2007年 · 第87卷第03期

目的 探讨原发性胆囊癌患者是否存在血管生成拟态(VM)及其VM存在的临床意义.方法 收集1994年1月至2000年12月期间同济大学附属同济医院收治的74例经手术切除和病理确诊的原发性胆囊癌患者病理标本及相关临床病理参数和预后指标;应用HE染色、CD31和PAS双重染色,观察胆囊癌患者是否存在VM,并作上述相关参数的单因素分析、Kaplan-Meier生存比较和Cox风险模型分析.结果 在74例胆囊癌患者中发现13.5%(10/74)存在VM.胆囊癌VM与患者性别、年龄、肿瘤部位、瘤体大小、分化程度、Nevin分期、浸润深度、局部淋巴转移无关;但与组织类型(χ2=10.241,P=0.017)、肝转移(χ2=11.904,P=0.001)和生存期(χ2=5.7221,P=0.0168)有关.Cox分析表明,VM(F=24.0508,P=0.0001,相对危险度=11.868)和浸润深度、淋巴结转移、肝转移、手术方式(姑息手术)一样,是影响胆囊癌患者预后的独立的危险因素.结论 人原发性胆囊癌存在VM,有VM存在的胆囊癌患者,易发生血行转移,预后差。

目的 检测分析Fas、Fas配体(FasL)、Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(caspase8)和突变型P53蛋白质在食管鳞癌中的表达,探讨这5种细胞凋亡相关蛋白质与食管鳞癌发生发展的关系.方法构建包含116例食管鳞癌患者的癌组织及相应癌旁正常食管鳞状上皮组织的组织芯片.应用免疫组织化学方法,检测鳞癌与鳞状上皮组织中Fas、FasL、FADD、caspase8和突变型P53蛋白质的表达,分析其表达差异与临床病理特征及预后的相关性.结果Fas在鳞癌组织中较正常鳞状上皮表达下降(阳性率分别为41.4%和95.7%,P＜0.001).FasL、FADD在鳞癌组织(阳性率分别为76.7%和50%)较正常鳞状上皮(阳性率分别为39.7%和7.8%)表达上调(均P＜0.01).caspase8在正常鳞状上皮表层细胞呈阳性表达,而在鳞癌组织中全部阴性.突变型P53蛋白质在正常鳞状上皮不表达,在鳞癌组织中呈弥漫表达(阳性率37.1%).FADD阳性者无病生存率较低(P=0.0028);而Fas、FasL、caspase8和突变型P53蛋白质的表达均与无病生存率无明显关系(均P＞0.05).结论Fas、FasL、FADD、caspase 8和突变型P53蛋白质与食管鳞癌发生发展密切相关,是食管鳞癌发生发展的重要标志物;其中FADD可作为食管鳞癌的预后相关标志物。

目的 研究人表皮生长因子受体-2(HER-2)基因与乳腺癌患者淋巴管新生的关系及其对预后的影响,以期探讨HER-2过表达患者预后差的分子机制.方法 (1)在体外赫赛汀阻断乳腺癌SKBR-3、MDA-MB-231细胞株HER-2蛋白质功能,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术(qRT-PCR)和免疫组织化学法检测阻断前后血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA及蛋白质表达水平.(2)采用实时qRT-PCR法检测67例乳腺浸润性导管癌VEGF-C mRNA表达水平.(3)免疫组织化学法分别检测160例乳腺癌患者石蜡包埋组织中HER-2、VEGF-C蛋白质表达,podoplanin抗体标记并计数淋巴管密度(LVD),观察淋巴管侵犯(LVI)情况.结果 (1)赫赛汀阻断后HER-2高表达的SKBR-3细胞VEGF-C mRNA和蛋白质表达明显降低.人原发性乳腺癌中HER-2蛋白质表达与VEGF-C蛋白质表达正相关(r=0.215,P＜0.05),VEGF-C蛋白质表达与LVD显著正相关(r=0.248,P＜0.01).(2)淋巴结转移组VEGF-C mRNA表达(1.6±0.5)高于未转移组(1.1±0.5)(t=2.196,P＜0.05).Logistic回归模型显示HER-2、LVD和LVI是淋巴结转移的重要影响因子(均P＜0.05).(3)Kaplan-Meier生存分析显示HER-2蛋白过表达、VEGF-C蛋白质过表达、高LVD和LVI均与患者低无病生存率有关(均P单＜0.05).Cox风险比例模型分析显示:HER-2和LVI均是乳腺癌独立的预后影响因子(均P多＜0.05).结论 乳腺癌中HER-2过表达上调VEGF-C表达、促进淋巴管新生及肿瘤淋巴结转移是患者预后差的重要分子机制,VEGF-C表达、LVD和LVI是评估乳腺癌患者预后新的重要指标。

目的 探讨逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测非小细胞肺癌淋巴结微转移的可行性.方法 术中将每枚淋巴结平均分成两半,一半淋巴结进行HE染色病理检查;另一半淋巴结,按区域混合,用于RT-PCR.如果一枚淋巴结HE染色证实有显性转移,该患者同一区域的其他淋巴结不再接受RT-PCR.结果 (1)25例肺癌患者中共195枚淋巴结接受了HE染色检查,9例共30枚淋巴结中发现有显性转移,无一枚淋巴结检出微转移.(2)39组HE染色阴性的区域淋巴结混合组织中,11组RT-PCR呈阳性.(3)16例常规病理PN0期患者中,6例肺门淋巴结出现了微转移;另9例常规病理PN1期患者中,5例出现了纵隔淋巴结的微转移,差异有统计学意义(χ2=54.063,P=0.0043).结论 (1)HE染色病理能准确地检测出非小细胞肺癌淋巴结中的显性转移灶,而不易发现隐匿性微转移灶.(2)RT-PCR能提高非小细胞肺癌淋巴结微转移的检出率,并可对部分Ⅰ、Ⅱ期患者重新进行分子分期。

目的 研究环池解剖,对比4种手术入路,明确其各自适应证及禁忌证.方法 12例(24侧大脑半球)用4%甲醛固定的成人头颅标本,4例用单纯4%甲醛处理,8例血管内灌注有色硅胶.在手术显微镜辅助下分侧解剖、观察,并对比至环池的4种手术入路,重点观察限制各入路的结构.结果 环池从脚池后缘延伸至中脑四叠体外侧缘,包绕脑干上部外侧面.其内主要有大脑后动脉P2段、小脑上动脉、脉络膜前动脉、基底静脉及滑车神经.颞下入路适用于环池下部病变,Labbé静脉、海马旁回影响此入路暴露;经颞-经脉络膜入路适用于非优势侧半球环池上部病变,此入路需作颞叶皮质切开,Labbé静脉前置将限制皮质切口;经岛叶-经脉络裂入路适用于环池前上部病变,但可损伤颞干,下环岛沟越长,切口越短,损伤越小;枕部经小脑幕入路适用于环池后下部病变,海马旁回也是影响此入路的主要结构.结论 环池病变的手术入路选择必须认真考虑病变的准确位置,Labbé静脉,海马旁回与病变的位置关系是确定手术入路的关键。

目的 利用磁共振功能成像(fMRI)技术,研究无心脑肾并发症以及认知障碍的中重度高血压患者是否存在认知相关的脑功能异常.方法 50名受试者参加试验.中重度原发性高血压患者25例,正常对照25名,按性别、年龄及文化程度匹配.fMRI刺激模式为Block Design,刺激材料通过听觉呈现.实验1任务要求受试者仔细听无意义假词词组.实验2要求听真词词组,并对词性(具体词还是抽象词)做心理判断.fMRI数据处理用SPM 99软件,获得基于单个像素分析的检验激活图及负激活图.结果 简易智能状态检查,高血压组29.3±1.1、对照组29.6±0.5,两组分值差异无统计学意义(P=0.5223).焦虑状态量表分值,患者组(47±5)高于对照组(42±5)(P=0.0356).fMRI实验1:患者组与对照组相比,激活与负激活脑区部位基本相同,但是患者组有关脑区的活动强度强于正常对照组.fMRI实验2两组受试者激活与负激活脑区也相同,激活脑区包括两侧颞上回、额下回脑区;左侧角回;两侧额上回、运动前区;两侧辅助运动区及小脑半球等.负激活脑区包括前额叶中内侧、后带回后部/楔前叶、两侧顶下小叶及枕叶区域等.但患者组激活的强度与范围均大于对照组.结论 无心脑肾并发症以及行为认知障碍的中重度高血压患者,可能已经存在某些脑功能异常,fMRI技术有可能早期检测到这些改变。

目的 探讨过氧化物酶体增殖型活化受体(PPAR)γ及配体对细胞滋养细胞浸润能力的影响及作用机制.方法 采用免疫荧光细胞化学方法检测细胞滋养细胞中PPARγ的表达,利用Transwell体外浸润系统检测PPARγ不同配体对原代无血清培养细胞滋养细胞浸润能力的影响,通过免疫荧光共聚焦技术和荧光定量PCR方法检测PPARγ配体对细胞滋养细胞表达基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的调控作用.结果 PPARγ蛋白主要定位在细胞滋养细胞核中,PPARγ激动配体15-d-PGJ2和Troglitazone(TGZ)均可抑制细胞滋养细胞浸润,当浓度为0.1、1和10 μmol/L时,浸润指数分别为0.7±0.1、0.6±0.0、0.4±0.1和0.8±0.1、0.7±0.0、0.6±0.0,具有剂量依赖关系,且15-d-PGJ2作用强于TGZ,当15-d-PGJ2浓度为1和10 μmol/L,TGZ浓度为10 μmol/L时对细胞滋养细胞浸润的抑制作用与对照相比差异有统计学意义(均P＜0.05).在细胞滋养细胞中二者均可下调MMP-2和MMP-9的表达,与对照相比差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达实现的。

目的 探讨细胞周期蛋白(CyclinB1)及Cyclin-Dependent kinasel(Cdc2)在子宫内膜异位症发生发展中的作用及其与卵巢激素之间的相关关系.方法 采用RT-PCR,Western印迹以及免疫组织化学的方法检测了子宫内膜异位症患者(异位症组)的异位内膜(29例)和在位子宫内膜(20例)以及正常生育期的其他良性疾病妇女的子宫内膜(对照组,30例)中CyclinB1及Cdc2的表达.结果 CyclinB1在异位症组异位内膜上的表达量明显高于在位内膜及对照组(P＜0.05).异位症组在位内膜上CyclinB1的表达量与对照组相比没有显著性差异(P＞0.05).Cdc2在各组患者中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CyclinB1高表达可能与子宫内膜异位症异位内膜的增生相关。

目的 研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠缺血性脑卒中的治疗作用及治疗机制.方法 采集人志愿者骨髓,密度梯度离心法分离、培养BMSC;建立大脑中动脉栓塞缺血2 h再灌注大鼠模型,根据神经损伤评分将符合标准的60只脑缺血模型大鼠随机分为治疗组(BMSC移植组,48只)和对照组(D-Hanks液注射组,12只),24h后在脑缺血边缘区皮层分别注射hBMSC悬液和D-Hanks液;移植后第4天开始进行粘贴物移除实验、转棒实验及Morris水迷宫实验的循环测试至第32天;治疗组分别在移植后1、2、3及4周分批次处死大鼠,通过免疫荧光技术动态追踪BMSC并检测细胞的迁移和分化.结果 移植后第1、2周细胞大量存活并向病灶迁移,第3周细胞存活数量明显减少,第4周存活细胞极少;hBMSC在大鼠脑内没有明确表达微管相关蛋白(MAP)2、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(GalC)等神经细胞的特异蛋白.治疗后1周水迷宫平均逃逸时间,治疗组为(69±10)s,对照组为(120±0)s,P＜0.05,至第4周两组差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后第10天转棒实验(10 r/min)平均潜伏期,治疗组为(167±18)s,对照组为(37±19)s,P＜0.05,至实验终期差异仍有统计学意义.治疗后第13天粘贴物移除实验平均潜伏期,治疗组为(33±8)s,对照组为(84±13)s,P＜0.05,至实验终期差异仍有统计学意义.结论 BMSC脑内移植可以显著改善脑缺血大鼠神经功能的恢复;移植细胞在大鼠脑内可以向病灶周围迁移,但是细胞存活有一定时限性;BMSC在大鼠脑内没有明确分化为经细胞。

目的 研究免疫抑制剂他克莫司(FK506)对大鼠骨髓来源的间充质干细胞(MSC)的成骨细胞分化诱导,及对MSCs结合多孔β三磷酸钙(β-TCP)的体内成骨作用.方法 原代MSCs按实验目的随机分组.对照组生长培养液中加入L-抗坏血酸-2-磷酸(AsAp)和β-甘油磷酸(β-GP);FK506处理组在对照组基础上加入50 nmol/L FK506.实验分成体外体内两部分相继进行.体外实验细胞分别于培养第4、8、12、16天时行碱性磷酸酶(APase)活性,钙含量,扫描电镜和骨钙素mRNA Northern印迹分析;体内实验将细胞载入多孔β-TCP立方块形成MSCs/β-TCP复合物,继续成骨诱导培养2周后植入大鼠背部皮下,4周和8周后取出复合物作组织学检查.结果 FK506处理组碱性磷酸酶活性、钙含量、骨钙素mRNA均明显高于对照组(均P＜0.05);体内成骨情况亦明显优于对照组.结论 免疫抑制剂FK506能显著促进大鼠骨髓来源间充质干细胞(MSCs)的体外成骨细胞分化和动物体内继续成骨的作用,并提示FK506可作为一种新型成骨生长因子,在临床有潜在的应用价值。

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在博莱霉素(BLM)致肺间质纤维化小鼠支气管肺泡灌洗细胞中的表达和对白细胞介素4(IL-4)的影响,及其反义寡核苷酸(ASON)对肺间质纤维化的干预作用.方法 将C57B1/6小鼠随机均分为4组,对照组和BLM组经尾静脉注射生理盐水,ASON组注射p65 ASON,SON组注射p65顺义寡核苷酸(SON),6 h后,BLM组、ASON组、SON组气管内注射博莱霉素-A5(BLM-A5),对照组注射生理盐水.对照组在气管注射后0.5、1、14 d,其余各组在0.5、1、3、7、14、28 d处死小鼠,行支气管肺泡灌洗,灌洗液测IL-4,灌洗细胞行p65和IL-4免疫组织化学染色.每组另取5只小鼠,在气管注射后28 d处死,左肺行HE及Masson三色病理染色,右肺测羟脯氨酸.结果 (1)BLM组和SON组肺病理可见大片实变及胶原沉积.而ASON组无实变,肺间质可见少量胶原纤维.(2)BLM组和SON组肺组织羟脯氨酸含量较对照组明显增高,ASON组明显低于BLM组和SON组.(3)BLM组和SON组支气管肺泡灌洗细胞的胞核p65表达明显高于对照组,亦明显高于ASON组.(4)BLM组和SON组支气管肺泡灌洗细胞IL-4的表达明显高于对照组,亦明显高于ASON组.(5)BLM组和SON组支气管肺泡灌洗液IL-4含量明显高于对照组,亦明显高于ASON组.(6)BLM组和ASON组小鼠支气管肺泡灌洗细胞表达的p65与IL-4均呈正相关(r=0.890,P＜0.05;r=0.909,P＜0.05).结论 BLM致肺间质纤维化的病理过程中,支气管肺泡灌洗细胞NF-κB的表达明显增强,并可能通过IL-4途径形成肺间质纤维化.NF-κB ASON可明显抑制NF-κB的活化和IL-4的表达,并进而抑制BLM所致的肺间质纤维化。

目的 探讨应用可控管道结构支架接种成骨细胞并行旋转式动态三维培养作为一种新的节段性组织工程骨体外构建方法的可行性、效果和机制.方法 设计、制备可控管道结构自固化磷酸钙(CPC)支架,并设计开发新型旋转式生物反应器.分离、扩增兔颅骨成骨细胞接种支架后分别行旋转培养和静态培养7、14、21 d后,行四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、细胞葡萄糖日耗量、细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的检测及扫描电镜(SEM)观察、X射线能谱(EDX)分析.结果 旋转培养组细胞的增殖、代谢、成骨分化等均显著优于静态培养(F=144.187、F=491.603、F=34.913,均P＜0.01、P＜0.01);旋转培养组细胞支架内分布的均匀性优于静态培养,EDX分析显示细胞分泌磷酸钙基质.结论 可控管道结构CPC支架结合旋转式动态三维培养有效促进成骨细胞的增殖、代谢、分化和支架内合理分布,可成为一种新的节段性组织工程骨体外构建方法。

患者女,46岁,孕2产2.因月经量增多1年阴道大量出血2 d伴头晕乏力,于2005年6月2日住浙江大学附属邵逸夫医院.患者1年前无明显诱因出现月经量增多,有少许血凝块,经期延长至10 d/次,无经期下腹痛.人院前2 d来月经时,经量较前明显增多,大量暗紫色血块,患者出现头晕及乏力等症状.体格检查:血压:110/70 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),心率100次/min.贫血貌.妇科检查:外阴无异常,阴道见大量积血,子宫颈重度糜烂,宫颈管见暗红色积血流出,宫体大小如妊娠3月余,质中,活动可,无明显压痛,双附件区未见明显异常。

绝经前妇女的雌激素主要由卵巢分泌.芳香化酶是含有细胞色素P450的酶复合物家族成员之一,作用于雌激素生成的限速步骤,即催化雄烯二酮或睾酮向雌激素的转化.这一过程受垂体分泌的卵泡刺激素(FSH)和黄体生成激素(LH)的控制。

20世纪70年代,研究人员发现,胸腺组织以外其他组织的提取物也有着与胸腺生成素(thymopoietin)相似的促T淋巴细胞分化的作用;基于这一发现,1975年美国纽约大学医学院的Gideon Goldstein、Margrit Scheid等从牛胸腺中分离纯化出一种参与T、B淋巴细胞分化,分子量在8500左右的多肽,并证明其广泛存在于各类真核细胞中,在各物种间具有高度的结构、功能和免疫学上的相似性;Goldstein等推断这种遗传保守性是其在生命活动中发挥重要作用的一种体现,并将其命名为ubiquitous immunopoietic polypepfide(UBIP),即是后来被人们称为"泛素"(ubiquitin)的物质。

关于使用激素替代疗法(HT)来缓解围绝经期症状及治疗绝经后骨质疏松是否安全,是否会增加心脑血管疾病及相关肿瘤的发生,一直是学术界的研究热点.早期流行病学研究主要关注的是雌激素治疗(ET)与卒中之间的关系.最新的研究主要关注的是雌孕激素联合疗法(EPT)和脑血管疾病危险因素之间的关系,提示黄体酮可能增加患脑血管疾病的风险。

患者男,13岁,浙江省富阳市人.因"反复腹痛、腹泻,进行性消瘦半年,腹痛加剧二天"于2006年2月8日来我院就诊,拟诊"腹痛待查"收住入院.患者近半年来反复腹痛,呈上腹部阵发性疼痛,能忍受,与进食无关,同时伴有黑糊便,每天5～6 次,无鲜血及黏液,无里急后重.不发热,无呕吐,患病来逐渐出现腹胀,进行性消瘦.患者曾于4个月前生吞尖吻蝮(五步蛇)蛇胆,1个月前初因腹痛在当地医院就诊,拟诊"腹腔淋巴结炎?"予以抗炎处理,因病症无好转,遂于2006年1月18日在我院住院治疗1周后出院。

国家药典委员会组织编纂的<中华人民共和国药典临床用药须知>(2005年版)(简称该书)已由人民卫生出版社于2005年12月正式出版发行.该书是2005年版<中华人民共和国药典>(简称<中国药典>)的重要配套丛书之一,也是目前国内主要供医务人员和药品企业参考的一部临床工具书。