2007年 · 第87卷第12期

膀胱癌是我国最常见的泌尿生殖系恶性肿瘤.膀胱癌的发生、发展是个多基因、多步骤、多阶段的过程.原癌基因的激活、抑癌基因的失活等均与膀胱癌密切相关.检测这些肿瘤基因和相关的肿瘤标记物对于了解膀胱癌的发病机制、监测随访、预后判断,以及开展基因治疗均有重要意义。

膀胱癌在中国泌尿系统肿瘤中,无论发病率或死亡率均占首位,而且发病率呈逐年增高之势.自20世纪末以来,肿瘤的基因研究取得了令人瞩目的进展,发现了许多肿瘤相关基因,近年来蛋白质组学的建立则为肿瘤相关基因的表达和功能研究提供了更有力的手段.然而,目前却难以将所有这些相关知识整合在一个完整的系统中为临床治疗和诊断提供切实的帮助.膀胱癌除了具有遗传学上的异质性,还涉及到复杂的组织微环境,如脉管系统、间质细胞和结缔组织等.如何将膀胱癌体外肿瘤细胞系、实验动物模型以及人体内研究有机统一起来依然是人们所面临的问题.针对近年来膀胱癌基础研究领域的进展和困惑现予以简单归纳。

目的 比较人表浅性与浸润性膀胱癌基因表达谱的差异.方法 应用基因芯片技术对表浅性膀胱癌和浸润性膀胱癌的RNA进行检测分析.得到芯片灰度扫描图,通过图像处理软件GenePix Pro 3.0对图像进行分析,得到表达差异基因的相应数据,根据差异基因的类型及膀胱癌的特点分析数据.结果 按显著差异基因标准,从13939条基因中筛选出显著差异表达基因:表浅组714条,其中480条下调,234条上调;浸润组470条,其中302条下调,168条上调.在显著差异基因中,下调基因的数量比上调基因多近1倍,免疫相关基因在浸润性膀胱癌中下调最明显.结论 浸润性和表浅性膀胱癌的基因表达谱具有许多共同特点,但表浅性膀胱癌的差异表达基因较浸润性膀胱癌更多.免疫相关基因在浸润性膀胱癌中缺失较表浅性膀胱癌严重。

目的 包装重组分泌型内皮抑素腺相关病毒(rAAV-ES)并研究其在体内外的抗肿瘤作用.方法 采用质粒共转染方法包装rAAV-ES;转染(感染复数MOI=105)膀胱癌细胞(EJ)后,ELISA法测定上清液中重组内皮抑素的浓度并检测其对血管内皮细胞趋化运动的抑制作用;建立裸鼠肿瘤模型,检测EJ细胞被转染后的成瘤率及全身应用rAAV-ES后抑制肿瘤发展的作用及其毒副作用.结果 成功包装具有生物活性的rAAV-ES,病毒滴度为1.0×1012 v·g/ml;转染EJ细胞后上清液中重组内皮抑素浓度为54.09 ng/ml,对血管内皮细胞趋化运动的抑制率为37.45%;被rAAV-ES转染后EJ细胞的成瘤率仅为对照组的2/5,体内实验证实全身应用rAAV-ES后血清中内皮抑素长期高效表达(30～40 ng/ml),肿瘤生长速度慢(32 d±9 d),瘤体微血管密度低[(8±3)条/0.739 mm2],与对照组比较,差异有统计学意义(均P＜0.05),心脑组织学检查未见缺血和其他异常改变.结论 rAAV-ES无毒副作用,可有效地抑制肿瘤的血管生成,从而抑制膀胱癌的发生、发展,其成功包装为原位基因治疗膀胱癌奠定了基础。

目的 检测凋亡抑制基因Livin在膀胱移行细胞癌组织中的表达,以探讨其在膀胱癌发生、发展中的作用.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测了60例膀胱移行细胞癌中Livin基因的表达情况.结果 60例膀胱癌组织中Livin基因阳性表达率为28.3%,10例非肿瘤膀胱组织无一例Livin表达阳性;Livin的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期无关(均P＞0.05);21例复发性膀胱癌组织中Livin阳性表达率为38.1%(8/21),高于原发性膀胱癌(23.1%,9/39).结论 Livin在膀胱癌的发生发展中具有一定意义,Livin高表达提示患者可能有早期复发的倾向。

目的 建立一项简易的绝经后妇女低骨量筛选的方法.方法 经筛选获得405名上海市绝经后健康妇女,填写有关低骨量危险因素的问卷调查表,并使用双能X线吸收仪测定股骨颈骨密度(BMD)以诊断骨质疏松(T值≤-2.5).将股骨颈BMD与危险因素进行单元回归分析,得到有统计学意义的变量与股骨颈BMD进行多元回归分析,以进一步剔除无统计学意义的变量,将筛选出来的变量建立筛选指数模型,应用此模型中的变量计算筛选指数(Index).将筛选指数做工作特征曲线(ROC曲线),分析曲线下面积(AUC),决定最终模型的参数.结果 建立筛选指数仅由年龄和体重两个参数组成.筛选指数=2×体重(kg)/10+[-1×年龄(岁)/10].这项Index的灵敏度为93.4%,特异度为52.6%,它的AUC为0.818(95%可信度:0.766～0.870).高危险人群组骨质疏松的患病率为58%,中等危险人群和低危险人群的患病率各为26%和2%.结论 此筛选方法,可以帮助临床简便评价绝经后妇女的骨量状况,筛选出骨质疏松高危和低危人群.对低危险人群组,可能不必进行BMD检查,以节省检测费用。

目的 研究阿米福汀(WR-2721)在保护非霍奇金淋巴瘤(NHL)来源的骨髓间充质干细胞(MSC)免受化疗药物依托泊甙(VP-16)体外损伤中的作用,为临床细胞移植治疗提供依据.方法 获取NHL患者的骨髓MSC,应用极限稀释法获取单克隆来源的MSC,并在低血清培养液中培养和扩增,后按处理因素分为空白对照组(A)、WR-2721组(B)、WR-2721+VP-16组(C)和VP-16组(D),分别计数细胞绘制生长曲线,流式细胞仪检测其免疫表型及凋亡,甲基纤维素半固体培养、MSC作为滋养层检测其支持造血能力,油红O染色和Von Kossa染色检测MSC向脂肪和骨的分化.结果 各组因素对MSC免疫表型无影响.(B)组MSC的增殖、凋亡和支持造血能力较空白对照组差异无统计学意义(均P＞0.05);(C)组MSC的增殖和凋亡较(D)组差异有统计学意义(均P＜0.05),其支持造血能力均明显高于(D)组(P＜0.05).各组MSC均能被诱导分化为骨和脂肪.结论 WR-2721能显著降低MSC遭受化疗药物VP-16的体外损伤,其对NHL骨髓来源MSC体外的增殖、凋亡、免疫表型、造血支持能力和分化能力无明显影响。

目的 探讨心房颤动患者心房肌组织盐皮质激素受体(MR)和赋予MR特异性的关键酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ(11βHSD2)的mRNA和蛋白表达改变.方法 入选进行人工心脏瓣膜置换术的风湿性心脏病患者25例,其中窦性心律12例,慢性心房颤动(心房颤动时程≥6月)13例.术前进行经胸超声心动图检查,所有患者在术前均签订知情同意书,于手术时取左右心房侧壁组织.用实时荧光定量PCR检测MR和11βHSD2的mRNA水平,Western印迹检测MR和11βHSD2的蛋白表达改变.结果 心房颤动组比窦性心律组左房内径显著扩大(P＜0.01);房颤组患者MR mRNA表达(右房:5.37±1.15 vs 2.67±1.09,左房:5.19±1.14 vs 2.70±0.82 P均＜0.01)和11βHSD2mRNA表达(右房:0.86±0.14 vs 0.33±0.12,左房:0.95±0.15 vs 0.37±0.10 P均＜0.01)均明显增加;同时房颤组患者MR和11βHSD2蛋白表达也较窦性心律者明显增加,MR分别为右房:1.65±0.72 vs 0.86±0.33(P＜0.01);左房:1.72±0.62 vs 0.97±0.37(P＜0.05).11βHSD2分别为右房:1.18±0.64 vs 0.71±0.21(P＜0.01);左房:1.36±0.58 vs 0.85±0.15(P＜0.05);但在左右心房之间无论是在窦性心律或心房颤动时,MR和11βHSD2二者在mRNA水平和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 心房颤动时心房肌组织MR和11βHSD2表达增加,醛固酮受体拮抗剂将可能对心房颤动发挥治疗作用。

目的 总结完全腹腔镜下巨脾切除联合贲门周围血管离断术治疗肝硬化门静脉高压症的手术技巧和临床应用价值.方法 回顾性总结了2005年3月-2006年9月间,一个治疗小组对23例肝硬化门静脉高压致食管下端静脉曲张患者应用超声刀行完全腹腔镜下巨脾切除联合贲门周围血管离断术治疗的临床资料.结果 23例中有20例在处理脾蒂前结扎脾动脉;中转开腹3例(13.0%),其中脾叶静脉破裂出血2例,左膈静脉破裂出血1例;20例顺利完成手术,其中18例应用二级脾蒂离断法处理脾蒂-逐支分离脾叶动静脉,边分离边用血管夹夹闭或丝线结扎离断血管,2例应用腔内直线型切割钉合器(Endo-GIA)集束离断二级脾蒂血管.手术时间180～350 min,平均235min.术中失血200～1600 ml,平均520 ml.术后经输血浆、利尿、预防抗炎治疗.术后发生胸腔积液3例,左膈下脓肿1例,B超引导穿刺治愈,轻度腹水2例.无死亡病例.术后住院时间6～17 d,平均8.5 d.术后平均随访时间9个月,再出血率0%.结论 娴熟的互相配合的腹腔镜技术、术中应用超声刀和预先结扎脾动脉,应用二级脾蒂离断法处理脾蒂是完全腹腔镜下巨脾切除联合贲门周围血管离断术手术成功的关键技术要素.手术仍具有微创的优势。

目的 比较超声引导下16 G与18 G针活检在诊断肝脏占位性病变中的价值.方法 自1998年9月至2005年9月,共有246例患者进行肝脏组织学活检.其中应用16 G穿刺针活检141例患者(男77例,女64例,平均年龄51.2岁),应用18 G穿刺针活检105例患者(男54例,女51例,平均年龄60.1岁).以术后病理、典型的影像学表现和/或6个月的追踪作为最终诊断,比较两种方法的差异.结果 141例患者应用16 G针活检,共取材171针,平均每例1.21针,敏感性95.9%,特异性100%,腹痛51例,腹腔出血3例.105例患者应用18 G针活检,共取材161针,平均每例1.53针,敏感性83.8%,特异性100%,腹痛37例,腹腔出血2例.两组之间进针次数与敏感性比较,差异有统计学意义(P值分别0.000,0.032).结论 与18 G针活检相比较,应用16 G针进行肝脏活检是安全的,并且在诊断疾病方面有更高的敏感性。

目的 探讨胰腺癌组织中Hedgehog信号通路成员GLI1 mRNA的表达情况及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测25例胰腺癌组织及其相应近癌旁组织、癌旁正常组织GLI1 mRNA的表达,并分析胰腺癌组织中GLI1 mRNA表达与肿瘤大小、分化程度及转移的关系.结果 GLI1 mRNA在胰腺癌组织、近癌旁组织及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为68.0%(17/25)、24.0%(6/25)、0;胰腺癌组织GLI1 mRNA阳性表达率显著高于近癌旁组织及癌旁正常组织(均P＜0.01);GLI1 mRNA阳性表达率与肿瘤分化程度相关(P=0.014),与肿瘤大小、有无淋巴结及远处转移无关(P＞0.05).结论 GLI1 mRNA在胰腺癌组织中有较高的阳性表达率,且其表达率与肿瘤分化程度相关.检测GLI1表达有助于胰腺癌的诊断,可能作为判断胰腺癌恶性程度及预后的指标。

目的 利用自建的膀胱出口梗阻(BOO)细胞水平的模型,探讨转录因子E2F"诱骗"(decoy)策略抑制逼尿肌细胞(DSMC)的表型转化作用.方法 对培养的DSMC施加周期性张力负荷以建立细胞水平的BOO模型;以Lipofectamine 2000介导E2F-decoy脱氧寡核苷酸(ODN)转染DSMC,设立E2F-decoy ODN转染组(Decoy组),错配E2F-decoy ODN转染组(Mis-decoy组)及空白对照组(非转染组);四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞的增殖活性,逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)分析增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达水平,Western印迹检测PCNA和细胞周期依赖性蛋白激酶cdk2表达.结果 Lipofectamine介导转染E2F-decoy ODN后24 h可获得表达;Decoy组增殖活性显著低于非转染组和Mis-decoy组(均P＜0.01);Decoy组PCNA mRNA表达显著低于非转染组(P＜0.01);Decoy组PCNA和cdk2蛋白表达显著低于非转染组(126±14 vs 180±10;155±6 vs210±22,均P＜0.01);而Mis-decoy组与非转染组之间以上指标差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 E2F-decoy ODN能够转染DSMC并获得表达;转录因子E2F"诱骗"策略有效抑制了BOO后DSMC的表型转化,显示了从逼尿肌结构的角度改善梗阻后膀胱功能的前景。

目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(CoV)相关受体血管紧张素转换酶2(ACE2)和CD209L在人8种不同器官组织微血管内皮细胞上的表达,分析两种受体表达水平与SARS器官病变之间的相关性.方法 应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western印迹、免疫细胞化学3种方法分析比较SARS-CoV相关受体,ACE2、CD209L在人8种不同器官组织微血管内皮细胞上的表达.结果 人的各种器官组织的血管内皮细胞均表达SARS-CoV相关受体ACE2与CD209L,其中ACE2在肺微血管内皮细胞表达最高,在淋巴内皮细胞表达最低,而CD209L在淋巴内皮细胞表达相对较高.结论 人的微血管内皮细胞是SARS-CoV作用的重要靶点,肺微血管内皮细胞和淋巴内皮细胞的损伤可能分别由两种不同的SARS-CoV受体介导。

目的 建立人网膜前脂肪细胞原代培养的方法,研究内脏脂肪增生肥大和内分泌功能的生物学特性.方法 选取人网膜脂肪组织,采用酶消化细胞原代培养出梭形细胞,对培养细胞进行形态学观察、MTT法测定生长曲线、油红O脂肪染色法进行脂肪细胞鉴定、酶联免疫法测定脂肪细胞因子瘦素和脂联素水平.结果 培养出的梭形细胞成分均一.第3天开始增殖,4～9 d为指数增长期,倍增时间约为60 h.经分化诱导21 d约有90%的细胞分化为成熟脂肪细胞.前脂肪细胞可检出低水平瘦素分泌,经诱导分化分泌量持续增多,第17天达峰值(1.6 ng·ml-1·24 h-1),之后保持高分泌状态至诱导结束;而脂联素直到诱导分化第7天始可检测到低水平分泌,此时光镜下已可见胞质含脂滴的细胞;7～17 d分泌逐渐增多,第17天分泌达峰值(99 ng·ml-1·24 h-1),之后有明显下降趋势.经油红O脂肪染色和瘦素、脂联素分泌检测证实分离培养的细胞为功能活跃的前脂肪细胞.结论 成功建立了人网膜前脂肪细胞模型,观察到瘦素和脂联素不同分泌模式.脂联素可作为鉴定前脂肪细胞分化成熟的内分泌功能特异标志物。

目的 探讨雄性SD大鼠前列腺上皮细胞膜钾离子通道电流的变化和对钾通道阻断剂的反应.方法 分别取3个月龄成年和12个月龄的老年SD大鼠的背外侧叶前列腺组织,剪成1～2 mm3大小,经消化、培养、免疫组鉴别,将形态正常、贴壁良好的腺上皮细胞用全细胞膜片钳模式记录钾通道电流.结果 成年和老年SD大鼠的前列腺上皮细胞膜+80 mV钾电流密度分别为(10.84±1.54)pA/pF vs(18.48±1.7)pA/pF(n=20,P＜0.01);钙激活型钾通道抑制剂(KCa通道)四乙胺(TEA)对老年大鼠峰电流阻断从19.1±2.9到7.2±3.2,KCa电流被抑制约63%;成年大鼠为9.5±1.8到5.4±3.1,KCa通道电流被抑制约44%.电压依赖型钾通道抑制剂4-AP(四氨基吡啶)对大鼠前列腺上皮细胞膜钾电流有显著阻断效应.结论 老年大鼠的前列腺上皮细胞膜钾通道电流比成年大鼠显著增强,同时老年大鼠KCa通道电流对TEA更敏感.由此结果可推论老年大鼠的前列腺上皮细胞分泌功能是降低的。

目的 探讨神经干细胞(NSC)移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的最佳部位.方法 7 d龄新生大鼠制成HIBD模型后随机分为HIBD组(12只),皮质移植组(CT,12只),海马移植组(HT,12只)和侧脑室移植组(VT,12只).移植4周后行放射形迷宫测试学习记忆和空间辨别能力,4项感觉运动功能测试测试感觉运动功能的恢复情况.计数皮质和海马CA1区单位面积的正常神经元.结果 在放射形迷宫测试中,成绩为HT组＞VT组＞CT组＞HIBD组[觅水时间依次为(s):48±17、51±21、58±22、89±26],各组与HIBD组差异均有统计学意义(均P＜0.05).感觉运动功能测试中的成绩为CT组＞VT组＞HT组＞HIBD组,其中CT组,VT组和HIBD组的差异有统计学意义(均P＜0.05).尼氏染色示皮质区正常神经元数:CT组＞VT组＞HT组＞HIBD组,CA1区正常神经元数:HT组＞VT组＞CT组＞HIBD组[依次为(细胞/mm2):98±12、90±8、79±9、57±10,均p＜0.05].结论 NSC移植到侧脑室可有效改善新生大鼠HIBD的全脑损伤。

目的 观察黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂对大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应的影响.方法 建立大鼠腹主动脉移植模型,移植后大鼠随机分为对照组、霉酚酸酯(MMF)组、黄芪多糖(APS)组和黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂(APS-CPS)组,同时设立假手术组.各组动物在饲养35 d后,观察移植动脉的病理变化,分别用免疫组织化学和胶原纤维染色,观察移植动脉TGF-β1的表达、胶原蛋白合成;应用流式细胞术检测脾脏中CD4+、CD8+阳性T淋巴细胞.结果 对照组血管内膜明显增厚,平滑肌细胞明显增生,胶原纤维增生明显;TGF-β1蛋白于内膜平滑肌细胞、单核细胞、动脉内皮细胞等均呈阳性表达.APS-CPS组血管壁三层结构清晰,内膜未见明显增生,胶原原纤维稀疏;TGF-β1表达较对照组明显减弱(P＜0.01),且移植前后CD4+、CD8+阳性T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+比值均无明显变化(P＞0.05).结论 APS-CPS抑制大鼠动脉移植慢性排斥反应,能下调TGF-β1表达,抑制内膜平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成,维持CD4+/CD8+比值的正常。

目的 了解氧化苦参碱对于对甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导的大鼠消化道肿瘤的化学预防作用及其作用机制.方法 99只雄性Wistar大鼠分成4组分别服用不同的药物:阴性对照组(20只)、肿瘤模型组(36只)、氧化苦参碱干预组(23只)、氧化苦参碱对照组(20只).给药28周后停药,正常饲料喂养至44周后观察各组大鼠的胃肠黏膜病变.并用免疫组化方法检测肿瘤模型组及氧化苦参碱干预组肿瘤组织中Ki67的表达,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测两组肿瘤组织细胞的凋亡.结果 92只(92.93%)大鼠完成实验.氧化苦参碱干预组肿瘤发生率为30.43%(7/23),明显低于肿瘤模型组[58.62%(17/29),P＜0.05];阴性对照组肿瘤发生率为5%(1/20);氧化苦参碱对照组无肿瘤发生.肿瘤模型组发生肿瘤的中位体积为2.56(全距49.5)cm3,大于氧化苦参碱干预组0.03(全距0.009)cm3及对照组(0.5 cm3,P＜0.05).肿瘤模型组大鼠消化道黏膜溃疡及异型增生的发生率也显著高于氧化苦参碱干预组(P＜0.05).肿瘤模型组肿瘤组织中Ki67的表达阳性率(48±18)%显著高于氧化苦参碱干预组的肿瘤组织(25±24)%(P＜0.05).肿瘤模型组肿瘤组织细胞的凋亡率(11±7)%显著低于氧化苦参碱干预组的肿瘤组织[(30±16)%,P＜0.05].结论 氧化苦参碱能通过抑制肿瘤细胞增殖,诱导其凋亡从而有效地抑制MNNG诱导的大鼠消化道肿瘤发生。

目的 探讨肝纤维化模型两步法门静脉栓塞的有效性及安全性.方法 20只肝纤维化新西兰大白兔模型,随机分为两组(一步组和两步组),每组10只,行保留右下叶门静脉的门静脉栓塞.一步组以碘油无水乙醇乳剂和弹簧钢圈;两步组首先以碘油无水乙醇乳剂栓塞,4周后以PVA再次行门静脉栓塞.栓塞后定期复查肝功能及CT检查,计算右下叶增生率.动物处死后行肝组织病理检查.所获数据行统计学分析处理.结果 一步组中1只于术中死亡,两步组中死亡2只(出血和感染).两组动物门静脉栓塞术术后丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶变化较明显,术后4 d达到最高峰,于栓塞后7 d逐步恢复正常.两步组第2次栓塞术后肝功能未见明显变化.一步组右下叶增生率为7.0%±1.3%,两步组右下叶增生率为15.4%±3.0%,两组间的增生率差异有统计学意义(t'-7.221,P＜0.05).结论 两步法门静脉栓塞是一种安全性较高的操作手段,与一步法门静脉栓塞比较,未栓塞肝叶可以获得良好的增生率。

既往研究显示,在短暂性脑缺血发作(TIA)后卒中的发生率很高,特别是在TIA发生后90 d内,发生卒中危险为9.5%～14.6%。

患者男,57岁,5个月前下颌后牙区麻木,3个月前已达正中,牙齿松动.专科检查:口内颏孔区膨隆,边界不清,质地中等,左半侧唇红及皮肤麻木感,开口度正常。

患者男,53岁,因感冒后乏力、尿黄半个月,加重伴发热4 d于2005年10月3日入院.既往高血压史2年.感冒后出现咽痛,应用青霉素1200万单位每日1次静脉输注,咽痛好转。

患者男53岁.因发现阴囊内渐进性增大肿块伴坠胀不适1年余入院.患者于3年前在外院行胃癌根治术,术后病理诊断:(胃大弯)低分化腺癌,浸润至浆膜层,上下切缘均阴性,大弯侧淋巴结1/12阳性,小弯淋巴结0/6阳性,第12组淋巴结0/2阳性。