2004年 · 第27卷第04期

自2003年12月以来,H5N1型高致病禽流感在亚洲流行,数千万只家禽死亡或被扑杀.至2004年3月10日为止在亚洲已有33人确诊患禽流感,22例死亡,病死率达67%。

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)-核因子κB(NF-κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法体外培养HPASMCs,用工具药PKC激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA+PDTC组在常氧和缺氧条件下培养.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA表达,Western blot法检测VEGF和NF-κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达,免疫细胞化学法检测NF-κB p65的表达和定位,流式细胞术检测细胞周期时相分布.结果(1)NF-κB p65胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2/M%:常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA+PDTC组比较差异均有显著性(P均<0.05);缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性(P<0.05).(2)VEGF mRNA和蛋白表达:常氧对照组、PMA组、PMA+PDTC组组间差异均无显著性(P均>0.05);缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA+PDTC组、常氧PMA组,差异均有显著性(P均<0.05).(3)缺氧PMA组NF-κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2/M%之间均呈正相关(r=0.587～0.710,P均<0.05).结论常氧培养HPASMCs存在PKC-NF-κB信号转导通道;缺氧培养HPASMCs 增殖与PKC激活、NF-κB活化和VEGF高表达有关.提示NF-κB活化是HPASMCs PKC信号转导通道的下游事件,缺氧时HPASMCs PKC-NF-κB信号转导通道激活和VEGF高表达可能参与缺氧性肺动脉高压的形成。

目的 探讨血管活性肠肽(VIP)在气道高反应性形成过程中的作用.方法25只新西兰兔按随机数字表法分为5组,每组5只,分别为非应激对照组(A组)和臭氧攻击第1天组(B0组)、第2天组(B1组)、第4天组(B2组)、第8天组(B3组),每天1 h.用放射免疫法检测肺组织匀浆中VIP含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺内VIP受体1 (VIPR1)mRNA表达,并用原位杂交法观察VIPR1 mRNA阳性细胞在肺内分布.结果(1)随臭氧应激时间延长,肺组织匀浆中VIP浓度逐渐增高,于第4天达峰值,之后逐渐下降,第8天降至正常水平;(2)肺组织匀浆中VIPR1 mRNA表达也呈先增加后降低的双向变化,随应激时间的延长,表达逐渐增强,应激第2～4天达到峰值,之后逐渐下降,应激第8天降至正常水平;(3)A组肺间质、支气管上皮细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞均有VIPR1 mRNA表达,分布均匀.应激第2～4天,阳性细胞呈斑片状集中于气管、血管周围染色强度增加,肺泡腔内亦可见阳性染色细胞,至臭氧应激第8天,阳性染色细胞减少.结论VIP由VIPR1介导参与气道高反应性形成。

目的 观察糖皮质激素和白三烯受体修饰剂对支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠骨髓CD+34造血细胞的影响,研究潜在的以骨髓为靶点的抗炎机制.方法以1%卵白蛋白(OVA)致敏并激发BALB/c小鼠建立哮喘模型.在连续激发2周期间分为4组,每组6只,分别给予生理盐水(对照, A组)、泼尼松(B组)、孟鲁斯特(C组)及泼尼松+孟鲁斯特(D组)灌胃,末次激发后24 h分别取支气管肺泡灌洗液(BALF)、外周血及骨髓,测定BALF、外周血中有核细胞的分类计数及骨髓中有核细胞总数;用流式细胞仪测定外周血及骨髓中CD+34造血细胞、CD+4、CD+8 T淋巴细胞占有核细胞的比例;免疫组化结合原位杂交法检测骨髓内表达白细胞介素5受体α链(IL-5Rα)mRNA的CD+34 造血细胞(CD+34 IL-5Rα mRNA+细胞)计数.结果A组BALF中嗜酸粒细胞(EOS)计数为[(18.3±1.3)×105/L]、外周血中EOS为[(2.5±0.4)×108/L]、CD+34 造血细胞为[(9.6±5.1)×107/L]、骨髓中CD+34 造血细胞为[(7.7±3.2)×107/根股骨] ;B组分别为[(4.6±1.7)×105/L]、[(1.5±0.3)×108/L]、[(3.9±2.1)×107/L]、[(3.3±1.8)×107/根股骨];D组分别为[(3.7±1.4)×105/L]、[(1.7±0.3)×108/L]、[(4.1±1.8)×107/L]、[(2.2±0.7)×107/根股骨],A组分别与B、D组比较,差异均有显著性(P均<0.01);骨髓CD+34 IL-5Rα mRNA+细胞计数B组[(23±7)%]、D组[(21±4)%]与A组[(37±4)%]比较,差异均有显著性(P均<0.01);BALF中EOS计数C组[(12.2±1.1)×105/L]与A组[(18.3±1.3)×105/L]比较,差异也有显著性(P<0.05).结论泼尼松可能抑制哮喘小鼠骨髓内CD+34造血细胞的增殖分化及迁移至外周血,抑制EOS的骨髓生成及其随后释放入血、募集入气道;孟鲁斯特虽然能降低哮喘小鼠EOS的肺浸润,但未见其明显抑制骨髓内CD+34 造血细胞的增殖分化及迁移作用,也未发现在骨髓环节其与泼尼松有明显的协同抗炎作用。

目的 白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素12(IL-12)和二性霉素B对小鼠肺组织曲霉菌感染治疗作用的研究.方法(1)建立小鼠肺部曲霉菌感染模型;(2)使用IL-2、IL-12和二性霉素B对上述模型小鼠随机分组治疗;(3)观察各组小鼠的存活数及肺组织菌落计数.结果IL-2、IL-12和二性霉素B三者联用组较IL-2+IL-12组和单用二性霉素B组能明显减少小鼠肺组织菌落数,明显提高小鼠的存活率.结论抗真菌感染的治疗必须是免疫调节治疗与化学药物治疗相结合。

目的 观察卡铂、足叶乙甙(CE方案)联合放射同步治疗局限期小细胞肺癌的临床疗效.方法局限期小细胞肺癌患者90例,采用信封抽签随机分组进入同步治疗组(A组)和序贯治疗组(B组).两组患者均接受CE方案治疗6个周期和放射治疗(简称放疗)6周(剂量为60 Gy).A组患者化学治疗(化疗)与放疗同时进行;B组先给予4个周期化疗,再进行放疗,然后再化疗2个周期.结果A组患者中位生存时间26个月,5年生存率27%;B组患者中位生存时间19个月, 5年生存率16%,两组差异有显著性(χ2=4.104, P<0.05).两组患者主要毒副反应为骨髓抑制,Ⅲ、Ⅳ度白细胞下降发生率A组为93.3%(42/45),B组为75.5%(34/45),差异有显著性(χ2=5.413, P<0.05).结论CE方案联合放射同步治疗,能有效提高局限期小细胞肺癌患者的生存时间和生存率。

目的 构建缺氧及辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的抑瘤素M(OSM)表达水平,提高肺癌放射-基因治疗效果.方法利用基因重组构建缺氧及辐射双敏感性缺氧反应元件早期生长反应基因(HRE-Egr)启动子及其调控的OSM表达载体;以脂质体转染肺癌A549细胞,给予照射(6 Gy)和(或)缺氧(1%氧浓度)处理,观察其OSM表达水平及细胞存活率的变化.利用肺癌移植瘤观察不同处理后的抑瘤效应.结果HRE-Egr启动子具有辐射及缺氧双重敏感性,它可使照射后的肺癌细胞OSM表达水平在缺氧条件下显著提高,为常氧条件下的3倍.在缺氧条件下,重组质粒pHEO转染合并照射处理后细胞存活率[(9.5±2.8)%]显著低于常氧组[(34.8±3.6)%;χ2 =11.375,P=0.003].HRE-Egr启动子转染合并照射可明显抑制肺癌移植瘤,并可使60%的移植瘤完全消退.结论用HRE-Egr启动子提高OSM表达水平,可增强肺癌移植瘤放射-基因治疗疗效。

目的 制备重组培养滤液蛋白10和6000早期分泌性抗原靶的融合蛋白(rCFPlO-ESAT-6)，研究其免疫学特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 用基因拼接(Gene SOEing)法扩增lhp-ESAT-6融合基因、并克隆人pQE30质粒，表达、纯化rCFPl0-ESAT-6蛋白，通过Western blot分析其抗原性。建立豚鼠BCG免疫模型和结核分枝杆菌强毒株(H37Rv)感染模型，建立以融合蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)法，检测豚鼠血清中的抗结核分枝杆菌抗体，并与以纯化蛋白衍生物(PPD)为抗原的ELISA法比较。结果 重组质粒pQE30-CFPl0-ESAT-6靶基因的测序结果与预计序列(lhp-linker-ESAT-6)完全一致。融合蛋白在DH5α菌中以可溶性非包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的40％，分子质量为26000，纯化后的蛋白纯度为98％，浓度为1.2g／L。Western blot分析表明，融合蛋白与活动性肺结核患者血清、兔抗CFP10血清和兔抗ESAT-6血清都能发生特异性免疫反应。以10只生理盐水处理豚鼠血清的平均吸光度(A)值+2s为正常界限值，以融合蛋白为抗原，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应，11份BCG免疫豚鼠血清仅1份呈阳性反应；以PPD为抗原，11份H37Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应，11份BCG免疫豚鼠血清也全部呈阳性反应。结论 pQE30-CFPl0-ESAT-6 DH5α菌能高效表达rCFPl0-ESAT-6融合蛋白，该蛋白兼具CFPl0和ESAT-6两种蛋白的抗原性，能特异性区分豚鼠因H37Rv感染和BCG免疫后产生的抗结核分枝杆菌抗体。本研究为rCFPl0-ESAT-6融合蛋白在结核病血清学诊断中的应用奠定了基础。

目的 构建E.coli.-BCG(Bacille Calmette-Guerin)穿梭载体,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌(MTB)的分泌蛋白Ag85B-ESAT-6.方法用聚合酶链反应(PCR)从MTB毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌19 000抗原(19-ss)胞壁区及其上游调控元件基因,克隆入E.coli.-BCG穿梭载体pOLYG中,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E.coli.-BCG穿梭载体.用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT-6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达.结果经测序证实所克隆的19-ss基因序列正确,所构建的E.coli.-BCG穿梭载体(pCW)能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭,经免疫荧光检查外源基因Ag85B-ESAT-6可融合表达于分枝杆菌宿主表面.结论本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B-ESAT-6的E.coli.-BCG穿梭质粒。

目前对肺癌组织中VEGF的表达情况已有较多的研究,但对肺癌胸腔积液中VEGF的研究尚少.我们采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测了30例肺癌患者胸腔积液中VEGF含量,探讨其作为肺癌诊断标记物的意义。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)系骨质疏松症(osteoporosis,OP)的独立危险因素,但COPD继发OP的机制尚不明确[1].瘦素是由肥胖基因(ob)编码的蛋白,由外周脂肪细胞分泌,其功能主要是抑制食欲和参与机体能量代谢平衡,且能通过交感神经系统调控骨形成[2].我们的研究旨在初步探讨COPD患者血清瘦素水平与骨密度关系,并推测瘦素在COPD继发OP的可能作用机制。

严重感染尤其是腹腔内感染是引发败血症最主要的原因,而肺常是最先受到损害的器官[1].本组研究采用腹腔注射E.coli复制败血症大鼠急性肺损伤(ALI)模型,通过观测血浆内毒素(LPS)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、肺组织核因子κB(NF-κB)活化程度及胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达情况,观察上述因素在ALI中的作用及重组人生长激素(rhGH)对败血症大鼠ALI的治疗效果并探讨其作用机制。

近年来为避免呼吸机相关肺损伤,临床上采用"允许性高碳酸血症"的通气策略,已被证实可提高急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者存活率[1]."允许性高碳酸血症"时升高的动脉血二氧化碳分压(PaCO2)对机体产生危害,但同时是否还有其他作用;此策略的有利影响是仅由减小肺泡压所致,还是高CO2对机体也有保护作用?我们的研究对以上问题加以探讨。

支气管哮喘(简称哮喘)是以慢性气道炎症和气道高反应性为特征的疾病.炎性细胞在气道局部产生大量活性氧/氮簇(ROS/RNS),造成氧化/抗氧化失衡,使病情进一步加重.呼吸道表面液体(RTLF)中丰富的还原型谷胱甘肽(GSH)是肺内抗氧化保护体系中最主要的成分.γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)是由重链(γ-GCSh)和轻链(γ-GCSL)构成的异二聚体,是GSH合成限速酶.糖皮质激素是哮喘治疗的一线药物。

为探讨烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)、血液中P物质(SP)含量及其肺组织中SP基因表达的影响,我们对此进行了研究并探讨了烟雾暴露对SP的影响机制。

核因子κB(NF-κB)的持续激活是支气管哮喘(简称哮喘)发病机制中的重要环节,以NF-κB为靶目标研制抗哮喘药物已成为哮喘治疗的研究方向之一.为研究全反式维甲酸对哮喘大鼠气道炎症的抑制作用,我们探讨了其对NF-κB的抑制效应,以阐明抗炎机制。

为观察吸入糖皮质激素对支气管哮喘(简称哮喘)患者诱导痰中嗜酸粒细胞(EOS)和中性粒细胞凋亡的影响,我们对哮喘患者经糖皮质激素治疗前、后诱导痰中EOS和中性粒细胞凋亡进行对比研究。

肺间质纤维化发生的机制尚不十分清楚,但氧自由基损伤机制是大家较公认的一个重要环节.近年的研究发现盐酸氨溴索(商品名:沐舒坦)具有良好的抗氧化作用[1,2],并能抑制细胞因子及炎症介质的合成和释放[3],提示盐酸氨溴索可能对肺纤维化有治疗作用。

结核性渗出性胸膜炎常由于治疗不当,或反复多次胸腔穿刺抽液导致包裹性积液.包裹性,特别是多房性包裹性胸腔积液形成后,常规治疗效果不佳,愈后不良.我院自1995年以来对31例结核性胸膜炎导致包裹性胸腔积液的患者,在用常规治疗方法的同时加尿激酶(山东北大高科华泰制药有限公司生产)胸腔内注射治疗,疗效满意。

机械通气治疗是包括急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)在内的严重呼吸衰竭的重要措施,但是,在治疗过程中若呼吸机参数设置不当将导致呼吸机相关肺损伤(ventilator-associated lung injury,VALI).肺水肿是VALI的主要表现,这种VALI所致肺水肿的发生原因和处理方法有别于其他肺水肿,它可使病情加重,甚至导致患者死亡。

流行性感冒病毒(influenza virus), 简称流感病毒,是引起流行性感冒(简称流感)的病原体.在20世纪人类遭受了4次流感大流行,致使数千万人失去了生命[1].近几年来禽流感等跨越种属障碍给人类健康和安全带来了更大的威胁,使人们清楚地认识到加强和完善对流感这类经呼吸道传播并有可能来源于动物的传染性疾病的预防、控制和治疗具有重大科学意义和实际应用价值[2]。

患者男性,52岁,因反复咳嗽、咳痰5年,咯出"肉样"物1 d,于2001年8月7日就诊.患者于5年前无明显诱因的出现反复咳嗽、咳痰,痰有时较黄,无发热、咯血,偶有咯出"肉样"物,未予重视,服用抗生素后症状可缓解.患者曾反复拍摄胸部X线片未见明显异常.今日患者又咯出约黄豆大小的"肉样"物。

胸腔积液的病因诊断,特别是如何准确地鉴别良恶性胸液,对于指导临床医师制定合理的治疗方案有很大的意义,直接关系到患者的治疗效果及预后.我们通过对97例诊断明确的胸腔积液患者胸液中白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)浓度测定,探讨两指标在胸腔积液鉴别诊断中的价值。

患者女性,44岁,因疑诊"肺癌"于2002年2月15日收入院.患者2个月前无明显诱因出现低热,体温波动在37.0～38.3℃,以午后发热为主.同时咳嗽、咳白黏痰,痰量每次约30 ml.伴盗汗、乏力,无咯血.患者有2型糖尿病史5年,空腹血糖波动在7.2～8.8 mmol/L之间,无并发症。

结核分枝杆菌耐药性和持留性是关系结核病临床疗效和结核病流行控制的两大课题.经过数十年的研究,在细节上虽仍有待继续深入,但在总体上人们对抗结核药物作用和耐药机制的认识已较为明确.与此相比,虽然对持留现象和持留菌的认知由来已久,近数年来也已进入现代研究的过程,但大体上仍然是一片迷蒙,学界甚至对持留现象和持留菌仍无明晰的界定.

病历摘要 患者女性,28岁,因发热伴咳嗽、咳痰2周于2002年11月25日以"左下肺炎"入院.患者2周前因劳累后出现乏力、发热、体温最高达39.7℃,伴有咳嗽及咳黄脓痰.无胸闷、胸痛、痰血等不适曾去某医院就诊,胸片示:"左下肺炎".血白细胞6.3×109/L,中性粒细胞0.73,经利巴韦林抗病毒、克林霉素、妥布霉素、环丙沙星抗感染治疗症状无明显缓解,遂至我院急诊.胸片CT示:"双肺肺炎"(图1),血白细胞5.4×109/L,中性粒细胞0.77, 11月19日血气(未吸氧时)分析示:pH值 7.532,动脉血二氧化碳分压(PaCO2)28.1 mm Hg(1 mm Hg = 0.133 kPa),动脉血氧分压(PaO2)44.9 mm Hg,精制蛋白衍生物(PPD)试验阴性,先后给予红霉素、头孢曲松(商品名:罗氏芬)、亚胺培南/西司他丁(商品名:泰能)抗感染治疗无效.患者既往有胃溃疡、胃窦炎史.否认疫区接触史,接触者无类似症状.家族史无特殊.体检:体温38.2℃,脉搏92次/min,呼吸32次/min,血压120/70 mm Hg.神清,皮肤黏膜无黄染,浅表淋巴结未肿大.眼睑无水肿,口唇紫绀,颈软,气管居中.胸廓无畸形,呼吸急促,左侧呼吸音略低,双肺可及少许细湿啰音.

一、人禽流感的流行病学 1.1997～2003年禽流感疫情:禽流感是由A型流感病毒引起的禽类急性呼吸道传染病.1997～2003年,香港地区出现数次禽流感疫情,共发现23例人类禽流感患者,其中20例为H5N1型高致病禽流感(highly pathogenic avian influenza,HPAI),3例为H9N2型.共有7例死亡,均为H5N1型.