报告与病例系列研究。调查2025年2月1日至28日就诊于首都医科大学附属北京积水潭医院的3例先证者及其家系成员（共3代14人）。收集3例先证者及其家系成员的临床资料；检测所有成员相关凝血指标；用凝固法检测蛋白S活性（PS：A）、用ELISA法检测总蛋白S抗原量（TPS：Ag）和游离蛋白S抗原量（FPS：Ag）。采用PCR技术扩增先证者PROS1基因全部外显子及其侧翼序列，通过直接测序法进行基因分析，寻找变异基因并用克隆测序予以验证，同时分析家系成员相应变异位点。用校准的自动凝血酶生成方法检测凝血酶生成情况。用ClustalX-2.1-win软件分析变异位点保守性；Mutation Taster和Franklin.genoox在线生物信息学软件预测变异位点致病性；用PyMol软件分析变异前后蛋白质空间结构的改变。 结果 3例遗传性PS缺陷症先证者PS：A、TPS：Ag与FPS：Ag均降低。基因测序分析共发现3种PROS1基因变异，3个先证者均为杂合移码变异：先证者A为p.Gln51Arg fs*2杂合变异；先证者B为p.Met251Valfs*17杂合变异；先证者C为p.Thr478Tyrfs*21杂合变异。保守性分析结果表明，p.Gln51、p.Met251及p.Thr478位点在不同物种间均不保守；Mutation Taster和Franklin.genoox分析提示上述变异位点均具有致病性；蛋白质结构模型分析显示，p.Gln51Arg fs*2、p.Met251Valfs*17及p.Thr478Tyrfs*21变异均可导致蛋白质空间构象发生显著改变。 结论 PS p.Gln51Arg fs*2、p.Met251Valfs*17及p.Thr478Tyrfs*21杂合移码变异可通过改变PS分子空间构象，降低其结构稳定性，从而导致PS缺陷症的发生。

目的 建立一种液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）准确测定血浆Lyso-GL-3浓度。 方法 采用固相萃取技术处理血浆样本；在正离子模式，多反应监测（MRM）条件下，LC-MS/MS测定Lyso-GL-3浓度；验证方法的线性范围、检出限与定量限、正确度、精密度、基质效应、携带效应和血浆样本稳定性，并结合酶学和基因的检测结果来比对Lyso-GL-3阳性患者的准确度。 结果 Lyso-GL-3在1.25~400 nmol/L范围内线性良好，检出限为0.15 nmol/L、定量限为0.50 nmol/L，加标回收率为88.78%~108.96%，批内精密度、批间精密度、基质效应的变异系数（CV）均<15%，携带效应结果为0.55。血浆样本在冷藏条件下可稳定性保存30 d。临床符合度为100%。 结论 建立的血浆Lyso-GL-3浓度LC-MS/MS检测法，检测时间为2.5 min，简单快速，结果准确可靠。

目的 评估平衡透析联合液相色谱-串联质谱检测游离睾酮的性能。 方法 前瞻性观察性研究。在中国医学科学院北京协和医院妇科门诊收集2024年6月1日至9月30日161例表观健康的26（24，32）岁育龄期女性样本，进行浓度测定。本研究将血清样本平衡透析后，使用磁珠法提取透析液中的游离睾酮，磁珠提取洗脱后在原位使用盐酸羟胺直接对游离睾酮进行衍生反应，联合液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）对游离睾酮进行定量检测。参考《液相色谱-质谱临床应用建议》《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》及 CLSI-C62A等对方法的线性、定量下限、精密度、正确度、基质效应及携带污染进行验证。使用Origin 2019 分析前处理优化过程的变化情况和临床样本检测结果的分布范围；使用WPS Office 2019进行性能验证数据的计算。 结果 在1~250 pg/ml线性范围内R2>0.99；定量下限为1 pg/ml；日内和日间不精密度变异系数均小于10%；回收率在92.60%~99.10%；相对基质效应偏差均在6%范围内；携带污染不影响游离睾酮的定量分析。 结论 本研究建立的磁珠提取-原位衍生联合液相色谱-串联质谱法检测游离睾酮的性能良好，可用于育龄期女性游离睾酮浓度的检测。

目的 探讨流式细胞术检测T细胞受体β链恒定区TRBC1/TRBC2双标记在T细胞淋巴瘤克隆性鉴定中的临床应用价值。 方法 回顾性病例对照研究。收集郑州大学第一附属医院2024年12月10日至2025年3月5日期间收治的侵犯骨髓的30例成熟T细胞淋巴瘤患者，男性16例，女性14例，年龄62（54，71）岁；10例T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤患者，年龄11（7，33）岁，及30例无T淋巴细胞增殖性疾病的对照者，男17例，女13例，年龄55（47，67）岁。采用多参数流式细胞术（FCM）分析骨髓中αβ-T细胞不同亚群TRBC1与TRBC2的表达；基于T细胞免疫表型标志物（CD3/CD2/CD5/CD7等）设门找出肿瘤性T淋巴细胞，并分析其TRBC1与TRBC2的表达特征。多组间比较采用Kruskal-Wallis检验，两组间比较采用Wilcoxon秩和检验。 结果 成熟T细胞淋巴瘤组中，66.7%（21/30）病例表现为TRBC1或TRBC2单型性表达，33.3%（9/30）表面CD3阴性的病例完全缺失表面及胞内TRBC1与TRBC2（双阴性），结合TCR基因重排阳性，其生物学本质仍为单克隆性增殖；对照组αβ-T细胞及其亚群的TRBC1和TRBC2呈多型性表达。与对照组αβ-T细胞相比，成熟T细胞淋巴瘤中TRBC1（U=270.00，P<0.05），TRBC2（U=300.00，P<0.05）分布具有统计学意义。对照组T细胞亚群中，以TRBC1或TRBC2阳性细胞>85%为阈值，在23%（7/30）的对照组中共检测到12个意义未明的T细胞克隆性增殖（T-CUS），与CD57+T细胞相关，提示免疫衰老或慢性抗原刺激。在T-ALL/LBL中，2例患者为胞内TRBC单型性，8例患者胞内TRBC呈双阴性表达，有助于T-ALL/LBL与正常胸腺细胞（为多型性TRBC表达）的鉴别诊断。 结论 多参数FCM联合TRBC1与TRBC2的双标记能够有效区分肿瘤性T细胞与正常T淋巴细胞群体，是判断T细胞克隆性的重要依据，并能明确TRBC亚型（TRBC1或TRBC2）。

目的 分析外加葡萄糖实验对慢性肾脏病（CKD）患者尿肌酐相关肾损伤标志物的干扰。 方法 本研究采用横断面研究。选取2023年10月1日至2024年3月31日于北京大学第一医院就诊的CKD患者，年龄为（50±18）岁，男性患者90例，女性患者70例。收集患者的新鲜晨尿，纳入160份尿液样本。将尿液样本分成5份，每份225 μl，其中1份加入75 μl去离子水作为对照样本，其余各加入120、480、960、1 200 mmol/L葡萄糖溶液75 μl，最终得到葡萄糖浓度分别为30、120、240、300 mmol/L的尿液样本。分别使用酶法和苦味酸法测定每份样本的尿肌酐，并计算尿白蛋白-肌酐比值（uACR）、尿蛋白-肌酐比值（uPCR）、尿转铁蛋白-肌酐比值（uTRF/uCr）、尿α1-微球蛋白-肌酐比值（uA1M/uCr）、尿免疫球蛋白G-肌酐比值（uIgG/uCr）、尿N-乙酰葡萄糖苷酶-肌酐比值（uNAG/uCr）。 结果 在高葡萄糖浓度条件下，酶法与苦味酸法在检测尿肌酐相关肾损伤标志物时存在显著差异（P<0.05）。葡萄糖浓度为30、120、240、300 mmol/L时，酶法肌酐的平均百分偏差为-0.19 %、-0.27 %、-0.20 %、-0.21 %；苦味酸法肌酐的平均百分偏差为0.78 %、1.26 %、1.35 %、1.38 %，随着葡萄糖浓度的增加，加糖前后测定结果的偏差逐渐增大。酶法测定uACR的平均绝对偏差为-0.01、1.27、0.95、1.10 mg/g；苦味酸法测定uACR的平均绝对偏差为-11.69、-14.98、-16.91、-18.51 mg/g，明显高于酶法且平均偏差的绝对值随葡萄糖浓度升高而增大。对于uPCR、uTRF/uCr、uA1M/uCr、uNAG/uCr、uIgG/uCr，酶法测定的偏差均小于苦味酸法测定的偏差。 结论 酶法肌酐及相关肾损伤标志物测定受葡萄糖浓度的影响较小，苦味酸法肌酐及相关肾损伤标志物测定结果受葡萄糖浓度影响较大。

目的 利用转录组mRNA测序检测射血分数轻度降低型心力衰竭（HFmrEF）和射血分数保留型心力衰竭（HFpEF）患者的差异表达基因，探讨差异基因与患者预后的关系。 方法 病例对照研究。选取2021年11月至2022年1月于泰达国际心血管病医院治疗的HFmrEF患者10例、HFpEF患者10例、健康体检者10名；通过转录组mRNA测序筛选差异表达基因。同时选取2021年11月至2022年12月于泰达国际心血管病医院治疗的HFmrEF患者50例、HFpEF患者62例、健康体检者57名进行验证；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测差异基因在各组中的表达情况。受试者工作特征（ROC）曲线及其曲线下面积（AUC）评估差异基因的辅助鉴别诊断价值及预后判断价值。对患者定期随访，记录出院后1年内住院不良心血管事件，包括心源性死亡和心力衰竭再入院。采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析，并用log rank检验；Cox回归分析随访1年差异mRNA是否为临床验证队列HFmrEF和HFpEF患者不良预后的危险因素。 结果 相对于HFpEF组，HFmrEF组共筛选出差异表达基因4个（3个上调基因和1个下调基因），校正P均<0.05。选取与心血管疾病发生发展相关的基因SLC12A1、C15orf48、SPP1进行临床人群验证，RT-qPCR结果显示，HFmrEF组SLC12A1基因表达明显高于HFpEF组（校正P<0.001）。SLC12A1对HFmrEF和HFpEF的辅助鉴别诊断价值的AUC为0.802（P<0.001）。ROC曲线分析SLC12A1对HFpEF患者不良预后的判断价值，当临界值为6.634时，AUC为0.737（P=0.003）。根据临界值分组，Kaplan-Meier生存分析结果显示，SLC12A1≤6.634患者心脏不良事件发生率高于SLC12A1>6.634患者（P=0.001）。Cox多因素回归分析显示，SLC12A1≤6.634组发生心脏不良事件的风险是SLC12A1>6.634组的6.787倍（HR=6.787，P=0.011）。 结论 转录组mRNA测序分析筛选了HFmrEF和HFpEF的差异表达基因，其中SLC12A1可考虑作为辅助鉴别诊断HFmrEF和HFpEF的新型分子生物标志物，同时SLC12A1也可作为HFpEF患者的辅助判断预后的生物标志物。

先天性凝血因子Ⅶ缺乏症是一种罕见的常染色体不完全隐性遗传性疾病，由凝血因子Ⅶ（FⅦ）基因缺陷引起，发生率约为1/500 000。抗磷脂抗体综合症较为常见，是获得性血栓病的常见原因。但后者合并前者，临床极为罕见，给诊断、治疗带来困难。本文报道了1例先天性凝血因子Ⅶ缺乏症合并抗磷脂综合征患者在发生门脉血栓后的实验室检查及诊疗经过，并以此患者为例进行相关文献回顾。

肝素诱导的血小板减少症（HIT）是一种由抗血小板因子4（PF4）-肝素复合物抗体介导的血栓前状态，严重者可导致致命性血栓形成。目前HIT的诊断主要依赖于临床表现与实验室检测，后者在HIT的诊断中占据重要地位。然而，国内HIT相关实验室检测仍以免疫学筛查为主（但缺乏IgG特异性检测试剂盒），功能学检测则因仪器技术要求高、部分方法具有放射性等因素，在大多数临床实验室受限条件下难以开展。近年来，随着新技术的发展，流式细胞术、液相质谱等方法逐步应用在HIT诊断中，并在提高诊断特异度和临床可行性方面展现出潜力。

随着输血医学的发展和血小板相关制剂的广泛使用，血小板输注已成为临床上重要的治疗措施之一。为提高血小板输注的安全性和有效性，血小板血型检测在临床实践中逐渐普及开展，同时产生许多新的检验技术与方法，如流式细胞免疫微球阵列分析、基于微孔板固定化重组单抗原的酶联免疫吸附法、第三代测序等。目前，血小板血型检测已取得显著进展，包括血清学检测方法的改良、多平台检测技术的整合优化以及高通量分子分型技术的产生。血小板血型检测技术的发展显著提升了检测精准度和临床适用性，为安全输血、血小板相关疾病诊疗及抗血小板药物研发提供了重要支撑。