2013年 · 第93卷第04期

目的建立用于预测中国初诊前列腺癌骨转移风险的回归树模型，以减少不必要的骨扫描。方法在2005至2011年复旦大学附属肿瘤医院住院的501例初诊前列腺癌中采用分类及回归树（CART）分析建立Fudan回归树模型，同时验证Briganti回归树模型，并比较两个模型在曲线下面积（AUC）及临床应用价值上的优劣性。结果本组骨转移的发生率为27.5%（138/501）。Fudan回归树模型、Briganti回归树模型及单以骨转移相关症状（SRE）为标准预测骨转移的准确度分别为0.813、0.691及0.645，三者间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。当决策阈值概率取值范围为（24.2%，36.8%）时，Fudan回归树模型具有更低的漏诊率及骨扫描过度检查率。结论Fudan回归树模型具有较高的预测价值，同时能减少中国初诊前列腺癌不必要的骨扫描。

目的应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中血小板反应蛋白1（TSP-1）水平，分析其作为前列腺癌辅助诊断指标的价值。方法用ELISA试剂盒测定2012年1至7月复旦大学附属金山医院及复旦大学附属肿瘤医院50例前列腺癌患者（局限性癌22例、浸润转移性癌28例），20例前列腺增生患者和16例健康人群血清TSP-1值。结果前列腺癌组TSP-1值平均为（200±49）μg/L，前列腺增生组平均（281±53）μg/L，健康人群组平均（323±56）μg/L，三组间两两比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。局限性前列腺癌组（Ⅰ期和Ⅱ期）TSP-1值平均为（216±34）μg/L，浸润转移性前列腺癌组（Ⅲ期和Ⅳ期）平均为（188±49）μg/L，差异亦有统计学意义（P=0.030）。前列腺癌Gleason评分与TSP-1值呈负相关（r=-0.32，P=0.023）。前列腺癌淋巴结转移与TSP-1值无明确相关（P=0.189）。TSP-1和前列腺特异抗原（PSA）对前列腺癌诊断的敏感度和特异度分别为72%、90%和64%、70%，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。TSP-1的受试者工作特征曲线（ROC）曲线下面积为0.886，PSA的ROC曲线下面积为0.719，差异亦有统计学意义（P=0.028）。结论TSP-1是一种较为理想的前列腺癌辅助诊断指标，其值不但能较为准确地鉴别前列腺癌和前列腺增生，而且对前列腺癌的分期和Gleason评分亦有一定的参考意义。

目的探讨前列腺癌上皮细胞间质转化现象（EMT）是否在肿瘤干细胞（CSC）水平发生。方法（1）将脂质体2000系统将缺氧诱导因子1α（HIF-1α）cDNA分别转染人前列腺癌细胞株LNCaP中的干细胞亚群LNCaP/SP和非干细胞亚群LNCaP/NSP，G418筛选稳定表达HIF-1α的抗性克隆。（2）采用Western印迹法鉴定HIF-1α及两种受其调控的下游基因的蛋白表达。同时检测细胞转染前后EMT指标蛋白的表达变化。（3）应用Transwell和四甲基偶氮唑盐（MTT）技术验证两种转染后细胞的体外侵袭和增殖能力的变化。（4）将两种转染后细胞裸鼠皮下致瘤，观察致瘤率、转移率及瘤体体积的差异。结果Western印迹法证实，与LNCaP/SP相比，LNCaP/HIF-1α/SP发生了典型的EMT：上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和细胞角蛋白18（CK18）表达缺失，同时波形纤维蛋白（vimentin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、纤维连接蛋白（fibronectin）、组织蛋白酶D（cathepsin D）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）反常表达；另外，与LNCaP/NSP相比，LNCaP/HIF-1α/NSP发生了部分EMT转化（CK18表达缺失，同时vimentin和cathepsin D反常表达）。与LNCaP/HIF-1α/NSP相比，LNCaP/HIF-1α/SP的体外增殖和侵袭能力更强大。LNCaP/HIF-1α/SP不仅在裸鼠体内的皮下致瘤率（80%比53%，P＜0.05）和骨转移率（40%比0，P＜0.01）显著高于LNCaP/HIF-1α/NSP，而且瘤体体积也远大于LNCaP/HIF-1α/NSP的成瘤体积［（1008±230）mm3与（288±145）mm3，P＜0.01］。结论CSC是人前列腺癌中EM T现象发生的主要细胞载体。

目的观察前列腺术后犬前列腺部尿道再上皮化的修复过程，并探讨基底层细胞角蛋白（CK）34（CK34βE12）细胞在再上皮化过程中的作用。方法选择15只老年家犬行2-μm激光前列腺汽化切除术，分别于术后3、7、14 d序贯取材，采用免疫组织化学染色法检测前列腺部尿道上皮细胞CK34、前列腺特异抗原（PSA）表达水平。结果术后3 d手术创面未见CK34阳性表达细胞；术后7 d可见连接成片的CK34阳性细胞覆盖手术创面，且这些细胞与残余前列腺组织连续；术后14 d新生尿道上皮的基底细胞层阳性表达CK34。正常或增生的前列腺组织可见前列腺腺泡、腺管上皮胞质PSA阳性，前列腺部尿道上皮PSA表达阴性。术后14 d再生的前列腺部尿路上皮的PSA均为阴性表达。结论前列腺组织是前列腺增生症术后前列腺尿道再上皮化的重要组织，而CK34阳性的基底细胞可能是这一修复过程的主要细胞。

目的探讨正常高值血压、血脂和血糖人群的动脉弹性特点及其影响因素。方法从2008年3月至2009年12月从北京、重庆社区12 899例自然人群中筛选出正常高值血压者65例、高值血脂者156例、高值血糖者159例、正常高值（血压＋血脂）者85例、正常高值（血压＋血糖）者77例、正常高值（血脂＋血糖）者55例、正常高值（血压＋血脂＋血糖）者9例。另将健康者332名、高血压患者113例、高脂血症患者150例及糖尿病患者37例作为对照。采用Dynapulse 200 M动脉弹性仪测定系统血管顺应性（SVC）、系统血管阻力（SVR）和肱动脉扩张性（BAD）。结果（1）高值血压者的SVC低于健康者［（1.14±0.20）ml比（1.26±0.23）ml，P＜0.01］，高于高血压患者［（1.11±0.18）ml，P=0.011］；SVR高于健康者［（157±29）kPa·s·L-1比（148±25）kPa·s·L-1，P=0.012），低于高血压患者［（166±36）k Pa·s·L-1，P＜0.01］；BAD低于健康者（5.93%±1.14%比6.50%±1.30%，P＜0.01）。（2）不同正常高值亚组间的SVC、SVR、BAD差异均有统计学意义（均P＜0.05）。（3）多元线性回归分析显示，血压是血管功能的独立危险因素。结论血压正常高值阶段时，血管功能已经损害，血压是影响血管功能的独立危险因素。多种心血管危险因素在正常高值阶段的聚集对血管功能的影响更大。

目的应用肝酶、肝脏超声和肝脏质子核磁共振波谱（1HMRS）3种方法探讨住院2型糖尿病（T2DM）患者肝病构成谱及非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的危险因素。方法采集2009年9月至2011年10月复旦大学附属中山医院内分泌代谢科1069例住院T2DM患者的病史资料、生化指标、肝脏超声检查结果和肝脏1HMRS检查结果进行分析。结果（1）T2DM人群肝酶升高检出率28.7%（307/1069），其中39.4%（121/307）由NAFLD引起。排除酒精、肝炎病毒等其他因素后，T2DM人群中肝酶升高检出率26.9%（185/688）；（2）T2DM者超声诊断脂肪肝的检出率为56.7%（500/882），其中72.6%（363/500）由NAFLD引起，NAFLD的检出率达58.0%（363/626）；（3）T2DM者肝脏1HMRS诊断脂肪肝的检出率为72.8%（227/312），其中69.6%（158/227）为NAFLD；（4）T2DM患者中NAFLD的检出率肝脏1HMRS＞肝脏超声＞肝酶检测。以肝脏1HMRS为金标准，联合肝酶和肝脏超声诊断较单纯肝酶或肝脏超声诊断灵敏度增高，丙氨酸转氨酶（ALT）诊断NAFLD的最佳临界值男性为19.7 U/L［受试者工作特征曲线曲线下面积（ROCAUC）=0.689，P＜0.01］，女性17.0 U/L（ROCAUC=0.727，P＜0.01）；（5）Logistic逐步回归分析，性别、体质指数、血红蛋白、空腹C肽、尿酸均与NAFLD独立正相关（OR=3.803，1.195，1.037，2.896，1.011，均P＜0.05）。糖尿病病程与NAFLD独立负相关（OR=0.948，P＜0.05）。结论T2DM患者中脂肪肝检出率高，构成以NAFLD为主，且肝酶异常检出率高，提示合并T2DM的NAFLD患者更易发生非酒精性脂肪性肝炎。

目的探讨结直肠癌临床症状谱特点及其对肿瘤诊断时间的影响。方法检索北京大学人民医院出院日期在2000年1月1日至2010年12月31日之间的原发性结直肠癌病例共1798例，采用系统抽样抽取符合入选标准的400例并进行回顾性研究。复习住院病历并收集病例的一般资料、肿瘤TNM分期等；收集其他信息包括：（1）结直肠癌的首发症状：最早出现的肿瘤相关的症状或症状群；（2）结直肠癌的就诊症状：导致患者就诊的症状或症状群；（3）就诊时间（患者费时）：指患者出现首发症状到就诊的时间；（4）确诊时间（医院费时）：患者首次就诊到确诊为大肠癌的时间；（5）诊断时间：就诊时间加确诊时间；（6）结直肠癌误诊率：误诊是指结直肠癌患者被诊断为其他疾病并接受相应治疗时间＞30 d的。采用χ2检验比较各种分类及比例的不同。结果400例结直肠癌患者首发症状按其发生频率依次为：大便习惯改变170例次（42.5%），腹痛和（或）腹部不适157例次（39.3%），便血147例次（36.8%）及肛门直肠刺激症状69例次（17.3%）；176例（44.0%）患者同时出现两种或两种以上症状。出现首发症状后及时就诊率（患者费时≤15 d）为40.7%（159/391）。首发症状包含大便习惯改变者的及时就诊率（25.3%，42/166）明显低于以其他首发症状发病者的及时就诊率（52.0%，117/225，P=0.000）。首发症状出现时晚期结直肠癌（TNM分期Ⅱb及以上）比例达到50.0%以上。不同首发症状结直肠癌病理类型、分化程度差异均无统计学意义（均P＞0.05）。进一步分析就诊症状按发生频率依次为：便血179例次（44.8%），腹痛或腹部不适159例次（39.8%），大便习惯改变155例次（38.8%）及肛门直肠刺激症状69例次（17.3%）。50.8%（203例）的患者因2种以上症状合并存在而就诊。59.9%（236/394）的患者为及时确诊病例（医院费时≤15 d）。以腹痛或腹部不适（52.5%，83/158）就诊者相比其他原因就诊者（64.8%，153/236）及时确诊比例低（P＜0.05）。以黑便就诊者误诊率（50.0%，10/20）高于其他症状就诊者［26.8%（101/377），P＜0.05］。结论结直肠癌患者以大便习惯改变、便血及腹痛为常见首发症状，患者就诊症状谱与首发症状谱类似，其中一半以上患者的就诊、确诊时间延迟。

目的探讨退行性变主动脉三叶瓣的组织病理学特点及其发生机制。方法收集2009年5月至2010年5月在天津胸科医院心外科因主动脉瓣狭窄行手术切除的严重钙化的主动脉三叶瓣标本22例［男14例，女8例，年龄（66±6）岁］和因夹层动脉瘤行Bentall手术的正常三叶式主动脉瓣标本6例［男4例，女2例，年龄（43±5）岁］。经HE染色和免疫组织化学染色，观察退行性主动脉瓣的病理组织学改变，通过其病理特征的改变了解参与主动脉瓣退行性变的相关机制。结果狭窄的主动脉瓣瓣叶增厚，瓣叶主动脉侧出现钙化灶；主动脉瓣内膜下有炎细胞浸润、新生毛细血管、胆固醇结晶和泡沫样细胞聚集及弥漫性和结节性钙化灶。成骨相关转录因子（OSX）和活化T细胞核因子1（NFATc1）在正常主动脉瓣膜无阳性表达，而在病变瓣膜中则显示细胞核阳性表达。病变瓣膜OSX免疫组化0、1、2、3级表达在钙化部位分别为1例（4.5%）、1例（4.5%）、8例（36.4%）、12例（54.5%），在非钙化部位分别为4例（18.2%）、6例（27.3%）、7例（31.8%）、5例（22.7%）；NFA Tc1免疫组化0、1、2、3级表达在钙化部位分别为1例（4.5%）、1例（4.5%）、8例（36.4%）、12例（54.5%），在非钙化部位分别为4例（18.2%）、6例（27.3%）、8例（36.4%）、4例（18.2%）；钙化部位OSX和NFATc1的表达均高于非钙化部位（χ2=8.320、P=0.040和χ2=9.371、P=0.025）。结论与正常瓣膜不同，病变瓣膜中出现了炎细胞浸润、脂质沉积、新生血管及骨调控因子的表达。

目的分析早产儿医院获得性奥默毕赤酵母菌败血症的临床及分子生物学特点，以提高对该病的认识和治疗水平。方法回顾性分析2010年7至11月温州医学院附属育英儿童医院新生儿重症监护病房（NICU）6例奥默毕赤酵母菌败血症患儿的临床和病原学资料；对分离株进行鉴定，用随机引物多态性分析（RAPD）进行同源性分析；同时根据医院感染流行病学特征，对患儿周围环境和物品进行采样分析。结果6例患儿分离出奥默毕赤酵母菌前平均住院时间28 d；使用抗菌药物时间为13～45 d；6例患儿均接受静脉营养，其中4例接受机械通气，5例接受中心静脉置管。5例经卡泊芬净治疗15～30 d后痊愈，1例使用氟康唑30 d后痊愈。菌株经仪器鉴定和18 S rDNA序列测定确认为奥默毕赤酵母菌。RAPD分型结果显示分离株均为同一克隆。采集的15份环境和物品标本培养结果均为阴性，但采取积极的医院感染控制措施后至2012年8月未再出现类似病例。结论奥默毕赤酵母菌引起的早产儿医院获得性败血症可在医院内传播，落实院内感染防控措施是关键；卡泊芬净治疗早产儿真菌血症是安全有效的。

目的比较妊娠期糖尿病（GDM）与血糖正常孕妇所生产的适于胎龄新生儿体成分之间的差异，并探讨新生儿体成分的影响因素。方法以昆明医科大学第一附属医院2010年7月至2012年6月出生的适于胎龄新生儿为研究对象，GDM组母孕期患GDM共160例，男90例，女70例。对照组母孕期血糖正常共284例，其中男139例，女145例。新生儿出生后24～48 h内进行人体成分测量，采用多元线性逐步回归分析两组新生儿脂质重量、身体脂肪百分比量及去脂质重相关因素。结果GDM组出生胎龄、体重、身长、体质指数、头围、胸围、上臂围、肱二头肌部及腹部皮褶厚度与对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），但GDM组肱三头肌部、肩胛下角部及髂嵴上部皮褶厚度均高于对照组（均P=0.000）；GDM组身体脂质重量及体脂百分含量均高于对照组，身体去脂质重量低于对照组［（585±59）比（480±74）g，17.8%±0.8%比14.7%±1.9%，（2685±127）比（2784±109）g，均P=0.000］。GDM组母孕期口服葡萄糖耐量试验（OGTT）中0 h血糖、母亲孕前体质指数及孕期增重是影响新生儿脂质重量及体脂百分含量的因素，其中0 h血糖与新生儿脂质重量及体脂百分含量相关性最明显（P=0.004、0.006）；胎龄及母亲身高是影响去脂质重量的因素（P=0.040、0.013）。对照组母孕期增重是影响新生儿脂质重量主要因素（P=0.015），0 h血糖、母亲分娩前体重是影响新生儿体脂百分含量的因素（P=0.002、0.043）；母亲孕前体质指数是影响去脂质重量的因素（P=0.004）。结论GDM母亲生产的适于胎龄新生儿身体脂质重量及体脂百分含量增加，去脂质重量减少。母孕期OGTT 0 h血糖水平、孕前体质指数水平、孕期增重及分娩前体重是新生儿体成分的影响因素。

目的研究内源表达白细胞介素21（IL-21）对外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）抗白血病的作用及其作用机制。方法采集分离健康人外周血单个核细胞，加用细胞因子诱导培养CIK细胞，构建表达IL-21基因的慢病毒载体，感染CIK细胞并鉴定后，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用；半定量反转录（RT）-PCR法检测CIK细胞干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、TNF-β、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、Fas配体（FasL）和NKG2D分子（NKG2D）的mRNA表达；流式直接免疫标记法检测CIK细胞免疫表型、细胞表面IL-21受体（IL-21R）、FasL及细胞内穿孔素、颗粒酶B的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达。结果经酶切与测序鉴定，IL-21慢病毒载体构建正确，共转染CIK细胞中有目的基因IL-21的表达。（1）与空载体组相比，内源表达IL-21组总的细胞增殖之间差异无统计学意义（P=0.856），内源表达IL-21组CIK细胞阳性细胞数高于空载体组（24.60%±2.10%比16.95%±4.70%，P=0.042）。（2）内源表达IL-21组CIK细胞对K562细胞的杀伤率高于空载体组（58.4%±8.3%比23.3%±2.8%，P=0.009），作用第5天时，杀伤作用仍能维持在61.2%±6.2%（P=0.003），相比外源性IL-21作用的CIK细胞的杀伤率（44.6%±8.3%比22.8%±2.8%，P=0.034）更强，而且作用时间更长久。（3）内源表达IL-21组CIK细胞表面IL-21R的表达比空载体组增加约2倍。（4）与空载体组比较，内源表达IL-21组CIK细胞IFN-γ和TNF-α mRNA的表达升高约1.5倍，穿孔素、颗粒酶B、FasL mRNA的表达量升高近2倍，颗粒酶A、TNF-β和NKG2D mRNA的表达与空载体组差异无统计学意义。（5）对mRNA表达差异有统计学意义的指标进一步行蛋白质表达的检测发现：内源表达IL-21组CIK细胞表面FasL、穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ、TNF-α的表达水平均高于空载体组［0.56%±0.37%比0.06%±0.02%、25.86%±6.13%比12.23%±2.35%、37.58%±2.30%比14.56%±1.36%、（55.3±3.5）ng/L比（23.2±5.6）ng/L、（15.6±0.6）μg/L比（5.6±0.6）μg/L，均P＜0.05］。结论内源表达IL-21的CIK细胞具有更强的抗白血病作用，而且作用时间更长久，此作用可能是通过增加其受体的表达，增加穿孔素、颗粒酶B、FasL、IFN-γ和TNF-α的表达而实现的。

目的探讨乙型肝炎病毒X基因（HBx）转染人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞株后对其表达Notch1受体的影响，并观察Notch1受体在HBx介导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡中的作用。方法用分子克隆的方法构建pcDNA3.1/myc-HBx质粒及pcDNA3.1/myc-Notch1质粒，转染HK-2细胞建立转染株，并应用短发夹RNA（shRNA）干扰技术沉默Notch1基因表达。将细胞分为7组：①正常培养组；②转染HBx空载质粒组；③转染HBx质粒组；④转染HBx质粒＋Notch1空载质粒组；⑤转染HBx质粒＋Notch1质粒组；⑥转染HBx质粒＋Notch1 shRNA空载质粒组；⑦转染HBx质粒＋Notch1 shRNA沉默质粒组。实时定量PCR和Western印迹法验证HBx转染成功，检测细胞中Notch1受体的变化，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测各组细胞的生长抑制率，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果HK-2细胞经转染HBx基因后可高表达HBx，Notch1 shRNA在HK-2细胞中的转染效率也高达70%，基因沉默有效；转染HBx基因组细胞Notch1水平明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组，且该组细胞凋亡率亦明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组，差异均有统计学意义（14.94%±0.32%比13.86%±0.18%、13.67%±0.54%，均P＜0.05）。转染HBx质粒＋Notch1质粒组细胞凋亡率明显低于HBx质粒＋Notch1空载质粒组，差异有统计学意义（10.10%±0.26%比14.79%±0.02%，P＜0.05），其细胞增殖抑制率亦低于HBx质粒＋Notch1空载质粒组。而转染HBx质粒＋Notch1 shRNA沉默质粒组细胞凋亡率及细胞增殖抑制率均高于HBx质粒＋Notch1 shRNA空载质粒组（均P＜0.05）。结论构建pcDNA3.1/myc-HBx质粒并转染肾小管上皮细胞可成功制备乙型肝炎病毒细胞感染模型，由此导致的肾小管上皮细胞生长抑制及凋亡增加可能与Notch1受体异常活化有关。