2008年 · 第88卷第03期

目的 应用激光捕获显微切割(LCM)联合表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片及支持向量机(SVM)方法筛选肺鳞癌和腺癌差异表达蛋白质,探讨二者在蛋白水平的差异,为筛选肺癌分型标志物提供依据.方法 将6例新鲜肺鳞癌及7例腺癌组织标本用LCM选择性获取1.4×105个同质鳞癌细胞和1.2×105个同质腺癌细胞.经PBS Ⅱ+型SELDI-TOF-MS分析仪(IMAC芯片)分析鳞癌及腺癌细胞蛋白质表达谱,比对差异峰;应用SVM筛选并验证候选标志蛋白的判别效能.结果 比较鳞癌和腺癌细胞的SELDI谱图,共筛选出87个蛋白峰.将差异最明显的10个蛋白峰作为候选标志蛋白.与腺癌相比,4种蛋白(相对分子质量分别为2505、4004、4847及11 412)在鳞癌中呈高表达;与鳞癌相比,6种蛋白(相对分子质量分别为3333、3592、3848、5036、5191及5211)在腺癌中呈高表达.其中相对分子质量为4847的蛋白在鳞癌和腺癌中表达差异有统计学意义.用SVM建立分类预测模型并评价各模型效能,筛选出一个由3种蛋白质(相对分子质量分别为4847、11 412和3592)组成的分型标志蛋白组合模式,其敏感度和特异度均为100%.结论 肺鳞癌和腺癌在蛋白水平存在差异;LCM联合SELDI蛋白质芯片技术有可能筛选出敏感性高、特异性强的肺癌分型标志蛋白组合模式。

目的 评价双球囊与单球囊椎体后凸成形术治疗骨质疏松性脊柱压缩骨折的临床价值.方法 51例疼痛性骨质疏松脊柱压缩骨折患者,累及椎体69个.在X线监测下,经双侧椎弓根穿刺伤椎,完成球囊扩张,骨水泥填充.双球囊组患者29例(38个椎体),应用双球囊在椎体内双侧同时协调扩张;单球囊组患者22例(31个椎体),应用单球囊双侧入路在椎体内先后交替扩张.比较术前与术后椎体高度与Cobb角的差异,并分别计算两组的术后椎体高度平均恢复率和与Cobb角平均矫正度,比较两组之间差异,并随访6-12个月.结果 51例患者手术顺利,术后第96小时内疼痛均明显缓解,无临床并发症.患者10分制视觉模拟疼痛评分法评分由术前平均7.7分降至术后2.6分(P＜0.01);Oswestry功能障碍指数评分由术前平均73%降至术后26%(P＜0.01).双球囊组伤椎椎体前缘和中部平均丢失高度由术前14.7 mm和10.5 mm改善至术后10.1 mm和5.5 mm,Cobb角由术前平均22.4°,矫正至术后12.3°,手术前后差异具有显著性意义(P＜0.01);单球囊组伤椎椎体前缘和中部平均丢失高度由术前14.7 mm和10.6 mm,改善至术后10.4 mm和6.5 mm,Cobb角由术前平均21.2°,矫正至术后11.6°,手术前后差异具有显著性意义(P＜0.01).双球囊组与单球囊组术后椎体平均高度恢复率分别为72.8%、70.1%,Cobb角平均矫正度分别为10.1°和9.5°,两组相比差异无统计学意义(P＞0.05).随访期间,无疼痛加重病例出现.结论 双球囊与单球囊椎体后凸成形术治疗老年骨质疏松脊柱压缩骨折均可获得满意疗效。

目的 评价静脉内平滑肌瘤病累及下腔静脉时的诊断和处理方式.方法 回顾性分析了北京协和医院血管外科自2000年7月至2006年2月收治的6例累及下腔静脉的静脉内平滑肌瘤病.结果 6例患者中3例行Ⅰ期,2例行Ⅱ期手术,手术均获得成功,无围手术期死亡或并发症,其中4例患者的原发肿瘤和静脉内瘤栓完整切除,1例患者因多次手术,肿瘤与盆腔粘连严重,残余少许肿瘤,但术后给予抗雌性激素治疗后,瘤体有明显缩小.所有患者术后均复发.结论 静脉内平滑肌瘤病极为少见,血管外科临床医师应当对该病有足够的重视,该病累及下腔静脉时可以选择多种治疗方式,手术是最佳选择,能否完整切除瘤体是防止复发的关键。

目的 分析前列腺上皮细胞的膜蛋白质构成.方法 将无前列腺病史的尸检前列腺标本常规制备冰冻组织切片,通过激光捕获显微切割(LCM)从组织冰冻切片中切取前列腺上皮细胞,Shotgun-MS技术分析膜蛋白质组学构成.结果 激光捕获显微切割可正确有效地分离前列腺上皮细胞,其同质性＞95%;在严格的过滤参数条件下(当Charge+1,Xcorr≥1.9;当Charge+2,Xcorr≥2.2;当Charge+3,Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1),正常前列腺上皮细胞中鉴定出1164个蛋白,其中799个蛋白经过基因本体评注(GOA)显示为已知细胞组分,其余为未知细胞组分.在已知细胞组分中377(49.15%)个蛋白为膜蛋白或者膜相关蛋白.除了已知的与膜相关的蛋白,很多新的蛋白也被鉴定,其中包括假设蛋白和一些cDNA序列.结论 Shotgun-MS结合LCM技术可以有效分析前列腺的膜蛋白质构成;有助于正常前列腺细胞膜蛋白质表达库的完善。

目的 探讨同时性胃与大肠双原发癌临床、病理特点以及诊治和预后.方法 检索北京大学人民医院胃肠外科自2000年1月至2006年12月胃及大肠癌1117例,包括大肠癌766例,胃癌351例,回顾分析同时性胃与大肠双原发癌临床资料,并分组进行统计学分析.结果 胃与大肠各组双原发癌共35例,占同期胃大肠恶性肿瘤的3.1%(35/1117).大肠-大肠组15例,胃-胃组3例,大肠-肠外组13例,胃-胃外组9例,后两组均包括胃-大肠双原发癌5例.癌灶均位于胃和大肠的双原发癌多于胃大肠与其他器官双原发癌;大肠-大肠组3年生存率明显高于胃-胃组.结论 双原发癌早期诊断,正确区分双原发癌与转移癌对于该病早期治疗、不漏治以及提高生存率有重要意义。

目的 探讨肺移植术后早期的死亡原因及其预防和处理.方法 2002年9月至2005年12月共完成肺移植30例,其中慢性阻塞性肺气肿12例、肺纤维化10例、淋巴管肌瘤病1例、矽肺1例、支气管扩张伴囊肿3例、Eisenmenger综合征3例;单肺移植23例、体外循环下室间隔缺损修补后行右肺移植3例、非体外循环下序贯式双肺移植3例,体外循环下序贯式双肺移植1例.术后带气管插管人ICU行连续有创监测及机械通气、免疫抑制治疗,预防感染和再灌注损伤等并发症.结果 术后早期死亡6例(20%),其中感染3例、原发性移植肺失功(PGD)1例、排斥1例、肺栓塞1例.结论 感染、原发性移植物失功、排斥、肺栓塞等是肺移植早期常见的死亡原因。

目的 分析抗核抗体(ANA)不同荧光型别在原发性胆汁性肝硬化(PBC)和单纯原发性干燥综合征(SS)的表达,研究ANA型别在PBC诊断中的临床意义.方法 收集了61例PBC、28例原发性Ss和11例PBC合并SS病人的血清,应用间接免疫荧光法检测ANA的表达,并分析比较了PBC和SS病人抗核抗体型别的差异.结果 PBC组ANA阳性率为85.2%,型别有核包膜型(37.7%)、散点型(21.3%)、斑点型(18.0%)、多核点型(8.2%)和板层素型(4.9%);原发性SS组的ANA阳性率为89.3%,主要为斑点型(89.3%)和散点型(3.6%);PBC合并SS的ANA阳性率为100%,核型与PBC相似:核包膜型(45.5%)、斑点型(18.2%)、散点型(18.2%)、板层素型(18.2%)和多核点型(9.1%).与单纯原发性SS相比较,PBC组核包膜型和多核点型ANA的表达差异具有统计学意义(χ2=14.236,3.781,P＜0.01,＜0.05).结论 PBC的ANA型别不同于原发性SS,核包膜型和多核点型仅见于PBC而不是原发性SS病人,是PBC的较特异的抗体型别。

目的 观察灌注CT联合CO2吸入测定症状性大脑中动脉缺血患者脑血管储备的可行性及脑血管储备的影响因素.方法 灌注CT采用10排的螺旋CT,激发试验采用5% CO2和95%O2混合气体,应用具有单向通气功能的简易呼吸气囊对40例症状性大脑中动脉缺血患者进行了脑血管储备的测定.另外检测了36名健康志愿者及32例症状性大脑中动脉缺血患者吸入5%CO2和95%O2混合气体2 min后呼气末CO2浓度的变化.结果 36名健康志愿者和32例症状性大脑中动脉缺血患者吸入混合气体后呼吸末CO2浓度增加值分别为0.93%±0.31%和0.89%±0.23%(P＜0.05).脑血管储备测定值可达20%以上.大脑中动脉支配区的脑血管储备与侧支循环数目和侧支循环分级呈正相关,与大脑中动脉M1段狭窄程度未发现明显相关关系.结论 经过初步观察,灌注CT联合CO2吸入是一种安全可行的测定症状性大脑中动脉缺血患者脑血管储备的方法,值得进一步研究。

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9在脑出血(ICH)后继发性神经元损伤中的作用.方法 收集符合ICH的诊断要点,经外科手术的住院患者60例.正常对照组40名,其中30名取自正常人静脉血;10名取自正常人脑脊液(CSF).ICH组取发病后第1天、第4天、第7天血肿引流液及同期静脉血.按照NIHSS和GCS评分;根据"多田公式"计算出血量;采用ELISA检测MMP-9含量.结果 (1)ICH患者血肿引流液及血浆中MMP-9含量在不同时段均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(均P＜0.01).正常对照组CSF中不含有MMP-9.(2)ICH患者血浆及血肿引流液中MMP-9含量在发病后的第1天即升高,至第4天达高峰,与第1天对比,差异有统计学意义(P＜0.01),至第7天进入平台期,与第4天对比差异无统计学意义(P＞0.05).通过动态观察发现,ICH患者血浆及血肿引流液中MMP-9的含量,会随着病情的变化而变化,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).(3)ICH患者血肿引流液中MMP-9含量较相应时限血浆中MMP-9含量高,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)ICH患者血浆及血肿引流液中MMP-9含量与出血量及NIHSS呈正相关;与GCS之间呈负相关,相关性有统计学意义(P＜0.01).结论 MMP-9可能参与了ICH后继发性神经细胞损伤,其变化与ICH患者脑水肿的演变规律相符.ICH患者血浆及血肿引流液中MMP-9含量的动态演变具有一致性,与出血量的大小和病情轻重呈正相关。

目的 比较臂丛阻滞和星状神经节阻滞下分别配合粘连松解术和关节松动术治疗粘连性肩周炎的疗效.方法 60例粘连性肩周炎患者随机分为4组,每组15例:Ⅰ组:臂丛阻滞下粘连松解术;Ⅱ组:臂丛阻滞下关节松动术;Ⅲ组:星状神经节阻滞下粘连有限松解术;Ⅳ组:星状神经节阻滞下关节松动术;记录治疗方法及次数、治疗前后疼痛程度以及肩关节运动功能状态.结果 近期疗效优良率Ⅳ组显著优于其他3组(P＜0.05);神经阻滞+手法治疗次数及痛点注射治疗次数Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组相比差异有显著的统计学意义(P＜0.01).结论 星状神经节阻滞下关节松动术疗效最好,对关节功能的改善更为显著,且患者无手臂麻木无力引起的不适感,治疗依从性较好。

目的 研究大鼠海马源神经干细胞(NSC)外向电压门控性钾通道(Kv)的电生理特性.方法 利用无血清培养、单细胞克隆技术,体外培养SD大鼠海马组织源NSC.以免疫细胞化学方法对NSC及其分化后的子代神经细胞进行鉴定.应用膜片钳技术全细胞模式记录不同外向Kv通道的电生理特性.结果 体外培养SD大鼠海马组织源NSC表达巢蛋白(nestin),在体外可诱导分化产生分别表达Tuj1和GFAP的细胞.全细胞膜片钳可记录到三种外向Kv通道:一种缓慢激活的、对四乙基胺(TEA)敏感的延迟整流钾电流(IDR);一种快速激活和失活、可被4-氨基吡啶(4-AP)阻断的外向瞬时钾电流(IA),其在+20 mV和+50 mV的电流密度分别为11 pA/pF±3 pA/pF和29 pA/pF ±7 pA/pF(标本数=11);一种可被iberiotoxin(IbIX)抑制的大电导钙激活钾通道(BKCa),钳制电位+80mV时,加入100 nM IbTX前后的电流密度分别为56 pA/pF ±4 pA/pF和45 pA/pF±4 pA/pF(标本数=6.P＜0.05).结论 体外培养的未分化状态下SD大鼠海马源NSC至少含有IDR、IA和BKCa三种外向Kv通道。

目的 构建CycD(-/-)/Ptc(+/-)双基因敲除鼠以验证Hh传导系统与Rb系统的关系.方法 应用已有的杂合子CycD基因敲除鼠CycD(+/-)与杂合子Ptc基因敲除鼠Ptc(+/-)进行交配繁殖,得到双基因杂合子敲除鼠CycD(+/-)/Ptc(+/-),再利用该双基因杂合子敲除鼠进行二次交配繁殖,得到实验组CycD(-/-)/Ptc(+/-)双基因敲除鼠.结果 实验得到了双基因敲除鼠CycD(-/-)/Ptc(+/-)、双基因杂合子基因敲除鼠CycD(+/-)/ptc(+/-)、cycD单基因敲除鼠CycD(-/-)/Ptc(+/+).结论 通过本实验方法得到CycD(-/-)/Ptc(+/-)双基因敲除鼠,可用于进一步揭示Ptc基因与CycD基因相互影响调控的作用及Hedgehog与Rb信号传导通路在哺乳动物中的相关性。

目的 筛选结核杆菌在人体内诱导表达的基因,进而作为候选的免疫及药物分子新靶位.方法 构建结核杆菌基因组表达文库,应用体内诱导的抗原技术,用吸收过的结核患者血清筛选文库,对阳性克隆测序得到开放阅读框(ORF).结果 实验共确定了51个ORF.按照功能分为8类:毒力、解毒及调节相关基因1个,细胞壁与细胞处理相关基因13个,中间代谢和呼吸相关基因11个,脂类代谢基因7个,信号通路基因2个,PE/PPE蛋白家族基因3个,保守假设蛋白基因12个,与牛型分支杆菌同源的保守假设蛋白基因2个.结论 应用体内诱导抗原技术可以筛选到结核杆菌进入人体后诱导表达的基因,其中部分基因可以作为结核病预防、诊断和治疗研究的候选靶位。

目的 探讨椎体软骨终板内软骨细胞凋亡和椎间盘退变之间的关系.方法 40只成年新西兰白兔,随机平均分为实验组和对照组.实验组采用阻断椎体软骨终板营养途径的方法制作椎间盘退变模型,对照组不做任何处理.术后4周和8周,每组各处死10只动物,切取软骨终板和相应的椎间盘组织.TUNEL法检测终板软骨细胞的凋亡数,免疫组织化学方法检测椎间盘内Ⅱ型胶原阳性细胞数,并对两组数据进行相关性分析.结果 实验组软骨终板内凋亡的软骨细胞在4周、8周时分别为9.9±O.88个/视野和12.4±0.71个/视野,较对照组明显增加,4周、8周组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).相关分析显示,术后4周和8周终板软骨细胞凋亡与Ⅱ型胶原表达之间有高度的相关性,相关系数分别为0.86和0.82(均P＜0.05),表明椎体终板软骨细胞凋亡与椎间盘退变之间存在有高度的相关性.结论 阻断椎体软骨终板营养途径可导致椎间盘退变的发生,椎体终板软骨细胞凋亡增加可导致椎问盘内Ⅱ型胶原表达进一步减少。

目的 为筛选出辐照灭菌中评价对病毒灭活效果的指示噬菌体,比较研究了噬菌体T4、φX174D、MS2和f2,以及两种细菌参考株大肠杆菌8099和枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372对电离辐射γ射线的抵抗力.方法 采用钴源60Co-γ射线辐射源对噬菌体和细菌进行辐照处理;灭活方法采用悬液灭活试验;噬菌体的检测采用双层琼脂法.结果 方差分析表明,不同剂量的γ射线组间(P＜0.01)和不同的噬菌体组间(P＜0.05),差异均有统计学意义.LIV(灭活对数值)和KL(杀灭对数值)为:(1)T4、ΦX174、f2和MS2 4种噬菌体经100 Gy的γ射线辐照可达到消毒水平(LIV≥4.00 log10);在此剂量下4种噬菌体的LIV分别为:6.31,6.92,5.74和4.46 log10;(2)在前述剂量下,大肠杆菌8099的KL＞7.97 log10;(3)在前述剂量下,枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372的KL为1.61 log10.结论 6种微生物对γ射线的抵抗力由强到弱为:枯草杆菌黑色变种芽孢＞噬菌体MS2＞噬菌体f2＞噬菌体T4＞噬菌体φX174＞大肠杆菌。

目的 探讨趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及趋化因子受体4(CXCR4)对胃癌腹膜转移潜能的影响.方法 采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌细胞NUGC4及间皮细胞HMrSV中CXCR4和SDF-1 mRNA的表达.采用MTT实验检测NUGC4细胞增殖能力的变化,采用间皮细胞黏附实验及间皮细胞迁移实验评价体外培养的NUGC4细胞与间皮细胞发生黏附的能力及其穿越间皮细胞发生迁移的能力.通过建立裸鼠胃癌腹膜种植瘤模型,评价NUGCA细胞腹膜肿瘤生成能力及荷瘤裸鼠生存时间的变化.结果 NUGC4细胞表达较高强度的CXCR4mRNA,而间皮细胞表达高强度的SDF-1 mRNA.抗CXCR4单抗对NUGC4细胞增殖具有显著的抑制作用(P＜0.05);SDF-1可促进NUGC4细胞与间皮细胞黏附及穿越间皮细胞发生迁移,抗CXCR4单抗处理可显著抑制NUGC4细胞的黏附及迁移能力(P＜0.05).体内实验结果显示,CXCR4拮抗剂AMD3100治疗组裸鼠的平均生存时间显著长于对照组[(43.8±2.8)vs(28.2±2.5)d,P＜0.01],瘤结节数目显著低于对照组[(64.6±8.2)vs(103±12.4),P＜0.01].结论 趋化因子SDF-1及其受体CXCR4参与胃癌腹膜转移过程,与肿瘤细胞增殖、肿瘤细胞-问皮细胞问的黏附和肿瘤细胞迁移等步骤密切相关;干扰SDF-1/CXCR4生物学轴可以作为胃癌腹膜转移的潜在治疗策略。

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性神经系统变性病,隐性起病,以记忆力和其他认知功能进行性减退为特征。

阴道上内瘤变(VAIN)是癌前病变,它在1952年由Graham和Meigs首次报道[1],大约占女性下生殖道上皮内瘤变的1.0%[2]。

米索前列醇(misoprostol)是前列腺素(PG)E1衍生物,1973年由英国Searle公司(现已并入Pfizer公司)合成,1985年上市后作为治疗胃溃疡的药物在临床广泛应用。

患者男,50岁,农民,因右环指背伸不能2周入院.患者半年前无明显诱因下出现右环指掌指关节肿胀,无发热、咳嗽、夜间盗汗、体重减轻,无局部疼痛及感觉障碍,未就诊。