2007年 · 第87卷第30期

原发性小肝癌目前国际上尚无统一的诊断标准,多数文献将小肝癌定义为单个或者相邻两个肿瘤结节直径和≤5 cm,但也有相当一部分文献以肿瘤直径≤3 cm作为界限。

"食肉细菌(flesh-eating bacteria)"感染是一种快速进展性皮肤病,可迅速破坏皮肤、筋膜、肌肉等软组织,并在短期内引起组织坏死、中毒性休克及多脏器衰竭,病死率及致残率极高。

目的 应用比较蛋白组学研究与肝细胞肝癌门静脉癌栓形成相关的蛋白质分子标记物.方法 利用双向凝胶电泳(2-DE)对同一患者的肝癌原发灶组织和其门静脉癌栓组织进行总蛋白的分离,两组之间的差异蛋白通过质谱分析和蛋白数据库搜索鉴定,并用免疫印迹(Western印迹)法对差异蛋白点进行进一步检测验证.结果 共鉴定出20有意义的蛋白质.12个蛋白仅在肝癌原发灶组织表达或表达明显增高,其中包括半乳糖苷凝-1(Galectin-1)、高迁移率族蛋白-1(HMGBI)、过氧化氧化还原蛋白1(peroxiredoxin 1)、亲环蛋白B(Cyclophilin B)、增殖细胞核抗原(PCNA)等,同时我们发现8个蛋白仅门静脉癌栓中表达或者高表达包括膜联蛋白5(Annexin V)、Triosephosphate Isomerase.对于门静脉癌栓组织高表达的Annexin V,应用Western印迹在蛋白水平上验证了2-DE结果.结论 肝癌门静脉癌栓形成与多种蛋白质相关,其中Annexin V高表达可能发挥重要作用。

目的 探讨肝癌细胞SMMC-7721在干扰素-α(IFN-α) 的作用下,对氟尿嘧啶类化疗药物敏感性的变化,及其与胸苷磷酸化酶(TP)表达水平的关系.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SMMC-7721细胞TP mRNA表达水平,利用MTY法检测肝癌细胞对氟尿嘧啶类化疗药物的敏感性.结果 IFN-α上调TP mRNA表达具有时间一剂量依赖性.10 000 U/ml的IFN-α处理SMMC-7721细胞8 h后TP mRNA表达水平开始升高,至12 h达到峰值,此后维持较高水平至72 h.5000 U/ml与10 000 U/ml IFN-α处理肝癌细胞24 h,TP mRNA表达水平显著升高,与未用IFN-α处理组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).IFN-α能明显提高SMMC-7721细胞对5'-脱氧-5-氟尿苷(5,-dFUrd)的敏感性,在10 000 U/ml IFN-α作用下,5'-dFUrd的IC50由(102.1±18.4)μmol/L降低至(34.2±4.1)μmoL/L(P＜0.05).而IFN-α对5-氟尿嘧啶(5-Fu)的敏感性影响不大,IC50与对照组(6.3±1.4)μmoL/L相比,10 000 U/ml IFN-α作用时为(5.8±2.0)μmol/L.细胞对5'-dFUrd敏感性的增加与IFN-α上调TP mRNA正相关,相关系数为0.6(Pearson检验P=0.008).结论 IFN-α显著增强肝癌细胞SMMC-7721对5-FU前体药物5'-dFUrd的敏感性,与其上调肝癌细胞TP mRNA表达水平正相关;IFN-α上调SMMC-7721细胞TP mRNA表达水平具有时间一剂量依赖性。

目的 分析对预后有显著影响的肿瘤相关因素,为肝癌肝移植适应证的选择提供依据.方法 回顾性分析我院2001年4月至2006年2月间251例肝细胞癌肝移植病例,Kaplan-Meier生存率统计分析各种肿瘤相关性因素对肝癌肝移植术后生存率及无瘤生存率的影响,Log Rank检验组间差异,COX多因素回归分析对预后有显著影响的危险因素.结果 对术后生存率和/或无瘤生存率有显著影响的因素有:大血管癌栓、淋巴结转移、Edmondson分级、镜下癌栓、肿瘤部位、播散灶、术前甲胎蛋白(AFP)等(P＜0.05或P＜0.01);而术前治疗史及肝炎背景对术后生存率及无瘤生存率差异均无统计学意义(P＞0.05).Cox多因素分析对生存率或无瘤生存率有显著影响的指标有:大血管癌栓、肿瘤播散灶及镜下癌栓(P＜0.05或P＜0.01).结论 Edmondson分级Ⅲ～Ⅳ级、镜下癌栓、肿瘤位于左叶或两叶、肿瘤有播散灶及术前AFP≥300 μg/L等都是肝癌肝移植危险因素,提示预后不良.有大血管癌栓、淋巴结转移的预后极差,应列为肝癌肝移植禁忌证。

临床资料 　　患者男,48岁,因乏力,全身胀痛伴低热1个月余于2005年12月7日入院.人院前1个月无明显诱因出现乏力,全身胀痛,伴低热(未测体温)、恶心、纳差,无呕吐,无畏寒、寒战、咳嗽、咳痰、咯血等不适.入院前3 d出现鼻腔出血,2 h后自行停止。

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)基因启动子-238G/A、-308G/A、-857C/T、-863C/A等位基因多态性和血清TNF-α水平与慢性重型乙型肝炎的相关性.方法 2002年12月至2005年12月北京佑安医院住院慢性重型乙型肝炎患者98例,慢性乙型肝炎患者211例.采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法检测TNF-α启动子-238G/A、-308G/A、-857C/T、-863C/A等位基因多态性.结果 两组-863C/A、-238G/A位点的等位基因(χ2=0.61,P=0.436;χ2=0.001,P=0.976),基因型频率比较差异无统计学意义(χ2=1.16,P=0.552;χ2=0.63,P=0.486).两组比较TNF-α-308 G/A和-857C/T等位基因差异都具有统计学意义(χ2=59.01,P=0.000;χ2=11.59,P=0.000);-308 GA和-857 TT基因型频率显著高于慢性乙型肝炎组(χ2=28.06,P=0.000;χ2=19.69,P=0.000),差异有统计学意义.-308 GA与-857 TT基因型与慢性重型乙型肝炎有显著性关联OR=4.176;95%CI 2.416-7.216;OR=6.09;95%CI 2.652-14.001.慢性重型乙型肝炎患者血清TNF-α水平明显高于慢性肝炎患者,两组比较差异有统计学意义(t=3.951,P=0.000).结论 TNF-α-308 GA与-857 TT基因型携带者感染HBV后可能增加成为慢性重型乙型肝炎的风险.TNF-α基因启动子区基因多态性与北京地区汉族人群中慢性重型乙型肝炎的发生可能密切相关。

目的 研究骨髓增殖性疾病(MPD)患者Janus激酶2(JAK2)V617F点突变,探讨其临床应用意义.方法 应用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)结合测序检测20例慢性粒细胞白血病(CML)、23例真性红细胞增多症(PV)、40例原发性血小板增多症(ET)、8例慢性特发性骨髓纤维化(IMF)、3例高嗜酸粒细胞综合征(HES)患者外周血单个核细胞基因组DNA的JAK2 V617F点突变.结果 74例BCR/ABL阴性MPD患者中共发现38例存在JAK2 V617F突变(51.4%),分别为16例PV,18例ET,3例IMF,1例HES.对所有阳性样本和10例阴性样本进行测序鉴定,二者结果均一致.JAK2 V617F突变阳性ET患者的外周血血红蛋白、红细胞压积和中性粒细胞比例显著高于阴性组.结论 JAK2 V617F突变为BCR/ABL阴性MPD患者主要的分子遗传学异常,对其诊断、分类及探索有效的靶向治疗有重要影响。

目的 了解人类疱疹病毒7型(HHV-7)在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者的感染现状.方法 采集72例allo-HSCT患者外周血标本680份以及53例供者标本.采用巢式聚合酶链反应检测供者以及移植前、后患者HHV-7 DNA血症.结果 72例患者中有62例(86.1%)移植后至少1次检出HHV-7 DNA血症,中位时间为15.6(7～56)d.29例(40.3%)移植后出现持续性HHV-7 DNA血症.47例接受含抗胸腺细胞球蛋白(ATG)预处理方案的人类白细胞抗原(HIA)配型不合移植或配型相合的非血缘移植患者中持续性HHV-7血症的发生率为48.9%(23/47),显著高于接受不含ATG预处理方案的配型相合移植患者[24%(6/25),P=0.040].应用糖皮质激素治疗的患者移植后持续性HHV-7 DNA血症的发生率为44.6%(39/65),显著高于未接受糖皮质激素治疗的患者[0%(0/7),P=0.037].HHV-7血症与急性移植物抗宿主病、出血性膀胱炎、巨细胞病毒和人类疱疹病毒6型感染无显著相关性.结论 HHV-7感染在allo-HSCT后患者中很常见,且其持续感染与预处理方案中ATG和移植后糖皮质激素的应用密切相关。

目的 探讨川崎病恢复期的肱动脉内皮功能、颈动脉僵硬度指数和颈动脉内一中膜厚度及其之间的关系.方法 共204例受试者纳入试验.包括51例川崎病合并冠状动脉病变者(冠状动脉病变组),50例川崎病无冠状动脉病变者(冠状动脉正常组),103名正常儿童(对照组).观察血压、血脂、肱动脉内皮功能、颈动脉僵硬度指数及颈动脉内-中膜厚度.结果 肱动脉内皮功能冠状动脉病变组(5.2%±1.9%)和冠状动脉正常组(6.8%±2.0%)均显著低于对照组(13.2%±4.1%,均P＜0.01);颈动脉僵硬度指数在冠状动脉病变组(4.0±0.6)显著高于冠状动脉正常组(3.6±0.6)和对照组(3.4±0.5,P＜0.05和P＜0.01).同样,冠状动脉病变组颈动脉内-中膜厚度(0.447 mm±0.024 mm)显著高于冠状动脉正常组(0.426 mm±0.016 mm)和对照组(0.424 mm±0.016 mm,均P＜0.01).多元回归分析显示,年龄和分组是肱动脉内皮功能、颈动脉僵硬度指数和颈动脉内-中膜厚度的显著决定因素.相关性检验分析显示,各组在调整年龄后,肱动脉内皮功能、颈动脉僵硬度指数和颈动脉内-中膜厚度两两比较均有显著相关性.结论 川崎病恢复期存在血管内皮功能障碍、颈动脉僵硬度增加以及颈动脉内-中膜增厚.综合采用肱动脉内皮功能、颈动脉僵硬度指数和颈动脉内-中膜厚度等超声检测指标可更全面评价川崎病恢复期血管病变的预后。

目的 探讨甲状腺机能减退症(甲减)患者左旋甲状腺激素(L-T4)治疗前后血浆护骨素(OPG)水平的变化.方法 选择20例临床甲减、20例亚临床甲减患者和20例健康者(对照组).所有甲减患者采用L-T4补充治疗至甲状腺功能在正常范围内.血浆OPG采用酶联免疫法测定.结果 L-T4治疗前,临床甲减组和亚临床甲减组血浆OPG水平分别为3.13 ng/L±0.27 ng/L和2.95ng/L±0.24 ng/L,明显高于对照组(2.42 ng/L±0.26 ng/L,P=0.000),多元相关分析结果显示,OPG与TSH呈正相关(r=0.306,P＜0.05),与内皮依赖性血管舒张功能呈负相关(r=-0.675,P＜0.01).治疗至甲状腺功能正常后,2组血浆OPG水平明显降低(2.53 ng/L±0.28 ng/L,2.54 ng/L±0.21 ng/L,P=0.000),与对照组相近.治疗前后OPG的变化与TSH的变化呈正相关(P＜0.05),与内皮依赖性血管舒张功能呈负相关(P＜0.01).与其他指标的变化无关.结论 OPG可能是甲减患者血管内皮功能的重要调节分子。

目的 观察氧化苦参碱对于肾综合征出血热的治疗效果.方法 将418例肾综合征出血热患者随机分为治疗组和对照组,治疗组应用氧化苦参碱静脉点滴,每日1次,每次600 mg,疗程为7 d,对照组应用传统的平衡盐疗法.观察两组患者的病情转归及并发症发生情况,动态检测患者血清中血清尿调蛋白(THP)和β2微球蛋白(β2M)的水平,同时观察血清白细胞介素15(IL-15)及可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)水平变化.结果 氧化苦参碱治疗组患者病程缩短、预后改善,血清THP和β2M的水平均明显低于对照组,且治疗后血清IL-15及sICAM-1水平与对照组相比差异也有统计学意义.结论 氧化苦参碱治疗肾综合征出血热疗效确切,值得临床进一步推广使用。

目的 研究儿童临床分离的30株肠球菌,红霉素耐药性在同属同种、同属异种和异属细菌之间的传递.方法使用临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的琼脂稀释法筛选30株耐红霉素的肠球菌,通过滤膜接合法进行质粒接合转移试验,采用PCR检测供体菌、受体菌和接合子ermB基因和转座子Tn1545、Tn917.结果13株粪肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到13株接合子,红霉素最小抑菌浓度(MIC)≥512μg/ml,除原供体菌1株粪肠球菌阴性外,其余的12株接合子全部携带ermB基因,且ermB基因均同时存在于转座子Tn1545和Tn917;16株屎肠球供体菌和1株海氏肠球供体菌通过质粒接合转移试验后得到17株接合子,红霉素MIC≥512μg/ml,除原供体菌1株屎肠球菌阴性外,其余16株接合子全部携带ermB基因,并且有11株接合子ermB基因同时存在于Tn1545和Tn917,4株接合子ermB基因仅存在于Tn1545,1株接合子ermB基因仅存在于Tn917;30株肠球菌通过质粒接合转移试验后得到的30株金黄色葡萄球菌接合子,红霉素MIC≥512μg/ml,除原供体菌1株粪肠球菌和1株屎肠球菌阴性外,其余的28株接合子全部携带ermB基因,其中ermB基因同时存在于Tn1545和Tn917的为23株,4株接合子ermB基因仅存在于Tn1545,1株接合子ermB基因仅存在于Tn917.结论肠球菌对红霉素的耐药性可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递;红霉素的耐药性与ermB基因存在一致,ermB基因与Tn1545和Tn917密切相关,ermB基因与Tn1545和Tn917可以在同属同种、同属异种和异属之间进行传递。

目的 研究免疫抑制治疗在防治同种带瓣主动脉移植(AVH)供体组织钙化的作用.方法 采用改良大鼠AVH腹主动脉异位移植模型,研究分为异基因组和同基因组.异基因组分别为接受低温保存的AVH移植组,接受低温保存的AVH移植后给予环孢素A(CsA)治疗组,接受树突状细胞(DC)单抗预处理低温保存,移植后给予DC单抗治疗组;同基因组为对照组.异基因组SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体;同基因组受体和供体均为Wistar大鼠.治疗时间为4周.手术后2、4、8、12、16周用流式细胞仪检测大鼠血液中T细胞抗原受体α、β(TCR-α、β),CD28的表达.观察移植物组织结构形态学变化,用免疫组织化学染色方法检测动脉壁CD54的表达,用原子火焰吸收法测定AVH组织钙的含量.结果 (1)接受深低温保存AVH移植组于术后2、4周其TCR-α、β表达水平为(52.4±3.3)%、(43.8±6.4)%,CD28的表达水平为(51.7±7.5)%、(66.3±4.4)%;CsA治疗组TCR-α、β表达为(34.5±3.5)%、(31.6±2.6)%,CD28表达水平为(41.2±1.6)%、(55.1±5.1)%;DC单抗治疗组TCR-α、β表达水平为(31.6±2.3)%、(29.5±3.0)%;CD28为(36.6±3.6)%、(51.8±5.6)%;对照组TCR-α、β表达为(23.2±1.3)%、(21.6±2.3)%;CD28为(30.7±1.4)%、(33.3±0.9)%.(2)异基因组不同时间的供体组织钙含量自移植后4周开始升高,同基因组各时点的钙含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 免疫抑制治疗可减轻免疫反应,延缓钙化进程,疗效明显。

目的 利用T淋巴细胞激活后早期表达的膜表面分子CD25和CD69来观察骨髓间充质干细胞(MSC)对于T淋巴细胞增殖的抑制作用.方法 体外扩增并鉴定大鼠MSC,采用尼龙棉柱纯化大鼠T淋巴细胞.将MSC和T淋巴细胞共培养,加入植物血球凝集素(Phytohaemagglutinin,PHA)进行刺激后测定T淋巴细胞膜表面CD25和CD69的表达.ELISA法测定MSC培养上清液的转化生长因子(TGF)-β1和IL-10的浓度.结果 ①10 000个以上的MSC和T淋巴细胞共培养时,CD25的表达明显下调,而且下调作用具有数量依赖性.100个MSC对于T淋巴细胞CD25的表达没有作用;②MSC对于T淋巴细胞CD25的下调可以持续96 h以上;③MSC对于T淋巴细胞CD25的下调介于其自身分泌的可溶性蛋白质;④TGF-β1和IL-10均不是MSC介导T淋巴细胞CD25下调的原因.结论 MSC具有PHA刺激的T淋巴细胞免疫调节作用,其在移植免疫方面的应用前景非常光明。

目的 观察靶向小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的小干扰RNA(siRNA)在体外对小鼠巨噬细胞系RAW264.7表达TNF-α的抑制作用.方法 采用化学法合成针对TNF-α mRNA不同位点设计的3条siRNA序列(siRNA1～3)和1条带有荧光标记的BLOCK-ITTM荧光Oligo(修饰的荧光标记的dsRNA,siRNA4)通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7,同时设立1个无任何靶基因的siRNA作为阴性对照(siRNA4).荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验(ELISA)法分别检测siRNA对TNF-α的mRNA和蛋白表达的抑制作用.结果 内毒素刺激后6 h,巨噬细胞表达TNF-α mRNA和合成分泌的TNF-α量均增加,于9～12 h达高峰.利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达72%～80%.siRNA1～4转染巨噬细胞后,siRNA2、3可见内毒素刺激的TNF-α mRNA(0.158±0.030、0.114±0.028)和TNF-α蛋白表达[(1355 4±348)ps/ml、(817±138)pg/ml]均明显少于未转染组[TNF-α mRNA 0.294±0.147,蛋白(2104±32)pg/ml,均P＜0.05],其中siRNA3的抑制率非常显著,达61.2%(P＜0.01).阴性对照siRNA4对细胞基因及蛋白表达无影响.结论 内毒素可刺激小鼠巨噬细胞TNF-α的合成.化学合成siRNA转染小鼠巨噬细胞能有效抑制TNF-α mRNA及蛋白的表达。

目的 探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)导致HaCaT角质细胞凋亡中,TNF-α对过氧化物酶体增殖物激活受体β(peroxisome proliferator activated receptor-β,PPARβ)表达时空和转录活性的影响.方法 采用Hoechst 33258染色后观察凋亡细胞的形态学改变,并计算凋亡细胞百分率,Caspase活性定量检测试剂盒分析Caspase-3的活性变化,RT-PCR和Western印迹观察TNF-α导致PPARβmRNA及蛋白的表达,应用凝胶迁移滞留实验及荧光素酶报道基因分析TNF-α介导PPARβ的DNA结合活性及转录活性的改变.结果 HaCaT角质细胞经5、10、20 ng/ml TNF-α处理24 h后,Hoechst 33258染色示随着TNF-α剂量的增加,凋亡细胞增多,凋亡细胞核百分率分别为12%4±3%、32%4±4%、57%4±5%;HaCaT角质细胞经TNF-α(10、20 ng/ml)处理不同时间后,Caspase-3的活性增强(P＜0.01).继而Western印迹显示,HaCaT角质细胞经10 ng/ml TNF-α处理12、24 h后PPARβ的蛋白表达显著增加,HaCaT角质细胞经不同浓度的TNF-α处理24 h后PPARβ蛋白表达水平亦增加;RT-PCR检测示TNF-α(10、20 ng/ml)处理3、6 h后PPARβmRNA的表达增强,说明TNF-α可诱导PPARβ的表达.进而凝胶迁移滞留实验及荧光素酶报道基因分析表明TNF-α可以增强PPARβ的DNA的结合活性和转录活性.结论 在TNF-α介导HaCaT角质细胞凋亡中,TNF-α可增强PPARβ mRNA、蛋白水平的表达以及DNA结合活性和转录活性。

目的 研究腹腔内注射血吸虫卵对小鼠三硝基苯磺酸(TNBS)肠炎的预防作用及对肠道上皮Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 40只BALB/c小鼠随机分成正常对照组(10只);TNBS肠炎组(20只);血吸虫卵组(10只).评价小鼠病死率,肠黏膜病理表现,血浆肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,免疫组化法、逆转录(RT)-PCR法检测结肠,TLR4的表达.结果 血吸虫卵组小鼠病死率低于TNBS肠炎组(20% vs 70%,P＜0.05),肠道炎症轻于TNBS肠炎组(Ameho标准评分1.4±0.5 vs 4.2±0.6,P＜0.01).结肠TLR4表达(TLR4/β-肌动蛋白吸光度比值):TNBS肠炎组＞血吸虫卵组＞正常对照组(0.762±0.054 vs 0.325±0.029 vs 0.237±0.021,均P＜0.01).结论 腹腔内注射血吸虫卵可预防小鼠TNBS肠炎,可能与其下调结肠TLR4表达有关。

病历摘要 　　患者男,49岁,无意中发现左阴囊内肿物2个月,偶尔有隐痛或轻度疼痛,体检发现左附睾尾部2 cm×2.5 cm肿物,表面光滑,质韧,与周围组织边界清楚,无触痛.诊断为左侧慢性附睾炎.给予头孢克洛、拜复乐抗感染治疗10 d无效,收入院。

医学教育不同于其他学科教育,医学生毕业不能够直接成为医生,需经过医院培训及住院医师规范化培训才能成为一名合格的住院医师.但是由于我国计划经济体制的制约和影响,在培训体制和准人管理制度上始终未能建立起较为完善的专科医师培训和准入管理制度,致使从事临床医疗工作的大部分医师缺乏严格、规范的专科训练,即使在大型综合性医院经过培训的医生也没有行业权威性的资质认定。

患者男,48岁,未婚,多饮、多食、多尿5年,体重减轻2年.患者5年前诊断为2型糖尿病,不规则服用中药治疗,血糖控制不佳.近2年体重由78 kg逐渐下降至71 kg。

患者,女,63岁.因"发热伴腹痛2 d"于2005年9月至我院就诊.2 d来体温最高38.6℃,腹痛位于左上腹,伴恶心、呕吐,无反酸、嗳气、腹泻、尿频、尿急、尿痛,无胸闷、胸痛。