2017年 · 第40卷第07期

高通量测序技术逐步发展成熟，临床应用越来越广泛，特别是在无创产前检测、罕见遗传病和肿瘤预防诊断等领域，成为精准医疗不可或缺的技术手段。随着技术进步，长读长单分子测序开始崭露头角，下一代测序朝向单细胞、长读长、低成本和转录组方向发展。由于临床检测特殊性，当前国内高通量临床应用体系包括遗传咨询、检测标准、质控、监管、数据库建设等还不健全，还需要在实际应用中不断总结完善。(中华检验医学杂志，2017, 40：483－485)

下一代测序技术大大提高了临床对罕见遗传病的诊断能力及精准治疗的可能性。为充分发挥这一新技术的临床应用，在完善测序技术、数据质量、变异分析及临床意义解读等方面的同时，还需要结合完善的临床表型评估及提供检测前后的遗传咨询。预期下一代测序会给更多的罕见病患者及家庭带来福音。(中华检验医学杂志，2017, 40：486-488)

下一代测序大力推动了无创产前检测的研究和应用。基于下一代测序的孕妇外周血浆胎儿游离DNA检测技术筛查胎儿患染色体非整倍体综合征(T21、T18、T13)的灵敏度高，假阳性率和假阴性率低，在全球广泛应用。性染色体非整倍体、常见染色体微重复微缺失综合征以及一些单基因病的无创检测也已在技术上实现。未来NIPT面临的主要挑战将不在技术层面，而在于配套服务和监管的完善。(中华检验医学杂志，2017, 40：489－491)

过去十余年，下一代测序(NGS)技术不断发展，逐渐从科研走向了临床诊断领域，并以其简单快速、高分辨率、高通量的特点，在肿瘤个性化诊疗、无创产前筛查和遗传性疾病筛查中都发挥了越来越重要的作用，在感染性疾病上也有着广阔的应用空间。本文主要针对NGS技术在不同感染性疾病检测的临床应用进行介绍。(中华检验医学杂志，2017, 40：492－494)

目的 通过1例22号染色体嵌合三体的产前诊断案例探讨无创产前检测(NIPT)检测异常结果的后续产前诊断策略。 方法 收集2016年12月就诊于新华医院产前诊断中心，超声显示胎儿颈项透明层增厚(3.5 mm)的孕妇1例。该孕妇在孕12＋2周抽取其外周血进行NIPT检测。于孕16＋2周接受了羊膜腔穿刺，进行羊水染色体核型分析与染色体组芯片检测。 结果 NIPT检测结果显示胎儿唐氏综合征、18-三体综合征和13-三体综合征均为低风险，而对其他染色体异常检测提示22号染色体数目偏多。羊水核型分析共计数35个培养细胞，配对分析5个染色体核型，均为正常女性核型。染色体组芯片结果为整条22号染色体嵌合重复，拷贝数为2.26。判断为22号染色体低比例嵌合三体可能性大。 结论 基于NIPT提示22号染色体数目偏多的临床案例，建议对于NIPT提示的染色体异常结果，采取传统核型分析结合染色体微阵列芯片检测的诊断策略。(中华检验医学杂志，2017, 40: 495-499)

目的 利用基因的审核归档策略进行矮小测序基因包设计。 方法 本研究详细介绍了基因审核归档策略，通过收集遗传学证据和功能证据，对基因－疾病关系进行分类，并且以身材矮小诊断基因包的设计为例，展示了基因审核归档过程对靶向测序基因列表设计的影响。 结果 通过基因审核归档，将机械搜索到的身材矮小基因包基因数量从1 276个精简到有效的705个，利用该基因包对全国371例身材矮小患者进行测序分析，诊断率可达到19.7%。该基因审核归档过程降低了假阳性的几率，同时在不影响诊断率的前提下降低了诊断成本和劳动时间。 结论 基因审核归档是二代测序诊断中的重要环节，应随着基因诊断的普及而得到广泛重视和应用。(中华检验医学杂志，2017, 40：500－504)

目的 探讨妇女阴道微生物群落构成与宫颈癌前病变的关系。 方法 采集2014年7月至2015年7月于中南大学湘雅二医院就诊的22名健康女性(对照)及宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)患者18例和宫颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ级(CINⅡ/Ⅲ)患者24例的阴道分泌物，分别对每份标本进行细菌基因组DNA提取、16S rRNA V3、V4区基因扩增及采用高通量测序技术对扩增的PCR产物进行测序等步骤，再采用Uparse软件、Mothur分析流程和LefSe统计软件，分析阴道微生物群落物种丰度和结构，并对各组女性的阴道微生物群落构成进行比较。 结果 CINⅡ/Ⅲ组标本的Alpha多样性指标(Chao：63±32；ACE：72±38；辛普森指数：0.70±0.27；香农指数：0.70±0.63)与对照组(Chao：48±24；ACE：54±25；辛普森指数：0.71±0.27；香农指数：0.65±0.58)比较，差异均无统计学意义(W＝192，P＝0.11；W＝189，P＝0.10；W＝281，P＝0.72；W＝241，P＝0.62)；CINⅠ组样本的ACE值(85±37)和Chao值(66±25)与对照组(ACE：54±25；Chao：48±24)比较，差异有统计学意义(W＝99，P＝0.006；W＝113，P＝0.02)。在门水平，对照组中阴道菌群78.69%(309 020/392 722)由厚壁菌门组成，放线菌门占16%(62 846/392 722)。CINⅠ组中厚壁菌门减少至64.86%(208 422/321 318)，放线菌门增加至27.71%(89 040/321 318)。CINⅡ/Ⅲ组阴道菌群构成和对照组相似。在属水平，CINⅡ/Ⅲ组和对照组菌群结构相似，以乳酸杆菌为优势菌属[71.81%(307 658/418 424)]，同时还包括加德纳菌属[12.91%(55 299/428 424)]，其他如普雷沃菌属、奇异菌属等含量较少。在CINⅠ组中，乳酸杆菌属含量下降[56.26%(180 787/321 318)]，加德纳菌属相对丰度上升[19.62%(63 057/321 318)]，奇异菌属含量上升[7.7%(24 746/321 318)]。本研究发现大部分样本阴道菌群类型(CST)为CSTⅢ、CSTⅠ，分别以惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌为优势菌。3组间阴道菌群类型差异无统计学意义(χ2＝2.72, P＝0.949)。LEfSe分析发现CIN组和对照组中某些细菌类群丰度发生变化。在属水平，地杆菌属、奇异菌属、脲原体属等丰度差异有统计学意义(P<0.05；P<0.05；P<0.01)。在种水平，血清9型解脲脲原体丰度差异有统计学意义(P<0.01)。 结论 不同级别CIN患者阴道菌群多样性及菌群类型与健康妇女相似，但部分细菌类群丰度发生了改变；解脲脲原体等条件致病菌在CIN患者丰度增加。(中华检验医学杂志，2017, 40：505-510)

目的 通过与BD MAX试剂盒检测临床粪便标本中艰难梭菌毒素基因的比对，评价本实验室前期研发的艰难梭菌毒素基因检测方法。 方法 本研究为临床应用研究。2014年7月1日至9月30日采集浙江中医药大学附属杭州市第一医院的腹泻患者粪便标本147份，分别采用BD MAX和本实验室前期研发的艰难梭菌毒素基因检测方法进行检测。BD MAX试剂盒采用自动化核酸提取和PCR检测；实验室前期研发方法通过提取粪便DNA后进行荧光定量PCR检测，最后采用SPSS10.0软件进行分析。 结果 147份标本中，两方法均检出艰难梭菌毒素B基因阳性33份，阴性114份，其中有4份标本的结果不一致。以BD MAX试剂盒的结果为标准，得出本实验室前期研发的艰难梭菌毒素基因检测方法的敏感度为93.94%(31/33)，特异度为98.25%(112/114)，阳性预测值为93.94 %(31/33)和阴性预测值为98.25 %(112/114)。且上述两种方法检测结果的一致性较好(Kappa值为0.922，P<0.01)。 结论 本实验室前期研发的艰难梭菌毒素基因检测方法与BD MAX试剂盒性能相似，敏感度高、特异度强，同时该方法成本低并可直接对腹泻标本进行测定，无需配套提取仪器，更适合我国临床开展常规艰难梭菌毒素基因检测。(中华检验医学杂志，2017, 40：511－514)

目的 分析矽肺患者血清肿瘤标志物的水平及与疾病严重程度的关系。 方法 回顾性研究，选择2012年1月至2015年12月在南京市胸科医院收治矽肺患者160例，另选择健康志愿者160名作为对照组。化学免疫发光法检测血清和肺泡灌洗液中肿瘤标志物的含量，同时检测患者肺功能参数、血气分析和血清乳酸脱氢酶(LDH)含量。免疫组化染色检测1例矽肺患者肺组织中糖链抗原125(CA125)、糖链抗原19－9(CA19－9)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。组间比较采用Student′s t检验或Mann－Whitney U检验，相关性分析采用直线相关分析。 结果 矽肺患者血清中NSE、CA125和CA19－9水平显高于健康对照组[(34.47±13.30)μg/L和(10.24±7.20)μg/L，t＝20.27, P<0.000 1; (33.96±17.80)kU/L和(12.23±15.30)kU/L,t＝11.71, P<0.000 1；(4.68±5.67)kU/L和(2.78±3.45)kU/L，t＝3.67，P<0.002]。矽肺患者血清中CA125和CA19－9水平与第1秒用力呼出量(FVE1)、第1秒用力呼出量/用力肺活量(FVE1/FVC)、一氧化碳弥散量(Dlco)和肺总量(TLC)呈负相关(r＝－0.423，P＝0.001; r＝－0.323，P＝0.011; r＝－0.479，P＝0.001; r＝－0.285，P＝0.043)和(r＝－0.324，P＝0.022；r＝－0.256，P＝0.023；r＝－0.354，P＝0.013；r＝－0.356，P＝0.012)，与血清LDH呈正相关(r＝0.378，P＝0.001和r＝0.347，P＝0.21)；NSE水平与肺功能参数(Dlco和TLC)呈负相关(r＝－0.374，P＝0.004和r＝－0.368，P＝0.002)，与血清LDH呈正相关(r＝0.404，P＝0.001)。NSE和CA19－9在肺泡灌洗液中的含量高于其在血清中的含量[(39.32±29.30)μg/L和(25.7±12.12)μg/L，t＝2.15，P＝0.036; (21.36±12.11)kU/L和(11.28±10.78)kU/L, t＝2.64，P＝0.012]。矽肺患者血清中NSE和CA19－9在大容量肺灌洗术后分别降低[(39.20±10.24)μg/L和(15.32±8.35)μg/L，t＝8.02，P<0.05；(26.24±12.23 kU/L)和(18.84±5.64)kU/L，t＝2.46，P<0.05]。矽肺患者肺组织中NSE和CA19－9呈阳性表达，而CA125未见阳性表达。 结论 矽肺患者血清中NSE、CA125和CA19－9的水平明显增高，通过检测血清中NSE、CA125和CA19－9的水平可以预测矽肺疾病的严重程度。(中华检验医学杂志，2017, 40：515－519)

目的 研制胆固醇和甘油水溶液基质的标准物质。 方法 标准物质研究。以胆固醇标准物质GBW09203b和甘油标准物质GBW09149为原料，溶解到20%甲基环糊精溶液中，称量配制法制备6个浓度水平的候选标准物质。用常规方法进行均匀性和同步稳定性研究。用参考方法—同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定候选标准物质以评价定值的准确性，同时进行空白验证试验。评价不均匀性、不稳定性和定值引入的不确定度，并计算总不确定度。 结果 6个浓度水平标准物质的研究结果显示均匀性良好，在－70 ℃和－20 ℃保存至少可稳定1年。定值结果("标准值±扩展不确定度"，单位：mmol/L)如下，胆固醇：0.65±0.01，1.31 ±0.01，2.57±0.02，5.21±0.06，7.71±0.08，10.24±0.06；甘油：0.29±0.01，0.58±0.01，1.22±0.02，2.24±0.02，3.46±0.04，4.52 ±0.04。参考方法测定结果与定值结果一致。空白验证结果显示试剂、空白基质不会对待测物的浓度产生影响。 结论 成功研制了胆固醇和甘油水溶液基质的候选标准物质。物质均匀、稳定，定值可靠，已被批准为国家一级标准物质(GBW 09823、GBW 09824、GBW 09825、GBW09826、GBW09827和GBW 09828)。(中华检验医学杂志，2017, 40：520-525)

目的 探讨血清同型半胱氨酸(HCY)水平在糖尿病大血管病变中的意义，并对相关危险因素进行分析。 方法 病例对照研究。选取从2015年5月至2016年2月在上海中山医院就诊的糖尿病患者279例，男168例，女111例，年龄59.6(55.0～67.0)岁。根据心脑血管病史及颈动脉内膜中层厚度将患者分为颈动脉病变组(137例)，心血管病变组(197例)及脑血管病变组(29例)。采集患者静脉血标本检测HCY、糖化白蛋白、空腹血糖、总胆红素、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、L－γ－谷氨酰转移酶、尿素氮、肌酐、尿酸、胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、糖化血红蛋白水平，并测定尿液标本的尿白蛋白、尿肌酐。组间比较采用Mann－Whitney U检验和χ2检验；采用Pearson相关性分析判断HCY与其他指标的相关性；采用logistic回归模型分析糖尿病大血管病变及其亚类的危险因素；利用ROC曲线分析HCY、尿酸对糖尿病大血管病变的诊断价值。 结果 糖尿病大血管病变患者组的HCY水平为10.40(8.50～12.48) μmol/L，糖尿病非大血管病变患者组的HCY水平为9.10(7.50～10.70) μmol/L，存在统计学差异(Z＝3.188, P<0.01)；HCY水平不同的患者，其糖尿病大血管病变(χ2＝7.030, P＝0.030)及颈动脉病变(χ2＝7.258, P＝0.027)的发病率存在差异；HCY与尿素氮、肌酐、尿酸、尿白蛋白/肌酐及估算的肾小球滤过率(eGFR)水平的相关系数分别为0.340、0.248、0.278、0.133、－0.369(P<0.05)；HCY是糖尿病大血管病变、颈动脉斑块、心血管病变的危险因素，HCY、年龄、尿酸是部分糖尿病大血管病变的独立危险因素(P<0.05)；HCY、尿酸对于糖尿病大血管病变具有一定的诊断价值(P<0.05)。 结论 血清HCY是发生糖尿病大血管病的危险因素，检测HCY水平对于疾病的诊断与预防有着一定的帮助。(中华检验医学杂志，2017, 40：526－531)

目的 针对性改进临床检验周转时间，提升检验科服务质量。 方法 利用LIS和HIS系统收集2016年8月1日至9月30日武汉同济医院检验科急诊生化标本TAT相关数据。采用EXCEL和SPSS进行数据统计和分析，计算标本申请到采集，采集到送达，送达到签收，签收到检验，检验到报告，采集到签收，签收到报告和采集到报告TAT中位数和第90百分位数，并且分别以2、2和4 h作为急诊标本采集到签收，签收到报告和采集到报告规定时间，计算不及时率。同时对不同临床科室标本申请到采集时间，不同采集时间段标本采集到签收时间，以及不同签收时间段标本签收到报告TAT进行统计学描述。 结果 共纳入32 235份急诊生化标本，标本申请到报告期间用时最长的阶段为标本申请到采集(P50:681 min，P90：1 261 min)，其次为采集到签收(P50：94 min，P90：169 min)，最短为标本签收到报告(P50：68 min，P90：111 min)时间。妇科肿瘤和器官移植等科室标本申请到采集时间较长，而感染科和心血管等科室则较短。2：00到3：59采集的标本送检时间最长，6：00到7：29签收的标本签收到报告时间较长。不同采集时段急诊标本量与标本采集到签收TAT无显著相关，但是不同签收时段急诊标本量则与签收到报告TAT显著相关。 结论 对TAT数据进行分析有助于帮助医院和实验室寻找存在的问题，提供改进方向缩短TAT。(中华检验医学杂志，2017, 40：535－539)

RNA作为蛋白编码分子或非编码分子，参与调控生物体中各种重要的生命活动。近年来又发现第3类同时具有编码和非编码功能的RNA分子，被命名为"CncRNAs(coding and non－coding RNA)"。在此，对CncRNAs的形成来源、特征及其功能的研究进展进行阐述，以深入了解和发现生物体内基因组和转录组中精细的基因调控网络。(中华检验医学杂志，2017, 40：540－543)

直接口服抗凝药(DOACs)，包括直接凝血酶抑制剂及直接Xa因子抑制剂。因其药代动力学、药理作用研究较为清楚，且血药浓度不受食物影响，故理论上无需常规监测抗凝效果。然而近年临床实践发现，用药期间发生血栓形成、大出血、急诊手术，肝/肾功能不全等情况时需要监测DOACs抗凝效果。大量研究显示，常规凝血试验活化部分凝血活酶时间(APTT)或凝血酶时间(TT)可作为直接凝血酶抑制剂达比加群酯的实验室筛查指标，凝血酶原时间(PT)可作为直接Xa因子抑制剂利伐沙班的筛查指标。DOACs定量监测包括针对直接凝血酶抑制剂的稀释凝血酶时间(dTT) 、Hemoclot凝血酶抑制试验(HTI)、ecarin蛇毒凝固时间(ECT)或ecarin蛇毒发色试验(ECA)以及针对利伐沙班的抗FXa试验(利伐沙班定标)。实验室在开展这些实验时，应建立适用于自己实验室的监测范围。(中华检验医学杂志，2017, 40：544-547)

脓毒性休克是脓毒症进展最为严重的阶段，病死率高。目前，脓毒性休克早期诊断和疗效监测的生物标志物备受关注。肝素结合蛋白(HBP)作为一种急性期蛋白，具有增加血管内皮细胞通透性、杀菌趋化以及调节细胞凋亡等功能。当血浆HBP浓度升高时，提示患者出现严重脓毒症伴严重水肿和血管渗漏，可作为脓毒性休克的早期诊断和疗效监测的临床指标。本文着重阐述脓毒症常见炎性标志物、HBP结构与功能以及其在脓毒性休克中的临床应用等。(中华检验医学杂志，2017, 40：548-551)

结合对检验系20多年的临床检验实习带教经验和检验医学专业特点，构建形成性评价理论体系，以其指导检验医学生的临床实践。基于网络题库的建设，实习生通过网络题库自测，了解自己是否已达到阶段目标、存在的问题及今后的努力方向，从而调动学生的学习积极性和主动性，增强其自信心。分析体系运行情况，建立学生实习档案资料，包括笔记、周记、小组讨论、自测成绩、带教老师和同伴的评价资料等。利用自媒体，以小组为单位建立师生QQ群、微信群，能及时发现实习过程中的问题，并采取相应的改进措施。建立和完善毕业后长期反馈机制，教学相长，通过形成性评价体系提升整体实践教学质量。(中华检验医学杂志，2017, 40：552－554)